維生素C含量測(cè)定方法

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1、單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級(jí),第三級(jí),第四級(jí),第五級(jí),*,*,組員：丁超凡 韓丹丹,郭珊 韓雙,付文靜,研究課題：維生素C,維生素,C,（,Vitamin C,，,Ascorbic Acid,）又叫,L-,抗壞血酸,，是一種,水溶性維生素,。食物中的維生素,C,被人體小腸上段吸收。一旦吸收，就分布到體內(nèi)所有的水溶性結(jié)構(gòu)中，正常成人體內(nèi)的維生素,C,代謝活性池中約有,1500mg,維生素,C,，最高儲(chǔ)存峰值為,3000mg,維生素,C,。,膠原蛋白的合成：膠原蛋白的合成需要維生素,C,參加，,治療壞血病,預(yù)防,牙齦萎縮,、出血：牙齦是軟組織，當(dāng)缺乏蛋白質(zhì)、鈣、,VC

2、,時(shí)易產(chǎn)生牙齦萎縮、出血。,預(yù)防動(dòng)脈硬化：可促進(jìn)膽固醇的排泄，防止膽固醇在動(dòng)脈內(nèi)壁沉積，甚至可以使沉積的粥樣斑塊溶解。,抗氧化,劑：可以保護(hù)其它抗氧化劑，如維生素,A,、維生素,E,、,不飽和脂肪酸,，防止自由基對(duì)人體的傷害。,治療貧血：使難以吸收利用的三價(jià)鐵還原成二價(jià)鐵，促進(jìn)腸道對(duì)鐵的吸收，提高肝臟對(duì)鐵的利用率，有助于治療,缺鐵性貧血,。,防癌：豐富的膠原蛋白有助于防止癌細(xì)胞的擴(kuò)散；,VC,的抗氧化作用可以抵御自由基對(duì)細(xì)胞的傷害防止細(xì)胞的變異；阻斷亞硝酸鹽和仲胺形成強(qiáng)致癌物亞硝胺。,保護(hù)作用：在人的生命活動(dòng)中，谷胱甘肽和酶保證細(xì)胞的完整性和新陳代謝的正常進(jìn)行至關(guān)重要。,功效,酶：谷胱甘肽是由

3、谷氨酸、,胱氨酸,和甘氨酸組成的短肽，在體內(nèi)有氧化還原作用。它有兩種存在形式，即氧化型和還原型，還原型對(duì)保證細(xì)胞膜的完整性起重要作用。,VC,是一種強(qiáng)抗氧化劑，其本身被氧化，而使氧化型谷胱甘肽還原為,還原型谷胱甘肽,，從而發(fā)揮抗氧化作用。,提高人體的免疫力：白細(xì)胞含有豐富的,VC,，當(dāng)機(jī)體感染時(shí)白細(xì)胞內(nèi)的,VC,急劇減少。,VC,可增強(qiáng),中性粒細(xì)胞,的趨化性和變形能力，提高殺菌能力。促進(jìn)淋巴母細(xì)胞的生成，提高機(jī)體對(duì)外來(lái)和惡變細(xì)胞的識(shí)別和殺滅。參與,免疫球蛋白,的合成。提高,CI,補(bǔ)體酯酶活性，增加補(bǔ)體,CI,的產(chǎn)生。,促進(jìn)干擾素的產(chǎn)生，干擾病毒,mRNA,的轉(zhuǎn)錄，抑制病毒的增生。,提高機(jī)體的應(yīng)

4、急能力：人體受到異常的刺激，如劇痛、寒冷、缺氧、精神強(qiáng)刺激，會(huì)引發(fā)抵御異常刺激的緊張狀態(tài)。該狀態(tài)伴有一系列身體，包括,交感神經(jīng)興奮,、腎上腺髓質(zhì)和皮質(zhì)激素分泌增多。腎上腺髓質(zhì)所分泌的,腎上腺素,和,去甲腎上腺素,是有,酪氨酸,轉(zhuǎn)化而來(lái)，在此過(guò)程需要,VC,的參與。,功效,維生素,C,在抗病毒和預(yù)防病毒性傳染病方面具有很高的應(yīng)用價(jià)值。如果我們普遍認(rèn)識(shí)到維生素,C,預(yù)防和治療病毒傳染病癥的原理并且按量服用，就可以預(yù)防很多病毒的傳播。,目前研究維生素,C,測(cè)定方法的報(bào)道較多，如滴定法、光度分析法、高效液相色譜法等，各種方法各有特點(diǎn)。特別是高效液相色譜法是近年來(lái)發(fā)展較快的一種方法。,測(cè)定方法,滴定法測(cè)

5、定,維生素,C,分光光度測(cè),定維生素,C,高效液相色譜法,測(cè)定維生素,C,2,6-,二氯酚靛酚滴定法測(cè)定維生素,C,含量,維生素C,能還原2,6-二氯酚靛酚染料。,維生素C具有還原性的烯二醇基，我們通過(guò)氧化還原滴定來(lái)測(cè)定維生素C,2,，,6-,二氯靛酚法,原理,2,，,6-,二氯靛酚是一種染料，其氧化型在,酸性,介質(zhì)中為,紅色,，,堿性,介質(zhì)中為,藍(lán)色,，與,Vc,反應(yīng)后，生成無(wú)色的還原型酚亞胺，因此，在酸性條件下，用,2,，,6-,二氯靛酚滴定至溶液顯,玫瑰紅色,，即為終點(diǎn)；無(wú)需另加指示劑。,取本品適量（約相當(dāng)于Vc50mg），用適量水溶解，置100ml量瓶中，加,偏磷酸-醋酸試液,20ml

6、,再用水稀釋置刻度，搖勻；,精密量取稀釋液適量（約相當(dāng)于Vc2mg）置50ml的錐形瓶中,加,偏磷酸-醋酸試液,5ml,用,2,6-二氯靛酚滴定液,滴定,至溶液顯,玫瑰紅色,并持續(xù)5s不褪；,空白試驗(yàn)：,取偏磷酸-醋酸試液5.5ml，加水15ml，用2，6-二氯靛酚滴定液滴定。,計(jì)算：,(V-V,0,),F,T,W,W,標(biāo)示量,標(biāo)示量,%=,反應(yīng)摩爾比,100,測(cè)定方法,維生素,C 2,6-,二氯酚靛酚 維生素,C 2,6-,二氯酚靛酚,（還原型）（氧化型，粉紅色）（氧化型）（還原型）,+,+,=,2,6-,二氯酚靛酚染料的鈉鹽在水溶液中顯藍(lán)色，在酸性溶液中呈紅色，被還原后紅色消失。,碘量法,

7、原理：,由于維生素,C,分子中的烯二醇基有極強(qiáng)的還原性，能被碘氧化，用碘滴定,VC,EC,6,H,6,O,6,/C,6,H,8,O,6,=0.18 ,EI,2,/I,-,=0.535,終點(diǎn)：,淀粉為指示劑，溶液出現(xiàn)穩(wěn)定的藍(lán)色即為終點(diǎn),反應(yīng)式：,注意！,測(cè)定時(shí)：加,HAC,使溶液呈弱酸性,原因,:,(1),Vc,還原性很強(qiáng)，在空氣中很容易被氧化，在堿性介質(zhì)中更甚,(2)I2,在堿性介質(zhì)中會(huì)發(fā)生歧化反應(yīng),加,HAC,可減少,VC,的副反應(yīng)，避免實(shí)驗(yàn),誤差,電位滴定法,原理,：根據(jù)滴定過(guò)程中電池電動(dòng)勢(shì)的變化來(lái)確定反應(yīng)終點(diǎn),.,Pt,為指示電極，甘汞作參比電極,E,池,E,+,-E,-,+E,液接電位

8、,EI,2,/I,-,+k(,常數(shù),),電位滴定法,右圖：電位滴定法基本儀器裝置,計(jì)算式：,(,與碘量法相同,),Wvc=C(I2)V(I2)M(vc)/m(vc)*100%,優(yōu)點(diǎn)：,解決了滴定分析中遇到有色或渾濁溶液時(shí)無(wú)法指示終點(diǎn)的問(wèn)題,2,，,4,一二硝基苯肼分光光度法,原理：,維生素,C,在空氣中尤其在堿性介質(zhì)中極易被氧化成脫氫抗壞血酸,反應(yīng)式：,pH5,脫氫抗壞血酸內(nèi)環(huán)開(kāi)裂，形成二酮古洛糖酸,二酮古洛糖酸,脫氫抗壞血酸，二酮古洛糖酸均能和,2,，,4,二硝基苯肼生成可溶于硫酸的脎,脎在,500nm,波長(zhǎng)有最大吸收,脎的結(jié)構(gòu)：,分光光度法,樣品溶液與VC標(biāo)準(zhǔn)溶液按上述方法同樣處理,500

9、nm處測(cè)吸光度,下圖：721型分光光度計(jì),差示旋光法,維生素,C,片在不同,PH,值的溶液中旋光度有顯著差異，而片劑輔料旋光度保持不變,差示旋光法消除輔料的影響，直接測(cè)出該制劑的含量,差示旋光法,1,）標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制,準(zhǔn)確稱(chēng)取維生素,C,精制品,5.0g,，乙二胺四乙酸鈉,0.37g,置于,100mL,容量瓶中,用新沸冷卻的蒸餾水溶解,加水到指定刻度,配制成,50mg/mL,的維生素,C,標(biāo)準(zhǔn)溶液。,2,）比旋光度與溶液,pH,值的關(guān)系,量取,10.0mL,維生素,C,標(biāo)準(zhǔn)液于,50mL,量瓶中,用水稀釋至,50mL,。測(cè)定溶液的,pH,及旋光度,然后逐次分批加入氫氧化鈉固體,(,每次約,50

10、mg),每次溶解后,測(cè)定一次溶液的,pH,及其旋光度,得到維生素,C,溶液的,pH,及旋光度關(guān)系,差示旋光法,選定,pH,為,2.2,和,6.2,2）差示旋光度與溶液濃度關(guān)系,吸取2.0、4.0、8.0、16.0、20.0mL的維生素C標(biāo)準(zhǔn)液各兩份,分別置于50mL的容量瓶,一份用,pH2.2的鹽酸鹽緩沖液,定容；一份用,pH6.2的磷酸鹽緩沖液,定容，靜置3min后,用220mm測(cè)定管，以前者為空白，測(cè)定后者的差示旋光度(a)。,文獻(xiàn)結(jié)果,：線(xiàn)性方程為,a=0 205*C+005，r=09964,3）輔料干擾試驗(yàn),取混合輔料20mg(淀粉、硬脂酸鎂、E,D,TA、糊精等按處方比例混勻)兩份,

11、分別置于50mL的容量瓶,一份用,pH2.2的鹽酸鹽緩沖液,定容,一份用,pH6.2的磷酸鹽緩沖液,定容,濾去不溶物,濾液在兩種pH值測(cè)定差示旋光度。,文獻(xiàn)結(jié)果,：輔料的差示旋光度為零，說(shuō)明輔料對(duì)維生素C含量的測(cè)定不干擾。,4）穩(wěn)定性試驗(yàn),同一測(cè)試樣品，在120min內(nèi)，每隔3min測(cè)定一次差示旋光度。,文獻(xiàn)結(jié)果,：差示旋光度基本不變,5,）回收率試驗(yàn),精密稱(chēng)取維生素,C,精制品,500.0mg,兩份，分別置于,50mL,容量瓶中，各加入,20mg,輔料，分別用鹽酸鹽緩沖液及磷酸鹽緩沖液配制成,50mL,溶液，測(cè)定差示旋光度。,文獻(xiàn)結(jié)果,：平均回收率為,97.8,，,變異系數(shù),cv,為,1.0

12、3,6,）樣品測(cè)定,取維生素,C,片劑,10,片，稱(chēng)重研碎后分別用鹽酸鹽緩沖液及磷酸鹽緩沖液配制成,50mL,溶液,(,相當(dāng)于含,Vc 20mg/mL),，濾去不溶物，測(cè)定濾液的差示旋光度，根據(jù)回歸方程計(jì)算其含量。,薄層掃描法,維生素,C,具有 較強(qiáng),還原性,，可使,藍(lán)色,染料,2,，,6-,二氯靛酚鈉定量地還原成無(wú)色的酚亞胺，而本身被氧化成去氫抗壞血酸，利用此特征進(jìn)行薄層掃描法測(cè)定含量。,（,1,）試紙的制備,2,6-,二氯靛酚鈉,(DCP-Na),溶于無(wú)水乙醇配成,0.05%,的,DCP-Na,乙醇溶液，,濾紙?jiān)谑⒂?DCP-Na,乙醇溶液的展開(kāi)缸中浸漬,3min,，邊浸邊搖展開(kāi)缸，使濾紙

13、均勻著色，充分被染料溶液所飽和。取出懸掛于暗處，晾干后，立即放入干燥器中避光保存，備用。,操作方法與結(jié)果,（,2,）緩沖溶液的配制,稱(chēng)取檸檬酸水合物,10g,，放入,1000ml,容量瓶中，加入,1M,氫氧化鈉,420ml,，并用蒸餾水稀釋至刻度，此溶液的,pH,應(yīng)為,3.5,。否則，用酸或堿調(diào)整,pH,值，保存于冰箱中。,3,）掃描條件確定,在制備的染料試紙上定量點(diǎn)上維生素,C,對(duì)照品進(jìn)行掃描，維 生素,C,在,290nm,處有最大吸收，,420nm,處無(wú)吸收,，故選擇,1,=290nm,，,2,=420nm,雙波長(zhǎng)反射式鋸齒掃描。,4,）線(xiàn)性實(shí)驗(yàn),4.1,）對(duì)照品溶液的配制,精密稱(chēng)取維生素

14、,C,標(biāo)準(zhǔn)品,100mg,，用緩沖溶液配成,lmg/ml,的標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密稱(chēng)取維生素,C,標(biāo)準(zhǔn)溶液,1,、,2,、,3,、,4,、,5ml,，分別置于,10ml,容量瓶中，用緩沖溶液稀釋至刻度。,4.2,）測(cè)定,用,5,l,定量毛細(xì)管，分別吸取上述溶液各,5,l,，點(diǎn)于試紙上。點(diǎn)樣后晾干，并將試紙 固定在,20cm20cm,玻璃板上，放入薄層掃描儀。測(cè)定,A,的積分值,(,峰面積,),作為縱坐標(biāo),Y,，點(diǎn)樣量為橫 坐標(biāo),X,，得一直線(xiàn)方程,Y=15692X+130225,，,r=0,9991,5,）樣品的含量測(cè)定,取維生素,C,片,10,片，研細(xì)，精密稱(chēng)取平均片重一片的粉末，放入,100ml,容量瓶中，加入緩沖液至刻度，振搖，使維生 素,C,溶解，放置、澄清，用吸液管取,3ml,移至,10ml,容量瓶中，用緩沖液稀釋至刻度。用,5,l,定量毛細(xì)管點(diǎn)樣品溶液與不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液于同一試紙上，然后掃描 測(cè)定峰面積，由工作曲線(xiàn)法計(jì)算維生素,C,片中的維生素,C,含量。,6,）回收率實(shí)驗(yàn),精密稱(chēng)取維生素,C,對(duì)照品,20mg,，其它原輔料適量，置,10ml,容量瓶中，加緩沖液稀釋至刻度，振搖，濾過(guò)，棄初濾液。分別吸取續(xù)濾液與對(duì)照品維生 素,C,液各,5,l,點(diǎn)于同一試紙上，按上述條件進(jìn)行掃描測(cè)定。,