豬肺炎支原體對上皮細(xì)胞損傷的影響

《豬肺炎支原體對上皮細(xì)胞損傷的影響》由會員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《豬肺炎支原體對上皮細(xì)胞損傷的影響（3頁珍藏版）》請?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。

1、豬肺炎支原體對上皮細(xì)胞損傷的影響豬肺炎支原體對上皮細(xì)胞損傷的影響 2014/10/14 畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)2014年第八期方法菌液培養(yǎng)株和株接種于培養(yǎng)基中。以復(fù)壯，待菌液培養(yǎng)至對數(shù)生長期時備用。細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)于含小牛血清、青霉素和鏈霉的培養(yǎng)液，待細(xì)胞生長達(dá)時，胰蛋白酶消化，稀釋至，以孔接種于孔培養(yǎng)板，在、的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。感染細(xì)胞取新鮮培養(yǎng)的處于對數(shù)生長期的和菌液以，離心，菌體沉淀用洗滌次，用培養(yǎng)基（無血清）重懸?？装逯械募?xì)胞棄去上清，然后用洗滌次。（無血清）培養(yǎng)基重懸的接種于鋪有細(xì)胞的孔中，對照組接種等體積的（無血清）培養(yǎng)基，、的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。感染時間、劑量的篩選在感染、時取細(xì)胞上清，用試劑盒測定

2、濃度；取細(xì)胞用法測定細(xì)胞活力，找出差異顯著的感染時間點(diǎn)；用感染劑量為、和的感染細(xì)胞，利用上一步確定的感染時間，檢測細(xì)胞活力及。檢測取感染好的細(xì)胞，先將細(xì)胞收集到離心管中，棄上清，加入過氧化氫檢測裂解液，充分勻漿以裂解細(xì)胞，取上清，按照試劑盒測定方法檢測。免疫熒光法檢測洗滌未黏附的次，每次；無水乙醇固定。洗滌次，封閉，洗滌次，與單抗（稀釋）孵育，洗滌次，與羊抗小鼠（稀釋）孵育，洗滌次，熒光顯微鏡觀察，拍照。染色免疫熒光拍照后，將孔板用洗滌次，每次，加入染色，洗滌次，每次，熒光顯微鏡觀察，拍照。統(tǒng)計(jì)分析測定結(jié)果使用軟件進(jìn)行分析。結(jié)果感染時間和感染劑量的篩選不同感染時間后細(xì)胞上清濃度和細(xì)胞活力從圖可

3、以看出，在時，和感染細(xì)胞后，細(xì)胞活力相同，但引起的濃度顯著（）高于。不同感染劑量后細(xì)胞上清濃度從圖可以看出，不同感染體積，細(xì)胞活力無差異，但在感染量為時，其濃度顯著性高于其它感染體積（），并且顯著性高于（）。感染細(xì)胞后測定的濃度結(jié)果顯示，在感染后，和感染細(xì)胞產(chǎn)生的濃度極顯著（）高于對照，而感染細(xì)胞產(chǎn)生的也顯著（）高于。感染細(xì)胞后檢測和對細(xì)胞影響的間接免疫熒光結(jié)果見圖，與對照相比，在上的黏附量高于。感染細(xì)胞后染色對感染細(xì)胞進(jìn)行染色如圖。與對照相比，感染后，細(xì)胞受到損傷，細(xì)胞膜破損，染色質(zhì)向外周聚集，呈絮狀，細(xì)胞體積明顯腫脹變大，而感染的細(xì)胞，細(xì)胞體積也增大，對細(xì)胞損傷較輕，其細(xì)胞周邊也有較少的染

4、色質(zhì)聚集。討論株是野毒分離株，具有一定的感染性，為江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院獸醫(yī)研究所早期分離鑒定。株經(jīng)多年的連續(xù)傳代培育為適應(yīng)無細(xì)胞培養(yǎng)基（）的人工致弱毒株，即株，已用該菌株研發(fā)成功具有良好的安全性和免疫保護(hù)效力的弱毒活疫苗，可有效預(yù)防豬氣喘病的發(fā)生。豬肺炎支原體致病株株和弱毒株株是來源于同一母本株的不同毒力株，全基因組分析顯示基因組差異較小，選這兩株同一來源不同毒力的感染細(xì)胞，并對其進(jìn)行氧化損傷分析，可為該病的致病機(jī)制研究提供非常良好的理論基礎(chǔ)。這在國內(nèi)外屬于首次報(bào)道。豬肺炎支原體可以黏附于豬呼吸道上皮細(xì)胞、豬肺泡上皮、豬腎細(xì)胞、微型豬肺纖維原細(xì)胞和人肺纖維原細(xì)胞。車巧林等用豬肺炎支原體黏附豬腎細(xì)胞

5、從而建立豬肺炎支原體黏附宿主細(xì)胞間接免疫熒光檢測的方法，張旭等也利用間接免疫熒光法檢測了不同毒力支原體分別對豬腎細(xì)胞的黏附情況。眾多的文獻(xiàn)研究豬肺炎支原體感染豬氣管上皮細(xì)胞，而利用強(qiáng)弱毒株體外感染靶細(xì)胞后的氧化損傷差異分析卻未見報(bào)道。作者希望對強(qiáng)弱毒株感染細(xì)胞的氧化損傷差異進(jìn)行分析，從感染細(xì)胞后的反應(yīng)中獲得宿主的差異表達(dá)方面，通過分子病理學(xué)，分子免疫學(xué)，轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白組學(xué)、代謝組學(xué)等多方面來共同進(jìn)行研究，只有這樣才能更加全面準(zhǔn)確地解釋和揭示豬肺炎支原體的致病機(jī)制，才能對豬支原體肺炎的防治和診斷起到積極的作用。作者：李彥偉劉茂軍劉蓓蓓武昱孜倪博白方方紀(jì)燕張映邵國青單位：江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院獸醫(yī)研究所農(nóng)業(yè)部獸用生物制品工程技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室國家獸用生物制品工程技術(shù)研究中心山西農(nóng)業(yè)大學(xué)南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院 上一個文章： 小議畜牧獸醫(yī)創(chuàng)業(yè)人才的培養(yǎng)的路徑下一個文章： 基因芯片對雞法氏囊差異的表達(dá)