中藥化學(xué) 實(shí)驗(yàn)指導(dǎo) (全套）

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1、 實(shí)驗(yàn)一 大黃中游離蒽醌的提取分離與檢識 （一）目的要求 學(xué)習(xí)羥基蒽醌類化合物的提取分離和檢識，通過實(shí)驗(yàn)要求： 1.掌握從大黃中提取和分離游離蒽醌的方法。 2.掌握用pH梯度萃取法分離不同酸性的羥基蒽醌類化合物。 3.掌握蒽醌類化合物的主要檢識方法。 4.熟悉蒽醌類化合物的色譜檢識方法。 5.了解用柱色譜法分離蒽醌類成分。 （二）主要化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)及性質(zhì) 大黃為蓼科植物掌葉大黃Rheum palmatum L.、唐古特大黃Rheum tanguticum Maxim. ex Reg.和藥用大黃Rheum officinale Baill.的干燥根及根莖。大黃中含有大黃酸、

2、大黃酚、蘆薈大黃素、大黃素、大黃素甲醚及其苷，總含量約3％～5％。 1．大黃酸(rhein) 分子式C15H8O6，分子量284.21。黃色針狀結(jié)晶（升華法），mp.321～322℃，330℃分解。能溶于堿水、吡啶，略溶于乙醇、苯、氯仿、乙醚和石油醚，幾不溶于水。 2．大黃素(emodin) 分子式C15H10O5，分子量270.23。橙色針狀結(jié)晶(乙醇)，mp.256～257℃，能升華。易溶于乙醇、堿水，微溶于乙醚、氯仿，幾不溶于水。 3．蘆薈大黃素(aloe-emodin) 分子式C16H10O5，分子量270.23。橙色針狀結(jié)晶（甲苯），mp.223～224℃。易溶于熱乙醇，

3、可溶于乙醚和苯，并呈黃色；溶于堿液呈紅色；氨水及硫酸中呈緋紅色。 4．大黃酚(chrysophanol) 分子式C15H10O4，分子量254.23。橙黃色六方形或單斜結(jié)晶（乙醇或苯），mp.196～197℃，能升華。易溶于沸乙醇，可溶于丙酮、氯仿、苯、乙醚和冰醋酸，極微溶于石油醚、冷乙醇，幾不溶于水。 大黃酚 R1=CH3 R2=H 大黃素 R1=CH3 R2=OH 大黃酸 R1=COOH R2=H 大黃素甲醚 R1=CH3 R2=OCH3 蘆薈大黃素 R1=CH2OH R2=H 5．大黃素甲醚(physcion) 分子式C16H12O5，分

4、子量284.26。磚紅色單斜針狀結(jié)晶，mp.203～207℃，溶于苯、氯仿、吡啶及甲苯，微溶于醋酸及醋酸乙酯，不溶于甲醇、乙醇、乙醚和丙酮。 （三）實(shí)驗(yàn)原理 本實(shí)驗(yàn)是根據(jù)大黃中的羥基蒽醌苷經(jīng)酸水解成游離羥基蒽醌，而游離羥基蒽醌不溶于水，可溶于氯仿、乙醚等親脂性有機(jī)溶劑的性質(zhì)，用氯仿從水解液中將游離羥基蒽醌提取出來，再利用各游離羥基蒽醌的酸性不同，采用pH梯度萃取法將其分離。其中大黃酚和大黃素甲醚的酸性十分近似，用pH梯度萃取法難以分離，可利用兩者的極性不同，采用硅膠柱色譜法進(jìn)行分離。 （四）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 1. 提取與分離 見書。 2．檢識 （1）堿液試驗(yàn) 分別取各蒽醌化合物結(jié)晶少許

5、，置試管中，加1ml乙醇溶解，加數(shù)滴10％氫氧化鈉試劑振搖，觀察顏色變化，羥基蒽醌應(yīng)顯紅色。 （2）醋酸鎂試驗(yàn) 分別取各蒽醌化合物結(jié)晶少許，置試管中，加1ml乙醇溶解，加數(shù)滴0.5％醋酸鎂乙醇試劑，觀察顏色變化，羥基蒽醌應(yīng)顯橙、紅、紫等顏色。 （3）薄層色譜檢識 薄層板：硅膠G-CMC-Na 試 樣：自制大黃酸、大黃素、蘆薈大黃素的氯仿溶液 對照品：上述各成分對照品乙醇溶液 展開劑：石油醚（30～60℃）-醋酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）上層溶液 顯 色：在可見光下觀察，記錄黃色斑點(diǎn)的位置。然后再用濃氨水熏蒸或噴霧5％醋酸鎂甲醇溶液，斑點(diǎn)應(yīng)顯紅色。 （五）實(shí)驗(yàn)說明及注意事項(xiàng)

6、 1．大黃中蒽醌類化合物的種類、含量與大黃的品種、采集季節(jié)、炮制方法及貯存時間均有關(guān)系，實(shí)驗(yàn)用藥材應(yīng)注意。 2．萃取用pH8緩沖液為檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液 ；pH9.9緩沖液為碳酸氫鈉-碳酸鈉緩沖液。配制好的緩沖液要測pH值。一般萃取大黃酸用pH7～8范圍的，萃取大黃素用pH9.5～11范圍的。 3．用各緩沖液進(jìn)行萃取時，采用一次性加入的方法，實(shí)驗(yàn)證明，如將緩沖液分次萃取，分離效果不理想。 4．本實(shí)驗(yàn)也適應(yīng)于以虎杖為原料的提取，但虎杖中不含大黃酸，故直接由大黃素開始分離。 5．色譜分離大黃酚及大黃素甲醚時，先用氯仿洗脫至出現(xiàn)黃色色帶時，改用氯仿—醋酸乙酯（8∶2）混合溶劑繼續(xù)洗脫，

7、并更換收集器，每10ml為一份，按順序編號，直至色譜柱的第一色帶全部洗脫下來為止。各流分經(jīng)硅膠-CMC-Na板，氯仿－醋酸乙酯(8∶2)展開，用大黃酚和大黃素甲醚作對照，合并斑點(diǎn)相同流分，分別濃縮、放置析晶，即可獲得大黃酚及大黃素甲醚。 （六）思考題 1．大黃中5種羥基蒽醌化合物的酸性和極性大小應(yīng)如何排列？為什么？ 2．pH梯度萃取法的原理是什么？適用于哪些中藥成分的分離？ 3．蒽醌類化合物及其苷的薄層色譜用什么作吸附劑、展開劑和顯色劑？ 4．蒽醌類與醋酸鎂顯色反應(yīng)的必要條件是什么？其顏色反應(yīng)與羥基所在的位置有何關(guān)系？ 實(shí)驗(yàn)二 補(bǔ)骨脂中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的提取分離與檢識 （一

8、）目的要求 學(xué)習(xí)香豆素類化合物的提取分離及檢識，通過實(shí)驗(yàn)要求： 1．掌握用溶劑法提取香豆素類化合物的操作技術(shù)。 2．通過補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的分離，熟悉干柱色譜的操作技術(shù)。 3．掌握香豆素類化合物的檢識方法。 （二）主要化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)及性質(zhì) 補(bǔ)骨脂 為豆科植物補(bǔ)骨脂Psoralea corylifolia L.的干燥成熟果實(shí)，全國各地多有栽培。含有多種呋喃香豆素類成分，主要含補(bǔ)骨脂內(nèi)酯 （補(bǔ)骨脂素）、異補(bǔ)骨脂內(nèi)酯 （異補(bǔ)骨脂素）和補(bǔ)骨脂次素等。其中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素為抗白癜風(fēng)的主要有效成分，具有光敏性質(zhì)。 1.補(bǔ)骨脂素(psoralen) 又稱補(bǔ)骨脂內(nèi)酯，分子式C11H6

9、O3，分子量186.16。無色針狀結(jié)晶（乙醇），mp.189～190℃，有揮發(fā)性。溶于甲醇、乙醇、苯、氯仿、丙酮；微溶于水、乙醚和石油醚。 2.異補(bǔ)骨脂素(isopsoralen) 分子式 C11H6O3，分子量186.16。無色針狀結(jié)晶，mp.137～138℃，溶于甲醇、乙醇、丙酮、苯、氯仿，微溶于水、乙醚，難溶于冷石油醚。 補(bǔ)骨脂素 異補(bǔ)骨脂素 3.補(bǔ)骨脂乙素(isobavachalcone) 又稱補(bǔ)骨脂酮、異補(bǔ)骨脂查耳酮。分子式C20H20O4，分子量324.36。黃色片狀結(jié)晶（甲醇-水），mp. 166～1

10、67℃。 4.補(bǔ)骨脂甲素(coryfolin) 又稱補(bǔ)骨脂黃酮，分子式C20H20O4，分子量324.36。無色針狀結(jié)晶，mp.191～192℃。 補(bǔ)骨脂乙素 補(bǔ)骨脂甲素 （三）實(shí)驗(yàn)原理 本實(shí)驗(yàn)根據(jù)補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素等在乙醇中溶解度大，利用乙醇從中藥補(bǔ)骨脂中提取補(bǔ)骨脂素及異補(bǔ)骨脂素等，并用活性炭吸附脫色，再依據(jù)補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的極性差異，利用氧化鋁干柱色譜予以分離。 （四）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 1.提取 方法Ⅰ:見書 方法Ⅱ:見書 2.精制 見書

11、3.分離 取色譜用中性氧化鋁12g，裝于直徑1.0cm28cm的干柱用色譜柱中。將補(bǔ)骨脂素精制品0.2g溶于少量甲醇，加入0.5g氧化鋁拌勻，60℃烘干，加樣，以苯-石油醚（4∶1）并每50ml加入15滴丙酮為洗脫劑，展層至柱底，置紫外燈下觀察，用刀片切取兩段藍(lán)色熒光色帶，分別用甲醇回流提取，濾過，濾液回收溶劑至小體積，靜置析晶，抽濾，分別得到補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素結(jié)晶。 4.檢識 （1）異羥肟酸鐵反應(yīng) 取試樣少許于試管中，加入7％鹽酸羥胺甲醇溶液2～3滴，再加10％氫氧化鈉甲醇溶液2～3滴，于水浴上加熱數(shù)分鐘，冷卻后，加鹽酸調(diào)pH3～4，加1％三氯化鐵1～2滴，觀察溶液顏色。 （2）

12、開環(huán)閉環(huán)試驗(yàn) 取試樣少許加稀氫氧化鈉溶液1～2ml，加熱，觀察現(xiàn)象，再加稀鹽酸試劑數(shù)滴，觀察所產(chǎn)生現(xiàn)象。 （3）熒光 取試樣少許溶于氯仿中，用毛細(xì)管點(diǎn)于濾紙上，晾干后在紫外燈下觀察熒光。 （4）薄層色譜檢識 薄層板：硅膠G-CMC-Na板 試 樣：補(bǔ)骨脂素乙醇液 異補(bǔ)骨脂素乙醇液 對照品：補(bǔ)骨脂素對照品乙醇液 異補(bǔ)骨脂素對照品乙醇液 展開劑：①苯-醋酸乙酯（9∶1） ②苯-石油醚（4∶1）每50ml含丙酮15滴 顯 色：紫外燈下觀察熒光 （五）實(shí)驗(yàn)說明及注意事項(xiàng) 1．提取藥材應(yīng)是未炮制過的補(bǔ)骨脂種子,其補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素等成分含量較高。 2．

13、補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素含內(nèi)酯結(jié)構(gòu)，具有內(nèi)酯類成分的通性，可用堿提酸沉法提取，但因補(bǔ)骨脂種子中含有大量油脂和糖類成分，易與堿水發(fā)生皂化反應(yīng)和形成膠狀物，致使難以濾過，降低收得率，故選用50％乙醇提取而不用堿溶酸沉法提取。 3．由補(bǔ)骨脂種子中提取所得的精制品，為補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的混合物結(jié)晶，兩者含量近于1∶1，但隨藥材品種、質(zhì)量等不同而有差異。在進(jìn)行干柱色譜分離之前，應(yīng)先進(jìn)行薄層色譜檢查，了解兩者含量情況。因兩者皆具有光敏作用，均為有效成分，故臨床應(yīng)用時，不必將兩者分開。 （六）思考題 1．從中藥中提取香豆素類成分還有哪些方法？ 2．異羥肟酸鐵反應(yīng)的機(jī)理是什么？ 實(shí)驗(yàn)三 陳皮中橙

14、皮苷的提取分離與檢識 （一）目的要求 學(xué)習(xí)橙皮苷的提取精制和檢識，通過實(shí)驗(yàn)要求： 1．掌握橙皮苷的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和理化性質(zhì)及一般提取方法。 2．了解橙皮苷的檢識方法。 （二）主要化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)及性質(zhì) 陳皮為蕓香科植物福橘Citrus tangerina Hort.et Tanaka、朱橘Citrus erythrosa Tanaka的果皮。含揮發(fā)油和黃酮類成分橙皮苷、川陳皮素等。 20 D 橙皮苷(hesperidin) 又稱陳皮苷、橘皮苷。分子式C28H34O15，為細(xì)樹枝狀針形結(jié)晶，mp.258～262℃，［α］ -76℃（C=2,吡啶）。易溶于稀堿及吡啶，微溶于甲醇及熱冰醋

15、酸，幾乎不溶于丙酮、苯及氯仿，在60℃溶于二甲基甲酰胺及甲酰胺。 橙皮苷 （三）實(shí)驗(yàn)原理 本實(shí)驗(yàn)是根據(jù)陳皮中的主要成分是揮發(fā)油和橙皮苷，先用石油醚溶除揮發(fā)油，再用甲醇提取及用活性炭精制得到橙皮苷。也可利用橙皮苷易溶于稀堿水的性質(zhì)，進(jìn)行堿溶酸沉法提取，用甲酰胺精制得橙皮苷。 （四）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 1．提取、精制 方法Ⅰ：見書 方法Ⅱ：見書 2．檢識 （1）Molish反應(yīng) 取橙皮苷少許置于試管中，加乙醇1ml，在水浴中加熱溶解，加α-萘酚乙醇溶液2～3滴振搖，傾斜試管45，沿管壁徐徐滴加1ml濃硫酸，靜置，觀察二層溶液界面變化，應(yīng)呈現(xiàn)紫紅色環(huán)。 （2）鹽酸-鎂粉反應(yīng) 取橙皮

16、苷少許置于試管中，加乙醇2ml，在水浴中加熱溶解，加入鎂粉約50mg振搖后，滴加濃鹽酸3～4滴，產(chǎn)生劇烈反應(yīng)，溶液逐漸由黃色變?yōu)榧t色。 （3）鋯-枸櫞酸反應(yīng) 取橙皮苷少許置于試管中，加甲醇2ml，在水浴中加熱溶解，加2％二氯氧鋯甲醇試劑3～ 4滴，呈鮮黃色。再加2％枸櫞酸甲醇試劑3～4滴，黃色變淺。 （4）三氯化鋁反應(yīng) 取橙皮苷少許置于試管中，加甲醇2ml，在水浴中加熱溶解，加1％三氯化鋁甲醇試劑2～3滴，呈鮮黃色。 （5）四氫硼鈉反應(yīng) 取橙皮苷少許置于試管中，加2ml甲醇溶解，加入等量的2％四氫硼鈉的甲醇液，一分鐘后，再加濃鹽酸或濃硫酸數(shù)滴，生成紫色～紫紅色。此反應(yīng)也可在濾紙上進(jìn)

17、行。 （6）薄層色譜檢識 薄層板：硅膠G-CMC-Na板 試 樣：自制橙皮苷乙醇飽和溶液 對照品：橙皮苷對照品乙醇飽和溶液 展開劑：醋酸乙酯-甲醇-水（100∶17∶13） 顯色劑：噴霧0.5％醋酸鎂試劑，在紫外燈下觀察顯天藍(lán)色熒光 （五）實(shí)驗(yàn)說明及注意事項(xiàng) 1．精制橙皮苷粗品時所用活性炭，應(yīng)事先用稀鹽酸處理。 2．橙皮苷微溶于甲醇，故工業(yè)生產(chǎn)中，以甲醇為溶劑提取時，應(yīng)加熱提取多次。 實(shí)驗(yàn)四 槐花米中蕓香苷的提取及槲皮素的制備與檢識 （一）目的要求 學(xué)習(xí)黃酮類化合物的提取、分離和檢識，通過實(shí)驗(yàn)要求： 1．通過蕓香苷提取與精制，掌握堿溶酸沉法提取黃酮類化合物的原

18、理和操作。 2．掌握黃酮類化合物的主要性質(zhì)及黃酮苷、苷元和糖部分的檢識方法。 3．掌握由蕓香苷水解制取槲皮素的方法。 （二）主要化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)及性質(zhì) 槐花米為豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花蕾，主要含蕓香苷（蘆丁），含量高達(dá)12％～20％，水解生成槲皮素、葡萄糖及鼠李糖；槐花亦含蕓香苷，但含量較槐米為少。 蕓香苷(rutoside) 分子式C27H30O16，分子量610.51。淡黃色針狀結(jié)晶，mp.177～178℃，難溶于冷水（1∶8000），略溶于熱水（1∶200），溶于熱甲醇（1∶7）、冷甲醇（1∶100）、熱乙醇（1∶30）、冷乙醇（1∶650），難

19、溶于醋酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚、石油醚等，易溶于吡啶及稀堿液中。 槲皮素(quercetin) 又稱槲皮黃素，分子式C15H10O7，分子量302.23。黃色結(jié)晶，mp.314℃（分解）。溶于熱乙醇（1∶23）、冷乙醇（1∶300），可溶于甲醇、丙酮、醋酸乙酯、冰醋酸、吡啶等溶劑，不溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿中，幾不溶于水。 蕓香苷 R=－葡萄糖－鼠李糖 槲皮素 R=H （三）實(shí)驗(yàn)原理 由槐花米中提取蕓香苷的方法很多，本實(shí)驗(yàn)是根據(jù)蕓香苷在冷水和熱水中的溶解度差異的特性進(jìn)行提取和精制，或

20、根據(jù)蕓香苷分子中具有酚羥基，顯弱酸性，能與堿成鹽而增大溶解度，以堿水為溶劑煮沸提取，其提取液加酸酸化后則蕓香苷游離析出。 （四）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 1．蕓香苷的提取 方法Ⅰ：水提取法 見書 方法Ⅱ ：堿溶酸沉法 見書 2．蕓香苷的精制 見書 4．蕓香苷、槲皮素及糖的檢識 取蕓香苷、槲皮素少許，分別用8ml乙醇溶解，制成試樣溶液，按下列方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，比較苷元和苷的反應(yīng)情況。 （1）Molish反應(yīng)：取試樣溶液各2ml，分置于兩支試管中，加10％α-萘酚乙醇溶液1ml，振搖后傾斜試管45，沿管壁滴加1ml濃硫酸，靜置，觀察并記錄兩液面交界處顏色變化。 （2）鹽酸-鎂粉反應(yīng)：取

21、試樣溶液各2ml，分別置于兩支試管中，各加入鎂粉少許，再加入鹽酸數(shù)滴，觀察并記錄顏色變化。 （3）醋酸鎂反應(yīng)：取兩張濾紙條，分別滴加試樣溶液后，加1％醋酸鎂甲醇溶液2滴，于紫外燈下觀察熒光變化，并記錄現(xiàn)象。 （4）三氯化鋁反應(yīng)：取兩張濾紙條，分別滴加試樣溶液后，加1％三氯化鋁乙醇溶液2滴，于紫外燈下觀察熒光變化，并記錄現(xiàn)象。 （5）鋯-檸檬酸反應(yīng)：取試樣溶液各2ml，分別置于兩支試管中，各加2％二氯氧鋯甲醇溶液3～4滴，觀察顏色，然后加入2％檸檬酸甲醇溶液3～4滴，觀察并記錄顏色變化。 （6）紙色譜檢識 支持劑：新華層析濾紙(中速,20CM7CM) 試 樣：自制蕓香苷乙醇溶液

22、自制槲皮素乙醇溶液 對照品：蕓香苷對照品乙醇溶液 槲皮素對照品乙醇溶液 展開劑：正丁醇-醋酸-水（4∶1∶5上層）或15％醋酸溶液 顯色劑：1）在可見光下觀察斑點(diǎn)顏色，再在紫外燈下觀察斑點(diǎn)顏色 2）噴霧三氯化鋁試劑，置日光下及紫外燈下觀察并記錄斑點(diǎn)的顏色變化。 （7）薄層色譜檢識 薄層板：硅膠G-CMC-Na 試 樣：自制1％蕓香苷乙醇溶液 自制1％槲皮素乙醇溶液 對照品：1％蕓香苷對照品乙醇溶液 1％槲皮素對照品乙醇溶液 展開劑：氯仿-甲醇-甲酸（15∶5∶1） 顯色劑：噴霧1％三氯化鐵和1％鐵氰化鉀水溶液，臨用時等體積混合 （8）糖的紙色譜檢識 取糖的供試液

23、做徑向紙色譜，和已知糖液作對照，可得到與葡萄糖、鼠李糖相同Rf值的斑點(diǎn)。 支持劑：新華層析濾紙（圓形） 試 樣：糖的供試液 對照品：1％葡萄糖對照品水溶液 1％鼠李糖對照品水溶液 展開劑：正丁醇-醋酸-水（4∶1∶5上層） 顯色劑：噴霧苯胺-鄰苯二甲酸試劑，于105℃加熱10分鐘或紅外燈下加熱10～15分鐘，顯棕色或棕紅色斑點(diǎn)。 （五）實(shí)驗(yàn)說明及注意事項(xiàng) 1．在提取前應(yīng)將槐花米略搗碎，使蕓香苷易于被熱水溶出。 2．本實(shí)驗(yàn)直接用沸水由槐花米中提取蕓香苷，收得率穩(wěn)定，且操作簡便。如用堿溶酸沉法提取，加入石灰乳可以達(dá)到堿性溶解的目的，又可除去槐花7米中所含的大量粘液質(zhì)，但應(yīng)嚴(yán)格控

24、制其堿性pH8～9，不可超過pH10。如pH值過高，加熱提取過程中蕓香苷可被水解破壞，降低收得率。加酸沉淀時，控制pH3～4,不宜過低，否則蕓香苷可生成yang鹽而溶于水，也降低收得率。 3．在提取過程中，加入硼砂的目的是使其與蕓香苷分子中的鄰二酚羥基發(fā)生絡(luò)合，既保護(hù)了鄰二酚羥基不被氧化破壞，又避免了鄰二酚羥基與鈣離子絡(luò)合（蕓香苷的鈣絡(luò)合物不溶于水），使蕓香苷不受損失，提高收得率。 （六）思考題 1． 黃酮類化合物還有哪些提取方法？蕓香苷的提取還可用什么方法？ 2． 酸水解常用什么酸？為什么用硫酸比用鹽酸水解后處理更方便？ 3． 本試驗(yàn)中各種色譜的原理是什么？解釋化合物結(jié)構(gòu)與Rf值的

25、關(guān)系。 4． 試討論苷類成分的檢識程序。 實(shí)驗(yàn)五 穿心蓮內(nèi)酯的提取分離與檢識 （一）目的要求 學(xué)習(xí)中藥中內(nèi)酯類成分的提取分離及檢識，通過實(shí)驗(yàn)要求： 1．掌握從穿心蓮中提取、分離穿心蓮內(nèi)酯的操作方法。 2．學(xué)習(xí)穿心蓮內(nèi)酯亞硫酸氫鈉加成物的制備。 3．熟悉穿心蓮內(nèi)酯類成分的性質(zhì)和檢識方法。 4．了解去除葉綠素的方法。 （二）、主要化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)及性質(zhì) 穿心蓮為爵床科植物穿心蓮Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees的全草。穿心蓮中含有多種二萜類化合物，主要為穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯、脫氧穿心蓮內(nèi)酯等。 1．穿心蓮內(nèi)酯(androgra

26、pholide) 又稱穿心蓮乙素。分子式C20H30O5，分子量350.44。無色方形或長方形結(jié)晶，味極苦。mp.230～231℃，易溶于甲醇、乙醇、丙酮、吡啶中，微溶于氯仿、乙醚、難溶于水、石油醚、苯。 2．新穿心蓮內(nèi)酯(neoandrographolide) 又稱穿心蓮丙素、穿心蓮新苷。分子式C26H40O8，分子量480.58。無色柱狀結(jié)晶，無苦味。mp.167～168℃，易溶于甲醇、乙醇、丙酮、吡啶中，微溶于水，較難溶于苯、乙醚、氯仿及石油醚。 22.5 D 3．去氧穿心蓮內(nèi)酯(deoxyandrographolide) 又稱穿心蓮甲素。分子式C20H30O4，分子量33

27、4.44。無色片狀（丙酮、乙醇或氯仿）或無色針狀結(jié)晶（醋酸乙酯），味稍苦。mp.174～175℃，［α］ -40（C=1,無水乙醇）。易溶于甲醇、乙醇、丙酮、吡啶、氯仿，可溶于乙醚、苯中，微溶于水。 4．脫水穿心蓮內(nèi)酯(dehydroandrographolide) 分子式C20H28O4,分子量332.42。無色針狀結(jié)晶（30％或50％乙醇），mp.204℃。易溶于乙醇、丙酮，可溶于氯仿，微溶于苯，幾不溶于水。 穿心蓮內(nèi)酯 去氧穿心蓮內(nèi)酯 新穿心蓮內(nèi)酯 脫水穿心蓮內(nèi)酯 （三）實(shí)驗(yàn)原理 本實(shí)驗(yàn)是利用穿心蓮內(nèi)酯類成分易

28、溶于甲醇、乙醇、丙酮等溶劑的性質(zhì)，選用乙醇為提取溶劑進(jìn)行提取。穿心蓮中含有大量葉綠素，故用活性炭吸附，除去葉綠素等脂溶性雜質(zhì)。又根據(jù)穿心蓮內(nèi)酯與去氧穿心蓮內(nèi)酯在氯仿中溶解度不同而進(jìn)行分離。也可利用穿心蓮內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯及新穿心蓮內(nèi)酯結(jié)構(gòu)上的差異所表現(xiàn)的極性不同，用氧化鋁柱色譜分離。 （四）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 1． 提取 方法Ⅰ：略 方法Ⅱ：略 2． 精制 略 3． 分離 略 4．穿心蓮內(nèi)酯類成分的檢識 （1）異羥肟酸鐵反應(yīng) 取穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶數(shù)毫克，加乙醇1ml溶解，加7％鹽酸羥胺甲醇溶液2～3滴，加10％氫氧化鉀甲醇溶液1～2滴使呈堿性，于水浴上加熱2分鐘，放冷后，加稀鹽酸使呈

29、酸性，加1％三氯化鐵溶液1～2滴，混勻，呈紫紅色。 （2）Legal反應(yīng) 取穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶少許，加乙醇1ml溶解，加0.3％亞硝酰鐵氰化鈉溶液2～4滴，加10％氫氧化鈉溶液1～2滴，呈紫色。 （3）Kedde反應(yīng) 取穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶少許，加乙醇1ml溶解，加堿性3,5-二硝基苯甲酸試劑2滴，呈紫色。 （4）穿心蓮內(nèi)酯類成分的薄層色譜檢識 薄層板：硅膠G-CMC-Na 試 樣：自制穿心蓮內(nèi)酯乙醇溶液 對照品：穿心蓮內(nèi)酯對照品乙醇溶液 展開劑：①氯仿-甲醇（9∶1） ②氯仿-正丁醇-甲醇（2∶1∶2） 顯色劑：噴霧Kedde試劑，加熱顯色 （五）實(shí)驗(yàn)說明及注意事項(xiàng) 1．穿

30、心蓮內(nèi)酯類化合物為二萜類內(nèi)酯，性質(zhì)極不穩(wěn)定，易氧化、聚合而樹脂化。因此提取所用的穿心蓮應(yīng)是當(dāng)年產(chǎn)的新藥材，并且要未受潮變質(zhì)的莖葉部分，否則內(nèi)酯含量明顯下降至極低，難以提取得到。 2．提取時，如用熱乙醇加熱回流提取穿心蓮總內(nèi)酯，能同時提出大量穿心蓮中的葉綠素、樹脂以及無機(jī)鹽等雜質(zhì)。使析晶和精制較為困難，因此本實(shí)驗(yàn)用冷浸法和超聲波振蕩法提取。 3．以超聲波振蕩法提取省時，濃縮析晶時脂溶性雜質(zhì)少，易得到黃色結(jié)晶，得率高。 4．穿心蓮內(nèi)酯的析晶宜在含乙醇量稍高的情況下進(jìn)行，此時晶形與結(jié)晶的純度都較好。當(dāng)溶液的含水量較高，或粘稠度太大時，往往不易析出結(jié)晶。 （六）思考與練習(xí) 1．葉綠素除用活性

31、炭吸附法去除外，還可采用哪些方法去除？ 2．穿心蓮總內(nèi)酯的分離可采用哪些方法？試比較各種方法的優(yōu)缺點(diǎn)。 3．根據(jù)穿心蓮內(nèi)酯類成分的結(jié)構(gòu)，試判斷其極性的強(qiáng)弱，在進(jìn)行吸附薄層色譜時其Rf值大小如何？ 4．Legal反應(yīng)和Kedde反應(yīng)的機(jī)理是什么？什么樣的結(jié)構(gòu)才有陽性反應(yīng)？ 實(shí)驗(yàn)六 八角茴香油的提取分離與檢識 （一）目的要求 學(xué)習(xí)揮發(fā)油的提取和各類組成成分的檢識，通過實(shí)驗(yàn)要求： 1．掌握揮發(fā)油的水蒸氣蒸餾提取法。 2．學(xué)習(xí)揮發(fā)油的一般檢識及揮發(fā)油中固體成分的分離。 3．掌握揮發(fā)油中化學(xué)成分的薄層點(diǎn)滴定性檢識。 4．了解揮發(fā)油單向二次薄層色譜檢識。 （二）主要化學(xué)成分的結(jié)

32、構(gòu)及性質(zhì) 八角茴香為木蘭科植物八角茴香Illicium verum Hook..f.的干燥成熟果實(shí)。分布于福建、廣東、廣西、貴州、云南等省區(qū)。含揮發(fā)油4％～9％，一般約5％（果皮中較多）、脂肪油約22％（主要存在于種子中）及蛋白質(zhì)、樹膠、樹脂等。揮發(fā)油中主要成分是茴香醚，約為總揮發(fā)油的80％～90％，冷時常自油中析出，故稱茴香腦。此外，尚含莽草酸及少量甲基胡椒酚、茴香醛、茴香酸等。 茴香醚（腦） 甲基胡椒酚 茴香醛 莽草酸 茴香酸 1．茴香腦(anethol

33、e) 又稱大茴香醚、茴香烯、茴香醚。分子式C10H12O，分子量148.21。為白色結(jié)晶，mp.21.4℃，bp.235℃。與乙醚、氯仿混溶，溶于苯、醋酸乙酯、丙酮、二硫化碳及石油醚，幾不溶于水。 2．莽草酸(shikimic acid) 又稱毒八角酸。分子式C7H10O5,分子量174.15。無色針狀結(jié)晶（甲醇—醋酸乙酯），mp.190～191℃。在100ml水中可溶解18g，100ml無水乙醇中可溶解2.5g，幾乎不溶于氯仿、苯、石油醚。 3．甲基胡椒酚(methylchavicol) 分子式C10H12O，為無色液體，bp.215～216℃。 4．茴香醛 (anisaldeh

34、yde) 分子式C8H8O2，有兩種狀態(tài)：棱晶，mp.36.3℃，bp.236℃；液體，mp.0℃，bp.248℃。 5.茴香酸 (anisic acid) 分子式C8H8O3，為針狀結(jié)晶，mp.184℃，bp.275～280℃。 （三）實(shí)驗(yàn)原理 本實(shí)驗(yàn)是水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油的通法。揮發(fā)油的組成成分較復(fù)雜，常含有烷烴、烯烴、醇、酚、醛、酮、酸、醚等官能團(tuán)。因此可以用一些檢出試劑在薄層板上進(jìn)行點(diǎn)滴試驗(yàn)，從而了解組成揮發(fā)油的成分類型。揮發(fā)油中各類成分的極性互不相同，一般不含氧的烴類和萜類化合物極性較小，在薄層色譜板上可被石油醚較好的展開；而含氧的烴類和萜類化合物極性較大，不易被石油醚展

35、開，但可被石油醚與醋酸乙酯的混合溶劑較好的展開。為了使揮發(fā)油中各成分能在一塊薄層色譜板上進(jìn)行分離，常采用單向二次色譜法展開。 （四）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 1．茴香腦的提取分離 取八角茴香50g，搗碎，置圓底燒瓶中，加適量水浸泡濕潤，按一般水蒸氣蒸餾法進(jìn)行蒸餾提取。也可將搗碎的八角茴香置于揮發(fā)油測定器的燒瓶中，加蒸餾水500ml與數(shù)粒玻璃珠，連接揮發(fā)油測定器與回流冷凝管，自冷凝管上端加水使充滿揮發(fā)油測定器的刻度部分，并使溢流入燒瓶時為止。緩緩加熱至沸，至測定器中油量不再增加，停止加熱，放冷，分取油層（見圖）。 實(shí)圖-1 揮發(fā)油測定器 將所得的八角茴香油置冰箱中冷卻1小時，即有白色結(jié)晶析出，

36、趁冷濾過，用濾紙壓干。結(jié)晶為茴香腦，濾液為析出茴香腦后的八角茴香油。 2．檢識 （1）油斑試驗(yàn) 取八角茴香油適量，滴于濾紙片上，常溫下（或加熱烘烤），觀察油斑是否消失。 （2）薄層色譜板點(diǎn)滴反應(yīng) 取硅膠G薄層色譜板1塊，用鉛筆按表畫線。將揮發(fā)油試樣用5～10倍量乙醇稀釋后，用毛細(xì)管分別滴加于每排小方格中，再將各種檢識試劑用滴管分別滴于各揮發(fā)油試樣斑點(diǎn)上，觀察顏色變化。初步推測每種揮發(fā)油中可能含有化學(xué)成分的類型。 實(shí)-表1 揮發(fā)油薄層板點(diǎn)滴反應(yīng) 試劑 試樣 試劑 1．三氯化鐵試劑 2．2,4-二硝基苯肼試劑 3．堿性高錳酸鉀試劑 4．香草醛-濃硫酸試劑 5．

37、0.05％溴酚藍(lán)試劑 6．硝酸鈰銨試劑 1 2 3 4 5 6 八角茴香油 檸檬油 丁香油 薄荷油 樟腦油 桉葉油 松節(jié)油 空白對照 （3）揮發(fā)油薄層色譜單向二次展開檢識 取硅膠G-CMC-Na薄層板（6cm15cm）一塊，在距底邊1.5cm及8cm處分別用鉛筆畫起始線和中線。將八角茴香油溶于丙酮，用毛細(xì)管點(diǎn)于起始線上呈一長條形，先用石油醚（30～60℃）-醋酸乙酯（85∶15）為展開劑展開至薄層板中線處取出，揮去展開劑，再放入石油醚（30～60℃）中展開至接近薄層板頂端時取出，揮去展開劑后，分別用下列幾種顯色劑噴霧顯

38、色。 ①1％香草醛-硫酸試劑：可與揮發(fā)油產(chǎn)生紫色、紅色等。 ②熒光素-溴試劑：如產(chǎn)生黃色斑點(diǎn)，表明含有不飽和化合物。 ③2,4-二硝基苯肼試劑：如產(chǎn)生黃色斑點(diǎn)，表明含有醛或酮類化合物。 ④0.05％溴甲酚綠乙醇試劑：如產(chǎn)生黃色斑點(diǎn)，表明含有酸性化合物。 觀察斑點(diǎn)的數(shù)量、位置及顏色，推測每種揮發(fā)油中可能含有化學(xué)成分的種類及數(shù)量。 （五）實(shí)驗(yàn)說明及注意事項(xiàng) 1．通過觀察餾出液的混濁程度來判斷揮發(fā)油是否提取完全。最初的餾出液中含油量較多，明顯混濁，隨著餾出液中油量的減少，混濁度也隨著降低，至餾出液變?yōu)槌吻迳踔翢o揮發(fā)油氣味時，停止蒸餾。 2．提取完畢，須放冷，待油水完全分層后，再將油層

39、放出，盡量不帶出水分。 3．進(jìn)行單向二次展開時，先用極性較大的展開劑展開至中線，然后再用極性較小的展開劑展開。在第一次展開后，應(yīng)將展開劑完全揮干，再進(jìn)行第二次展開，否則將影響第二次展開劑的極性，從而影響分離效果。 4．揮發(fā)油易揮發(fā)逸失，因此進(jìn)行層析檢識時，操作應(yīng)迅速及時，不宜久放。 5．噴灑香草醛-濃硫酸顯色劑時，應(yīng)于通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行；用溴甲酚綠試劑顯色時，應(yīng)避免在酸性條件下進(jìn)行。 （六）思考題 1．從八角茴香中提取分離茴香腦的原理是什么？ 2．利用點(diǎn)滴反應(yīng)檢識揮發(fā)油的組成優(yōu)點(diǎn)是什么？ 3．單向二次展開薄層色譜法檢識揮發(fā)油中各成分時，為什么第一次展開所用的展開劑極性最好大于第二次展開

40、所用的展開劑的極性？單向二次展開薄層色譜法有什么優(yōu)點(diǎn)？ 實(shí)驗(yàn)七 丁香中揮發(fā)油的提取分離與檢識 （一）目的要求 1．掌握揮發(fā)油的一般化學(xué)檢識及薄層色譜檢識方法。 2．熟悉揮發(fā)油中酸性成分的分離方法。 3．學(xué)會應(yīng)用揮發(fā)油含量測定器提取藥材中揮發(fā)油及含量測定的操作方法。 （二）主要化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)及性質(zhì) 丁香 別名：公丁香（花蕾）、母丁香（果實(shí)）。為桃金娘科植物丁香Eugenia caryophyllata Thunb.的干燥花蕾及果實(shí)。原產(chǎn)于非洲摩洛哥，現(xiàn)我國廣東亦有種植。丁香花蕾含揮發(fā)油（即丁香油）14％～20％，油中主要成分丁香酚，約78％～95％，乙酰丁香酚約3％及少量

41、的丁香烯、甲基正戊酮、甲基正庚酮、香莢蘭醛等。另尚含齊墩果酸、鞣質(zhì)、脂肪油及蠟。果實(shí)含丁香油2％～9％。 丁香酚(eugenol) 分子式C10H12O2，分子量164.20。無色或蒼黃色液體，bp.225℃。幾不溶于水，與乙醇、乙醚、氯仿可混溶。 丁香酚 （三）實(shí)驗(yàn)原理 本實(shí)驗(yàn)用水蒸氣蒸餾法提取丁香揮發(fā)油。利用丁香酚為苯丙素類衍生物，具有酚羥基，遇到氫氧化鈉水溶液即轉(zhuǎn)為鈉鹽而溶解，酸化時又可游離的性質(zhì)將丁香酚從揮發(fā)油中分離出來。并利用可與三氯化鐵試劑發(fā)生反應(yīng)的性質(zhì)進(jìn)行檢識，也可進(jìn)行薄層色譜檢識。 （四）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 1．丁香油的提取 取丁香50g，搗

42、碎，置于燒瓶中，加適量水浸泡濕潤，按一般水蒸氣蒸餾法進(jìn)行蒸餾提取。也可將搗碎的丁香置于揮發(fā)油測定器的燒瓶中，加蒸餾水300ml與數(shù)粒玻璃珠，連接揮發(fā)油測定器。自測定器上端加水使充滿刻度部分，并溢流入燒瓶時為止，精確加入1ml二甲苯，然后連接回流冷凝管。加熱蒸餾30分鐘后，停止加熱，放置15分鐘以上，讀取測定器中二甲苯油層容積，減去開始蒸餾前加入二甲苯的量，即為揮發(fā)油的量，再計(jì)算出丁香中揮發(fā)油的含量。 2．丁香酚的分離 將所得的丁香油置于分液漏斗中，加10％氫氧化鈉溶液80ml提取，并加150ml蒸餾水稀釋，分取下層水溶液，用10％鹽酸酸化使丁香酚呈油狀液體，分取油層，用無水硫酸鈉脫水干燥，

43、得純品丁香酚。 3．檢識 取少許丁香酚置于試管中，加1ml乙醇溶解，加2～3滴三氯化鐵試劑，顯藍(lán)色。 4．薄層色譜檢識 將提取得到的丁香油用乙醚配制成每1ml含0.02ml丁香油的供試液。另取丁香酚對照品，加乙醚制成每1ml含20微升的對照品溶液，吸取上述兩種溶液各5微升，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層色譜板上，以石油醚（60～90℃）－醋酸乙酯（9∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴灑5％香草醛硫酸溶液，于105℃加熱烘干。在供試品色譜與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。 （五）實(shí)驗(yàn)說明及注意事項(xiàng) 1．采用揮發(fā)油含量測定器提取揮發(fā)油，可以初步了解該藥材中揮發(fā)油的含量，但所用的藥材

44、量應(yīng)使蒸出的揮發(fā)油量不少于0.5ml為宜。 2．揮發(fā)油含量測定裝置一般分為兩種，一種適用于相對密度小于1.0的揮發(fā)油測定。另一種適用于測定相對密度大于1.0的揮發(fā)油?！端幍洹芬?guī)定，測定相對密度大于1.0的揮發(fā)油，也在相對密度小于1.0的測定器中進(jìn)行，其作法是在加熱前，預(yù)先加入1ml二甲苯于測定器內(nèi)，然后進(jìn)行水蒸氣蒸餾，使蒸出的相對密度大于1.0的揮發(fā)油溶于二甲苯中。由于二甲苯的相對密度為0.8969，一般能使揮發(fā)油與二甲苯的混合溶液浮于水面。由測定器刻度部分讀取油層的量時，扣除加入二甲苯的體積即為揮發(fā)油的量。 3．用揮發(fā)油測定器提取揮發(fā)油，以測定器刻度管中的油量不再增加作為判斷是否提取完全

45、的標(biāo)準(zhǔn)。 （六）思考題 1．從丁香中提取分離丁香酚的原理是什么？ 2．除可利用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油外，還可采用什么方法提取揮發(fā)油？原理是什么？ 實(shí)驗(yàn)八 甾體皂苷元的提取分離與檢識 （一）目的要求 學(xué)習(xí)從藥材中提取、精制和檢識甾體皂苷元，通過實(shí)驗(yàn)要求： 1．掌握用酸水解，有機(jī)溶劑提取和精制皂苷元的方法。 2．熟悉皂苷及皂苷元的性質(zhì)和檢識方法。 （二）主要化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)及性質(zhì) 甾體皂苷主要存在于百合科、薯蕷科、龍舌蘭科等植物中。某些甾體皂苷元如薯蕷皂苷元、替告皂苷元及?？稍碥赵仁侵扑幑I(yè)中合成甾體激素類藥物及甾體避孕藥的重要原料。穿山龍為薯蕷科植物穿龍薯蕷Diosco

46、rea nipponica Mak.的干燥根莖。具有舒筋活血、消食利水、祛痰截瘧的功效。主治風(fēng)寒濕痹、慢性氣管炎、消化不良、勞損扭傷、瘧疾、癰腫。常被作為提取薯蕷皂苷元的原料，穿山龍總皂苷水解可得1.5％～2.6％薯蕷皂苷元。 1．薯蕷皂苷(dioscin) 分子式C45H72O16，分子量869.08，針狀結(jié)晶，mp.275～277℃（分解），可溶于甲醇、乙醇、醋酸，微溶于丙酮、戊醇，難溶于石油醚、苯，不溶于水。 薯蕷皂苷 2．薯蕷皂苷元(diosgenin) 又稱薯蕷皂素,分子式C27H42O3，分子量414.61

47、。為白色結(jié)晶性粉末（乙醇），mp.206～208℃，可溶于常用的有機(jī)溶劑及醋酸中，不溶于水。 （三）實(shí)驗(yàn)原理 本實(shí)驗(yàn)是根據(jù)藥材中的薯蕷皂苷，經(jīng)酸加熱水解可產(chǎn)生薯蕷皂苷元和糖。因甾體皂苷元不溶于水，可溶于有機(jī)溶劑的性質(zhì)，用石油醚連續(xù)回流提取總皂苷元，再用活性炭吸附脫色精制，得到精制薯蕷皂苷元。 （四）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 1．薯蕷皂苷元的提取、精制 略 2．薯蕷皂苷與皂苷元的檢識 （1）泡沫試驗(yàn)：取穿山龍的水浸液2ml，置于小試管中，用力振搖1分鐘，應(yīng)產(chǎn)生多量泡沫，放置10分鐘，泡沫量應(yīng)無顯著變化。 （2）溶血試驗(yàn)：取清潔試管二支，一支加入穿山龍的水浸液0.5ml，另一支加入蒸餾水0.5ml

48、作對照，然后各加入0.8％氯化鈉水溶液0.5ml，搖勻，再向每支試管中加入紅細(xì)胞懸浮液1ml，充分搖勻，靜置，觀察溶血現(xiàn)象。如試管中溶液為透明的鮮紅色，管底無紅色沉淀物為全部溶血；如試管中溶液透明但無色，管底沉著大量紅細(xì)胞，振搖立即發(fā)生混濁為不溶血。 （3）醋酐-濃硫酸反應(yīng)：取薯蕷皂苷元結(jié)晶少許，置白瓷板上，加醋酐數(shù)滴溶解后，加濃硫酸1滴，觀察顏色變化。 （4）三氯醋酸反應(yīng)：取薯蕷皂苷元結(jié)晶少許，置于干燥試管中，加等量固體三氯醋酸，于60～70℃恒溫水浴中加熱數(shù)分鐘后，觀察顏色變化。 （5）磷鉬酸試驗(yàn)：取薯蕷皂苷元結(jié)晶少許，溶于乙醇中，用毛細(xì)管點(diǎn)于濾紙片或硅膠薄層板上，滴加磷鉬酸試劑于斑

49、點(diǎn)上，110℃加熱，觀察顏色變化，并與空白試劑作對照。 （6）薄層色譜檢識 薄層板：硅膠G-CMC-Na板 試 樣：薯蕷皂苷元精制品乙醇溶液 對照品：薯蕷皂苷元對照品乙醇溶液 展開劑：氯仿-丙酮（93∶7） 顯 色：噴5％磷鉬酸乙醇溶液，110℃加熱10分鐘顯色。 （五）實(shí)驗(yàn)說明及注意事項(xiàng) 1．穿山龍經(jīng)酸水解后應(yīng)充分洗滌呈中性，以免烘干時被碳化。 2．在干燥水解后的原料時，應(yīng)注意經(jīng)常翻動，以縮短干燥時間。 3．石油醚極易揮發(fā)和燃燒，必須用水浴加熱且水浴溫度不宜過高，以能使石油醚微沸即可，并應(yīng)加大冷凝水流速，以便冷凝完全。 4．本實(shí)驗(yàn)也可用石蒜科龍舌蘭屬植物劍麻Agau

50、e sisalana Perrine為原料提取甾體皂苷元，此植物南方各省有種植，將劍麻葉片刮去纖維，殘?jiān)鼔赫ト≈瑢⒅鹤匀话l(fā)酵2周（酶水解得其次生苷），布袋濾過收集沉淀，曬干，以干渣為原料，用硫酸水解，再用石油醚提取得甾體皂苷元。 （六）思考題 1．從植物中提取甾體皂苷元可用什么方法？要注意什么問題？ 2．請?jiān)O(shè)計(jì)從其他含甾體皂苷的藥材中提取分離皂苷元的方法，并說明原理。 實(shí)驗(yàn)九 防己中粉防己堿的提取分離與檢識 （一）目的要求 學(xué)習(xí)生物堿類成分的一般提取分離法，通過實(shí)驗(yàn)要求： 1．掌握生物堿的溶劑提取法和粉防己堿與防己諾林堿的分離方法。 2．熟悉生物堿的一般理化性質(zhì)。

51、3．熟悉粉防己堿和防己諾林堿的檢識方法。 4．掌握連續(xù)回流法（索氏提取器）、萃取法、結(jié)晶法等的基本操作過程及注意事項(xiàng)。 （二）主要化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)及性質(zhì) 防己為防己科植物粉防己Stephania tetrandra S.Moore的干燥根。總生物堿含量約為1.5％～2.3％，主要為粉防己堿和防己諾林堿。 1．粉防己堿(tetrandrine) 又稱粉防己甲素，分子式C38H42N2O6，在防己中的含量約為1％，為無色針狀結(jié)晶（乙醚），mp.217～218℃。易溶于甲醇、乙醇、丙酮、氯仿，溶于乙醚、苯等有機(jī)溶劑，幾乎不溶于水和石油醚。

52、 粉防己堿 R=CH3 防己諾林堿 R=H 2．防己諾林堿(fangchinoline) 又稱粉防己乙素，分子式C37H40N2O6，在防己中的含量約為0.5％，六面體粒狀結(jié)晶（丙酮），mp.237～238℃。溶解度與粉防己堿相似，但因較粉防己堿多一個酚羥基，故極性較粉防己堿稍大，因此在冷苯中的溶解度小于粉防己堿，可利用此性質(zhì)相互分離。 （三）實(shí)驗(yàn)原理 本實(shí)驗(yàn)是根據(jù)粉防己堿和防己諾林堿游離時難溶于水，易溶于氯仿，成鹽后易溶于水，難溶于氯仿的性質(zhì)提取得到總生物堿。再利用兩者在冷苯中的溶解度不同，使之相互分離。 （四）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 1．防己總生物堿的提取 略 2．防己總生物堿的精制

53、 略 3．粉防己堿和防己諾林堿的分離 略 4．防己生物堿的檢識 （1）生物堿沉淀反應(yīng) 取粉防己堿的鹽酸水溶液8 ml分置于4支試管中，分別滴加下列試劑2～3滴，觀察并記錄有無沉淀產(chǎn)生及顏色變化。 ①碘化鉍鉀試劑 ②碘化汞鉀試劑 ③碘－碘化鉀試劑 ④硅鎢酸試劑 （2）薄層色譜檢識 薄層板：硅膠G-CMC-Na板 試 樣：自制粉防己堿乙醇溶液 自制防己諾林堿乙醇溶液 對照品：粉防己堿標(biāo)準(zhǔn)品乙醇溶液 防己諾林堿標(biāo)準(zhǔn)品乙醇溶液 展開劑：氯仿-丙酮-甲醇（6∶1∶1）氨氣飽和 顯色劑：噴霧改良碘化鉍鉀試劑 （五）實(shí)驗(yàn)說明及注意事項(xiàng)

54、 1．提取總生物堿時，回收乙醇至稀浸膏狀即可，不宜過干，否則當(dāng)加入1％鹽酸水溶液后，易結(jié)成膠狀團(tuán)塊，影響提取效果。 2．兩相溶劑萃取時，應(yīng)注意不可用力振搖，應(yīng)將分液漏斗輕輕旋轉(zhuǎn)搖動，以免產(chǎn)生乳化現(xiàn)象，影響分層，但萃取振搖的時間需適當(dāng)延長。且不可因怕產(chǎn)生乳化現(xiàn)象而不敢振搖或?yàn)轭A(yù)防乳化現(xiàn)象產(chǎn)生而減少振搖的程度和時間，從而造成萃取分離不完全。要力求萃取完全，提盡生物堿，防止生物堿丟失過多而影響收得率。倘若發(fā)生嚴(yán)重乳化現(xiàn)象難以分層時，可用以下方法解決：將難以分層的乳化液置于三角燒瓶中，取定性濾紙少許揉成蓬松的團(tuán)塊，放入乳化液中，用玻璃棒攪拌片刻后，乳化液中的粘稠物質(zhì)被吸附在濾紙團(tuán)的周圍，從而削弱和破

55、壞了乳化液的穩(wěn)定性，克服了乳化現(xiàn)象，因而得到澄清溶液。然后濾過，必要時可再加入適量溶劑洗滌濾紙團(tuán)，濾過，合并濾液即可。 3．檢查生物堿是否萃取完全的方法，通常采用薄層色譜、紙上斑點(diǎn)試驗(yàn)或生物堿沉淀反應(yīng)。取最后一次氯仿萃取液數(shù)滴，水浴上蒸去溶劑，殘留物加5％鹽酸溶液0.5ml溶解后，傾入試管中，加碘化鉍鉀試劑1～2滴，如無沉淀或無明顯混濁，則表示生物堿已提取完全或基本被提取完全，否則應(yīng)繼續(xù)萃取。也可取最后一次氯仿萃取液1滴，滴于一薄層板或?yàn)V紙片上，干燥后，噴灑改良碘化鉍鉀試劑，觀察有無紅棕色斑點(diǎn)出現(xiàn)，若無紅棕色斑點(diǎn)，表示已萃取完全。 （六）思考題 1．粉防己堿、防己諾林堿在結(jié)構(gòu)與性質(zhì)上有何

56、異同點(diǎn)？實(shí)驗(yàn)過程中，應(yīng)怎樣利用它們的共性及個性進(jìn)行提取及分離？請?jiān)O(shè)計(jì)方案。 2．分離水溶性與脂溶性生物堿的常用方法有哪些？ 3．萃取過程中怎樣防止和消除乳化？ 實(shí)驗(yàn)十 黃連中鹽酸小檗堿的提取分離與檢識 （一）目的要求 學(xué)習(xí)提取精制和檢識黃連中的小檗堿，通過實(shí)驗(yàn)要求： 1．掌握小檗堿的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和理化性質(zhì)。 2．熟悉浸漬法、鹽析法、結(jié)晶法和薄層色譜法的基本操作過程及注意事項(xiàng)。 3．了解鹽酸小檗堿的檢識方法。 （二）主要化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)及性質(zhì) 黃連為毛茛科植物黃連Coptis chinensis Franch.、三角葉黃連Coptis deltoidea C.Y.Cheng

57、et Hsiao、峨嵋野連Coptis omeiensis(Chen)C.Y.Cheng或云連Coptis teeta Wall.的根莖。黃連的根狀莖含多種生物堿，主要為小檗堿（黃連素），約5％～8％，其次為黃連堿、甲基黃連堿、掌葉防己堿、藥根堿、木蘭堿等。葉含小檗堿1.49％。 小檗堿(berberine)：分子式(C20H18NO4)＋，分子量336.37。系季銨生物堿。游離小檗堿為黃色針狀結(jié)晶（乙醚），mp.145℃，能緩緩溶于冷水（1∶20），可溶于冷乙醇（1∶100），易溶于熱水或熱乙醇，難溶于丙酮、氯仿、苯，幾乎不溶于石油醚。鹽酸小檗堿(C20H17NO4HCl2H2O)，為黃色

58、結(jié)晶，微溶于冷水（1∶500），易溶于沸水，幾乎不溶于冷乙醇、氯仿和乙醚。硫酸小檗堿( (C20H18NO4)2SO43H2O)，溶于水（1∶30），溶于乙醇。重硫酸小檗堿(C20H18NO4HSO4)為黃色結(jié)晶或粉末，溶于水（1∶150），微溶于乙醚。 小檗堿 木蘭堿 （三）實(shí)驗(yàn)原理 根據(jù)小檗堿的鹽酸鹽在水中溶解度小，而小檗堿的硫酸鹽水中溶解度較大。因此，從植物原料中提取小檗堿時常用稀硫酸水溶液浸泡或滲漉，然后向提取液中加入10％的食鹽，在鹽析的同時，也提供了氯離子，使其硫酸鹽轉(zhuǎn)變?yōu)槁然￠迚A（即

59、鹽酸小檗堿）而析出。 （四）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 1．鹽酸小檗堿的提取、精制 略 2．鹽酸小檗堿的檢識 （1）濃硝酸或漂白粉試驗(yàn)：取鹽酸小檗堿少許，加4ml稀硫酸溶解，分置于兩支試管中。一支試管滴加濃硝酸數(shù)滴，即顯櫻紅色。另一支試管加少許漂白粉，也立即顯櫻紅色。 （2）丙酮試驗(yàn)：取鹽酸小檗堿約50mg，加蒸餾水3ml緩緩加熱溶解后，加氫氧化鈉試劑2滴，顯橙色。溶液放冷后，加丙酮4滴振搖，即發(fā)生混濁。放置后析出黃色丙酮小檗堿沉淀。 （3）沒食子酸試驗(yàn)：取鹽酸小檗堿約20mg，置白瓷皿中，加硫酸1ml溶解后，加5％沒食子酸的乙醇溶液5滴，置水浴上加熱，即顯翠綠色。 （4）薄層色譜檢識 薄層板

60、：中性氧化鋁（軟板） 試 樣：自制鹽酸小檗堿乙醇溶液 對照品：鹽酸小檗堿對照品乙醇溶液 展開劑：氯仿－甲醇（9∶1） 顯 色：自然光下觀察黃色斑點(diǎn)或紫外燈下觀察熒光 （5）紙色譜檢識 支持劑：新華層析濾紙（中速、20cm7cm） 試 樣：自制鹽酸小檗堿乙醇溶液 對照品：鹽酸小檗堿對照品乙醇溶液 展開劑：正丁醇-醋酸-水（4∶1∶1） 顯 色：紫外燈下觀察熒光 （五）實(shí)驗(yàn)說明及注意事項(xiàng) 1．浸泡黃連粗粉的硫酸水溶液，一般為0.2％～0.3％為宜。若硫酸水溶液濃度過高，小檗堿可成為重硫酸小檗堿，其溶解度（1∶150）明顯較硫酸小檗堿（1∶30）小，從而影響提取效果。

61、硫酸水溶液浸出效果與浸漬時間有關(guān)，有報(bào)道，浸漬12小時約可浸出小檗堿80％，浸漬24小時，可浸出92％。常規(guī)提取應(yīng)浸漬多次，使小檗堿提取完全，本實(shí)驗(yàn)中只收集第一次浸出液。 2．進(jìn)行鹽析時，加入氯化鈉的量，以提取液量的10％（g/v）計(jì)算，即可達(dá)到析出鹽酸小檗堿的目的。氯化鈉的用量不可過多，否則溶液的相對密度增大，造成析出的鹽酸小檗堿結(jié)晶呈懸浮狀態(tài)難以下沉。鹽析用的氯化鈉用市售的精制食鹽，因粗制食鹽混有較多泥沙等雜質(zhì)，影響產(chǎn)品質(zhì)量。 3．在精制鹽酸小檗堿過程中，因鹽酸小檗堿放冷極易析出結(jié)晶，所以加熱煮沸后，應(yīng)迅速抽濾或保溫濾過，防止溶液在濾過過程中冷卻，析出鹽酸小檗堿結(jié)晶阻塞濾材，造成濾過困

62、難，減低提取率。 4．本實(shí)驗(yàn)流程也適用于以三棵針、黃柏為原料提取小檗堿，但因其小檗堿含量較低，應(yīng)加大藥材量，以150g以上為宜。 （六）思考題 1．怎樣從黃連中提取分離鹽酸小檗堿？原理是什么？ 2．試述小檗堿的檢識方法。 3．用薄層色譜法檢識小檗堿時，為什么常選用氧化鋁為吸附劑？如果選用硅膠作吸附劑，怎樣操作才能達(dá)到較準(zhǔn)確的結(jié)果。 實(shí)驗(yàn)十一 應(yīng)用薄層色譜法檢識中藥制劑 （一）目的要求 學(xué)習(xí)中藥制劑的鑒別方法，通過實(shí)驗(yàn)要求： 1．掌握薄層色譜法的操作技術(shù)及分離原理。 2．掌握中藥制劑鑒別的一般程序及定性檢識的原理。 3．熟悉檢識其所含化學(xué)成分的方法與實(shí)驗(yàn)技術(shù)。 （二

63、）實(shí)驗(yàn)原理 本實(shí)驗(yàn)是根據(jù)中藥制劑牛黃解毒片中的主要成分或特征成分的性質(zhì)，選用適當(dāng)?shù)娜軇┖头椒▽υ嚇舆M(jìn)行預(yù)處理，盡量排除干擾物質(zhì)，達(dá)到提高待測成分或特征成分的相對濃度，以利在進(jìn)行薄層色譜鑒別時提高色譜清晰度，實(shí)現(xiàn)應(yīng)用薄層色譜檢測技術(shù)鑒別和控制中藥制劑質(zhì)量。 （三）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 牛黃解毒片為包衣片。處方為：牛黃50g，雄黃50g，石膏200g，大黃200g，黃芩150g，桔梗100g，冰片25g，甘草50g。以上八味藥，雄黃水飛或粉碎成極細(xì)粉；大黃粉碎成細(xì)粉；牛黃、冰片研細(xì)；其余黃芩等四味加水煎煮2次，每次2小時，合并煎煮液，濾過，濾液濃縮成稠膏，加入大黃、雄黃粉末，制成顆粒，干燥，再加入牛黃、

64、冰片粉末，混勻，壓制成1000片，包衣即得。 1．牛黃的鑒別 （1）供試液制備；取本品10片，刮去包衣，研碎，加10ml氯仿研磨，濾過，再用10ml氯仿浸洗濾渣，合并濾液，濃縮至1ml為供試液。 （2）對照液制備：①取膽酸0.001g溶于1ml氯仿中，作為對照品溶液。②取缺牛黃的模擬牛黃解毒片（相當(dāng)于10片），按供試液制備法處理，得陰性對照液。 （3）薄層色譜檢識 薄層板：硅膠G-CMC-Na 樣 品：牛黃解毒片供試液 對照品：膽酸對照液 模擬牛黃解毒片對照液 展開劑：正己烷-醋酸乙酯-醋酸-甲醇（6∶32∶1∶1） 顯色劑：噴霧5％磷鉬酸乙酸溶液，110℃加熱10分鐘

65、 2．冰片的鑒別 （1）供試液制備：取本品2片，刮去包衣，研碎，加4ml甲醇-氯仿（1∶1），室溫下浸漬30min，時加振搖，濾過，濾液使成5ml，作為供試液。 （2）對照液制備：①取冰片適量，加甲醇-氯仿（1∶1）溶解，制成1ml含4mg的溶液。②取缺冰片的模擬牛黃解毒片（相當(dāng)于2片），按供試液制備法處理，得陰性對照液。 （3）薄層色譜檢識 薄層板：硅膠G 試 樣：牛黃解毒片供試液 對照品：冰片對照液，模擬牛黃解毒片對照液 展開劑：石油醚-醋酸乙酯-苯（18∶2∶4） 顯色劑：噴霧5％磷鉬酸乙醇溶液，110℃加熱顯色 3．大黃的鑒別 （1）供試液制備：取本品6片，刮去包

66、衣，研碎，加10ml甲醇回流提取15分鐘，冷后濾過，濾液使成5ml，作為供試液。 （2）對照液制備：①取1g大黃藥材，同供試液制備法制成對照液。②分別取大黃素、蘆薈大黃素、大黃酚和大黃素甲醚對照品適量，加乙醇溶解成1ml對照品溶液。③取缺大黃的模擬牛黃解毒片（相當(dāng)于6片），同供試液制備法制得陰性對照液。 （3）薄層色譜檢識 薄層板：硅膠CMC-Na 試 樣：牛黃解毒片供試液、 對照品：大黃藥材對照液，模擬牛黃解毒片對照液 大黃素、蘆薈大黃素、大黃酚和大黃素甲醚對照液 展開劑：石油醚（60～90℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）上層溶液 顯色劑：顯色前后置日光及紫外光（365nm）下觀察，再噴霧0.5％醋酸鎂乙醇溶液顯色。 4．黃芩的鑒別 （1）供試液的制備：取本品6片，刮去包衣，研碎，加10ml甲醇回流提取15分鐘，放冷后濾過，濾液使成5ml，作為供試液。 （2）對照液的制備：①取1g黃芩，同供試液制備法處理，得對照液。②取黃芩苷對照品適量，加乙醇溶液1ml含1mg的對照品溶液。③取缺黃芩的模擬牛黃解毒片（相當(dāng)于6片），同供試液制備法制