《生物化學(xué)實驗》(共13頁)
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1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-----傾情為你奉上 《生物化學(xué)實驗》 教學(xué)方案 湖南文理學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院學(xué)院 生化與分子生物學(xué)教研組 實驗一 蛋白質(zhì)的性質(zhì)實驗(1)—蛋白質(zhì)和氨基酸的呈色反應(yīng) 授課題目:蛋白質(zhì)的性質(zhì)實驗(1)——蛋白質(zhì)和氨基酸的呈色反應(yīng)(3學(xué)時) 授課對象:生科、農(nóng)學(xué)、動科專業(yè) 授課教師: 教學(xué)目標(biāo)及基本要求: 1、了解蛋白質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)單位及主要連接方式。 2、了解某些蛋白質(zhì)和氨基酸的呈色反應(yīng)原理。 3、學(xué)習(xí)幾種常見的鑒定蛋白質(zhì)和氨基酸的方法。 教學(xué)內(nèi)容提要及時間分配: 1、實驗原
2、理講解: 12分鐘 ?雙縮脲反應(yīng)的原理 ?茚三酮反應(yīng)的原理 ?黃色反應(yīng)的原理 ?坂口反應(yīng)的原理 ?考
3、馬斯亮藍(lán)反應(yīng)的原理 2、實驗試劑與器材 2分鐘 3、實驗步驟講解: 10分鐘 4、總結(jié)。 2分鐘 教學(xué)重點及難點: 1、?雙縮脲反應(yīng)的原理。 2、蛋白質(zhì)、氨基酸與水合茚三酮的顯色反應(yīng)。 教學(xué)方法:
4、采用啟發(fā)式教學(xué),結(jié)合理論,對實驗步驟進(jìn)行分析并給于適當(dāng)示范。 教學(xué)手段(掛圖、幻燈、多媒體…等): 采用板書等手段進(jìn)行教學(xué)。 使用的教材及參考資料: 1、生物化學(xué)實驗指導(dǎo),自編講義。 2、基礎(chǔ)生物化學(xué)實驗,高等教育出版社,王秀奇 主編,第二版,2003年。 思考題: 1、如果蛋白質(zhì)水解后雙縮脲反應(yīng)呈陰性時,可以對水解反應(yīng)程度作出什么樣的推論? 2、茚三酮反應(yīng)的陽性結(jié)果為何顏色?能否用茚三酮反應(yīng)可靠鑒定蛋白質(zhì)的存在? 3、考馬斯亮藍(lán)G-250法測定蛋白質(zhì)含量的原理是什么? 4、如何正確使用分光光度計? 5、測定蛋白質(zhì)含量還有哪些方法,測定原理有哪些不同? 本單元教
5、學(xué)總結(jié)(教學(xué)的主要經(jīng)驗、效果、存在的問題、改進(jìn)措施等) 1、 結(jié)合理論內(nèi)容講述實驗內(nèi)容,效果較好。 2、 強(qiáng)調(diào)實驗基本操作規(guī)范,讓學(xué)生養(yǎng)成良好的實驗習(xí)慣,具有扎實的實驗技能。 實驗二 蛋白質(zhì)的性質(zhì)實驗(2)—蛋白質(zhì)等電點的測定和沉淀反應(yīng) 授課題目:蛋白質(zhì)的性質(zhì)實驗(2)——蛋白質(zhì)等電點的測定和沉淀反應(yīng)(3學(xué)時) 授課對象:生科、農(nóng)學(xué)、動科專業(yè) 授課教師: 教學(xué)目標(biāo)及基本要求: 1、了解蛋白質(zhì)的兩性解離性質(zhì)。 2、學(xué)習(xí)測定蛋白質(zhì)等電點的一種方法。 3、加深對蛋白質(zhì)膠體溶液穩(wěn)定因素的認(rèn)識。 4、了解沉淀蛋白質(zhì)的幾種方法及其實用意義。 5、了解蛋白質(zhì)變性與
6、沉淀的關(guān)系。 教學(xué)內(nèi)容提要及時間分配: 1、實驗原理講解: 10分鐘 ???蛋白質(zhì)的兩性解離性質(zhì) ??蛋白質(zhì)等電點的概念 ???? ??測蛋白質(zhì)溶解度最低時的溶液pH值為其等電點 ?穩(wěn)定蛋白質(zhì)親水膠體顆粒的因素 ?蛋白質(zhì)沉淀反應(yīng)的類型 2、實驗操作講解: 10分鐘 ??蛋白質(zhì)的鹽析 ??重金屬離子沉淀蛋白質(zhì) ??某些有機(jī)酸沉淀蛋白質(zhì) ??有機(jī)溶劑沉
7、淀蛋白質(zhì) ??乙醇引起的變性與沉淀 3、總結(jié)。 2分鐘 教學(xué)重點及難點: 1、?穩(wěn)定蛋白質(zhì)親水膠體顆粒的因素。 2、蛋白質(zhì)變性與沉淀的關(guān)系。 教學(xué)方法: 采用啟發(fā)式教學(xué),結(jié)合理論,對實驗步驟進(jìn)行分析并給于適當(dāng)示范。 教學(xué)手段(掛圖、幻燈、多媒體…等): 板書,PPT。 使用的教材及參考資料: 1、生物化學(xué)實驗指導(dǎo),自編講義 2、基礎(chǔ)生物化學(xué)實驗,高等教育出版社,王秀奇
8、 主編,第二版,2003年 思考題: 1、穩(wěn)定蛋白質(zhì)親水膠體顆粒的因素有哪些? 2、蛋白質(zhì)變性與沉淀的關(guān)系。 3、解釋蛋白質(zhì)兩性反應(yīng)中顏色及沉淀變化的原因。 4、該方法測定蛋白質(zhì)等電點的原理是什么? 本單元教學(xué)總結(jié)(教學(xué)的主要經(jīng)驗、效果、存在的問題、改進(jìn)措施等) 1、 結(jié)合理論內(nèi)容講述實驗內(nèi)容,效果較好。 2、 強(qiáng)調(diào)實驗基本操作規(guī)范,培養(yǎng)學(xué)生對實驗現(xiàn)象的觀察和實驗結(jié)果的思考。 實驗三 牛乳中蛋白質(zhì)的提取與鑒定 授課題目:牛乳中蛋白質(zhì)的提取與鑒定(3學(xué)時) 授課對象:生科、農(nóng)學(xué)、動科專業(yè) 授課教師: 教學(xué)目標(biāo)及基本要求 1、學(xué)習(xí)從牛乳中制備酪蛋白的
9、原理和方法。 教學(xué)內(nèi)容提要及時間分配 1、實驗原理講解: 8分鐘 ??????蛋白質(zhì)在其等電點pH溶液中溶解度降底。根據(jù)這個原理,將牛乳的pH調(diào)整至4.8,即酪蛋白的等電點時,酪蛋白即沉淀出來。用乙醇除去酪蛋白沉淀中不溶于水的脂肪,得到純的酪蛋白 ??????所得酪蛋白的定性鑒定? 2、實驗條件及步驟講解: 7分鐘 ???酪蛋白的制備 ? ??酪蛋白的性質(zhì)鑒定 ? ??乳清中可凝固
10、性蛋白質(zhì)的鑒定 教學(xué)重點及難點:酪蛋白的制備。 教學(xué)方法: 1、結(jié)合理論實際,深入淺出。 2、實驗操作過程給于示教。 教學(xué)手段(掛圖、幻燈、多媒體??等) 板書,PPT。 使用的教材及參考資料 1、生物化學(xué)實驗指導(dǎo),自編講義 2、基礎(chǔ)生物化學(xué)實驗,高等教育出版社,王秀奇 主編,第二版,2003年 思考題: 1、牛乳中制備酪蛋白的原理和方法。 本單元教學(xué)總結(jié)(教學(xué)的主要經(jīng)驗、效果、存在問題、改進(jìn)措施等) 1、實驗內(nèi)容結(jié)合理論內(nèi)容進(jìn)行講述,效果較好。 2、強(qiáng)調(diào)實驗基本操作規(guī)范,讓學(xué)生養(yǎng)成良好的實驗習(xí)慣,具有扎實的實驗技能。
11、 實驗四 氨基酸的分離鑒定——紙層析法 授課題目:氨基酸的分離鑒定——紙層析法(3學(xué)時) 授課對象:生科、農(nóng)學(xué)、動科專業(yè) 授課教師: 教學(xué)目標(biāo)及基本要求 通過氨基酸的分離,學(xué)習(xí)紙層析法的基本原理及操作方法。 教學(xué)內(nèi)容提要及時間分配 1、實驗原理的說明 10分鐘 ?紙層析法是用濾紙作為惰性支持物的分配層析法 ?層析溶劑由有機(jī)溶劑和水組成 ?物質(zhì)被分離后在紙層析圖譜上的位置是用Rf值(比移)來表示 ?在一定的條件下某種物質(zhì)的Rf值是常數(shù)。Rf值的大小與物質(zhì)的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、溶劑
12、系統(tǒng)、層析濾紙的質(zhì)量和層析溫度等因素有關(guān)。 2、實驗操作講解: 5分鐘 教學(xué)重點及難點 1 、擴(kuò)展劑的制備。 2、 氨基酸樣品的點樣。 教學(xué)方法 理論與實際相結(jié)合,深入淺出,培養(yǎng)學(xué)生綜合運用所學(xué)課程知識。實驗過程中向?qū)W生提出問題,讓學(xué)生在實驗中觀察思考,提高學(xué)生的分析問題,解決問題的能力。 教學(xué)手段( 掛圖、幻燈、多媒體. .等) 板書,PPT,示教。 使用的教材及參考資料 1、生物化學(xué)實驗指導(dǎo),自編講義 2、基礎(chǔ)生物化學(xué)實驗,高等教育出版社,王秀奇 主編,第二版,2003
13、年 思考題: 1、何謂Rf值?影響Rf值的主要因素是什么? 2、層析缸中平衡溶劑的作用是什么? 3、濾紙為什么要在層析缸中預(yù)先懸空密封飽和30min? 4、展開時為什么要調(diào)節(jié)濾紙使溶劑前沿線平行于點樣線? 5、實驗結(jié)果為什么有時會產(chǎn)生拖尾、相鄰氨基酸分不開等異常現(xiàn)象? 本單元教學(xué)總結(jié)(教學(xué)的主要經(jīng)驗、效果、存在的問題、改進(jìn)措施等) 在實驗中向?qū)W生提問題,可增強(qiáng)學(xué)生的好奇心,對于理解實驗原理很有幫助。 實驗五 酶的特性(設(shè)計型實驗) 授課題目:酶的特性(設(shè)計型實驗)(6學(xué)時) 授課對象:生科、農(nóng)學(xué)、動科專業(yè) 授課教師: 教學(xué)目標(biāo)及基本要求 1、加
14、深對酶的性質(zhì)的認(rèn)識:本實驗由溫度對酶活力的影響;PH對酶活力的影響;酶的激活劑及抑制;酶的專一性4組實驗組成。 2、學(xué)會設(shè)計并實施影響酶催化活性因素的實驗方案。 教學(xué)內(nèi)容提要及時間分配 1、實驗原理講解: 10分鐘 ?酶的催化作用受溫度的影響。在最適溫度下,酶的反應(yīng)速度最高。大多數(shù)動物酶的最適溫度為37-40℃,植物酶的最適溫度為50-60℃ ?酶的活力受環(huán)境pH的影響極為顯著。不同酶的最適pH值不同 ?酶的活性受活化劑或抑制劑的影響 ?酶具有高度的專一性,淀粉和蔗糖無還原性 2、實驗設(shè)計方
15、案講解: 5分鐘 ? 教學(xué)重點及難點 1、影響酶催化活性的因素。 2、實驗方案設(shè)計及原理方法選擇。 教學(xué)方法:結(jié)合理論實際,深入淺出。實驗操作過程給于示教。 教學(xué)手段(掛圖、幻燈、多媒體??等) 多媒體,板書,畫圖,示教。 使用的教材及參考資料 1、生物化學(xué)實驗指導(dǎo),自編講義 2、基礎(chǔ)生物化學(xué)實驗,高等教育出版社,王秀奇 主編,第二版,2003年 思考題: 1、?實驗方法設(shè)計及選擇的原理和依據(jù) 2、? 進(jìn)行設(shè)計性實驗的經(jīng)驗與體會 3、什么是酶的最適溫度及其應(yīng)用意義? 4、什么是酶反
16、應(yīng)的最適pH?對酶活性有什么影響? 5、什么是酶的活化劑? 6、什么是酶的抑制劑?與變性劑有何區(qū)別? 本單元教學(xué)總結(jié)(教學(xué)的主要經(jīng)驗、效果、存在的問題、改進(jìn)措施等) 1、 學(xué)生實驗結(jié)合理論內(nèi)容進(jìn)行自行設(shè)計,講述實驗設(shè)計方法,效果較好。 2、 學(xué)生自己設(shè)計實驗方案,探討影響酶催化活性的因素,培養(yǎng)學(xué)生分析和解決實際問題的能力,提高學(xué)生的主動性和創(chuàng)造性,得到能力的培養(yǎng)。 實驗六 酵母核糖核酸的分離及組分鑒定 授課題目:酵母核糖核酸的分離及組分鑒定 (3學(xué)時) 授課對象:生科、農(nóng)學(xué)專業(yè) 授課教師: 教學(xué)目標(biāo)及基本要求: 了解核酸的組分,并掌握鑒定核酸組分的方法。
17、 教學(xué)內(nèi)容提要及時間分配: 1、實驗原理講解: 10分鐘 ?酵母核酸中RNA含量較多。RNA可溶于堿性溶液,在堿提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀,由此即得到RNA的粗制品。核糖核酸含有核糖、嘌呤堿、嘧啶堿和磷酸各組分。加硫酸煮沸可使其水解,從水解液中可以測出上述組分的存在。 2、實驗操作講解: 5分鐘 3、總結(jié)
18、 2分鐘 教學(xué)重點及難點: 核酸組分鑒定的實驗依據(jù)。 教學(xué)方法: 理論結(jié)合實踐,深入淺出。實驗操作過程給予示教。 教學(xué)手段: 板書,PPT,示教。 使用的教材及參考資料 1、生物化學(xué)實驗指導(dǎo),自編講義 2、基礎(chǔ)生物化學(xué)實驗,高等教育出版社,王秀奇 主編,第二版,2003年 思考題: 1、如何得到高產(chǎn)量RNA的粗制品? 2、現(xiàn)有三瓶未知溶液,已知它們分別為蛋白質(zhì)、糖和RNA,采用什么試劑和方法鑒定?(自行設(shè)計簡便的實驗) 本單元教學(xué)總結(jié): 對學(xué)生的實驗預(yù)習(xí)、實驗紀(jì)律、實驗操作、實驗報告、實驗整理等環(huán)節(jié)進(jìn)行督導(dǎo),使學(xué)生
19、養(yǎng)成良好的實驗習(xí)慣,提高實驗技能。 實驗七 紫外分光光度法測定核酸的含量 授課題目:紫外分光光度法測定核酸的含量 (3學(xué)時) 授課對象:生科、農(nóng)學(xué)、動科專業(yè) 授課教師: 教學(xué)目標(biāo)及基本要求 1、了解紫外分光光度計的基本原理和使用方法。 2、學(xué)習(xí)用紫外分光光度法測定核酸含量的原理和操作方法。 教學(xué)內(nèi)容提要及時間分配 1、實驗原理講解: 10分鐘 ?核酸、核苷酸及其衍生物都具有共軛雙鍵系統(tǒng),能吸收紫外光。RNA和DNA的紫外吸收高峰在A260nm波長處。一般在
20、A260波長下,每mL含1ugRNA溶液的光吸收值為0.020。故測定未知濃度RNA或DNA溶液A260nm波長的光吸收值即可計算出其中核酸的含量。此法操作簡便。若樣品內(nèi)混雜有大量的核苷酸或蛋白質(zhì)等能吸收紫外光的物質(zhì),則測定誤差較大,故應(yīng)設(shè)法預(yù)除去。 2、實驗操作講解: 5分鐘 ? 紫外分光光度計的使用 教學(xué)重點及難點 1、核酸的制備 2、紫外分光光度計的使用 教學(xué)方法: 理論結(jié)合實踐,深入淺出。實驗操作過程給予示教。 教學(xué)手段(掛圖、幻燈、多媒體??等) 板書
21、,PPT,示教。 使用的教材及參考資料 1、生物化學(xué)實驗指導(dǎo),自編講義 2、基礎(chǔ)生物化學(xué)實驗,高等教育出版社,王秀奇 主編,第二版,2003年 思考題或作業(yè): 1、紫外分光光度計的使用方法和操作要點? 2、若樣品中含有蛋白質(zhì)和核苷酸等雜質(zhì),如何排除干擾? 本單元教學(xué)總結(jié)(教學(xué)的主要經(jīng)驗、效果、存在的問題、改進(jìn)措施等) 1、強(qiáng)調(diào)實驗基本操作規(guī)范,讓學(xué)生養(yǎng)成良好的實驗習(xí)慣,具有扎實的實驗技能。 實驗八 維生素C的定量測定 授課題目:維生素C的定量測定 (3學(xué)時) 授課對象:生科、農(nóng)學(xué)、動科專業(yè) 授課教師: 教學(xué)目標(biāo)及基本要求
22、 1、學(xué)習(xí)維生素C定量測定法的原理和方法。 2、進(jìn)一步熟悉、掌握微量商定法的基本操作技術(shù)。 教學(xué)內(nèi)容提要及時間分配 1、實驗原理講解: 8分鐘 ?測定維生素C(抗壞血酸)的化學(xué)方法,一般是根據(jù)它的還原性。本實驗即利用維生素C的這一性質(zhì),使其與2,6-二氯酚靛酚作用。2,6-二氯酚靛酚鈉鹽的水溶液呈藍(lán)色,在酸性環(huán)境中為玫瑰色,當(dāng)其被還原時,則脫色。 2、實驗操作講解: 5分鐘
23、 教學(xué)重點及難點 1、 含維生素C的樣品提取液的制備 2、 熟練掌握滴定操作 教學(xué)方法 理論結(jié)合實踐,深入淺出。實驗操作過程給予示教。 教學(xué)手段(幻燈、多媒體等) 板書,PPT,示教。 使用的教材及參考資料 1、生物化學(xué)實驗指導(dǎo),自編講義 2、基礎(chǔ)生物化學(xué)實驗,高等教育出版社,王秀奇 主編,第二版,2003年 思考題: 試述本實驗介紹的2,6-二氯酚靛酚滴定法的優(yōu)缺點。 本單元教學(xué)總結(jié)(教學(xué)的主要經(jīng)驗、效果、存在問題、改進(jìn)措施等) 1、實驗內(nèi)容結(jié)合理論內(nèi)容進(jìn)行講述,效果較好。 2、強(qiáng)調(diào)實驗基本操作規(guī)范,讓學(xué)生養(yǎng)成
24、良好的實驗習(xí)慣,具有扎實的實驗技能。 實驗九 血糖的定量測定—GOD-PAP法 授課題目:血糖的定量測定—GOD-PAP法 (3學(xué)時) 授課對象:生科、動科專業(yè) 授課教師: 教學(xué)目標(biāo)及基本要求 學(xué)習(xí)用GOD-PAP法測定血糖含量。 教學(xué)內(nèi)容提要及時間分配 1、實驗原理講解: 8分鐘 ?動物血液中的糖主要是葡萄糖,正常情況下,其含量較恒定。健康家兔的血糖水平為80-120mg/dL。GOD-PAP法,即過氧化物酶-抗過氧化物酶法是近幾年臨床血糖定量測定普
25、遍采用的方法。該法測定血糖依據(jù)的酶反應(yīng)為: 葡萄糖 氨基安替比林+酚醌亞胺+ 醌亞胺在A480nm~A550nm波長有最大吸收,所產(chǎn)生顏色的深淺與血清中葡萄糖的量成正比。 2、實驗操作講解: 5分鐘 教學(xué)重點及難點: 樣品中葡萄糖濃度的計算方法。 教學(xué)方法: 1、結(jié)合理論實際,深入淺出。 2、實驗操作過程給于示教。 教學(xué)手段(掛圖、幻燈、多媒體??等) 板書,PPT,示教。 使用的教材及參考資料 1、生物化學(xué)實驗指導(dǎo),自編講義 2、基礎(chǔ)生物化學(xué)實驗,高等教
26、育出版社,王秀奇 主編,第二版,2003年 思考題: 1、 制取樣品時應(yīng)主要什么? 2、 體液血糖測定有哪些方法 本單元教學(xué)總結(jié)(教學(xué)的主要經(jīng)驗、效果、存在問題、改進(jìn)措施等) 1、實驗內(nèi)容結(jié)合理論內(nèi)容進(jìn)行講述,效果較好。 2、強(qiáng)調(diào)實驗基本操作規(guī)范,讓學(xué)生養(yǎng)成良好的實驗習(xí)慣,具有扎實的實驗技能。 實驗十 DNA的瓊脂糖凝膠電泳 授課題目:DNA的瓊脂糖凝膠電泳(3學(xué)時) 授課對象:生科、農(nóng)學(xué)、動科專業(yè) 授課教師: 教學(xué)目標(biāo)及基本要求 1、了解瓊脂糖凝膠電泳的原理和使用范圍。 2、了解瓊脂糖凝膠電泳的操作技術(shù)。 教學(xué)內(nèi)容提要及
27、時間分配 1、實驗原理講解: 10分鐘 ? DNA片斷瓊脂糖凝膠電泳的原理與蛋白質(zhì)的電泳原理基本相同,DNA分子在高于其等電點的pH溶液中帶負(fù)電荷,在電場中向正極移動。DNA分子在電場中通過介質(zhì)而泳動,除電荷效應(yīng)外,凝膠介質(zhì)還有分子篩效應(yīng),與分子大小及構(gòu)想有關(guān)。對于線形DNA分子,其電場中的遷移率與其分子量的對數(shù)值成反比。 ?在凝膠中加入少量溴化乙錠,其分子可插入DNA的堿基之間,形成一種光絡(luò)合物,在254~365nm波長紫外光照射下,呈現(xiàn)桔紅色的熒光,因此可對分離的DNA進(jìn)行檢測。 ?
28、電泳時以溴酚藍(lán)及二甲苯氰(藍(lán))作為雙色電泳指示劑。其目的有:①增大樣品密度,確保DNA均勻進(jìn)入樣品孔內(nèi);②使樣品呈現(xiàn)顏色,了解樣品泳動情況,使操作更為便利;③以0.5×TBE做電泳液時溴酚藍(lán)的泳動率約與長300bp的雙鏈DNA相同,二甲苯氰(藍(lán))則與4 kb的DNA相同。 2、實驗操作講解: 5分鐘 ?瓊脂糖凝膠的制備 ?樣品配制與加樣 ?電泳 ?觀察和拍照 3、凝膠成像系統(tǒng)的使用 2分鐘 教學(xué)
29、重點及難點 1、? 利用電泳方法分離核酸的原理。 2、? 如何使用電泳儀和水平式電泳槽。 3、? 凝膠的制備和加樣操作。 教學(xué)方法 結(jié)合理論實際,深入淺出。實驗操作過程給于示教和個別指導(dǎo)。 教學(xué)手段(多媒體、錄像等) PPT,錄像,示教。 使用的教材及參考資料 1、生物化學(xué)實驗指導(dǎo),自編講義 2、基礎(chǔ)生物化學(xué)實驗,高等教育出版社,王秀奇 主編,第二版,2003年 思考題: 1、 DNA在電場中的遷移率取決于哪些因素? 2、 瓊脂糖凝膠有哪些注意事項? 本單元教學(xué)總結(jié)(教學(xué)的主要經(jīng)驗、效果、存在的問題、改進(jìn)措施等) 首先讓學(xué)生觀看錄像,要求學(xué)生注意電泳技術(shù)的基本原理
30、和基本操作。在此基礎(chǔ)上,學(xué)生進(jìn)入實驗操作階段。 實驗十一 蛋白質(zhì)的透析 授課題目:蛋白質(zhì)的透析(3學(xué)時) 授課對象:生科專業(yè) 授課教師: 教學(xué)目標(biāo)及基本要求 學(xué)習(xí)透析的基本原理和操作 教學(xué)內(nèi)容提要及時間分配 1、實驗原理講解: 3分鐘 ?蛋白質(zhì)是大分子物質(zhì),它不能透過透析膜而小分子物質(zhì)可以自由透過。在分離提純蛋白質(zhì)的過程中,常利用透析的方法使蛋白質(zhì)與其中夾雜的小分子物質(zhì)分開。 2、實驗操作講解:
31、 5分鐘 ?用蛋白質(zhì)溶液作雙縮脲反應(yīng) ?向火棉膠制成的透析管中裝人10~15mL蛋白質(zhì)溶液并放在盛有蒸餾水的燒杯中 ?檢查氯離子的存在。做雙縮脲反應(yīng),檢查是否有蛋白質(zhì)存在。 ?不斷更換燒杯中的蒸餾水以加速透析過程。 教學(xué)重點及難點 火棉膠制成透析管 教學(xué)方法 理論結(jié)合實踐,深入淺出。實驗操作過程給予示教。 教學(xué)手段(幻燈、多媒體等) 板書,示教。 使用的教材及參考資料 1、生物化學(xué)實驗指導(dǎo),自編講義 2、基礎(chǔ)生物化學(xué)實驗,高等教育出版社,王秀奇 主編,第二版,2003年
32、 思考題: 蛋白質(zhì)透析的操作要點及主要事項。 本單元教學(xué)總結(jié)(教學(xué)的主要經(jīng)驗、效果、存在問題、改進(jìn)措施等) 1、實驗內(nèi)容結(jié)合理論內(nèi)容進(jìn)行講述,效果較好。 2、強(qiáng)調(diào)實驗基本操作規(guī)范,讓學(xué)生養(yǎng)成良好的實驗習(xí)慣,具有扎實的實驗技能。 實驗十二 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離細(xì)菌蛋白質(zhì) 授課題目:SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離細(xì)菌蛋白質(zhì) (12學(xué)時) 授課對象:生科 授課教師: 教學(xué)目標(biāo)及基本要求 1、? 掌握不連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳的原理和實驗方法。 2、? 能夠熟練使用電泳儀和垂直板式電泳槽進(jìn)行凝膠電泳操作。 教學(xué)內(nèi)容提要及時間分配 1、凝
33、膠電泳分離蛋白質(zhì)的原理。 5 分鐘 2、聚丙烯酰胺凝膠電泳的組成成份。 3 分鐘 3、影響電泳分離效果的因素。 2 分鐘 4、實驗條件及步驟。 10 分鐘 5、儀器的使用方法。
34、 4 分鐘 6、具體實驗過程包括:凝膠貯液和工作液的配制、電泳裝置的安裝、制分離膠和濃縮膠、樣品的制備、加樣、電泳、取膠、染色、固定、背景脫色。 3 分鐘 7、評價并總結(jié)實驗結(jié)果 1 分鐘 教學(xué)重點及難點 1、? 利用電泳方法分離蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子物質(zhì)的原理。 2、? 如何使用電泳儀和垂直板式電泳槽。 3、? 分離膠和濃縮膠的制備及灌膠和加樣的操作。 教學(xué)方法 首先讓學(xué)生觀看錄像,要求學(xué)生注意電泳技術(shù)的基本原理和基本操
35、作。在此基礎(chǔ)上,學(xué)生進(jìn)入實驗操作階段。 教學(xué)手段(多媒體、錄像等) 多媒體、錄像,示教 使用的教材及參考資料 1、生物化學(xué)實驗指導(dǎo),自編講義 2、基礎(chǔ)生物化學(xué)實驗,高等教育出版社,王秀奇 主編,第二版,2003年 思考題: 1、? 電泳后上下槽緩沖液可否混合后再使用?為什么? 2、上樣緩沖液中加入甘油的作用是什么? 3、貯液配制及貯存應(yīng)注意什么? 4、過硫酸銨、TEMED和考馬斯亮藍(lán)在實驗中有什么作用? 本單元教學(xué)總結(jié)(教學(xué)的主要經(jīng)驗、效果、存在的問題、改進(jìn)措施等) 1、分離膠和濃縮膠的制備過程不要與皮膚接觸,管膠過程緩慢不能產(chǎn)生氣泡。 2、電泳儀應(yīng)從低壓電流逐步到高壓電,以免直接影響實驗結(jié)果。 3、?此實驗過程中需要凝膠過程,所以最好選擇于室溫達(dá)到25°C的季節(jié)進(jìn)行。強(qiáng)調(diào)實驗基本操作規(guī)范,讓學(xué)生養(yǎng)成良好的實驗習(xí)慣,具有扎實的實驗技能。 專心---專注---專業(yè)
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