食品中玉米赤霉烯酮的測定

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中華人民共和國國家標準 華人民共和國衛(wèi)生部 發(fā)布 布 施 食品安全國家標準 食品 中 玉米赤霉烯酮 的測定 （征求意見稿） 前 言 本標準代替 谷物中玉米赤霉烯酮的測定 》和 23504食品中玉米赤霉烯酮的測定 免疫親和層析凈化高效液相色譜法 》 。 本標準與 B/T 23504要變化 如下： —— 修改了標準的中文名稱，標準中文名稱改為 《食品安全國家標準 食品中玉米赤霉烯酮的測定（理化方法 ）》； —— 按照 —— 新標準內(nèi)容是由原 23504個方法組成， 將 23504 食品安全國家標準 食品 中玉米赤霉烯酮的測定 1 范圍 本標準規(guī)定了 食品 中玉米赤霉烯酮的測定方法。 本標準 第一法 適用于 谷物 （ 玉米、小麥 等 ）中玉米赤霉烯酮的測定 ，第二法 適用于糧食和糧食制品、酒類、醬油、醋、醬及醬制品中玉米赤霉烯酮含量的測定。 2 原理 試樣中的玉米赤霉烯酮用乙腈 取液經(jīng)免疫親和柱凈化、濃縮后，用配有熒光檢測器的液相色譜儀進行測定，外標法定量。 第一法 免疫親和層析凈化液相色譜法 3 試劑和材料 除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為 符合 6682中 規(guī)定的 一級 水 。 試劑 醇 （ ： 色譜 純 。 腈 （ ： 色譜 純 。 化鈉 （ 。 劑配制 乙腈 9+1）： 90 0 準品 玉米赤霉烯酮 （ 標準品：純度 ≥98%。 準溶液配制 米赤霉烯酮標準儲備 液（ 0.1 mg/ 準確稱取適量的玉米赤霉烯酮標準品，用乙腈 溶解并定容至濃度 為 0.1 mg/ 冰箱中避光保存 ，可使用 3個月 。 使用前用流動相稀釋成適當濃度的標準工作液。 米赤霉烯酮標準標準曲線工作液： 將標準儲備液用乙腈系列稀釋后，配成濃度為 g/g/g/g/g/g/g/g/可使用 7 d。 料 米赤霉 烯酮免疫親和柱。 璃纖維濾紙 4 儀器和設備 高效液相色譜儀，配有熒光檢測器。 粉碎機 。 高速均質(zhì)器 。 氮吹儀 。 空氣壓力泵 。 玻璃注射器： 20 天平：感量 g。 5 分析步驟 試樣 制備 樣品提取 稱取 40 確到 g）置于 250 入 4 00 9+1） ，以均質(zhì)器高速攪拌提取 2 過折疊快速定性濾紙過濾，移取 10.0 0.0 玻璃纖維濾紙過濾 1次～ 2次，至濾液澄清后進行免疫親和柱凈化操作。 凈化 將免疫親和柱連接于 20 確移取 10.0 相當于 0.8 入玻璃注射器中，將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以 1 滴 /s～ 2 滴 /至有部分空氣通過柱體。以 5 次，棄去全部流出液，并使部分空氣通過柱體。準確加入 1.5 洗脫，流速為 1 mL/集 洗脫液于玻璃試管中，于 55 ℃以下氮氣吹干后，用 1.0 b） ]溶解殘渣，供液相色譜測定。 儀器參考條件 液相色譜條件 a） 色譜柱： 150 .6 內(nèi)徑 ） ，粒度 4 μm，或相當者； b） 流動相：乙腈 甲醇 （ 46+46+8） ； c） 流速： 1.0 mL/ d） 檢測波長：激發(fā)波長 274 射波長 440 e） 進樣量： 100 μL； f） 柱溫：室溫。 色譜分析 分別取樣液和標準溶液各 100 μ保留時間定性，峰面積定量。在上述色譜條件下，玉米赤霉烯酮的保留時間約為 3.4 玉米赤霉烯酮標準品的液相色譜圖參見 圖 1。 空白試驗 除不加試樣外，均按上述步驟進行 。 6 分析結(jié)果的表述 按外標法計算試樣中玉米赤霉烯酮的含量，計算結(jié)果需將空白值扣除。見式 （ l） ： 式中： X—— 試樣中玉米赤霉烯酮的含量，單位為微克每千克 （ μg/； A—— 樣液中玉米赤霉烯酮的峰面積； 空白樣液中玉米赤霉 烯酮的峰面積； c—— 標準工作溶液中玉米赤霉烯酮的濃度，單位為微克每毫升 （ μg/； V—— 樣液最終定容體積，單位為毫升 （ ； m—— 最終樣液所代表的試樣量，單位為克 （ g） ； 標準工作溶液中玉米赤霉烯酮的峰面積。 第二法 免疫親和層析凈化液相色譜法 7 試劑和材料 除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為 6682規(guī)定的一級水。 劑 醇 （ ：色譜純。 腈 （ ：色譜純。 化鈉（ 。 磷酸氫二鈉（ 。 磷酸二氫鉀（ 。 氯化鉀（ 。 試劑配制 取液：乙腈 ＋ 水 （ 9+1） ， 9份乙腈和 1份水混合而成 。 取 8.0 1.2 0.2 0.2 990 后用濃鹽酸調(diào)節(jié) 用水定容至 1 L。 醇十乙腈 （ 1+1） ： 1份乙腈和 1份甲醇混合而成。 準品 玉米赤霉烯酮 （ 標準品：純度 ≥98%。 準溶液配制 ： 備液 （ 0.1 mg/：準確稱取一定量的玉米赤霉烯酮標準品，用甲醇 +乙腈（ 1+1） 溶解，配成 0.1 mg/ 保存，可使用 3個月。 玉米赤霉烯酮標準工作液：根據(jù)使用需要，準確吸取一定量的玉米赤霉烯酮儲備液，用流動相稀釋，分別配成相當于 10 ng/50 ng/100 ng/200 ng/500 ng/4 ℃保存，可使用 7 d。 料 玉米赤霉 烯酮免疫親和柱。 玻璃纖維濾紙：直徑 11 徑 m，無熒光特性。 8 儀器和設備 天平：感量 g。 高效液相色譜儀：配有熒光檢測器。 均質(zhì)器：轉(zhuǎn)速大于 10 000 r/ 高速萬能粉碎機：轉(zhuǎn)速 10 000 r/ 玻璃注射器： 10 試驗篩： 1 空氣壓力泵。 9 分析步驟 試樣制備與提取 糧食和糧食制品：將樣品研磨，硬質(zhì)的糧食等用高速萬能粉碎機磨細并通過 試驗篩 （ ，不要磨成粉末。稱取 50 g（精確到 g）磨碎的試樣于 入 5 提取液 （ 容至刻度，混勻，轉(zhuǎn)移至均質(zhì)杯中，高速攪拌提取 2 量濾紙過濾，移取 10.0 0 水定容至刻度，混勻，用玻璃纖維濾紙過濾至濾液澄清，收集濾液 酒類：取脫氣酒類試樣（含二氧化碳的酒類使用前先置于 4 ℃ 冰箱冷藏 30 濾或超聲脫氣）或其他不含二氧化碳的酒類試樣 20 g（精確到 g）于 50 乙腈定容至刻度，搖勻。移取 10.0 0 水定容至刻度，混勻，用玻璃纖維濾紙過濾至濾液澄清， 收集濾液 醬油、醋、醬及醬制品：稱取 25 g（精確到 g）混勻的試樣，用乙腈定容至 100.0 聲提取 2 量濾紙過濾，移取 10.0 0 水定容至刻度，混勻，用玻璃纖維濾紙過濾至濾液澄清，收集濾液 凈化 將免疫親和柱連接于玻璃注射器 （ 下，準確移取 A 或 B 或 C 10.0 入玻璃注射器中。將空氣壓力泵與玻璃注射器相連接，調(diào)節(jié)壓力，使溶液以約 1 滴／ 至空氣進入親和柱中。依次用 10 和 10 速約為 l 滴 /s～ 2 滴 /s，直至空氣進入親和柱中，棄去全部流出液，抽干小柱。 洗脫 準確加入 1.0 速約為 1 滴 /s，收集全部洗脫液于干凈的玻璃試管中，用甲醇定容至 1 液相色譜參考條件 a） 色譜柱： 5 μm ， 150 .6 b） 流動相：乙腈十水十甲醇 （ 46+46+8） ； c） 流速： 1.0 mL/ d） 柱溫： 35℃ ； e） 進樣量： 20 μL～ 100 μL； f） 檢測波長：激發(fā)波長 274 射波長 440 在上述色譜條件下 ，玉米赤霉烯酮標準品色譜圖參見圖 2。 標準曲線的制作 以玉米赤霉烯酮標準工作溶液濃度為橫坐標，以峰面積積分值為縱坐標，繪制標準工作曲線。 試樣溶液的測定 將試樣溶液注入液相色譜儀中，得到相應的峰面積。用標 準工作曲線對試樣進行定量，標準工作溶液和試樣溶液中玉米赤霉烯酮的響應值均應在儀器檢測線性范圍內(nèi)， 平行測定次數(shù)不少于兩次 。 空白試驗 除不加試樣外，空白試驗應與測定平行進行，并采用相同的分析步驟。 10 分析結(jié)果的表述 試樣中玉米赤霉烯酮的含量按式 （ l） 計算： 01 ) 1 0 0 01000c c ?????（ ………………………………… （ 1） 式中： X—— 試樣中玉米赤霉烯酮的含量，單位為微克每千克 （ μg/； 試樣 溶液中玉米赤霉烯酮的濃度，單位為納克每毫升 （ ng/； 空白試樣溶液中玉米赤霉烯酮的濃度，單位為納克每毫升 （ ng/； V—— 甲醇洗脫液體積，單位為毫升 （ ； m—— 試樣的質(zhì)量，單位為克 （ g） ； f—— 稀釋倍數(shù)。 附 錄 A 第一法 玉米赤霉烯酮標準品 的液相色譜圖 附 錄 B 第二法 玉米赤霉烯酮標準品的液相色譜圖 圖 2 玉米赤霉烯酮標準品的液相色譜圖