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1、人類口腔上皮細(xì)胞 巴氏小體的觀察 鄒方東 教授 助教：陽(yáng)敏 四川大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌 握人體性染色質(zhì)的檢測(cè)方法； 觀 察人體性染色質(zhì)的形態(tài)特征及存在部位；為進(jìn)一步 研究人體染色體的畸變與疾病 提 供 參考條件； 了 解雌性哺乳動(dòng)物 X染色體失活假說(shuō)和劑量補(bǔ)償效應(yīng)的 機(jī)制 二、 實(shí)驗(yàn)原理 1949年 M.L.Barr等研 究 發(fā)現(xiàn)了雌 貓神經(jīng)細(xì) 胞核膜 內(nèi)具有凝 縮的 深染小 體（巴氏小 體），而雄性 個(gè)體細(xì) 胞中則沒(méi)有 .進(jìn)一步研 究發(fā)現(xiàn)： 所有哺乳類 雌體細(xì)胞中都可以見(jiàn) 到這一結(jié)構(gòu) 。 巴氏小體 是雌性 哺乳動(dòng)物體細(xì)胞 中失活的 X染色體，在 間期細(xì)胞核中 呈 異固縮 狀態(tài)（
2、染色質(zhì)高度螺旋化 ）， 直徑 約 1m，貼近于核膜邊緣的染 色小體。 細(xì)胞分裂間期 細(xì)胞核中出現(xiàn)異固縮現(xiàn)象：濃縮、 染色深、無(wú)活性； 細(xì)胞分裂期 可形成正常的染色體形態(tài)；復(fù)制 時(shí)間比有活性的 X染色體稍遲一些。 Barr小體的數(shù)目 =n-1（ n為 X染色體數(shù)目） 正常女人的體細(xì)胞間期核中 Barr小體為 1； 正常男人的體細(xì)胞間期核中 Barr小體為 0； XXX女人的體細(xì)胞間期核中 Barr小體為 2； XXXX女人的體細(xì)胞間期核中 Barr小體為 3。 定義：具有兩份或兩份以上的基因量的個(gè)體與只有一份基 因量的個(gè)體的基因表達(dá)趨于一致的遺傳效應(yīng) . 舉例：雌性哺乳動(dòng)物一條 X染色體異染色質(zhì)
3、化（失活）， 只有一條 X染色體具有活性，使雌雄動(dòng)物雖然 X染色 體數(shù)目不同但基因產(chǎn)物的劑量是平衡的。 劑量補(bǔ)償效應(yīng) （ dosage compensation effect） 巴氏小體是一條失活的 X染色體；哺乳動(dòng)物雌性個(gè)體兩 條 X染色體的其中一條在受精后失活； 兩條 X染色體中哪一條失活是隨機(jī)的；在同一哺乳動(dòng)物 的體細(xì)胞中，有些父源 X染色體失活，有些為母源失活。 失活在胚胎早期發(fā)生 (人類在胚胎發(fā)育 16天時(shí) )，失活的 X染色體在以后分裂中不會(huì)復(fù)活；當(dāng)生殖細(xì)胞形成時(shí)，失 活的染色體可恢復(fù)。 雜合體雌性在伴性基因的作用上是嵌合體。 X-染色質(zhì)的形態(tài)表現(xiàn)為一結(jié)構(gòu) 致密的濃染小體；輪廓清楚
4、；大小 1 1.5m；常附著于核膜邊緣或 靠近內(nèi)側(cè)；形狀為凸形、三角形、 卵形、短棒及雙球形等。 正常女性口腔黏膜細(xì)胞中出現(xiàn) 率： 30 50%。 三、 實(shí)驗(yàn)材料 1、器材： 顯微鏡、載玻片、蓋玻片、鑷子、牙簽等 2、試劑： 改良苯酚品紅、 60%醋酸（鹽酸） 3、實(shí)驗(yàn)材料： 女生口腔黏膜細(xì)胞（男生為對(duì)照 ) 四、實(shí)驗(yàn)步驟 （ 1）取干凈載玻片，用記號(hào)筆在將涂細(xì)胞的一面右上角做好 標(biāo)記； （ 2）嗽口（三次），盡可能除去口中雜物； （ 3）用牙簽刮取頰部粘膜上皮細(xì)胞，棄第一次刮取物，在同 一部位繼續(xù)刮?。?（ 4）將刮得的細(xì)胞涂在干凈載玻片上，反復(fù)幾次，使玻片上 的材料盡可能多些 ; （ 5）
5、空氣中干燥； （ 6）涂片區(qū)滴上 100l 的 60%冰醋酸 (鹽酸 )固定 5分鐘； （ 7）吸去冰醋酸，滴 20l 改良苯酚品紅染色 2分鐘； （ 8）壓片； （ 9）將玻片置于顯微鏡下觀察。 五 觀察 在女性間期細(xì)胞核內(nèi)側(cè)靠近核膜處有約 1微米大小的反光極強(qiáng)的顆 粒狀亮點(diǎn)，即為巴氏小體。材料不同，觀察結(jié)果可能有不同，且 必須和核仁區(qū)別開(kāi)來(lái)（核仁往往離核膜較遠(yuǎn)或接近核中央部位）。 箭頭所示為巴氏小體 （女性細(xì)胞 左 中存在，男性細(xì)胞 右 中沒(méi)有 ） 注意事項(xiàng) 1刮口腔上皮前要漱口； 2刮時(shí)用滅菌牙簽的寬邊，勿用一角，以免劃破口腔； 3第一次刮下的脫落細(xì)胞用酒精棉球擦去，在原位重復(fù)刮 一下制片； 4盛放酒精棉球的小廣口瓶，瓶蓋用完即時(shí)蓋好； 5涂片略干再加改良苯酚品紅； 6染色時(shí)間不要太長(zhǎng)，否則核質(zhì)著色深， X染色質(zhì)體不易 區(qū)分； 7可數(shù)細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)：核質(zhì)染色呈網(wǎng)狀或顆粒狀；核膜清晰， 無(wú)缺損；染色適度，周圍無(wú)雜質(zhì)。 五、作業(yè) *1分別觀察男女各 50個(gè)可數(shù)細(xì)胞，計(jì)算顯示 X染色質(zhì)所占百分 比。 *2觀察中選繪 4-5個(gè)典型細(xì)胞，示明 X染色質(zhì)體的形成和部位。 六、思考題 *1、巴氏小體是怎么形成的？女性的卵母細(xì)胞含有巴氏小體么？ *2、你認(rèn)為是什么原因造成了“劑量補(bǔ)償效應(yīng)”？
口腔上皮細(xì)胞巴氏小體的觀察.ppt
