鞭毛染色法及活菌活動性觀察一

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1、Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,11/7/2009,#,單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級,第三級,第四級,第五級,*,*,*,鞭毛染色法及活菌活動性觀察,第一頁,共十頁。,一、實驗?zāi)康募耙?了解細(xì)菌鞭毛染色的原理,掌握鞭毛染色的方法;學(xué)習(xí)用壓滴法觀察細(xì)菌的運(yùn)動性。,第二頁,共十頁。,二、實驗原理,細(xì)菌的鞭毛極纖細(xì),直徑一般為,0.10.2um,,只有用電子顯微鏡才能觀察

2、到。但是,如采用特殊的染色法,則在普通光學(xué)顯微鏡下也能看到它。,鞭毛染色的基本原理是:即在染色前先用媒染劑處理,讓它沉積在鞭毛上,使鞭毛直徑加粗,然后再進(jìn)行染色。,常用的媒染劑由丹寧酸和氯化高鐵或鉀明礬等配制而成。,第三頁,共十頁。,采用鞭毛染色法雖能觀察到鞭毛的形態(tài)、著生位置和數(shù)目,但此法既費時又麻煩。如果僅須了解某菌是否有鞭毛,可采用懸滴法或壓滴法直接在光學(xué)顯微鏡下檢查活細(xì)菌是否具有運(yùn)動能力,以此來判斷細(xì)菌是否有鞭毛。此法較快速、簡便。,懸滴法就是將菌液滴加在潔凈的蓋玻片中央,在其周邊涂上凡士林,然后將它倒蓋在有凹槽的載玻片中央,即可放置在普通光學(xué)顯微鏡下觀察,。,壓滴法是將菌液滴在普通的

3、載玻片上,然后蓋上蓋玻片,置顯微鏡下觀察。,第四頁,共十頁。,三、實驗器材,1.,菌種:蘇云金芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單細(xì)胞菌,2.,染色液和試劑:硝酸銀染色液、香柏油、二甲苯、,0.01,美蘭水溶液。,3.,儀器、材料:載玻片、擦鏡紙、吸水紙、記號筆、鑷子、接種環(huán),顯微鏡。,第五頁,共十頁。,四、實驗方法,(一)硝酸銀染色法,1.,清洗玻片 選擇光滑無裂痕的玻片,置洗衣粉過濾液中(洗衣粉煮沸后用濾紙過濾,以除去粗顆粒),煮沸,20min,。取出用清水沖洗,瀝干水后,置,95%,乙醇中浸泡,用時取出在火焰上燒去酒精。,2.,菌液的制備:菌齡較老的細(xì)菌容易失落鞭毛,所以在染色前應(yīng)將待染細(xì)菌

4、在新配制的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基斜面上連續(xù)移接,3-5,代,以增強(qiáng)細(xì)菌的運(yùn)動力。最后一代菌種放恒溫箱中培養(yǎng),1216h,。然后,用接種環(huán)挑取斜面與冷凝水交接處的菌液數(shù)環(huán),移至盛有,12mL,無菌水的試管中,使菌液呈輕度混濁。將該試管放在,37,恒溫箱中靜置,10min,(放置時間不宜太長,否則鞭毛會脫落),讓幼齡菌的鞭毛松展開。,第六頁,共十頁。,3.,制片:吸取少量菌液滴在潔凈玻片的一端,立即將玻片傾斜,使菌液緩慢地流向另一端,用吸水紙吸去多余的菌液。涂片放空氣中自然干燥。,4.,染色,滴加,A,液,染,3-5min,;,用蒸餾水充分洗凈,A,液;,用,B,液沖去殘水,再加,B,液于玻片上覆蓋染

5、色數(shù)秒至,1min,,必要時在酒精燈微火加熱直至顯褐色,立即用蒸餾水洗,自然干燥。,5.,鏡檢:先低倍,再高倍,最后用油鏡檢查。,菌體呈深褐色,鞭毛呈淺褐色。,第七頁,共十頁。,(二)壓滴法,1.,制備菌液:從幼齡菌斜面上,挑數(shù)環(huán)菌放在裝有,1,2mL,無菌水的試管中,制成輕度混濁的菌懸液。,2.,取,2,3,環(huán)稀釋菌液于潔凈載玻片中央,再加入一環(huán),0.01%,的美藍(lán)水溶液,混勻。,3.,用鑷子夾一潔凈的蓋玻片,先使其一邊接觸菌液,然后慢慢地放下蓋玻片,防止產(chǎn)生氣泡。,4.,鏡檢:將光線適當(dāng)調(diào)暗,先用低倍鏡找到觀察部位,再用高倍鏡觀察。要區(qū)分細(xì)菌鞭毛運(yùn)動和布朗運(yùn)動,后者只是在原處左右擺動,細(xì)菌

6、細(xì)胞間有明顯位移者,才能判定為有運(yùn)動性。,第八頁,共十頁。,五、實驗報告,繪圖表示鞭毛細(xì)菌的形態(tài)特征,并用箭頭表示其運(yùn)動方向。,六、思考題,1.,鞭毛染色法準(zhǔn)確鑒定細(xì)菌是否具有鞭毛要注意的細(xì)節(jié)。,2.,壓滴法中,發(fā)現(xiàn)視野內(nèi)大量的細(xì)菌朝一個方向運(yùn)動,原因何在?,第九頁,共十頁。,內(nèi)容總結(jié),鞭毛染色法及活菌活動性觀察。細(xì)菌的鞭毛極纖細(xì),直徑一般為0.10.2um,只有用電子顯微鏡才能觀察到。壓滴法是將菌液滴在普通的載玻片上,然后蓋上蓋玻片,置顯微鏡下觀察。取出用清水沖洗,瀝干水后,置95%乙醇中浸泡,用時取出在火焰上燒去酒精。5.鏡檢:先低倍,再高倍,最后用油鏡檢查。3.用鑷子夾一潔凈的蓋玻片,先使其一邊接觸菌液,然后慢慢地放下蓋玻片,防止產(chǎn)生氣泡,第十頁,共十頁。,

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