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廣東醫(yī)學(xué) 2010 年 1 月第 31 卷第 2 期 Guangdoni： Mediad Journal Jan. 2010, Vol. 31, No. 2
氟伐他汀對(duì)心梗家兔左室重構(gòu)及心肌細(xì)胞
NHE 一 1 mRNA表達(dá)的影響
陳緒江S董曉燕，楊波2
I湖北省武漢市第三醫(yī)曉心內(nèi)科（430060）； 2武漢大學(xué)人民醫(yī)院（武漢430060）
【播要】 目的 研究鼠伐他汀對(duì)正常血脂家兔心梗后左室重構(gòu)及心肌鈿胞NHE-lmRNA表達(dá)的影響。方法
30只家兔隨機(jī)分為3組5 = 10）：假手術(shù)組、心肌梗死組和鼠伐他汀干預(yù)組■干預(yù)組予以鼠伐他汀10 巒（燉? d） 灌胃給藥
2、，心肌梗死組予以蒸館水灌那。喂養(yǎng)4周后，進(jìn)行血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)、左室肥厚指數(shù)（LVHI）的測定，同時(shí)運(yùn)用 逆轉(zhuǎn)錄聚合胯聯(lián)反應(yīng)法（RT-PCR）檢測左宣非梗死區(qū)心肌NHE?1 mRNA的表達(dá)。結(jié)果 心肌梗死組左宣重童指 數(shù)（LVWI）增大、左室收縮壓（LVSP）顯著降低，而鼠伐他汀干枝組較心肌梗死組LVSP增高、1VWI下降,NHE-1 mKNA表達(dá)降低。結(jié)論 II伐他汀改#家兔心梗后心室菱構(gòu)■并下調(diào)局部心肌NHE-1 mRNA的表達(dá)。
【關(guān)鍵詞）鼠伐他?。恍募」Ｋ?；NHE - 1
心室肥厚是急性心肌梗死后的一個(gè)常見并發(fā)癥， 現(xiàn)研究發(fā)現(xiàn),其發(fā)生除了與神經(jīng)體液因素、炎性細(xì)胞因 子、氧自由基
3、的參與有關(guān)外，還與細(xì)胞內(nèi)鈣超載有關(guān)。 在心臟，心肌細(xì)胞胞漿內(nèi)游離的鈣濃度與NaVH4交 換體（NHE - 1）的參與調(diào)節(jié)有關(guān),當(dāng)其功能或表達(dá)的量 發(fā)生改變時(shí)，可導(dǎo)致心肌細(xì)胞內(nèi)鈣的穩(wěn)態(tài)發(fā)生改變，從 而導(dǎo)致心肌細(xì)胞發(fā)生病理性改變，如肥大增生或凋亡 等。TAKEWAKI等⑴研究發(fā)現(xiàn)NHE-1的激活及其基 因表達(dá)的增加與心肌肥厚發(fā)生的分子機(jī)制有關(guān)。他汀 類藥物在臨床上廣泛用于降脂，近年來的研究發(fā) 現(xiàn)其具有改善心室重構(gòu)、滅輕室壁肥厚的作用,在此基 礎(chǔ)上是否對(duì)心肌梗死后非梗死區(qū)心肌細(xì)胞NHE-1 mRNA的表達(dá)有影響，國內(nèi)外研究較少。本文在結(jié)扎家 兔左冠狀動(dòng)脈前降支制造心梗模型的基礎(chǔ)上，觀察氟 伐他汀對(duì)家
4、兔心肌梗死后左室重構(gòu)及非梗死區(qū)心肌細(xì) 胞NHE-1 mRNA表達(dá)的影響。
1材料與方法
1.1試驗(yàn)動(dòng)物健康家兔30只，雌雄不拘，體重 1.5 -2.2 kgo
1.2試劑和儀器氟伐他汀由北京諾華制藥有限公 司饋贈(zèng);Trizol購自Invitrogen公司；MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶購 自Promega公司；RNasin購自Biostar公司；ACS型電子 計(jì)重稱為梅特勒■托利多（常州）稱重設(shè)備系統(tǒng)有限 公司產(chǎn)品；32道電生理記錄儀LEAD2000B型四川錦 江通用實(shí)業(yè)有限公司產(chǎn)品；Biometra PCR儀為華粵企 業(yè)集團(tuán)有限公司產(chǎn)品。
1.3 方法
1.3.1心梗模型制作所有家兔均用20%烏
5、拉坦 （5 mL/kg）腹腔注射麻醉，常規(guī)消毒后，沿胸骨左緣切 口 ,切斷第3、4兩功,保持胸膜完整,充分暴需心臟,結(jié)扎 冠狀動(dòng)脈左前降支，當(dāng)結(jié)扎線以下出現(xiàn)局部心肌紫綃. 體表心電圖示ST段抬高大于0.2 mV,觀察一段時(shí)間后 不回降表明心肌梗死模型制備成功，術(shù)后肌內(nèi)注射青髯 素3 d（800 000 U/d），假手術(shù)組只開胸穿線但不結(jié)扎。
1.3.2 實(shí)驗(yàn)分組將30只家兔隨機(jī)分成3組5 = 10）,即假手術(shù)組、心肌梗死組和氟伐他汀干預(yù)組。干 預(yù)組術(shù)后第2天開始予以氟伐他汀10 mg/（kg-d）灌 胃給藥，心肌梗死組則給予等量的蒸他水。飼養(yǎng)過程 中因心力衰竭或腹瀉死亡的兔子及時(shí)補(bǔ)上。
1
6、.3.3 血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)測定 喂養(yǎng)4周后，所有家兔 麻醉后固定于手術(shù)臺(tái)上，常規(guī)消毒后，分離右側(cè)頸總動(dòng) 脈，結(jié)扎遠(yuǎn)心端，近心端用動(dòng)脈夾夾緊，用眼科剪在靠 近遠(yuǎn)心端的動(dòng)脈壁上剪一小口，插入導(dǎo)管，通過換能器 連接于32道電生理記錄儀,然后緩慢插入左心室，當(dāng) 電生理儀上出現(xiàn)穩(wěn)定的左心室壓力圖形時(shí)開始記錄左 室收縮壓（LVSP），整個(gè)測量過程始終保持導(dǎo)管內(nèi)充滿 肝察鹽水（1 000 U/mL）o
1.3.4左宣肥厚指數(shù)測定 喂養(yǎng)4周后，所有家兔術(shù) 前稱重，處死后迅速取下心臟，在冰鹽水中洗干凈，然 后放到滅過酶的錫紙上稱重，左心室的重量為心臟去 除左右心房及右心室后的重凰,并由此計(jì)算出左室重 量指數(shù)。
7、
1.3.5 非梗死區(qū)心肌NHE-1 mRNA表達(dá)測定剪 下左心室后，去除梗死區(qū)，余下部分儲(chǔ)存于-70弋冰箱 中，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶聯(lián)反應(yīng)法（RT - PCR）檢測NHE -1 mRNA 表達(dá)。（1）總 RNA 的提取：取 50 ~ 100 mg 心肌組織，在高溫滅酶過的勻漿器中加入1 mL Trizol 于冰上充分勻漿，將勻漿液轉(zhuǎn)移至1.5 mL DEPC處理 過的EP管中，室溫靜置15 min后加入0. 2 mL氯仿，劇 烈振蕩20 s,重復(fù)3次，室溫下靜置5 min,12 000 r/min 4弋離心15 min,取上清轉(zhuǎn)移至一新EP管中，加入等體 積的異丙醇混勻，室溫下靜置10 min,12 000 r/min 4七 離心15 min,棄上清，加入DEPC水配制的75%乙醇 1 mLt 7 500 r/min 4T離心5 min,棄上渭■室溫下自然 晾干，加入20~40 mL DEPC處理水溶解，于55 ~60丫 孵育10 min,紫外分光光度法測定其濃度。（2）RT? PCR：取總RNA 10譏用MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。 NHE - 1PCR反應(yīng)條件：94^5 min預(yù)變性后開始42個(gè)
氟伐他汀對(duì)心梗家兔左室重構(gòu)及心肌細(xì)胞NHE-1mRNA表達(dá)的影響
