液體乳中三聚氰胺的快速檢測(cè) 拉曼光譜法(KJ201908)
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附件8 液體乳中三聚氰胺的快速檢測(cè) 拉曼光譜法 (KJ201908) 1 范圍 本方法規(guī)定了液體乳制品中三聚氰胺快速測(cè)定方法。 本方法適用于生鮮乳、滅菌乳、巴氏殺菌乳、調(diào)制乳和發(fā)酵乳等液態(tài)乳制品中三聚氰胺含量的快速測(cè)定。 2 原理 樣品經(jīng)沉淀、溶劑提取,加表面增強(qiáng)拉曼試劑對(duì)信號(hào)增強(qiáng),進(jìn)行拉曼光譜掃描。以70410cm-1處的拉曼特征峰作為三聚氰胺定量基準(zhǔn)峰,以92510cm-1或類似基質(zhì)中穩(wěn)定存在的拉曼峰為參比峰,根據(jù)三聚氰胺峰與參比峰的相對(duì)強(qiáng)度對(duì)三聚氰胺的濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,內(nèi)置儀器內(nèi)進(jìn)行判別。 3 試劑和材料 除另有規(guī)定外,本方法所用試劑均為分析純,水為GB/T 6682規(guī)定的二級(jí)水。 3.1 試劑 3.1.1 三氯乙酸。 3.1.2 三氯乙酸溶液(5%):準(zhǔn)確稱取三氯乙酸(3.1.1)50 g于1 L容量瓶中,用水溶解并定容至刻度,混勻后備用。 3.1.3 表面增強(qiáng)試劑:金或銀納米粒子溶膠,或相當(dāng)者。 注:表面增強(qiáng)試劑的參考配制方法: 納米金溶膠:取100mL0.01%氯金酸(AuCl3HCl4H2O)水溶液加熱至沸,劇烈攪拌下準(zhǔn)確加入1.0mL 1%檸檬酸三鈉(Na3C6H5O7)水溶液,金黃色的氯金酸水溶液在2min內(nèi)變?yōu)榧t色,繼續(xù)煮沸15min,冷卻后用蒸餾水補(bǔ)加到100mL。增強(qiáng)試劑配制用水為GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。 納米銀溶膠:取200mL1.0mM硝酸銀(AgNO3)水溶液加熱沸騰,劇烈攪拌下逐滴準(zhǔn)確滴加5.0mL1%檸檬酸三鈉(Na3C6H5O7)水溶液,持續(xù)煮沸1h,溶液變?yōu)榛揖G色,冷卻后用蒸餾水補(bǔ)加到200mL。增強(qiáng)試劑配制用水為GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。 3.1.4 促凝劑:金溶膠的促凝劑:稱取5.85 g氯化鈉,溶于100 mL水中,搖勻,備用,或配制成其他相當(dāng)?shù)臒o機(jī)鹽溶液。銀溶膠的促凝劑:稱取5.85 g氯化鈉和2 g氫氧化鈉,溶于100 mL水中,搖勻,備用,或配制成其他相當(dāng)?shù)臒o機(jī)鹽溶液。 3.2 參考物質(zhì) 三聚氰胺參考物質(zhì)中文名稱、英文名稱、CAS號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量見表1,純度≥99%。 表1 三聚氰胺中文名稱、英文名稱、CAS登記號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量 中文名稱 英文名稱 CAS登錄號(hào) 分子式 相對(duì)分子質(zhì)量 三聚氰胺 Melamine 108-78-1 C3H6N6 126.12 注:或等同可溯源物質(zhì)。 3.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)工作液(500 g/mL):精密稱取三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品(3.2)適量,分別置于100 mL容量瓶中,用水溶解并稀釋至刻度,搖勻,制成濃度為500 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。于4℃避光保存,有效期1個(gè)月。 4 儀器和設(shè)備 4.1 便攜式拉曼光譜儀 穩(wěn)頻激光光源:發(fā)射波長(zhǎng)為7851 nm,線寬<0.1 nm,能量≥250 mW;光譜分辨率≤15 cm-1;光譜響應(yīng)范圍500 cm-1~2000 cm-1,或大于該響應(yīng)范圍。 4.2 移液器:200 L、1 mL和5 mL。 4.3 渦旋振蕩器。 4.4 離心機(jī):轉(zhuǎn)速≥6000 r/min。 4.5 電子天平:感量為0.01 g。 4.6 塑料具塞離心管:2 mL。 5 分析步驟 5.1 試樣的提取 取0.5 g樣品加到2 mL離心管中,再加入1ml 5%三氯乙酸溶液,渦旋30 s混勻;放入離心機(jī),以不低于6000 r/min轉(zhuǎn)速離心1 min;上清液備用。 5.2 測(cè)定步驟 5.2.1 拉曼光譜儀器參考條件 激光能量≥250 mW,數(shù)據(jù)采集時(shí)間≥2 s。 5.2.2 測(cè)定 在儀器樣品池中依次加入100 L促凝劑,100 L表面增強(qiáng)試劑,50 L樣品(5.1),快速搖晃均勻,等待20 s檢測(cè)(檢測(cè)需在樣品加入后1 min內(nèi)完成)。 5.3 質(zhì)控試驗(yàn) 每批樣品應(yīng)同時(shí)進(jìn)行空白試驗(yàn)和加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn)。 5.3.1 空白試驗(yàn) 稱取空白試樣,按照5.1和5.2步驟與樣品同法操作。 5.3.2 加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn) 準(zhǔn)確稱取空白試樣10 g置于15 mL具塞離心管中,加入50 μL三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)工作液(500 g/mL)(3.3),使三聚氰胺濃度為2.5 mg/kg,按照5.1和5.2步驟與樣品同法操作。 6 結(jié)果判定要求 儀器軟件將測(cè)試結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)譜圖庫中的三聚氰胺進(jìn)行匹配計(jì)算,根據(jù)譜圖704 cm-1(10 cm-1)處特征拉曼光譜及內(nèi)置校準(zhǔn)曲線,對(duì)樣品中的三聚氰胺進(jìn)行結(jié)果判定:顯示測(cè)試結(jié)果并判定陰性或陽性。陰性代表該樣品不含有三聚氰胺或低于2.5 mg/kg,陽性則代表該樣品含有三聚氰胺且大于等于2.5 mg/kg。液態(tài)乳表面增強(qiáng)拉曼光譜圖參見圖1。 圖1 液態(tài)乳表面增強(qiáng)拉曼光譜圖 6.1 質(zhì)控試驗(yàn)要求 空白試樣測(cè)定結(jié)果應(yīng)為陰性,加標(biāo)質(zhì)控樣品測(cè)定結(jié)果應(yīng)為陽性。 7 性能指標(biāo) 7.1 檢測(cè)限 2.5mg/kg。 7.2 靈敏度 靈敏度應(yīng)≥99%。 7.3 特異性 特異性應(yīng)≥85%。 7.4 假陰性率 假陰性率應(yīng)≤1%。 7.5 假陽性率 假陽性率應(yīng)≤15%。 注:性能指標(biāo)計(jì)算方法見附錄A。 8 確證 本方法為初篩方法,當(dāng)檢測(cè)結(jié)果為陽性時(shí),應(yīng)對(duì)結(jié)果進(jìn)行確證。 9 其他 本方法所述納米表面增強(qiáng)試劑及促凝劑信息及操作步驟是為給方法使用者提供方便,在使用本方法時(shí)不做限定。方法使用者在使用替代試劑或操作步驟前,須對(duì)其進(jìn)行考察,應(yīng)滿足本方法規(guī)定的各項(xiàng)性能指標(biāo)。 本方法參比標(biāo)準(zhǔn)為GB/T 22388-2008 《原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測(cè)方法》。 附錄A 快速檢測(cè)方法性能計(jì)算表 表A.1 性能指標(biāo)計(jì)算方法 樣品情況a 檢測(cè)結(jié)果b 總數(shù) 陽性 陰性 陽性 N11 N12 N1.=N11+N12 陰性 N21 N22 N2.=N21+N22 總數(shù) N.1=N11+N12 N.2=N21+N22 N=N1.+N2.或N.1+N.2 顯著性差異(х2) c2=(|N12-N21|-1)2/(N12+N21), 自由度(df)=1 靈敏度(p+,%) p+=N11/N1. 特異性(p-,%) p-=N22/N2. 假陰性率(pf-,%) pf-=N12/N1.=100-靈敏度 假陽性率(pf+,%) pf+=N21/N2.=100-特異性 相對(duì)準(zhǔn)確度,%c (N11+N22)/(N1.+N2.) 注: a由參比方法檢驗(yàn)得到的結(jié)果或者樣品中實(shí)際的公議值結(jié)果; b由待確認(rèn)方法檢驗(yàn)得到的結(jié)果。靈敏度的計(jì)算使用確認(rèn)后的結(jié)果。 N:任何特定單元的結(jié)果數(shù),第一個(gè)下標(biāo)指行,第二個(gè)下標(biāo)指列。例如:N11表示第一行,第一列,N1.表示所有的第一行,N.2表示所有的第二列;N12表示第一行,第二列。 C為方法的檢測(cè)結(jié)果相對(duì)準(zhǔn)確性的結(jié)果,與一致性分析和濃度檢測(cè)趨勢(shì)情況綜合評(píng)價(jià)。 本方法負(fù)責(zé)起草單位:江蘇省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院。 驗(yàn)證單位:山東省食品藥品檢驗(yàn)研究院、江南大學(xué)、四川省食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)院 主要起草人:徐春祥、張淵、張征、顏春榮、胡明燕、劉麗強(qiáng)、姚歡 — END — — 5 —- 1.請(qǐng)仔細(xì)閱讀文檔,確保文檔完整性,對(duì)于不預(yù)覽、不比對(duì)內(nèi)容而直接下載帶來的問題本站不予受理。
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