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1、接種操作規(guī)程
1 雜菌無處不在，接種是一個(gè)嚴(yán)格無菌操作的過程，是一個(gè)與雜菌作斗爭(zhēng)的過程，所有接種操作人員都必須要豎立嚴(yán)格的無菌操作意識(shí)，按規(guī)程要求進(jìn)行接種作業(yè)。
2 熟練的接種操作技術(shù)對(duì)接種成功率有著直接影響，所有操作人員都必須盡力提高自己的接種操作技術(shù)水平。
3 接種室開放式接種的接種量對(duì)接種成功率有著較大的影響，接種量大，菌種覆蓋均勻成品率相對(duì)較高，接種人員不得貪圖簡(jiǎn)便少接或接入不均。
4 接種室是一個(gè)與外界環(huán)境相對(duì)隔離的區(qū)域，人員要同進(jìn)同出，盡量減少與外界空氣的交換。
5 進(jìn)入緩沖間后更換工作服、鞋、帽，戴口罩。在自動(dòng)凈手器下噴灑酒精對(duì)雙手進(jìn)行消毒后，一同進(jìn)入無菌操作
2、間開始接種作業(yè)。
6 進(jìn)入無菌操作間應(yīng)先開啟電子凈機(jī)對(duì)空間進(jìn)行凈化作業(yè)，人員操作需在凈化機(jī)無菌區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。
7 使用預(yù)先配制好的消毒溶液對(duì)菌包進(jìn)行外表消毒，一次性處理完畢待用。消毒時(shí)要注意觀察菌種有無污染或長(zhǎng)勢(shì)異常。
8 使用75%酒精對(duì)雙手、接種工具進(jìn)行擦拭消毒，接種工具擦拭后在酒精燈火焰上來回轉(zhuǎn)動(dòng)灼燒3~4圈，稍冷卻。
9 將菌種拔除棉花塞，并刨去料面上0.5厘米左右的菌種，然后用接種勺將菌種刨碎（小麥粒大?。┘创蜷_菌包接入菌種。菌種必須用完一袋處理一袋，每袋菌種使用完畢后接種工具和手都必須重新消毒一次。
10 每袋菌包接入菌種三勺，大約25克。菌包接種孔必須接入菌種，
3、如接種孔有堵塞的可用接種勺向下捅入。接入料面的菌種一定要注意分布均勻，不均勻的可適當(dāng)搖動(dòng)使其均勻。
11 接種中，待接種菌包的棉花塞要用右手小指和手掌將其夾住，不得放置于操作臺(tái)面上。塞回時(shí)要在酒精燈火焰上轉(zhuǎn)動(dòng)一圈后塞入。
12 接好一筐種后，端上架子車前套環(huán)棉塞要側(cè)向壓倒，切忌壓倒時(shí)棉花塞觸碰到料面，棉花在攜帶雜菌，常壓滅菌很難將其殺滅干凈，觸碰料面易引起菌包污染。
13 接種操作要力求快速敏捷，盡量減少開袋后菌包在空間的暴露時(shí)間。
14 接種時(shí)如發(fā)現(xiàn)有菌種被污染的要將菌種袋擰緊密封，單獨(dú)放置，并重新對(duì)手和工具進(jìn)行嚴(yán)格的消毒。
15 接種作業(yè)完畢后按《接種室使用規(guī)程》要求做
4、好清潔工作。
接種室使用規(guī)程
1 接種室分為緩沖間和無菌操作間，均為潔凈區(qū)域，凡進(jìn)入此區(qū)域者均需遵守本規(guī)程。
2 接種室控制溫度為18~22℃,濕度≤90%。
3 無菌操作間無新風(fēng)過濾系統(tǒng)，操作人員及酒精燈燃燒所需氧氣由門縫等處進(jìn)入，攜帶雜菌較多，因此與無菌操作間相鄰的冷卻間、緩沖間、過道都必須保持干凈整潔，并定期進(jìn)行消毒作業(yè)。
4 無菌操作間及緩沖間每月應(yīng)進(jìn)行一次潔凈度的檢測(cè)，檢測(cè)方法為：將直徑9cm的培養(yǎng)皿注入PDA培養(yǎng)基15ml,滅菌冷卻凝固好后，在接種時(shí)將培養(yǎng)皿打開暴露30min后蓋上蓋，于30~35℃下倒置培養(yǎng)48h后觀察結(jié)果。
5 緩沖間設(shè)計(jì)潔凈度為30萬級(jí)
5、，檢測(cè)結(jié)果培養(yǎng)皿平均菌落數(shù)應(yīng)≤15個(gè)，無菌操作間設(shè)計(jì)潔凈度為10萬級(jí)，培養(yǎng)皿平均菌落數(shù)應(yīng)≤10個(gè)。
6 進(jìn)入接種室應(yīng)先在緩沖間更換工作服、穿專用鞋、戴工作帽、口罩，頭發(fā)應(yīng)用工作帽帽兜兜住，不得批肩或散落。
7 進(jìn)入接種室嚴(yán)禁隨便走動(dòng)、打鬧、高聲談笑，不接聽和撥打電話，接種操作時(shí)動(dòng)作要輕柔、快捷。工作服、鞋、帽要勤洗勤換。
8 無菌操作間使用臭氧消毒，消毒前注意將兩端的門關(guān)閉嚴(yán)實(shí)，當(dāng)菌種、菌包、藥品物件等準(zhǔn)備妥當(dāng)后即可開啟臭氧機(jī)，消毒人員在開啟臭氧機(jī)后一定要嗅到臭氧腥味并確定臭氧機(jī)正常工作后方可離開，每批次消毒時(shí)間為2小時(shí)，間隔40~60分鐘后可進(jìn)入接種室進(jìn)行接種作業(yè)，最長(zhǎng)間隔時(shí)間不
6、可超過1.5小時(shí)。
9 無菌操作間的潔凈度會(huì)隨著作業(yè)時(shí)間的延長(zhǎng)而降低，接種操作應(yīng)盡量快速敏捷，一次接種時(shí)間不宜超過兩小時(shí)。
10 機(jī)器設(shè)備是無菌操作間賴以存在的基礎(chǔ)，必須定期的進(jìn)行維護(hù)保養(yǎng)，確保機(jī)器有效平穩(wěn)運(yùn)行。臭氧機(jī)濾網(wǎng)每月清洗一次，電子凈化機(jī)過濾網(wǎng)、電場(chǎng)每月清洗一次，活性炭網(wǎng)每年更換一次。
11 接種室要同進(jìn)同出，進(jìn)出時(shí)動(dòng)作要迅速，進(jìn)入后馬上將門關(guān)閉，不可長(zhǎng)時(shí)間將門打開，致使外界帶菌空氣過多的進(jìn)入。接種期間嚴(yán)禁人員進(jìn)出。
12 接種室兩天以上未使用，再次使用前應(yīng)進(jìn)行一次密閉空間消毒。保持接種室清潔，接種人員不得將與生產(chǎn)無關(guān)的物品帶入接種室。
13 接種室配備的消毒液濃度為：酒精70%~75%，甲酚5%，新潔爾滅0.1%~0.2%及按規(guī)定配備的其它消毒劑。
14 接種室每批次操作完畢后都必須做好清潔，地板、角落及軌道槽內(nèi)料渣要打掃干凈，無菌操作臺(tái)及墻壁應(yīng)用抹布醮取消毒水擦洗干凈。地板用消毒水進(jìn)行拖洗，拖洗后地板上的明水要用吸水拖把吸干。
15 接種室掃帚、拖把、抹布等專室專用，每日掃除的垃圾要及時(shí)清走。
16 無菌操作間冷卻盤管防水槽每月至少?zèng)_洗一次，以防灰塵、雜菌聚積，帶來污染隱患。接種室門、玻璃每半月必須擦洗一次。
食用菌栽培技術(shù)之接種室操作規(guī)程
