清華大學 有機化學及實驗 實驗指導 實驗五、從番茄醬中提取番茄紅素和β胡蘿卜素

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1、實驗五：從番茄醬中提取番茄紅素和β胡蘿卜素 一、實 驗 目 的 1. 學習從天然產(chǎn)物中提取有機化合物的方法。 2. 學習用薄層層析法檢驗有機化合物的基本原理，點樣，展開和計算Rf值的方法。 二、提 取 方 法 1. 浸取法：選用合適的溶劑，根據(jù)相似相溶原理，直接把溶劑加到固體樣品上加熱回流提取，本次試驗就用的是此法。平時熬中藥也是使用的該方法。用水煮中藥就是把中藥的有效成分提取出來。 2. 水蒸汽蒸餾法：天然動植物中含有一些較易揮發(fā)的成分。利用水蒸汽可以把這些物質(zhì)蒸出提取。天然的很多香料的提?。ㄈ绯扔偷奶崛。┚褪怯玫拇朔?。 3. 連續(xù)提取法：原理同第一種方法，但

2、是使用了一種特殊的裝置—索氏提取器。使用少量的溶劑能重復用來浸取達到濃縮的目的。如：茶葉種咖啡因的提取就是用此法。 三、本實驗中的具體方法 1. 取一平勺番茄醬于50ml圓底燒瓶中，加5 ml 95％ 的乙醇，裝上冷凝管，回流3-5分鐘，冷卻。用玻璃漏斗墊棉花過濾。濾液置于帶塞子的錐形瓶內(nèi)，濾渣放回原燒瓶。加入乙醇的目的是破壞細胞壁，為下一步用石油醚的提取創(chuàng)造條件。 2. 上部的濾渣及棉花一起放入燒瓶中，加入10 ml石油醚，加熱回流10分鐘，冷卻，過濾。濾液和上面濾液合并，濾渣扔掉。 3. 將合并的濾液倒入分液漏斗中，加入5 ml飽和食鹽水，萃取，分層。其中有機層進行薄板層析，無

3、機層作對比用。加入飽和食鹽水的目的：1）鹽析，分層快且清；2）因為NaCl溶液是飽和水溶液，所以溶解有效成分少，即損失小。 4. 有機相加入少量Na2SO4干燥—很重要。b-胡蘿卜素是合成VB6的原料，極性小，Rf值大，在上邊。番茄紅素極性大，Rf值小，在下邊。 四、本實驗中薄板層析的爬板 1. 介紹色譜法包括薄層法，柱色譜，紙色譜氣相色譜和液相色譜。今天只作薄層色譜。 2. 色譜法是分離和鑒定有機化合物的常用方法。 3. 原理：利用混合物個組分在固定相和流動相的溶解度不同，即在兩相間分配系數(shù)的不同而使各組分分開。 4. 特點：時間短；分離效果好；需要樣品量少；適用于在較高溫度

4、下容易發(fā)生化學變化的化合物。 5. 事先準備：用鉛筆和尺子輕輕畫出起始線和終止線； 6. 點樣：用直徑1mm的平頭毛細管點取提取物，先在廢紙上點一下（快速），然后在起始線線上少量多次地點樣（保證一定濃度，一般需要50次以上）。待溶劑揮發(fā)以后，輕放到裝好展開劑地展開缸內(nèi)，不要讓展開劑濺起或傾斜； 7. 展開（爬板）：當展開劑爬到終止線時，停止爬行，取出。因為b-胡蘿卜素（黃點）易揮發(fā)，所以要盡快畫出黃點的位置； 8. Rf值的計算：分離效果好時Rf應為0.15 ~ 0.75之間。 9. 意義：定性鑒定，監(jiān)測化學反應等等。 10. 點樣：再薄板一端10mm（下）及另一端5mm（上）處用

5、鉛筆輕輕畫一道痕跡，用直徑小于1mm的毛細管（平口）點樣，點樣時要做到少量多次，保證樣品點小而又有一定的濃度，一塊板上可以點兩個點。 11. 展開劑的選擇：根據(jù)樣品的極性而定，極性大的化合物可選用極性較大的展開劑。為達到較好的分離效果，可用混合溶劑。做多次展開后可確定一合適的配比。展開時，溶劑前沿離板頂5mm停

6、止。 12. 顯示方法：A)有色化合物可直接觀察；B)無色的，用顯色劑顯色，如碘熏法；紫外光顯色，用硅膠GF254，有樣品點的位置再紫外燈光照射下發(fā)暗。 13. Rf值計算公式：Rf = 樣品中某組份移動離開原點的距離 / 展開劑前沿距離原點中心的距離 五、注 意 事 項 ? 本次實驗使用95％乙醇和石油醚提取。兩種混合后用NaCl水溶液洗滌。乙醇主要進入水相，建議水相不要棄去。點樣時在一塊板上點兩點：一為有機相，一為水相。觀察比較有何不同。 ? 展開劑的配比控制在石油醚:丙酮=9:1。 同時可以做一個比較，采用12:1。在混合展開劑中丙酮的極性大于石油醚，因此如果丙酮含量

7、增大，極性增大，使得分離效果很差。如果增加石油醚的含量，使展開劑的極性變小，分離效果較好。 ? 觀察：如果紅點緊追黃點，且Rf>0.75，則要增加石油醚的用量如達到12:1。 ? 番茄紅素為紅色，b-胡蘿卜素為黃色，展開后的薄板放置一段時間后，樣品顏色褪去。因為b-胡蘿卜素極易氧化，故在提取和展開過程中，注意不要敞開口，要用瓶蓋蓋住。 ? 番茄紅素的雙鍵比b-胡蘿卜素的雙鍵多，因此番茄紅素的極性大，在爬板時爬地慢，在下面，b-胡蘿卜素的極性小，爬地快，且易氧化。 ? 展開缸用后不要用水洗！ ? 薄板展開后臨摹在實驗報告上，板用后洗干凈放回窗臺上地塑料筐內(nèi)。 ? 在實驗報告臨摹一塊走好的薄板—最理想的。 六、所用儀器 1． 50ml圓底燒瓶 2． 球形冷凝管 3． 25ml錐形瓶 4． 50ml錐形瓶 5． 14#/19#變口 6． 梨形分液漏斗 7． 5ml量筒 8． 10ml量筒 9． 滴管 10． 藥勺 11． 攪拌棒 12． 展開缸 13． 塞子 2個 14． 普通漏斗 共15件