紫外分光光度法測(cè)定氨茶堿的含量.ppt

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實(shí)驗(yàn)四：紫外分光光度法測(cè)定氨茶堿的含量,紫外-可見(jiàn)分光光度法（藥典相關(guān)規(guī)定）,1.對(duì)溶劑的要求含雜原子的有機(jī)溶劑，通常具有末端吸收。因此，它們的適用范圍不能小于截止波長(zhǎng)。例如甲醇、乙醇的截止使用波長(zhǎng)為205nm。另外，當(dāng)溶劑不純時(shí)，也可能增加干擾吸收。因此，在測(cè)定樣品前，應(yīng)先檢查所用溶劑在樣品所用波長(zhǎng)附近是否符合要求，即將溶劑置1cm石英吸收池中，以空氣為空白測(cè)定其吸光度。溶劑和吸收池的吸光度在220-240nm范圍內(nèi)不超過(guò)0.4，在241-250nm范圍內(nèi)不得超過(guò)0.2，在251-300nm范圍內(nèi)不得超過(guò)0.10，在300nm以上時(shí)不得超過(guò)0.05.,測(cè)定法,應(yīng)以配制樣品溶液的同批溶劑為空白對(duì)照，吸收峰波長(zhǎng)應(yīng)在該品種項(xiàng)下規(guī)定的波長(zhǎng)2nm以內(nèi)，并以吸光度最大的波長(zhǎng)為測(cè)定波長(zhǎng)。,含量測(cè)定,（1）對(duì)照品比較法（2）吸收系數(shù)法,（3）計(jì)算分光光度法（4）比色法樣品本身在紫外-可見(jiàn)區(qū)沒(méi)有強(qiáng)吸收，或在紫外區(qū)雖有吸收但為避免干擾或提高靈敏度，可加入適當(dāng)?shù)娘@色劑顯色后測(cè)定。,藥物其他分析定量方法,標(biāo)準(zhǔn)曲線法也稱外標(biāo)法或直接比較法，是一種簡(jiǎn)便、快速的定量方法。與分光光度分析中的標(biāo)準(zhǔn)曲線法相似，首先用欲測(cè)組分的標(biāo)準(zhǔn)樣品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。內(nèi)標(biāo)法,標(biāo)準(zhǔn)曲線法,標(biāo)準(zhǔn)曲線的橫坐標(biāo)(X)表示可以精確測(cè)量的變量(如標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度)，稱為普通變量，縱坐標(biāo)(Y)表示儀器的響應(yīng)值(也稱測(cè)量值，如吸光度、電極電位等)，稱為隨機(jī)變量。當(dāng)X取值為X1,X2,……Xn時(shí)，儀器測(cè)得的Y值分別為Y1,Y2,……Yn。將這些測(cè)量點(diǎn)Xi,Yi描繪在坐標(biāo)系中，用直尺繪出一條表示X與Y之間的直線線性關(guān)系，這就是常用的標(biāo)準(zhǔn)曲線法。用作繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，它的含量范圍應(yīng)包括試祥中被測(cè)物質(zhì)的含量，標(biāo)準(zhǔn)曲線不能任意延長(zhǎng)。,標(biāo)準(zhǔn)曲線法的優(yōu)點(diǎn)是：繪制好標(biāo)準(zhǔn)工作曲線后測(cè)定工作就變得相當(dāng)簡(jiǎn)單，可直接從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線上讀出含量，因此特別適合于大量樣品的分析。標(biāo)準(zhǔn)曲線法的缺點(diǎn)是：每次樣品分析的色譜條件（檢測(cè)器的響應(yīng)性能，柱溫，流動(dòng)相流速及組成，進(jìn)樣量，柱效等）很難完全相同，因此容易出現(xiàn)較大誤差。此外，標(biāo)準(zhǔn)工作曲線繪制時(shí)，一般使用欲測(cè)組分的標(biāo)準(zhǔn)樣品（或已知準(zhǔn)確含量的樣品），而實(shí)際樣品的組成卻千差萬(wàn)別，因此必將給測(cè)量帶來(lái)一定的誤差。,內(nèi)標(biāo)法,內(nèi)標(biāo)法internalstandardmethod是色譜分析中一種比較準(zhǔn)確的定量方法，尤其在沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)物對(duì)照時(shí)，此方法更顯其優(yōu)越性。它尤其廣泛的應(yīng)用于高效液相色譜中。這種方法可以抵消儀器和操作過(guò)程帶來(lái)的誤差。內(nèi)標(biāo)法是將一定重量的純物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)物加到一定量的被分析樣品混合物中，然后對(duì)含有內(nèi)標(biāo)物的樣品進(jìn)行色譜分析，分別測(cè)定內(nèi)標(biāo)物和待測(cè)組分的峰面積（或峰高）及相對(duì)校正因子，內(nèi)標(biāo)物在色譜圖上得到分離的峰。根據(jù)已知含量的內(nèi)標(biāo)物的峰面積和樣品的峰面積，計(jì)算組分的百分含量。,內(nèi)標(biāo)物的選擇要符合以下要求：（1）內(nèi)標(biāo)物的峰與組分峰能完全分離。（2）內(nèi)標(biāo)物峰在色譜圖上出現(xiàn)的位置，最好在欲定量組分峰的鄰近位置。如果樣品中有幾個(gè)組分需要定量，并且他們的k’值差別較大，這時(shí)就需要用幾個(gè)內(nèi)標(biāo)物來(lái)作定量測(cè)定。（3）內(nèi)標(biāo)物的性質(zhì)和濃度盡量與預(yù)測(cè)定峰的接近。（4）內(nèi)標(biāo)物是樣品中不存在的，與樣品各組分、柱填料和移動(dòng)相不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。,內(nèi)標(biāo)法優(yōu)缺點(diǎn),優(yōu)點(diǎn)：內(nèi)標(biāo)法能夠消除大部分的誤差，如儀器造成的。外標(biāo)法無(wú)法消除，需要求儀器不產(chǎn)生誤差。缺點(diǎn)：操作復(fù)雜。,實(shí)驗(yàn)?zāi)康?了解紫外分光光度法檢測(cè)藥物含量的原理；熟悉紫外分光光度計(jì)的基本構(gòu)造和功能；掌握紫外分光光度法檢測(cè)藥物含量基本過(guò)程;掌握標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立方法。,實(shí)驗(yàn)原理,單色光輻射穿過(guò)被測(cè)物質(zhì)溶液時(shí)，被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度（光路長(zhǎng)度）成正比，即朗伯-比爾定律，這是吸收光譜法定量的理論依據(jù)，其關(guān)系式如下A=ECL式(3-1)式中A為吸收度；E為吸收系數(shù)，即單位濃度、單位液層厚度的吸收度數(shù)值；C為溶液濃度；L為液層厚度。紫外-可見(jiàn)分光光度法是根據(jù)物質(zhì)分子對(duì)波長(zhǎng)為200-760nm這一范圍的電磁波的吸收特性所建立的光譜分析方法。其主要特點(diǎn)為：靈敏度高，可達(dá)10-4g/ml～10-7g/ml；準(zhǔn)確度高，相對(duì)誤差為2％-5％。中藥中有紫外吸收的成分或本身有顏色的成分，在一定的濃度范圍內(nèi)，其溶液的吸收度與濃度符合朗伯-比爾定律，均可用此法進(jìn)行分析。,實(shí)驗(yàn)儀器與材料,實(shí)驗(yàn)儀器：紫外分光光度計(jì)、精密天平、石英比色皿、50ml燒杯、玻璃棒、稱量紙、10ml容量瓶、25ml容量瓶、洗瓶。實(shí)驗(yàn)材料：氨茶堿原料、氨茶堿標(biāo)準(zhǔn)品、蒸餾水、氫氧化鈉。0.01MNaOH溶液的配制：稱取氫氧化鈉0.4g，用蒸餾水定容至1000ml，即得。,實(shí)驗(yàn)方法,標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備：精密稱取氨茶堿對(duì)照品12.5mg置于25mL容量瓶中，先用少量0.01M的NaOH溶液振搖使溶解，再用該溶液定容至刻度，配成濃度為0.5mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液；樣品溶液的制備：精密稱取氨茶堿原料藥12.5mg，置于25ml容量瓶中，用0.01MNaOH溶液溶解并定容至刻度，搖勻，再?gòu)闹腥〕?.2ml定容至10ml，即得氨茶堿樣品溶液。,一、標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立,精密吸取氨茶堿標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液分別為100、150、200、250、300μl于10mL容量瓶中，然后用0.01M的NaOH溶液定容至刻度，搖勻，照紫外分光光度法在275nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，并以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，并建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。,二、氨茶堿樣品含量測(cè)定,取已配制好的氨茶堿樣品溶液適量，置于石英比色皿中，采用紫外分光光光度法在275nm波長(zhǎng)處測(cè)定溶液中氨茶堿吸光度，最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中氨茶堿的含量。,實(shí)驗(yàn)結(jié)果,1.標(biāo)準(zhǔn)曲線方程、相關(guān)系數(shù)及繪圖。2.氨茶堿樣品含量。,思考題：,1.標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中對(duì)相關(guān)系數(shù)r值有何要求？2.標(biāo)準(zhǔn)曲線制備中，各點(diǎn)濃度取值范圍是根據(jù)什么確定的？3.實(shí)驗(yàn)中為什么選擇用0.01M的NaOH溶液作為溶劑來(lái)溶解氨茶堿。,