高考生物二輪復(fù)習(xí) 第九單元 現(xiàn)代生物科技專題 專題一 基因工程與細(xì)胞工程

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第九單元 現(xiàn)代生物科技專題 專題一 基因工程與細(xì)胞工程 (時(shí)間：40分鐘　滿分：60分) B級(jí)必測(cè) 1．(2016無(wú)錫期末)下列有關(guān)基因工程的敘述中，正確的是(　　) A．限制性核酸內(nèi)切酶只在獲得目的基因時(shí)使用 B．重組質(zhì)粒的形成是在細(xì)胞內(nèi)完成的 C．目的基因必須整合到受體細(xì)胞的DNA中才能復(fù)制 D．通過(guò)基因工程育種可以定向地改變生物的性狀 解析　基因工程中用同種限制性核酸內(nèi)切酶切割目的基因和質(zhì)粒，A錯(cuò)誤；重組質(zhì)粒的形成是在生物體外完成的，B錯(cuò)誤；載體中具有復(fù)制原點(diǎn)，因此只要目的基因重組到質(zhì)粒中即能復(fù)制，C錯(cuò)誤；基因工程育種可以定向地改變生物的性狀，這是基因工程的優(yōu)點(diǎn)，D正確。 答案　D 2．(2016南京三模)下圖表示核移植與克隆動(dòng)物的相關(guān)圖解，有關(guān)敘述中錯(cuò)誤的是(　　) A．圖示過(guò)程說(shuō)明高度分化的動(dòng)物細(xì)胞核仍具有發(fā)育的全能性 B．用于核移植的供體細(xì)胞①一般都選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞 C．采集的卵母細(xì)胞培養(yǎng)到的②時(shí)期表示減數(shù)第二次分裂后期 D．選用去核卵母細(xì)胞的主要原因是其細(xì)胞質(zhì)可使體細(xì)胞核的全能性表達(dá) 解析　圖示過(guò)程表明高度分化的動(dòng)物細(xì)胞的細(xì)胞核經(jīng)核移植、克隆培養(yǎng)可以得到克隆后代，說(shuō)明高度分化的動(dòng)物細(xì)胞的細(xì)胞核仍具有發(fā)育的全能性，A正確；因?yàn)閭鞔?0代以內(nèi)的細(xì)胞能保持正常的二倍體核型，所以用于核移植的供體細(xì)胞一般都選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞，B正確；圖中采集到的卵母細(xì)胞常培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂中期適合用來(lái)去核后作為核受體，C錯(cuò)誤；動(dòng)物細(xì)胞核移植時(shí)常選用去核卵母細(xì)胞作受體，主要原因是去核卵母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)可以為供體體細(xì)胞核的全能性表達(dá)提供條件，D正確。 答案　C 3．(2016南通一模)下圖為培育甘蔗脫毒苗的兩條途徑，研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)②過(guò)程獲得的幼苗脫毒效果更好。相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(　　) A．①過(guò)程所取莖尖中的葉原基具有較高的分裂、分化能力 B．②過(guò)程的作用可能是阻礙病毒等進(jìn)入莖尖分生組織 C．③、④過(guò)程中基因的選擇性表達(dá)導(dǎo)致了細(xì)胞脫分化 D．培養(yǎng)基A、B中生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的含量和比例不同 解析　取芽進(jìn)行培養(yǎng)是因?yàn)檠烤哂休^高的分裂和分化能力，經(jīng)過(guò)熱水處理脫毒效果好與阻礙病毒進(jìn)入有一定的關(guān)系，圖中③和④為再分化過(guò)程。評(píng)講時(shí)注重復(fù)習(xí)植物組織培養(yǎng)的原理、過(guò)程、應(yīng)用。 答案　C 4．(2016南京、鹽城二模)圖示為人體抗胃癌單克隆抗體的制備過(guò)程。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(　　) A．甲是能與人體抗胃癌抗體特異性結(jié)合的抗原 B．細(xì)胞融合獲得乙的原理和植物原生質(zhì)體融合的原理基本相同 C．用特定選擇培養(yǎng)基對(duì)乙篩選，融合細(xì)胞均能生長(zhǎng)，未融合細(xì)胞均不能生長(zhǎng) D．丙需進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)，多次篩選后可獲得能分泌所需抗體的丁 解析　分析圖示可知：甲是能與人體抗胃癌抗體特異性結(jié)合的抗原，A正確；細(xì)胞融合獲得乙的原理和植物原生質(zhì)體融合的原理都是細(xì)胞膜的流動(dòng)性，B正確；用特定選擇培養(yǎng)基對(duì)乙篩選，只有融合的雜交瘤細(xì)胞能生長(zhǎng)，融合的具有同種核的細(xì)胞與未融合的細(xì)胞均不能生長(zhǎng)，C錯(cuò)誤；丙為雜交瘤細(xì)胞，需進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)，從中篩選出能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞丁，D正確。 答案　C 5．(2016南通一模)有關(guān)限制性內(nèi)切酶HindⅢ和XhoI的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)分別為A↓AGCTT和C↓TCGAG，相關(guān)敘述正確的是(　　) A．兩種限制酶的識(shí)別序列在DNA分子中出現(xiàn)的概率不同 B．兩種限制酶切割形成的粘性末端都是－AGCT C．分別用這兩種酶切割目的基因和質(zhì)粒后能形成重組質(zhì)粒 D．實(shí)驗(yàn)中可通過(guò)控制反應(yīng)時(shí)間、酶的濃度等控制酶切效果 解析　兩種限制酶的識(shí)別序列均為6個(gè)，所以在DNA中出現(xiàn)的概率相同，切出的黏性末端分別為－AGCT和－TCGA，無(wú)法再次形成黏性末端，實(shí)驗(yàn)中可通過(guò)控制反應(yīng)時(shí)間、酶濃度等控制切割效果。評(píng)講時(shí)注意分析黏性末端以及末端之間的黏合。 答案　D 6．(2016揚(yáng)州高三期末)下列關(guān)于核酸分子雜交和抗原—抗體雜交的敘述，正確的是(　　) A．核酸分子雜交是指兩條脫氧核苷酸鏈的雜交 B．抗原—抗體雜交的原理為堿基互補(bǔ)配對(duì)原則 C．核酸分子雜交可檢測(cè)目的基因的存在和轉(zhuǎn)錄 D．抗原—抗體雜交常以目的基因產(chǎn)物作為抗體 解析　核酸分子雜交是指兩個(gè)DNA分子四條脫氧核苷酸鏈的雜交；抗原—抗體雜交的原理為蛋白質(zhì)的特異性結(jié)合原理?？乖贵w雜交常以目的基因產(chǎn)物作為抗原。 答案　C 7．(2016蘇錫常鎮(zhèn)一模)青蒿素是從植物黃花蒿的葉片中所提取的一種代謝產(chǎn)物，而莖及其他部位中的青蒿素含量極其微小，下列關(guān)于利用植物組織培養(yǎng)生產(chǎn)青蒿素的敘述中，正確的是(多選)(　　) A．在黃花蒿組織培養(yǎng)過(guò)程中的一定階段必須給予光照 B．加入大量生長(zhǎng)素可提高青蒿素的產(chǎn)量 C．可通過(guò)大量培養(yǎng)愈傷組織以直接獲得青蒿素 D．可大規(guī)模栽培組織培養(yǎng)苗以獲取藥用成分 解析　在黃花蒿組織培養(yǎng)過(guò)程中的再分化階段必須給予光照，A正確；青蒿素是從植物黃花蒿的葉片中所提取的一種代謝產(chǎn)物，故加入大量生長(zhǎng)素不會(huì)提高青蒿素的產(chǎn)量，B錯(cuò)誤；愈傷組織不產(chǎn)生青蒿素，C錯(cuò)誤；可大規(guī)模栽培組織培養(yǎng)苗以獲取藥用成分，D正確。 答案　AD 8. (2016南通三模)如圖是某動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)液中活細(xì)胞和死亡細(xì)胞密度統(tǒng)計(jì)結(jié)果。相關(guān)敘述正確的是(多選)(　　) A．實(shí)驗(yàn)中要控制胰蛋白酶溶液濃度和處理時(shí)間，以免損傷細(xì)胞 B．培養(yǎng)液中應(yīng)適當(dāng)加入青霉素、鏈霉素，以避免雜菌污染 C．曲線bc段產(chǎn)生的主要原因是培養(yǎng)液中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不足及有害代謝產(chǎn)物積累等 D．培養(yǎng)第6天時(shí)，新產(chǎn)生的細(xì)胞數(shù)等于死亡細(xì)胞數(shù) 解析　在第6天時(shí)表示活細(xì)胞總數(shù)與死細(xì)胞總數(shù)相等，并非是新產(chǎn)生的細(xì)胞與死亡細(xì)胞數(shù)相等，D錯(cuò)誤。 答案　ABC 9. (2016蘇錫常鎮(zhèn)一模)pBV220載體是我國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒研究所自行構(gòu)建并廣泛應(yīng)用的大腸桿菌溫控載體，大小為3666bp(bp表示堿基對(duì))，其結(jié)構(gòu)如下圖所示。圖中PRPL是啟動(dòng)子，rrnB是基因轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)，Ampr是氨芐抗性基因，ori是質(zhì)粒復(fù)制起點(diǎn)，EcoRⅠ、HindⅢ等為各種限制性內(nèi)切酶。請(qǐng)據(jù)圖回答下列有關(guān)問(wèn)題： (1)從圖中可看出，pBV220作為運(yùn)載體具備的條件有________、________。 (2)該質(zhì)?？杀籄、B、C三種限制性內(nèi)切酶同時(shí)切割。單獨(dú)A切割得一條長(zhǎng)鏈，單獨(dú)B切也得一條長(zhǎng)鏈，A和C同時(shí)切割得2個(gè)500bp和1個(gè)2666bp片段，B和C同時(shí)切割得2個(gè)250bp和1個(gè)3166bp片段。若以A的切割位點(diǎn)為計(jì)算起點(diǎn)，則B的切割位點(diǎn)與A點(diǎn)最短長(zhǎng)度為________，C的兩個(gè)切割位點(diǎn)與A點(diǎn)的最短距離分別為________、________。 (3)PR和PL都是啟動(dòng)子，pBV220載體構(gòu)建過(guò)程中把兩個(gè)啟動(dòng)子串聯(lián)在一起，形成了雙啟動(dòng)子，雙啟動(dòng)子的作用可能是______________________。溫控基因CIts857編碼對(duì)溫度敏感的CIts蛋白，CIts在30℃時(shí)具有抑制啟動(dòng)子的活性，在42℃時(shí)失活。促進(jìn)工程菌目的基因表達(dá)的誘導(dǎo)溫度為________。 解析　(1)從圖中可看出，pBV220作為運(yùn)載體具備的條件有多個(gè)限制性內(nèi)切酶的切割位點(diǎn)和標(biāo)記基因。 (2)由題意可知，A和C同時(shí)切割得2個(gè)500bp和1個(gè)2666bp片段，B和C同時(shí)切割得2個(gè)250bp和1個(gè)3166bp片段。故若以A的切割位點(diǎn)為計(jì)算起點(diǎn)，則B的切割位點(diǎn)與A點(diǎn)最短長(zhǎng)度為750bp；C的兩個(gè)切割位點(diǎn)與A點(diǎn)的最短距離分別為500bp和1000bp。 (3)雙啟動(dòng)子可以保證目的基因的高水平表達(dá)(高效轉(zhuǎn)錄)；由題意可知，CIts在30℃時(shí)具有抑制啟動(dòng)子的活性，在42℃時(shí)失活，故促進(jìn)工程菌目的基因表達(dá)的誘導(dǎo)溫度為42℃。 答案　(1)多個(gè)限制性內(nèi)切酶的切割位點(diǎn)　標(biāo)記基因 (2)750bp　500bp　1000bp (3)保證目的基因的高水平表達(dá)(高效轉(zhuǎn)錄)　42℃ 10．(2016蘇錫常鎮(zhèn)二模)研究人員利用成年鼠嗅粘膜制備的嗅鞘細(xì)胞，在添加不同血清濃度下培養(yǎng)并測(cè)量其細(xì)胞生長(zhǎng)(增殖)情況，獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下圖，請(qǐng)據(jù)圖分析回答： (1)將獲取的嗅粘膜加入0.25%酶液中，用剪刀充分剪碎，并用吸管吹吸多次，該操作的生物學(xué)意義是________，以便制成嗅粘膜細(xì)胞懸液。該過(guò)程中，所使用酶液的主要成分是________。 (2)將獲得的嗅粘膜細(xì)胞懸液及時(shí)離心，將分離獲得的嗅粘膜細(xì)胞加入適量的培養(yǎng)液，搖勻后再離心獲取嗅粘膜細(xì)胞，這樣操作的意義主要是去除________，以避免其對(duì)嗅粘膜細(xì)胞正常的生命活動(dòng)造成影響。將獲得的嗅粘膜細(xì)胞用特定培養(yǎng)基置于培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。進(jìn)行原代培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞增殖的方式是________。 (3)根據(jù)實(shí)驗(yàn)可知，當(dāng)培養(yǎng)液中血清濃度為40%－80%時(shí)，隨血清濃度升高，對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)的促進(jìn)作用表現(xiàn)為________。據(jù)圖推測(cè)，與40%的血清濃度培養(yǎng)條件相比，10%的血清濃度對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的促進(jìn)作用可能表現(xiàn)為________。 解析　(1)培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞前，將動(dòng)物組織用剪刀充分剪碎，將剪碎的組織加到酶溶液后用吸管反復(fù)吹吸的目的是使動(dòng)物組織與酶液充分接觸，使細(xì)胞分散開來(lái)，以便于制備細(xì)胞懸液。實(shí)驗(yàn)中通常選用胰蛋白酶來(lái)分散動(dòng)物組織。 (2)如果將動(dòng)物細(xì)胞長(zhǎng)期接觸胰蛋白酶，可能會(huì)造成動(dòng)物細(xì)胞結(jié)構(gòu)被破壞，所以，當(dāng)組織中的細(xì)胞充分分散后要及時(shí)去除培養(yǎng)液中的胰蛋白酶。原代培養(yǎng)中，動(dòng)物細(xì)胞通過(guò)有絲分裂進(jìn)行增殖。 (3)分析題圖曲線可知，當(dāng)培養(yǎng)液中血清濃度為40%～80%時(shí)，雖然血清對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)仍有促進(jìn)作用，但血清濃度越高，細(xì)胞生長(zhǎng)指數(shù)越低，說(shuō)明當(dāng)培養(yǎng)液中血清濃度為40%～80%時(shí)，隨著血清濃度的升高，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的促進(jìn)作用不斷下降。根據(jù)圖中信息無(wú)法比較10%的血清濃度條件與40%的血清濃度對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。 答案　(1)(與酶液充分接觸)使細(xì)胞分散開來(lái)　胰蛋白酶　(2)胰蛋白酶　有絲分裂　(3)下降　增大或下降或基本不變 A級(jí)自悟 11. (2016南通三模)科研人員研究了馬鈴薯莖尖外植體大小對(duì)幼苗的成苗率和脫毒率的影響，結(jié)果如下圖。相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(　　) A．培育脫毒苗所依據(jù)的原理有基因突變和細(xì)胞全能性 B．培育脫毒苗的過(guò)程中涉及脫分化和再分化兩個(gè)階段 C．實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明莖尖越小脫毒率越高，成苗率越低 D．根據(jù)本實(shí)驗(yàn)，培養(yǎng)脫毒苗時(shí)莖尖的適宜大小為0.27mm 解析　培育脫毒苗的原理是植物細(xì)胞的全能性，A錯(cuò)誤。 答案　A 12．(2016蘇錫常鎮(zhèn)二模)研究發(fā)現(xiàn)，將源自同品系小鼠的癌細(xì)胞和正常成纖維細(xì)胞融合，所獲雜種細(xì)胞所產(chǎn)生的子細(xì)胞中，若保留成纖維細(xì)胞中的某些染色體就可表現(xiàn)正常；但若這些染色體丟失則會(huì)重新惡變?yōu)榘┘?xì)胞。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(　　) A．所保留的成纖維細(xì)胞的某些染色體上有抑制細(xì)胞惡性增殖的基因 B．利用滅活病毒可誘導(dǎo)癌細(xì)胞和正常成纖維細(xì)胞融合 C．雜種細(xì)胞重新變?yōu)榘┘?xì)胞后將失去接觸抑制現(xiàn)象 D．染色體數(shù)目的變異能使癌細(xì)胞突變成正常細(xì)胞 解析　分析題意可知，子細(xì)胞是否癌變?nèi)Q于子細(xì)胞中是否含有成纖維細(xì)胞的某些染色體，說(shuō)明成纖維細(xì)胞的某些染色體上有抑制細(xì)胞惡性增殖的基因，A正確；可以利用滅活的病毒誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合，B正確；正常體細(xì)胞有接觸抑制現(xiàn)象，而癌變細(xì)胞會(huì)失去接觸抑制現(xiàn)象，C正確；題中信息只能說(shuō)明染色體數(shù)目變異可能是導(dǎo)致細(xì)胞癌變的原因之一，不能表明染色體數(shù)目變異可使癌變細(xì)胞突變成正常細(xì)胞，D錯(cuò)誤。 答案　D 13．(2016南京、鹽城二模)草甘膦是一種低毒性的廣譜除草劑，能非特異性侵入并殺死所有的植物，其除草機(jī)制是抑制植物體內(nèi)EPSPS酶的合成，最終導(dǎo)致植物死亡?？茖W(xué)家從一種抗草甘膦的大腸桿菌突變株中分離出EPSPS基因(控制EPSPS合成酶合成的基因)轉(zhuǎn)入小麥，以提高其對(duì)草甘膦的耐受性。下列有關(guān)敘述正確的是(　　) A．要篩選出含EPSPS基因的突變菌株，應(yīng)在培養(yǎng)基中加入EPSPS酶 B．可用抗原—抗體雜交的方法檢測(cè)細(xì)胞中是否有EPSPS基因的表達(dá)產(chǎn)物 C．EPSPS基因轉(zhuǎn)錄時(shí)以DNA的兩條鏈同時(shí)作為模板，提高轉(zhuǎn)錄的效率 D．EPSPS基因?qū)胄←溔~肉細(xì)胞的葉綠體后，該性狀可隨傳粉過(guò)程遺傳 解析　依題意可知：要篩選出含EPSPS基因的突變菌株，應(yīng)在培養(yǎng)基中加入草甘膦，A錯(cuò)誤；EPSPS基因的表達(dá)產(chǎn)物是蛋白質(zhì)，可用抗原—抗體雜交的方法檢測(cè)細(xì)胞中是否有EPSPS基因的表達(dá)產(chǎn)物，B正確；EPSPS基因轉(zhuǎn)錄時(shí)以DNA的一條鏈為模板，C錯(cuò)誤；葉綠體中的基因通過(guò)母本遺傳給后代，因此EPSPS基因?qū)胄←溔~肉細(xì)胞的葉綠體后，該性狀不能隨傳粉過(guò)程遺傳，D錯(cuò)誤。 答案　B 14．(2016揚(yáng)州期中考)下列有關(guān)人胰島素基因表達(dá)載體的敘述，錯(cuò)誤的是(多選)(　　) A．表達(dá)載體中的胰島素基因可通過(guò)人肝細(xì)胞mRNA反轉(zhuǎn)錄獲得 B．表達(dá)載體的復(fù)制和胰島素基因的表達(dá)均啟動(dòng)于復(fù)制原(起)點(diǎn) C．借助抗生素抗性基因可將含胰島素基因的受體細(xì)胞篩選出來(lái) D．啟動(dòng)子和終止密碼子均在胰島素基因的轉(zhuǎn)錄中起作用 解析　由于基因的選擇性表達(dá)，在人的肝細(xì)胞中，沒有胰島素基因轉(zhuǎn)錄的mRNA，A錯(cuò)誤；表達(dá)載體的復(fù)制啟動(dòng)于復(fù)制原(起)點(diǎn)，胰島素基因的表達(dá)啟動(dòng)于啟動(dòng)子，B錯(cuò)誤；標(biāo)記基因的作用是為了鑒定受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來(lái)，C正確；啟動(dòng)子在胰島素基因的轉(zhuǎn)錄中起作用，終止密碼子在胰島素基因的翻譯中起作用，D錯(cuò)誤。 答案　ABD 15．(2016南通三模)hNaDC3(人鈉/二羧酸協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白－3)主要分布于腎臟等重要器官，它具有促進(jìn)人腎小管上皮細(xì)胞能量代謝和轉(zhuǎn)運(yùn)等功能。科研人員利用基因工程技術(shù)構(gòu)建綠色熒光蛋白與hNaDC3融合基因，并在腎小管上皮細(xì)胞中表達(dá)，以動(dòng)態(tài)觀察hNaDC3在腎小管上皮細(xì)胞中的定位情況，為進(jìn)一步研究hNaDC3的生理功能奠定基礎(chǔ)。研究主要過(guò)程如圖(實(shí)驗(yàn)中使用的限制酶SacⅠ的識(shí)別序列是GAGCT↓C，限制酶SacⅡ識(shí)別序列是CCGC↓GG)。請(qǐng)分析回答： (1)與PCR相比，過(guò)程①需要的特有的酶是________，應(yīng)從人體________(器官)的組織細(xì)胞中獲得模板RNA。 (2)DNA分子被SacⅠ切割后，形成的黏性末端是________。過(guò)程②選用SacⅠ、SacⅡ分別切割hNaDC3基因和質(zhì)粒載體，可實(shí)現(xiàn)目的基因定向插入并正常表達(dá)的原因是__________________。 (3)過(guò)程③可獲得多種重組DNA，可依據(jù)不同DNA分子的大小，運(yùn)用________(技術(shù))分離、篩選重組表達(dá)載體。 (4)顯微觀察導(dǎo)入“綠色熒光蛋白－h(huán)NaDC3融合基因”的豬腎小管上皮細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)：轉(zhuǎn)染后第1天綠色熒光混合分布于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜，核中未見綠色熒光；到第5天綠色熒光清晰聚集于細(xì)胞膜，細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中未見綠色熒光。根據(jù)這一觀察結(jié)果還不能得出“hNaDC3是在細(xì)胞質(zhì)中生成后，在細(xì)胞膜上發(fā)揮作用”的結(jié)論，需要設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)以排除綠色熒光蛋白本身的定位，對(duì)照實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)思路是____________________________________________________。 (5)研究人員以較高濃度的葡萄糖溶液培養(yǎng)導(dǎo)入融合基因的豬腎小管上皮細(xì)胞，一段時(shí)間后發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染細(xì)胞的細(xì)胞膜上綠色熒光明顯增強(qiáng)。這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以說(shuō)明________。 解析　(1)RT—PCR是以RNA為模板逆轉(zhuǎn)錄形成DNA，需要逆(反)轉(zhuǎn)錄酶的催化。因目的基因是在腎小管上皮細(xì)胞中表達(dá)，故首先應(yīng)從腎臟組織細(xì)胞獲得模板RNA。 (2)限制酶SacI的識(shí)別序列是GAGCT↓C，切割形成的黏性末端是－GAGCT。雙酶切時(shí)不同的酶切割形成的黏性末端不同，在DNA連接酶作用下可實(shí)現(xiàn)目的基因定向插入載體并正常表達(dá)。 (3)依據(jù)DNA分子的大小不同，可利用(凝膠)電泳技術(shù)進(jìn)行篩選，基因工程技術(shù)中通常也用該技術(shù)對(duì)酶切后的重組質(zhì)粒進(jìn)行電泳，以達(dá)到篩選重組質(zhì)粒的目的。 (4)通過(guò)該實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象不能排除綠色熒光蛋白本身對(duì)結(jié)果的干擾，需設(shè)置對(duì)照進(jìn)行比較，其思路為將GFP基因表達(dá)載體直接導(dǎo)入豬腎小管上皮細(xì)胞，然后觀察熒光在細(xì)胞中的分布情況，以排除熒光蛋白對(duì)結(jié)果的影響。 (5)轉(zhuǎn)染細(xì)胞膜上綠色熒光明顯增強(qiáng)的原因是較高濃度葡萄糖增強(qiáng)腎小管上皮細(xì)胞中hNaDC3基因的表達(dá)。 答案　(1)逆轉(zhuǎn)錄酶(或反轉(zhuǎn)錄酶)　腎臟 (2)—AGCT　兩種限制酶切割產(chǎn)生的黏性末端不同 (3)(凝膠)電泳 (4)將GFP基因表達(dá)載體直接導(dǎo)入豬腎小管上皮細(xì)胞，然后觀察綠色熒光在細(xì)胞中的分布情況 (5)較高濃度葡萄糖能增強(qiáng)腎小管上皮細(xì)胞中hNaDC3基因的表達(dá)