2019-2020年高中生物 實驗10 泡菜的腌制和亞硝酸的測定教案 浙科版選修1.doc
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2019-2020年高中生物 實驗10 泡菜的腌制和亞硝酸的測定教案 浙科版選修1 一、實驗原理 亞硝酸鹽可以與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應,這一產(chǎn)物再與N-1-萘基乙二胺偶聯(lián),形成紫紅色產(chǎn)物,可用光電比色法定量。 二、實驗目的 1、進行泡菜的腌制; 2、進行亞硝酸鹽的測定。 三、實驗用具及材料 泡菜罐、蔬菜、三角瓶、量筒、燒杯、試管及試管架、pH試紙、容量瓶、研磨過濾器或研缽、微量可調移液器、分光光度計、亞硝酸鹽含量的測定試劑盒。 三、試劑配制 硫酸鋅溶液:稱取18g ZnSO47H2O固體加水溶解,稀釋至150mL。混勻后備用。 氫氧化鈉溶液:稱取20g NaOH固體,加水至250mL,備用。 N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽溶液:向含有0.08g N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽固體的離心管中加入1mL60%乙酸充分溶解,然后將以上溶解液加入到79mL60%乙酸中再溶解,混勻后,在冰箱中4℃避光保存,1周內穩(wěn)定。 對氨基苯磺酸溶液:稱取0.8g對氨基苯磺酸固體溶于56mL蒸餾水和24mL冰乙酸中,棕色瓶室溫保存,使用時取上清液。 顯色液:將N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽溶液與對氨基苯磺酸溶液(上清液)等體積混合。 亞硝酸鈉標準儲液:向含有0.025g亞硝酸鈉固體的離心管中加入1mL蒸餾水充分溶解,然后將以上溶解液轉移到100mL燒杯中,向燒杯內加入19mL蒸餾水和10mL NH4Cl緩沖液混合,再移至50mL容量瓶中,加蒸餾水定容至50mL,冰箱中避光保存。 亞硝酸鈉標準溶液(測定時用):取1mL亞硝酸鈉儲液,移至100mL容量瓶中,加蒸餾定容,即制得5μg/mL亞硝酸鈉標準液。 四、實驗步驟 1、泡菜腌制 (1)各種菜(蘿卜、白菜等)洗凈并切成3~4cm長的小塊。 (2)按照清水與鹽的質量比4:1的比例配制鹽水,將鹽水煮沸冷卻。 (3)將經(jīng)過預處理的新鮮蔬菜混合均勻,裝入泡菜壇內,加入鹽水沒過全部菜料,蓋好壇蓋。 (4)將壇口用水封好,防止外界空氣進入。 (5)泡菜發(fā)酵。 2、亞硝酸鹽的定量測定 (1)樣品處理:腌制的泡菜5g及少量泡菜湯,加入研磨過濾器中,將研磨液轉移至100mL燒杯中,接著用20mL水洗滌研磨過濾器,合并濾液,用氫氧化鈉溶液將pH調至8.0,再加入5mL硫酸鋅溶液,混勻,如不產(chǎn)生白色沉淀,再加入氫氧化鈉溶液至產(chǎn)生白色沉淀為止。在水浴中加熱至60℃,10min后,冷卻至室溫,用濾紙過濾,用少量水淋洗沉淀2-3次,將濾液和洗滌液在100mL容量瓶中定容。 (2)測定:取2mL樣品溶液,置于有刻線試管中,加入900μL NH4Cl緩沖液,500μL60%乙酸和1mL顯色液,加水定容至5mL,混合混勻,暗處靜止25min;用光程1cm的比色杯在550nm處測定光密度值。以2mL水為空白對照。 (3)標準曲線:吸取0,100,200,600,1000μL的亞硝酸鈉標準溶液,分別置于有刻線試管中,各加入900μL NH4Cl緩沖液,500μL60%乙酸和1mL顯色液,加水定容至5mL,混合混勻,暗處靜止25min;用光程1cm的比色杯在550nm處分別測定吸光度值。以亞硝酸鈉質量為橫坐標,以吸光度值為縱坐標,繪標準曲線。 (4)計算:X1=(m21000V1)/(m1V2 1000) 式中:X1為樣品中亞硝酸鈉含量,單位mg /Kg;m1為樣品質量,單位g; m2為通過標準曲線得到的亞硝酸鈉的質量,單位μg;V1為樣品處理液總體積;V2為測定用樣品液體積。若按照以上實驗步驟,則m1 =5、V1=100、V2=2。 五、實驗結果與分析 1、標準顯色液 不同濃度亞硝酸鈉溶液與顯色液反應后的顏色梯度見下圖:- 配套講稿:
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