食品中鉤吻堿和鉤吻堿子的測定

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DBS45 廣西壯族自治區(qū)地方標準 DBS 45/xxx—xxxx 食品安全地方標準 食品中鉤吻堿和鉤吻堿子的測定 （征求意見稿） XXXX - XX - XX發(fā)布 XXXX - XX - XX實施 廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生健康委員會 ?發(fā)布 附件1 DBS 45/XXX—XXXX ?前 言 本標準按GB/T 1.1—2009的格式編寫。 本標準由廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生健康委員會提出。 本標準起草單位：梧州市食品藥品檢驗所。 本標準主要起草人：羅達龍、陳學松、劉慧妍、黃蘅、葉小強、賴秀梅、王華、陳翠玲、姚泳成、鐘家 I 食品安全地方標準食品中鉤吻堿和鉤吻堿子的測定 1　 范圍 本標準規(guī)定了食品中鉤吻堿和鉤吻堿子的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜和氣相色譜-質(zhì)譜測定方法。 標準中方法一 高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法，適用于蜂蜜、酒類及疑似鉤吻中毒的食品（如保健湯等）中鉤吻堿和鉤吻堿子的定性和定量測定，其它基質(zhì)食品可參照執(zhí)行。 標準中方法二 氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，適用于蜂蜜、酒類及疑似鉤吻中毒的食品（如保健湯等）中鉤吻堿和鉤吻堿子的定性和定量測定，其它基質(zhì)食品可參照執(zhí)行。 標準中方法三 高效液相色譜-串聯(lián)高分辨質(zhì)譜法，適用于蜂蜜、酒類及疑似鉤吻中毒的食品（如保健湯等）中鉤吻堿和鉤吻堿子的篩查和定性確證，其它基質(zhì)食品可參照執(zhí)行。 2　 規(guī)范性引用文件 下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。 GB/T 6682 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法 方法一 高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法 3　 原理 試樣經(jīng)1 %鹽酸超聲提取，經(jīng)MCX柱凈化后，高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定，外標法定量。 4　 試劑和材料 除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為符合GB/T 6682規(guī)定的一級水。 4.1　 試劑 4.1.1　 甲醇（CH3OH）：色譜純。 4.1.2　 甲酸（HCOOH）：色譜純。 4.1.3　 乙腈（CH3CN）：色譜純。 4.1.4　 鹽酸（HCl）。 4.1.5　 氨水（NH3H2O）。 4.1.6　 甲酸銨（HCOONH4）。 4.2　 試劑配制 4.2.1　 5 %氨化甲醇：取氨水5.0mL，用甲醇稀釋至100mL。 4.2.2　 5 mmol/L甲酸銨溶液（含0.1 %甲酸）：稱取甲酸銨0.315 g，加適量水溶解，加入甲酸1.0 mL，用水稀釋至1000 mL，搖勻，用濾膜（5.3）過濾后備用。 4.2.3　 1 %鹽酸水溶液：取鹽酸1.0 mL用水稀釋至100 mL。 4.2.4　 50 %甲醇溶液（含0.1%甲酸）：取甲醇與水各50 mL，混合均勻，每100 mL混合液中加入甲酸0.10 mL。 4.3　 標準品 鉤吻堿、鉤吻堿子標準品的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子質(zhì)量、精確分子量見附錄E表E.1，純度≥98%。 4.4　 標準溶液配制 4.4.1　 標準儲備液（1 mg/mL）：精密稱取鉤吻堿、鉤吻堿子標準品各10 mg分別置10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度。-20 ℃以下避光密封保存，有效期6個月。 4.4.2 混合標準中間工作液（1 μg/mL）：分別準確量取標準儲備液（1 mg/mL）各0.10 mL，用甲醇（4.1.1）稀釋至100 mL。 4.4.3 混合標準工作溶液：分別準確吸取混合標準中間工作液（1 g/mL）（4.4.2）適量，用甲醇溶液（4.2.4）稀釋，搖勻，作為系列混合標準工作溶液，各化合物濃度依次為2 g/L、4 g/L、8 g/L、10 g/L、20 g/L，（可根據(jù)需要進行適當調(diào)整），現(xiàn)配現(xiàn)用。 5　 儀器和設備 5.1　 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，配電噴霧（ESI）離子源。 5.2　 天平：感量分別為0.01 mg、0.1 mg和0.01 g。 5.3　 微孔濾膜：0.22 m，有機相型。 5.4　 離心機：轉(zhuǎn)速≥3 000 r/min。 5.5　 超聲波發(fā)生器：工作頻率40 kHz ，功率100 W。 5.6　 MCX固相萃取小柱：60 mg/3mL，或性能相當者。使用前依次用甲醇3 mL、水3 mL進行活化。 5.7　 渦旋振蕩器。 5.8　 帶刻度100 mL一次性離心管。 6　 分析步驟 6.1　 試樣制備 6.1.1　 蜂蜜樣品制備 對無結(jié)晶的蜂蜜樣品，將其攪拌均勻。對有結(jié)晶的樣品，在密閉情況下，置于不超過 60℃的水浴中溫熱，振蕩，待樣品全部融化后攪勻，迅速冷卻至室溫，分出0.5kg作為試樣置于樣品瓶中，密封，并標明標記，室溫保存，待用。 6.1.2　 保健湯樣品制備 應將湯與湯渣混合均勻后作為試樣。制備均勻的試樣應置于樣品瓶中，密封，并標明標記，置于2～8℃保存，待用。 6.1.3　 試樣處理 稱取1g（精確至0.01g）制備均勻的樣品于帶刻度100 mL一次性離心管中，加1 %鹽酸溶液至50 mL，渦旋振蕩2 min后超聲處理30分鐘，3000 r/mim離心5分鐘，準確吸取上清液5.00 mL，置MCX固相萃取小柱，依次用水5 mL、甲醇5 mL淋洗，抽干，用5 mL氨化甲醇溶液（4.2.4）洗脫，收集洗脫液， 40 ℃氮吹濃縮至干，準確加入1.00 mL甲醇溶液（4.2.4）溶解殘渣，過0.22μm濾膜，備用。必要時可根據(jù)實際濃度進行適當稀釋。 6.2　 儀器參考條件 6.2.1　 色譜條件 a）色譜柱：C18 2.5 μm，2.1 mm x75 mm，或性能相當者。 b）流動相：A為5 mmol/L甲酸銨溶液（含0.1 %甲酸）（4.2.2），B為乙腈（4.1.3），梯度洗脫程序見表1。 c）流速：0.35 mL/min。 d）柱溫：35 ℃。 e）進樣量：0.5 μL。 表1 梯度洗脫程序表 梯度時間/min 流動相A/% 流動相B/% 0.00 95 5 1.00 90 10 1.50 65 35 2.50 10 90 3.00 5 95 3.01 95 5 5.50 95 5 6.2.2　 質(zhì)譜條件 a） 離子源： ESI源。 b） 檢測方式：多反應離子監(jiān)測（MRM）。 c） 碰撞氣為高純氮氣，干燥氣、霧化氣、鞘氣等均為氮氣或其他合適氣體，使用前應調(diào)節(jié)相應參數(shù)使質(zhì)譜靈敏度達到檢測要求，毛細管電壓、干燥氣溫度、鞘氣溫度、鞘氣流量、碰撞能量、碎裂電壓等參數(shù)應優(yōu)化至最佳靈敏度，監(jiān)測離子對和定量離子對等信息詳見附錄A表A.1。 6.3　 定性測定 按照高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜條件測定試樣和標準工作溶液，記錄試樣和標準溶液中各化合物的色譜保留時間，當試樣中檢出與標準品色譜峰保留時間一致的色譜峰（變化范圍在2.5 %之內(nèi)），并且試樣色譜圖中所選擇的監(jiān)測離子對的相對豐度比與相當濃度標準溶液的離子相對豐度比（k）的偏差不超過表2規(guī)定的范圍，可以確定試樣中檢出相應化合物。 表2 定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差 相對離子豐度（%） k＞50 % 50 %≥k＞20 % 20 %≥k＞10 % k≤10 % 允許的最大偏差（%） 20 25 30 50 6.4　 定量測定 6.4.1　 標準曲線的制作 將混合標準工作溶液（4.4.3）分別按儀器參考條件（6.2）進行測定，得到相應的標準溶液的色譜峰面積。以混合標準工作溶液的濃度為橫坐標，以定量離子的色譜峰的峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。 6.4.2　 試樣溶液的測定 將試樣溶液（6.1.3）按儀器參考條件（6.2）進行測定，得到樣品溶液中對應組分的色譜峰面積。根據(jù)標準曲線得到待測液中組分的濃度，平行測定次數(shù)不少于兩次。 標準品色譜圖參見附錄B。 6.4.3　 空白試驗 除不加試樣外，均按上述步驟進行。 7　 結(jié)果計算 將液相色譜-質(zhì)譜測得濃度代入下式計算含量： …………………………………………（1） 式中： X — 試樣中各待測物的含量，單位為微克每千克（μg/kg）； c — 從標準曲線中讀出的供試品溶液中各待測物的濃度，單位為微克每升（μg/L）； V — 樣液最終定容體積，單位為毫升（mL）； m —試樣溶液所代表的質(zhì)量，單位為克（g）； f— 稀釋倍數(shù)。 計算結(jié)果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的算術平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。 8　 精密度 在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術平均值的20 %。 9　 檢出限和回收率 9.1 檢出限 本方法中鉤吻堿檢出限為14 μg/kg，鉤吻堿子檢出限為10 μg/kg；鉤吻堿定量限為28 μg/kg。鉤吻堿子定量限為20 μg/kg。 9.2 回收率 回收率詳見附錄H表H.1。 —21— 方法二 氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法 10　 原理 試樣經(jīng)1 %鹽酸超聲提取，經(jīng)MCX柱凈化后，氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定，外標法定量。 11　 試劑和材料 除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為符合GB/T 6682規(guī)定的一級水。 11.1　 試劑 11.1.1　 甲醇（CH3OH）：色譜純。 11.1.2　 甲酸（HCOOH）：色譜純。 11.1.3　 乙腈（CH3CN）：色譜純。 11.1.4　 鹽酸（HCl）。 11.1.5　 氨水（NH3H2O）。 11.1.6　 甲酸銨（HCOONH4）。 11.2　 試劑配制 11.2.1　 5 %氨化甲醇：取氨水5.0mL，用甲醇稀釋至100mL。 11.2.2　 1 %鹽酸水溶液：取鹽酸1.0 mL，用水稀釋至100 mL。 11.3　 標準品 鉤吻堿、鉤吻堿子標準品的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子質(zhì)量、精確分子量見附錄E表E.1，純度≥98%。 11.4　 標準溶液配制 11.4.1　 標準儲備液（1 mg/mL）：精密稱取鉤吻堿、鉤吻堿子標準品各10 mg分別置10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度。-20 ℃以下避光密封保存，有效期6個月。 11.4.2　 混合標準中間工作液（1 μg/mL）：分別準確量取標準儲備液（1 mg/mL）各0.10 mL，用甲醇稀釋至100 mL。 11.4.3　 混合標準工作溶液：分別準確吸取混合標準中間工作液（1 g/mL）（11.4.2）適量，用甲醇稀釋，搖勻，作為系列混合標準工作溶液，各化合物濃度依次為20 g/L、40g/L、80 g/L、100 g/L、200 g/L，（可根據(jù)需要進行適當調(diào)整），現(xiàn)配現(xiàn)用。 12　 儀器和設備 氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，其他儀器設備同方法一 5.2～5.8。 13　 分析步驟 13.1　 試樣制備 13.1.1　 蜂蜜樣品制備 與6.1.1項下一致 13.1.2　 保健湯樣品制備 與6.1.2項下一致 13.1.3　 試樣處理 稱取1g（精確至0.01g）制備均勻的樣品于帶刻度100 mL一次性離心管中，加1 %鹽酸溶液至50 mL，渦旋振蕩2 min后超聲處理30分鐘，3000 r/mim離心5分鐘，準確吸取上清液5.00 mL，置MCX固相萃取小柱，依次用水5 mL、甲醇5 mL淋洗，抽干，用5 mL氨化甲醇溶液（11.2.1）洗脫，收集洗脫液， 40 ℃氮吹濃縮至干，準確加入1.00mL甲醇溶解殘渣，過0.22μm濾膜，備用。必要時可根據(jù)實際濃度進行適當稀釋。 13.2　 儀器參考條件 13.2.1　 色譜條件 a）色譜柱：以5 %苯基-95 %二甲基聚硅氧烷為固定相 0.25 mm30 m0.25 μm石英毛細管柱，或性能相當者。 b）載氣：高純氦氣（純度：99.999%）。 c）流速：1.2 mL/min。 d）進樣量：1.0 μL；不分流進樣。 e）程序升溫：初始溫度為150 ℃，保持2 min，然后15 ℃min-1升至280 ℃，保持4 min 13.2.2　 質(zhì)譜條件 a）離子源：電子轟擊源(EI) 70 eV。 b）離子源溫度230 ℃。 c）溫度280 ℃。 d）四極桿溫度150 ℃。 e）儀器使用前以全氟三丁胺調(diào)諧液對質(zhì)譜質(zhì)量軸進行校正。 f）全掃描（SCAN）質(zhì)量范圍40-350 amu。 g) 監(jiān)測方式：選擇離子掃描（SIM）：選擇離子詳見附錄C。 13.3　 定性測定 在相同實驗條件下，樣液中待測物質(zhì)的質(zhì)量色譜保留時間與標準工作溶液相同并且在扣除背景后的樣品質(zhì)量色譜中所選離子均出現(xiàn)，經(jīng)過對比所選擇離子的豐度與標準品對應離子的豐度比其值在允許范圍內(nèi)（允許范圍見表3）則可判定樣品中存在對應的待測物。在上述色譜條件下，鉤吻堿和鉤吻堿子的保留時間參見附錄C。鉤吻堿和鉤吻堿子標準品的氣相色譜-質(zhì)譜選擇離子色譜圖參見附錄D。 表3 單極質(zhì)譜電子轟擊電離源分析定性時相對離子豐度比的最大允許相對誤差 相對離子豐度比（基峰%） ＞50 ＞20~50 ＞10~20 ≤10 最大允許相對誤差 10 % 15 % 20 % 50 % 13.4　 定量測定 13.4.1　 標準曲線的制作 將混合標準工作溶液（11.4.3）分別按儀器參考條件（13.2）進行測定，得到相應的標準溶液的色譜峰面積。以混合標準工作溶液的濃度為橫坐標，以定量離子的色譜峰的峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。 13.4.2　 試樣溶液的測定 將試樣溶液（13.1.3）按儀器參考條件（13.2）進行測定，得到樣品溶液中對應組分的色譜峰面積。根據(jù)標準曲線得到待測液中組分的濃度，平行測定次數(shù)不少于兩次。 標準品色譜圖參見附錄D。 13.4.3　 空白試驗 除不加試樣外，均按上述步驟進行。 14　 結(jié)果計算 將氣相色譜-質(zhì)譜測得濃度代入下式計算含量： …………………………………………（1） 式中： X — 試樣中各待測物的含量，單位為微克每千克（μg/kg）； c — 從標準曲線中讀出的供試品溶液中各待測物的濃度，單位為微克每升（μg/L）； V — 樣液最終定容體積，單位為毫升（mL）； m —試樣溶液所代表的質(zhì)量，單位為克（g）； f— 稀釋倍數(shù)。 計算結(jié)果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的算術平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。 15　 精密度 在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術平均值的20 %。 16　 檢出限和回收率 16.1　 檢出限 監(jiān)測方式為選擇離子掃描（SIM）時，本方法中鉤吻堿檢出限為140 μg/kg，鉤吻堿子檢出限為100 μg/kg；鉤吻堿定量限為280 μg/kg。鉤吻堿子定量限為200 μg/kg。 16.2　 回收率 回收率詳見附錄I表I.1。 方法三 高效液相色譜-串聯(lián)高分辨質(zhì)譜法 17　 原理 試樣經(jīng)1 %鹽酸超聲提取，經(jīng)MCX柱凈化后，高效液相色譜-串聯(lián)高分辨質(zhì)譜測定，比較供試品與標準品的保留時間、一級質(zhì)譜圖和二級質(zhì)譜圖進行篩查和定性確證。 18　 試劑和材料 除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為符合GB/T 6682規(guī)定的一級水。 18.1　 試劑 18.1.1　 乙腈（CH3CN）：色譜純。 18.1.2　 甲酸（HCOOH）：色譜純。 18.1.3　 甲醇（CH3OH）：色譜純。 18.1.4　 鹽酸（HCl）。 18.1.5　 氨水（NH3H2O）。 18.1.6　 甲酸銨（HCOONH4）。 18.2　 試劑配制 18.2.1　 1 %鹽酸水溶液：取鹽酸1.0 mL用水稀釋至100 mL。 18.2.2　 5 mmol/L甲酸銨溶液（含0.1 %甲酸）：稱取甲酸銨0.315 g，加適量水溶解，加入甲酸1.0 mL，用水稀釋至1000 mL，搖勻，用0.22 μm濾膜過濾后備用。 18.2.3　 5 %氨化甲醇：取氨水5.0mL，用甲醇稀釋至100mL。 18.2.4　 50 %甲醇溶液（含0.1 %甲酸）：取甲醇與水各50 mL，混合均勻，每100 mL混合液中加入甲酸0.10mL。 18.3　 標準品 鉤吻堿、鉤吻堿子標準品的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子質(zhì)量、精確分子量見附錄E表E.1，純度≥98 %。 18.4　 標準溶液配制 18.4.1　 標準儲備液（1 mg/mL）：精密稱取鉤吻堿、鉤吻堿子標準品各10 mg分別置10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度。-20 ℃以下避光密封保存，有效期6個月。 18.4.2　 混合標準工作溶液（1 μg/mL）：分別準確量取標準儲備液（1 mg/mL）各0.10 mL，用甲醇溶液（18.2.4）稀釋至100 mL。(可根據(jù)需要進行適當調(diào)整），現(xiàn)配現(xiàn)用。 19　 儀器和設備 高效液相色譜-串聯(lián)高分辨質(zhì)譜儀，配有電噴霧（ESI）離子源，其他儀器設備同方法一 5.2～5.8。 20　 分析步驟 20.1　 試樣制備 20.1.1　 蜂蜜樣品制備 與6.1.1項下一致 20.1.2　 保健湯樣品制備 與6.1.2項下一致 20.1.3　 試樣處理 稱取1g（精確至0.01g）制備均勻的樣品于帶刻度100 mL一次性離心管中，加1 %鹽酸溶液至50 mL，渦旋振蕩2 min后超聲處理30分鐘，3000 r/mim離心5分鐘，準確吸取上清液5.00 mL，置MCX固相萃取小柱，依次用水5 mL、甲醇5 mL淋洗，抽干，用5 mL氨化甲醇溶液（18.2.3）洗脫，收集洗脫液， 40 ℃氮吹濃縮至干，準確加入1.00 mL甲醇溶液（18.2.4）溶解殘渣，過0.22μm濾膜，備用。必要時可根據(jù)實際濃度進行適當稀釋。 20.1.4　 空白試驗 除不加試樣外，均按上述步驟進行。 20.2　 儀器參考條件 20.2.1　 色譜條件 a）色譜柱： C18 2.6 μm，2.1 mm 100 mm ，或性能相當者。 b）流動相：A為5 mmol/L甲酸銨溶液（含0.1 %甲酸）（18.2.2），B為乙腈（18.1.1），梯度洗脫程序見表4。 c）流速：0.30 mL/min。 d）柱溫：35 ℃。 e）進樣量：2 μL。 表4 梯度洗脫程序表 梯度時間/min 流動相A/% 流動相B/% 0.00 95 5 3.00 80 20 3.01 5 95 4.00 5 95 4.01 95 5 6.00 95 5 20.2.2　 質(zhì)譜條件 a）離子源：電噴霧離子源（ESI源）。 b）干燥氣、霧化氣、鞘氣、碰撞氣等均為高純氮氣或其他合適氣體，使用前應調(diào)節(jié)相應參數(shù)使質(zhì)譜靈敏度達到檢測要求，毛細管電壓、干燥氣溫度、鞘氣溫度、鞘氣流量、碰撞能量、碎裂電壓等參數(shù)應優(yōu)化至最佳靈敏度，母離子及碎片離子等參考信息詳見附錄F表F.1。 21　 定性判定 按照高效液相色譜-串聯(lián)高分辨質(zhì)譜條件測定試樣（20.1.3）和混合標準工作溶液（18.4.2），記錄試樣和混合標準工作溶液中各化合物的色譜峰保留時間及多級質(zhì)譜圖，當試樣中檢出與標準品色譜峰（或由標準品建立的譜庫）保留時間一致的色譜峰，并且與標準品母離子精確分子量誤差不超過百萬分之五，主要碎片離子精確分子量誤差不超過百萬分之十，即可以確定試樣中檢出相應化合物。 標準品色譜圖參見附錄G。 22　 檢測方法的靈敏度和專屬性 22.1　 靈敏度 本方法中鉤吻堿檢出限為140 μg/kg，鉤吻堿子檢出限為100 μg/kg。 22.2　 專屬性 取空白溶液（20.1.4）進樣測定，應無干擾。 取混合標準工作溶液（18.4.2）進樣測定，各化合物之間應無互相干擾。 附錄A 高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法 a. 離子源：電噴霧離子源（ESI） b. 掃描方式：MRM c. 毛細管電壓：正離子模式：3000 V d. 離子源溫度：150 ℃ e. 干燥氣流量：15 L/min f. 霧化氣壓力：25 Psi g. 鞘氣溫度：350 ℃；鞘氣（N2）流量：12 L/min 表A.1化合物名稱、分子式、母離子、子離子、碎裂電壓、碰撞電壓及主要碎片離子 序號 化合物名稱 分子式 母離子(m/z) 子離子(m/z) 碎裂電壓/V 碰撞能量/V 1 鉤吻堿 C20H22N2O2 323.1 70.0a/236.1 380 35/25 2 鉤吻堿子 C20H22N2O 307.2 220.1a/180.0 380 35/40 注：1.a為定量離子 2.本方法提供質(zhì)譜條件為推薦質(zhì)譜方法條件?？筛鶕?jù)實際情況，選擇響應信號強且無干擾的離子對進行檢測，質(zhì)譜參數(shù)亦可根據(jù)實際可達到最優(yōu)靈敏度的條件進行設定。 附錄B 高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜 標準色譜圖 鉤吻堿提取離子色譜圖 鉤吻堿子提取離子色譜圖 鉤吻堿、鉤吻堿子提取離子色譜疊加圖 附錄C 氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法 表C.1化合物名稱、分子式、定量離子、定性離子、保留時間 序號 化合物名稱 分子式 定量離子 （m/z） 定性離子 （m/z） 保留時間（min） 1 鉤吻堿 C20H22N2O2 322.0 279.0，251.0，108.0 12.963 2 鉤吻堿子 C20H22N2O 306.0 263.0，223.0，70.0 11.670 附錄D 氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法 標準色譜圖 鉤吻堿子提取離子色譜圖 鉤吻堿提取離子色譜圖 鉤吻堿、鉤吻堿子提取離子色譜疊加圖 附錄E 鉤吻堿、鉤吻堿子化合物相關信息 表E.1 鉤吻堿、鉤吻堿子英文名稱、中文名稱、分子式、CAS號、相對分子質(zhì)量、精確分子量 序號 英文名 中文名稱 分子式 CAS號 相對分子質(zhì)量 精確分子量 1 Gelsemine 鉤吻堿 C20H22N2O2 509-15-9 322.4 322.1681 2 Koumine 鉤吻堿子 C20H22N2O 1358-76-5 306.4 306.1732 附錄F 高效液相色譜-串聯(lián)高分辨質(zhì)譜參考條件 a． 離子源：電噴霧離子源（ESI） b． 掃描方式：正離子MS/MS模式 c． 毛細管電壓：正離子模式：3500 V d． 離子源溫度：200 ℃ e． 干燥氣流量：14 L/min f． 霧化氣壓力：35 Psi g． 鞘氣溫度：350 ℃；鞘氣（N2）流量：11 L/min 表F.1化合物名稱、分子式、準分子離子、保留時間、碰撞電壓、碰撞電壓及主要碎片離子 序號 化合物名稱 分子式 準分子離子 （m/z） 保留時間（min） 碎裂電壓（V） 碰撞電壓（V） 主要碎片離子（m/z） 1 鉤吻堿 C20H22N2O2 323.1783 2.97 380 40 70.0656 91.0542 195.0683 236.1073 2 鉤吻堿子 C20H22N2O 307.1089 3.88 380 40 70.0654 130.0657 167.0735 180.0811 220.1123 注：可根據(jù)實際情況，選擇響應信號強且碎片離子穩(wěn)定且豐富的準分子離子進行檢測。 附錄G 高效液相色譜-串聯(lián)高分辨質(zhì)譜標準色譜圖 鉤吻堿提取離子色譜圖 鉤吻堿子提取離子色譜圖 鉤吻堿、鉤吻堿子提取離子色譜疊加圖 附錄H 高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法 表H.1 鉤吻堿、鉤吻堿子在不同基質(zhì)中的回收率 基質(zhì)類型 蜂蜜 酒 保健湯* 物質(zhì)種類 添加濃度/（μg/kg） 回收率 相對標準偏差(RSD) 回收率 相對標準偏差(RSD) 回收率 相對標準偏差(RSD) 鉤吻堿 28 89.3%~95.9% 2.0%~3.9% 90.3%~95.0% 1.3%~2.9% 89.6%~93.0% 2.5%~3.6% 56 91.0%~96.1% 2.0%~3.4% 94.1%~98.1% 1.1%~2.4% 90.2%~96.0% 2.3%~3.4% 280 92.3%~98.1% 2.0%~2.9% 96.2%~98.1% 1.0%~2.0% 91.6%~98.1% 2.1%~2.8% 鉤吻堿子 20 86.2%~91.2% 2.2%~4.0% 89.9%~95.1% 1.1%~3.0% 85.9%~92.1% 1.7%~3.8% 40 88.2%~93.2% 2.2%~3.5% 90.2%~96.2% 1.2%~2.8% 88.2%~94.1% 1.6%~2.9% 200 89.6%~95.1% 2.1%~2.8% 91.0%~97.3% 1.1%~2.2% 90.0%~95.4% 1.7%~2.1% *保健湯為誤用鉤吻作為原材料加水煮熟后的汁液。 附錄I 氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法 表I.1 鉤吻堿、鉤吻堿子在不同基質(zhì)中的回收率 基質(zhì)類型 蜂蜜 酒 保健湯* 物質(zhì)種類 添加濃度/（μg/kg） 回收率 相對標準偏差(RSD) 回收率 相對標準偏差(RSD) 回收率 相對標準偏差(RSD) 鉤吻堿 280 84.3 %~90.9 % 2.0 %~4.2 % 85.3 %~91.2 % 2.0 %~3.5 % 83.9 %~91.2 % 2.7 %~3.8 % 560 86.2 %~90.7 % 2.0 %~3.4 % 88.2 %~92.1 % 1.8 %~3.0 % 85.2 %~91.6 % 2.5 %~3.4 % 2800 90.2 %~93.6 % 2.0 %~3.0 % 89.8 %~93.9 % 1.9 %~2.6 % 88.5 %~93.1 % 2.1 %~2.9 % 鉤吻堿子 200 84.2 %~89.6 % 2.1 %~4.2 % 86.9 %~90.2 % 1.6 %~3.2 % 85.9 %~91.1 % 1.9 %~3.9 % 400 86.3 %~91.2 % 2.3 %~3.7 % 87. 2%~91.3 % 1.5 %~2.9 % 87.3 %~92.2 % 1.8 %~3.5 % 2000 88.5 %~92.1 % 2.1%~2.9 % 89.0 %~92.3 % 1.1 %~2.8 % 89.7 %~92.3 % 1.7 %~2.9 % *保健湯為誤用鉤吻作為原材料加水煮熟后的汁液。 ____________________________