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華中農(nóng)業(yè)大學(xué)本科生課程考試試卷
考試課程與試卷類型：植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)原理與技術(shù)（A）
姓名：
學(xué)年學(xué)期：2008－2009－1
學(xué)號(hào)：
考試時(shí)間：2009－－
班級(jí)：
一、名詞解釋 ( 每題 4 分 , 共 12分 )
專心---專注---專業(yè)
1. 聚丙烯酰胺凝膠
2. 離心技術(shù)
3．可見光分光光度法/反相紙層析
二、填空題 ( 每空 2 分 , 共 42分 )
1. 反相紙層析法分離油菜不飽和脂肪酸的實(shí)驗(yàn)中 ,分離后的不飽和脂肪酸經(jīng)紅氨酸溶液顯色后 , 其最終產(chǎn)物顏色是（1）,從點(diǎn)樣端起層析譜帶所對(duì)
2、應(yīng)的脂肪酸依次是 (2) 、（3）、（4）、（5）、（6）。
2. 圓盤聚丙烯酰胺凝膠電泳分離過氧化物酶同工酶的實(shí)驗(yàn)中 , 電泳時(shí)上槽接電源（7）極 ,下槽接電源 (8) 極 , 電泳開始電流應(yīng)調(diào)節(jié)至每管 （9）mA, 十分鐘后電流調(diào)節(jié)至每管 (10) mA; 在上槽或樣品中加入溴酚藍(lán)是起 （11）的作用。
3. 核酸提取過程中 , 將含有 DNA 的溶液置72℃處理 3 分鐘，其目的是（12）；在淀粉酶活性測(cè)定過程中將淀粉酶液置于 70℃下處理 15 分鐘的目的是（13） 。
4．在微量凱氏定氮法測(cè)定植物組織中的總氮和蛋白氮，有三個(gè)主要的實(shí)驗(yàn)階段，它們分別是（14）、（15）和
3、（16） 。在第二階段，若收集三角瓶中的溶液顏色由_（17）變?yōu)椋?8） ，表明反應(yīng)完全。第三階段所用的標(biāo)準(zhǔn)濃度的滴定溶液名稱是（19）。
5. DNA 提取研磨時(shí)加入的研磨緩沖液的NaCl濃度是（20），研磨時(shí)加入SDS的作用是（21）
三、是非判斷題 (判斷對(duì)錯(cuò)，對(duì)的標(biāo)T，錯(cuò)的標(biāo)F，每題 2 分，共 10 分 )
1．萌發(fā)的小麥種子中含有很高活性的淀粉酶，其中α－淀粉酶不耐熱，在70℃迅速鈍化。（ ）
2．本學(xué)期測(cè)定還原性糖和可溶性蛋白含量時(shí)都用到了斐林試劑，這兩個(gè)實(shí)驗(yàn)中所用的斐林試劑的配方是相同的。（ ）
3．DNA提取中，加入冷乙醇是為了使DNA分子復(fù)性變粗。（ ）
4
4、．離心機(jī)使用中，要求同一臺(tái)離心機(jī)所用的離心管都有相同的重量。（ ）
5．油菜種子硫甙葡萄糖苷的快速分析法中，反應(yīng)的實(shí)質(zhì)是測(cè)定水解硫苷產(chǎn)生的葡萄糖的數(shù)量。（ ）
四、問答題（共36分）
1．試述維生素C測(cè)定的基本原理及其實(shí)驗(yàn)過程中的注意事項(xiàng)（12分）
2．簡(jiǎn)述凱氏定氮法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的基本原理。為什么一些不法商人要在蛋白質(zhì)制品中加入三聚氰胺？（12分）
3．凝膠電泳法測(cè)定同工酶的原理是什么？為什么本學(xué)期所作的膠條染色后顯示的譜帶就是過氧化物同工酶帶？（12分）
華中農(nóng)業(yè)大學(xué)本科課程考試
參考答案與評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)
考試課程：生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)原理和技術(shù) 學(xué)年學(xué)
5、期：2008－2009－1
試卷類型：A 考試時(shí)間：
一、名詞解釋 ( 每題 4 分 9 共 l2 分 )
1. 聚丙烯酰胺凝膠：是由丙烯酰胺和N，N 一甲叉雙丙烯酰胺在催化劑過硫酸胺以及加速劑四甲基乙二胺的催化下聚合成的凝膠。
2．離心技術(shù)：是根據(jù)物質(zhì)顆粒在離心場(chǎng)中的行為而發(fā)展起來的分離細(xì)胞器和生物大分子的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，不同的物質(zhì)通常有不同的沉降速度或沉降位置。(4分)
3．可見光分光光度法：利用分光裝置，將光源產(chǎn)生的連續(xù)光譜分成可見光的各種單色光，再利用單色光照射待測(cè)溶液，經(jīng)檢測(cè)器接
6、收透過光的強(qiáng)弱，并轉(zhuǎn)換成電信號(hào)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析的方法。(4分)
二、填空題 ( 每空 2 分 , 共 42 分 )
1．(1) 灰褐色 (2) 芥酸 (3) 花生烯酸 (4) 油酸
(5) 亞油酸 (6) 亞麻油酸
2. (7) 負(fù) （8) 正 (9) 1 (10) 2-3 (11) 指示
3. (12) 變性 DNA 酶 （或使DNA變性） (13) 使β-淀粉酶失活
4. (l4) 消化 (15) 蒸餾 (l6) 滴定 (17)紫紅色 (l8) 藍(lán)色
(19) 鹽酸（HCl）
5. (20) 1.0 M/L (21)
7、 使核酸酶變性
三、是非判斷題 ( 每題 2 分男共 10 分 )
1．( F ) 2.(F )3. (F ) 4.(F ) 5.( T )
四、問答題 ( 共 36 分 )
l. 試述維生素 C 測(cè)定的基本原理及其實(shí)驗(yàn)過程中的注意事項(xiàng) (l2 分 )
原理：VC 具有還原性，易被氧化,2，6-二氯酚靛酚具有較強(qiáng)的氧化性且在酸性溶液中呈紅色， 在中性或堿性溶液中呈藍(lán)色，被還原后為無色（3分）。因此當(dāng)用藍(lán)色的2,6-二氯酚靛酚溶液滴定含有 VC 的草酸溶液時(shí), VC 可將 2,6-二氯酚靛酚還原成無色的還原型 (3 分 )。當(dāng)溶液中的 VC 完全被氧化后 , 再滴入2,
8、6 -二氯酚靛酚就會(huì)在酸性草酸溶液中呈紅色,借此可以指示滴定終點(diǎn)。根據(jù)用標(biāo)準(zhǔn)VC與滴定所用的2，6-二氧酚靛酚溶液的量求出二者的對(duì)應(yīng)定量關(guān)系, 可以計(jì)算出被測(cè)樣品溶液中的 VC含量。（3分 )
注意事項(xiàng) :保護(hù)VC不被氧化：加草酸溶液研磨、不可用鐵銹刀處理樣品、用新鮮水果蔬菜做樣品、操作要迅速,滴定要準(zhǔn)確等 (3分 )
2. （12分 )
蛋白質(zhì)制品是以蛋白質(zhì)含量作為質(zhì)量指標(biāo)的，蛋白質(zhì)含量測(cè)定多以N素含量推算蛋白質(zhì)含量，加入高含N量的非蛋白質(zhì)物質(zhì)，可提高蛋白質(zhì)表觀測(cè)定值，因此不法商人用此法牟取非法利益。（3分）
測(cè)定原理 : 將植物材料與濃硫酸共熱 , 硫酸分解為二氧化硫、水和原子
9、氧 , 并將有機(jī)物質(zhì)氧化分解為二氧化碳和水，其中的氮轉(zhuǎn)變成氨 , 并進(jìn)一步生成硫酸胺 (3分)。消化完成后 , 再加入過量的濃氫氧化鉀（鈉），使銨分解放出 NH3（2分）, 通過蒸餾，借蒸汽將 NH3 導(dǎo)入過量的硼酸溶液中, 并用標(biāo)準(zhǔn)HCl溶液滴定，至硼酸溶液恢復(fù)到原來的氫離子濃度。(2 分 ) 所用鹽酸與N原子具有相同的化學(xué)當(dāng)量， 通過計(jì)算可得出樣品的總氮量。（2分）。
3．（12分 )
混合蛋白質(zhì)樣品通過凝膠電泳后，因不同的蛋白質(zhì)分子大小、結(jié)構(gòu)和電性不同而有不同的遷移速率，不同的酶被分離存在于膠條的不同部位，通過特定的顯色反應(yīng)就可看出特定功能的蛋白質(zhì)（酶）的所在的位置。（5 分）
過氧化物酶是由特定的染色方法顯現(xiàn)出來的，其染色方法是 : 取 0.5Iml 聯(lián)苯胺母液 + 9 .3m1H20 + 0.2ml 3 %H202, 混勻后倒入盛有凝膠條的培養(yǎng)皿。此時(shí)可以看到凝膠條上出現(xiàn)藍(lán)色或棕褐色環(huán) , 即過氧化物酶酶帶（5分）根據(jù)條帶數(shù)量，就可知有多少種同工酶。 (2 分〉
華中農(nóng)業(yè)大學(xué)《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》試卷(共4頁)
