MTT比色法檢測(cè)苦杏仁甙對(duì)兔晶狀體上皮細(xì)胞增生的影響

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1、MTT比色法檢測(cè)苦杏仁甙對(duì)兔晶狀體上皮細(xì)胞增生的影響 目的 研究苦杏仁甙(Amygdalin)對(duì)體外培養(yǎng)的兔晶狀體上皮細(xì)胞增生的影響。方法 取第2代對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的兔晶狀體上皮細(xì)胞，培養(yǎng)24h后，加入不同濃度的苦杏仁甙(4.0、2.0、1.0、0.5、0.25、0.125mg/L)作用24h后，采用MTT法觀察苦杏仁甙對(duì)兔晶狀體上皮細(xì)胞增生的影響。結(jié)果 苦杏仁甙隨著濃度的增加，兔晶狀體上皮細(xì)胞增生的抑制作用逐漸增強(qiáng)。結(jié)論 苦杏仁甙能有效抑制體外培養(yǎng)的兔晶狀體上皮細(xì)胞增生，其抑制作用在一定濃度范圍內(nèi)有劑量依賴(lài)性。苦杏仁甙;兔晶狀體上皮細(xì)胞;后囊渾濁;MTT比色法Abstract Objective

2、To study the effects of Amygdalin on the proliferation of rabbit lens epithelial cells(RLECs)in vitro.Methods RLECs were primary cultured.After the second generation of RLECs were incubated for 24 hours，we added different concentraions of Amygdalin for 24 hours.The cell proliferation of RLECs was de

3、termined by MTT assay.Results The inhibitory rates of RLECs proliferation were increased in dose.dependent ways by Amygdalin in vitro.Conclusion Amygdalin could effectively inhibit the proliferation of RLECs，and it might have broad prospects in the prevention of posterior capsular opacification.Key

4、words amygdalin;rabbit lens epithelial cells;posterior apsular opacification;MTT assay后囊渾濁(posterior capsular opacification，PCO)是現(xiàn)代白內(nèi)障囊外摘出人工晶狀體植入術(shù)后最常見(jiàn)的并發(fā)癥。后囊混濁的發(fā)生主要由于術(shù)后殘留的晶狀體上皮細(xì)胞(lens epithelialcells，LECs)發(fā)生增生及后囊的纖維化有關(guān)。其發(fā)生率往往與年齡相關(guān)，年齡越輕，發(fā)生率越高。在成人，術(shù)后發(fā)生率為30%50%，在兒童則為100%。因此，如何有效地抑制晶狀體上皮細(xì)胞增生對(duì)于PCO的防治具有重要

5、意義?？嘈尤蔬?Amygdalin)是中藥桃仁的主要成分，是一種能生氰(cyanogensic)的化合物。存在于水果果核和堅(jiān)果中。有研究表明它能有效抑制纖維母細(xì)胞增生1，而且可以明顯地抑制組織的纖維化2。這里我們采用MTT比色法研究其對(duì)體外培養(yǎng)的兔晶狀體上皮細(xì)胞(rabbit lens epithelial cells，RLECs)增生的影響，為進(jìn)一步探索其作用機(jī)制提供理論依據(jù)。1 資料與方法1.1 試劑與儀器 主要試劑苦參堿購(gòu)自西安天豐生物科技有限公司;胰蛋白酶、小牛血清、DMEM干粉培養(yǎng)基、噻唑藍(lán)、二甲基亞砜。二氧化碳培養(yǎng)箱、倒置相差顯微鏡、超凈工作臺(tái)、自動(dòng)酶標(biāo)讀數(shù)儀(E2500型，美國(guó)B

6、ioRad)。1.2 細(xì)胞培養(yǎng)方法 健康雄性新西蘭大白兔5只，體重1.41.6kg，以空氣栓塞法處死。立即取出眼球置于18000的慶大霉素生理鹽水中，無(wú)菌手術(shù)臺(tái)上將其晶狀體取出。在手術(shù)顯微鏡下，剝離晶狀體囊膜，剪為大小約1mm2的小塊，均勻平貼于培養(yǎng)皿中，間隔35mm。放置23h待囊貼牢后后，加入含20%小牛血清的DMEM培養(yǎng)基至剛好浸沒(méi)囊膜，置入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)。35天換液1次，待細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)后，用0.25%胰蛋白酶消化。按12的比例接種到培養(yǎng)瓶中。倒置顯微鏡下動(dòng)態(tài)觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，取第2代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。1.3 細(xì)胞處理 取第2代RLECs，用胰酶消化并調(diào)整細(xì)胞濃度為5104個(gè)/ml，接種于9

7、6孔培養(yǎng)板，每孔200l。置入二氧化碳培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24h靜待細(xì)胞貼壁;加入1g/L苦杏仁甙PBS溶液并調(diào)整濃度為4.0、2.0、1.0、0.5、0.25、0.125mg/L，空白對(duì)照組則加入等量的PBS溶液，培養(yǎng)24h后，每孔加入MTT(5mg/L)溶液20l，繼續(xù)培養(yǎng)4h后中止培養(yǎng)，吸去孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，加入150l二甲基亞砜溶液，室溫下微量振蕩器振蕩10min，自動(dòng)酶標(biāo)儀比色(波長(zhǎng)570nm)，測(cè)定吸光值。以此計(jì)算細(xì)胞存活率和細(xì)胞抑制率(細(xì)胞存活率%=藥物組平均吸光度值/正常對(duì)照組平均吸光度值100%，細(xì)胞抑制率%=100%-細(xì)胞存活率)。1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 本研究獲取的數(shù)據(jù)采用(s)表示，用SPSS13.0進(jìn)行成組資料的方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，對(duì)檢驗(yàn)顯著性水準(zhǔn)為=0.05。