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1、人類口腔上皮細(xì)胞 巴氏小體的觀察 鄒方東 教授 助教:陽(yáng)敏 四川大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌 握人體性染色質(zhì)的檢測(cè)方法; 觀 察人體性染色質(zhì)的形態(tài)特征及存在部位;為進(jìn)一步 研究人體染色體的畸變與疾病 提 供 參考條件; 了 解雌性哺乳動(dòng)物 X染色體失活假說(shuō)和劑量補(bǔ)償效應(yīng)的 機(jī)制 二、 實(shí)驗(yàn)原理 1949年 M.L.Barr等研 究 發(fā)現(xiàn)了雌 貓神經(jīng)細(xì) 胞核膜 內(nèi)具有凝 縮的 深染小 體(巴氏小 體),而雄性 個(gè)體細(xì) 胞中則沒(méi)有 .進(jìn)一步研 究發(fā)現(xiàn): 所有哺乳類 雌體細(xì)胞中都可以見(jiàn) 到這一結(jié)構(gòu) 。 巴氏小體 是雌性 哺乳動(dòng)物體細(xì)胞 中失活的 X染色體,在 間期細(xì)胞核中 呈 異固縮 狀態(tài)(
2、染色質(zhì)高度螺旋化 ), 直徑 約 1m,貼近于核膜邊緣的染 色小體。 細(xì)胞分裂間期 細(xì)胞核中出現(xiàn)異固縮現(xiàn)象:濃縮、 染色深、無(wú)活性; 細(xì)胞分裂期 可形成正常的染色體形態(tài);復(fù)制 時(shí)間比有活性的 X染色體稍遲一些。 Barr小體的數(shù)目 =n-1( n為 X染色體數(shù)目) 正常女人的體細(xì)胞間期核中 Barr小體為 1; 正常男人的體細(xì)胞間期核中 Barr小體為 0; XXX女人的體細(xì)胞間期核中 Barr小體為 2; XXXX女人的體細(xì)胞間期核中 Barr小體為 3。 定義:具有兩份或兩份以上的基因量的個(gè)體與只有一份基 因量的個(gè)體的基因表達(dá)趨于一致的遺傳效應(yīng) . 舉例:雌性哺乳動(dòng)物一條 X染色體異染色質(zhì)
3、化(失活), 只有一條 X染色體具有活性,使雌雄動(dòng)物雖然 X染色 體數(shù)目不同但基因產(chǎn)物的劑量是平衡的。 劑量補(bǔ)償效應(yīng) ( dosage compensation effect) 巴氏小體是一條失活的 X染色體;哺乳動(dòng)物雌性個(gè)體兩 條 X染色體的其中一條在受精后失活; 兩條 X染色體中哪一條失活是隨機(jī)的;在同一哺乳動(dòng)物 的體細(xì)胞中,有些父源 X染色體失活,有些為母源失活。 失活在胚胎早期發(fā)生 (人類在胚胎發(fā)育 16天時(shí) ),失活的 X染色體在以后分裂中不會(huì)復(fù)活;當(dāng)生殖細(xì)胞形成時(shí),失 活的染色體可恢復(fù)。 雜合體雌性在伴性基因的作用上是嵌合體。 X-染色質(zhì)的形態(tài)表現(xiàn)為一結(jié)構(gòu) 致密的濃染小體;輪廓清楚
4、;大小 1 1.5m;常附著于核膜邊緣或 靠近內(nèi)側(cè);形狀為凸形、三角形、 卵形、短棒及雙球形等。 正常女性口腔黏膜細(xì)胞中出現(xiàn) 率: 30 50%。 三、 實(shí)驗(yàn)材料 1、器材: 顯微鏡、載玻片、蓋玻片、鑷子、牙簽等 2、試劑: 改良苯酚品紅、 60%醋酸(鹽酸) 3、實(shí)驗(yàn)材料: 女生口腔黏膜細(xì)胞(男生為對(duì)照 ) 四、實(shí)驗(yàn)步驟 ( 1)取干凈載玻片,用記號(hào)筆在將涂細(xì)胞的一面右上角做好 標(biāo)記; ( 2)嗽口(三次),盡可能除去口中雜物; ( 3)用牙簽刮取頰部粘膜上皮細(xì)胞,棄第一次刮取物,在同 一部位繼續(xù)刮?。?( 4)將刮得的細(xì)胞涂在干凈載玻片上,反復(fù)幾次,使玻片上 的材料盡可能多些 ; ( 5)
5、空氣中干燥; ( 6)涂片區(qū)滴上 100l 的 60%冰醋酸 (鹽酸 )固定 5分鐘; ( 7)吸去冰醋酸,滴 20l 改良苯酚品紅染色 2分鐘; ( 8)壓片; ( 9)將玻片置于顯微鏡下觀察。 五 觀察 在女性間期細(xì)胞核內(nèi)側(cè)靠近核膜處有約 1微米大小的反光極強(qiáng)的顆 粒狀亮點(diǎn),即為巴氏小體。材料不同,觀察結(jié)果可能有不同,且 必須和核仁區(qū)別開(kāi)來(lái)(核仁往往離核膜較遠(yuǎn)或接近核中央部位)。 箭頭所示為巴氏小體 (女性細(xì)胞 左 中存在,男性細(xì)胞 右 中沒(méi)有 ) 注意事項(xiàng) 1刮口腔上皮前要漱口; 2刮時(shí)用滅菌牙簽的寬邊,勿用一角,以免劃破口腔; 3第一次刮下的脫落細(xì)胞用酒精棉球擦去,在原位重復(fù)刮 一下制片; 4盛放酒精棉球的小廣口瓶,瓶蓋用完即時(shí)蓋好; 5涂片略干再加改良苯酚品紅; 6染色時(shí)間不要太長(zhǎng),否則核質(zhì)著色深, X染色質(zhì)體不易 區(qū)分; 7可數(shù)細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn):核質(zhì)染色呈網(wǎng)狀或顆粒狀;核膜清晰, 無(wú)缺損;染色適度,周圍無(wú)雜質(zhì)。 五、作業(yè) *1分別觀察男女各 50個(gè)可數(shù)細(xì)胞,計(jì)算顯示 X染色質(zhì)所占百分 比。 *2觀察中選繪 4-5個(gè)典型細(xì)胞,示明 X染色質(zhì)體的形成和部位。 六、思考題 *1、巴氏小體是怎么形成的?女性的卵母細(xì)胞含有巴氏小體么? *2、你認(rèn)為是什么原因造成了“劑量補(bǔ)償效應(yīng)”?