梅毒的實驗室檢測與技術(shù)規(guī)范標準詳課件

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1、梅毒的實驗室檢查與技術(shù)規(guī)范,朱穗蘭,2013年3月2日,梅毒的實驗室檢查與技術(shù)規(guī)范 朱穗蘭,主要內(nèi)容,梅毒概述,梅毒血清學檢測方法,梅毒檢測技術(shù)規(guī)范,主要內(nèi)容梅毒概述,梅毒概述,（一）,性接觸是主要的傳染途徑,未經(jīng)治療的患者在感染后的,1,年內(nèi)最具有傳染性,隨著病期的延長，傳染性越來越小,到感染后,2,年，通過性接觸一般無傳染性,母 嬰 傳 播,在妊娠,7,周時，梅毒螺旋體即可通過胎盤傳染未經(jīng)治療者，雖已無性傳播（病期,2,年），但妊娠時仍可傳染給胎兒,病期越長，傳染性越小,;,梅毒概述（一）性接觸是主要的傳染途徑,梅毒概述,（二）,一期梅毒,硬下疳和,(,或,),腹股溝淋巴結(jié)腫大,二期梅毒,

2、可有一期梅毒史，病期在,2,年以內(nèi)有多形性皮疹、扁平濕疣等,三期（晚期）梅毒,可有一期或二期梅毒史，病期在,2,年以上,皮膚黏膜損害等，包括神經(jīng)梅毒、心血管梅毒,隱性（潛伏）梅毒,早期：病期在,2,年以內(nèi)；晚期：病期在,2,年以上。無任何梅毒性的癥狀和體征,胎傳（先天）梅毒,早期：在,2,歲前發(fā)生；晚期：在,2,歲以后發(fā)病。胎傳隱性梅毒：無臨床表現(xiàn),梅毒概述（二）一期梅毒,梅毒概述,（三）,疑似病例、確證病例診斷依據(jù)：,病史,癥狀,實驗室檢查,梅毒的實驗室檢查結(jié)果對診斷有決定性意義,梅毒概述（三）疑似病例、確證病例診斷依據(jù)：,梅毒實驗室檢測技術(shù),病原學檢測,血清學檢測,梅毒實驗室檢測技術(shù)病原學

3、檢測,梅毒血清學檢測方法,梅毒血清學檢測方法,梅毒血清學檢測分類,(1),非梅毒螺旋體抗原血清學試驗,（非特異性梅毒抗體）,(2),梅毒螺旋體抗原血清學試驗,（特異性梅毒抗體）兩類方法。,為什么梅毒實驗室診斷需要兩類血清學檢測方法？,梅毒血清學檢測分類(1)非梅毒螺旋體抗原血清學試驗,非梅毒螺旋體抗原血清學試驗,原理,人體感染了梅毒螺旋體后，組織受到破壞，釋放出來的一種類脂成分，與梅毒螺旋體結(jié)合形成完全抗原，刺激機體,在3周-4周產(chǎn)生,類脂質(zhì)抗體（反應(yīng)素）。主要是,IgM,和,IgG,混合抗體。,抗體的作用,無保護作用，治療監(jiān)測。,未經(jīng)治療的病人，其血清內(nèi)的反應(yīng)素可長期存在。經(jīng)正規(guī)治療后，反應(yīng)

4、素可以逐漸減少至轉(zhuǎn)為陰性。,臨床上非梅毒螺旋體抗原血清學試驗為什么有定性和定量兩種檢測法？,非梅毒螺旋體抗原血清學試驗原理,非梅毒螺旋體抗原血清學試驗,所有非梅毒螺旋體抗原血清試驗的抗原基本成分都是一樣,方法包括：,（,1,）快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗,(RPR),（,2,）,甲苯胺紅不加熱血清試驗（,TRUST,）,（,3,）性病研究實驗室試驗,(VDRL),等。,基本成分是心磷脂 卵磷脂和膽固醇,抗原抗體結(jié)合形成復合物，凝集成網(wǎng)狀沉淀顆粒被肉眼所見,上述方法的敏感性和特異性都基本相似,非梅毒螺旋體抗原血清學試驗所有非梅毒螺旋體抗原血清試驗的抗原,試驗特點,原理和成分與試驗相同,血清不需要滅

5、活,不需要顯微鏡觀測結(jié)果,可作定量試驗,有現(xiàn)成的試劑盒攜帶方便,操作簡單,價格便宜,試驗特點 原理和成分與試驗相同,操作要點,儀器：,水平旋轉(zhuǎn)儀。,定性實驗,加樣：吸取,5,0ul血清,(,漿,),放在卡片圈中，并均勻地涂布在整個圈內(nèi),加抗原：將抗原輕輕搖勻，用,9,號針頭加,1,滴抗原,反應(yīng)：將卡片置水平旋轉(zhuǎn)儀旋轉(zhuǎn),8,分鐘，立即在亮光下觀察結(jié)果,3.,定量試驗,稀釋夜準備：在圈內(nèi)加入,50uL,生理鹽水,（根據(jù)需要確定稀釋度），勿將鹽水涂開。,加樣：吸取,50uL,血清（漿）與各圈中鹽,水作系列稀釋，并涂布整個圈內(nèi)。,下同定性試驗。,操作要點儀器：水平旋轉(zhuǎn)儀。,非梅毒螺旋體抗原血清學試驗結(jié)

6、果判斷,RPR,TRUST,非梅毒螺旋體抗原血清學試驗結(jié)果判斷,非梅毒螺旋體抗原血清學試驗臨床意義,早期梅毒硬下疳出現(xiàn),1,周,-2,周后，血清可呈陽性。,經(jīng)治療后血清滴度可下降并轉(zhuǎn)陰性，故可作為療效觀察、判愈、復發(fā)或再感染的指征。,為什么要做定量檢測？,非梅毒螺旋體抗原血清學試驗臨床意義早期梅毒硬下疳出現(xiàn)1周-2,非梅毒螺旋體抗原血清學試驗臨床意義,一期梅毒1年后轉(zhuǎn)為陰性,二期梅毒2年后轉(zhuǎn)為陰性。,晚期梅毒 治療后血清滴度下降緩慢，2年后約50%病人血清反應(yīng)仍為陽性。,非梅毒螺旋體抗原血清學試驗臨床意義 一期梅毒1年后轉(zhuǎn)為陰性,TRUST結(jié)果解釋示意圖,TRUST結(jié)果解釋示意圖,假陽性問題,

7、假陽性,：非梅毒患者的血清反應(yīng)呈陽性,技術(shù)性假陽性,由于標本的保存不當（如細胞污染或溶血）、試劑質(zhì)量差或過期、或?qū)嶒炇也僮麇e誤所造成。,生物學假陽性,是由于患者有其他疾病或生理狀態(tài)發(fā)生變化，使梅毒血清試驗出現(xiàn)陽性,某些疾病：結(jié)核、瘧疾、肝病、紅斑狼瘡、流感、肺炎、類風濕性關(guān)節(jié)炎、風濕性心臟病、風疹、系統(tǒng)性硬化癥等，疾病發(fā)展過程中釋放心磷脂到血液中呈假陽性。老年人。,生理機能發(fā)生變化：少數(shù)孕婦也可發(fā)生生物學假陽性。,假陽性問題 假陽性：非梅毒患者的血清反應(yīng)呈陽性,梅毒假陽性反應(yīng)的處理,技術(shù)性假陽性反應(yīng)一般是由于操作錯誤引起的假陽性反應(yīng)，經(jīng)過重復試驗即可除外。,對生物學假陽性反應(yīng)，應(yīng)做,TPHA,

8、（,TPPA,）等試驗進行排除。,梅毒假陽性反應(yīng)的處理技術(shù)性假陽性反應(yīng)一般是由于操作錯誤引起的,前帶現(xiàn)象,指非梅毒螺旋體抗原血清試驗中，有時血清中存在高濃度的抗體時出現(xiàn)的弱陽性、不典型或陰性反應(yīng)的結(jié)果，而臨床上又象二期梅毒，此時將血清稀釋后再進行試驗，出現(xiàn)了陽性的結(jié)果，該現(xiàn)象稱為前帶現(xiàn)象。,處理：,將血清稀釋后再進行試驗。,前帶現(xiàn)象指非梅毒螺旋體抗原血清試驗中，有時血清中存在高濃度的,耐血清性（血清固定,）,指經(jīng)抗梅毒治療后，非梅毒螺旋體抗原血清試驗在一定時期內(nèi)不陰轉(zhuǎn)。早期的耐血清性常與治療量不足或不規(guī)則治療、復發(fā)、再感染或有神經(jīng)系統(tǒng)梅毒等因素有關(guān)。,耐血清性（血清固定）指經(jīng)抗梅毒治療后，非梅

9、毒螺旋體抗原血清試,梅毒螺旋體抗原血清學試驗,梅毒螺旋體抗原血清學試驗,梅毒螺旋體抗原血清學試驗方法,梅毒螺旋體顆粒凝集試驗,(TPPA),梅毒螺旋體血球凝集試驗,(TPHA),梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗（,ELISA,）,梅毒免疫層析法,-,梅毒快速檢測,(RT),熒光螺旋體抗體吸收試驗（,FTA-ABS,）,化學發(fā)光免疫分析法（,CLIA,）,梅毒螺旋體蛋白印跡試驗（,WB,）,梅毒螺旋體抗原血清學試驗方法 梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(T,TPPA,TPPA,試驗用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒，此致敏顆粒與人血清中的抗梅毒螺旋體抗體結(jié)合，產(chǎn)生可見的凝集反應(yīng)，具有較高的敏感性和特異性。,TPPA,是目前,W

10、HO,認可的梅毒抗原血清學試驗的“金標準”，常用于新方法、新試劑評價的參照標準,。,TPPATPPA試驗用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒，此致敏顆,TPPA(TPHA),試驗原理示意圖,TPPA(TPHA)試驗原理示意圖,梅毒螺旋體抗原血清試驗的臨床意義,一般情況下，一旦梅毒患者梅毒螺旋體抗原血清試驗呈陽性，即使經(jīng)過正規(guī)有效治療治，仍將終身陽性。所以,TPPA,等試驗不能作為療效觀察的指標。,作為非梅毒螺旋體抗原血清試驗初篩陽性標本的確證試驗。,TPPA,等陽性不能區(qū)分既往感染和現(xiàn)癥感染，應(yīng)結(jié)合非梅毒螺旋體抗原血清試驗結(jié)果進行診斷。,梅毒螺旋體抗原血清試驗的臨床意義一般情況下，一旦梅毒患者梅毒,TPP

11、A結(jié)果解釋示意圖,TPPA結(jié)果解釋示意圖,梅毒血清學試驗結(jié)果解釋,梅毒血清學試驗結(jié)果解釋,梅毒血清學試驗結(jié)果解釋梅毒血清學試驗結(jié)果解釋,梅毒檢測技術(shù)規(guī)范簡介,全國梅毒檢測技術(shù)規(guī)范,第一章 梅毒檢測樣品的采集和處理,第二章 梅毒血清學檢測,第三章 梅毒病原體顯微鏡檢測,第四章 梅毒病原體核酸檢測,第五章 實驗室生物安全,第六章 梅毒檢測實驗室質(zhì)量管理,全國梅毒檢測技術(shù)規(guī)范第一章 梅毒檢測樣品的采集和處理,第一章 樣品的采集和處理,血清、血漿、全血及腦脊液,:,梅毒血清學檢測或核酸檢測,皮損部位組織液、淋巴穿刺液,:,梅毒病原體檢測或核酸檢測。,第一章 樣品的采集和處理,梅毒血清學試驗適用范圍,梅

12、毒血清學試驗適用范圍,第二章 梅毒血清學檢測,檢測目的,:,臨床診斷、血液篩查、流行病學監(jiān)測,以臨床診斷為目的的檢測是為了確定梅毒感染的狀況。,以血液篩查為目的的檢測是為了防止梅毒的經(jīng)血傳播。,以流行病學監(jiān)測為目的的檢測是為了調(diào)查梅毒血清學感染率和發(fā)病率。,第二章 梅毒血清學檢測 檢測目的:,梅毒實驗室檢測策略選擇,根據(jù)目的選擇檢測方法及檢測策略。,可采用任何一類梅毒血清學檢測方法作為篩查試驗,。,梅毒實驗室檢測策略選擇,以臨床診斷為目的檢測策略一,以臨床診斷為目的檢測策略一,以臨床診斷為目的檢測策略二,以臨床診斷為目的檢測策略二,策略一和策略二比較,策略一和策略二比較,第三章 梅毒體病原學檢

13、測,檢測方法,暗視野顯微鏡檢查,鍍銀染色檢查,第三章 梅毒體病原學檢測,第四章 梅毒核酸檢測,可對血漿、血清、皮損部位組織液、淋巴穿刺液及腦脊液等標本的梅毒螺旋體核酸檢測,在早期梅毒、神經(jīng)梅毒和先天梅毒等診斷，以及螺旋體現(xiàn)癥感染和既往感染鑒別診斷中具有一定的價值,可應(yīng)用于梅毒螺旋體的耐藥性監(jiān)測、菌株流行病學分型。,第四章 梅毒核酸檢測可對血漿、血清、皮損部位組織液、淋巴穿刺,第五章 實驗室生物安全,梅毒的生物危害,梅毒螺旋體屬第三類病原微生物，一般情況下對人、動物或者環(huán)境不構(gòu)成嚴重危害，傳播風險有限，實驗室感染后很少引起嚴重疾病，是有有效治療和預防方法的致病微生物,梅毒相關(guān)檢測的生物安全級別,

14、為了保證安全，對臨床和現(xiàn)場未知樣本的梅毒血清學檢測應(yīng)在符合,級生物安全實驗室（,BSL-2,）要求的實驗室中進行。如有艾滋病檢測實驗室，可以在艾滋病抗體檢測實驗室中進行。,第五章 實驗室生物安全梅毒的生物危害,第六章 實驗室質(zhì)量管理,質(zhì)量保證,質(zhì)量評估,試劑評價,第六章 實驗室質(zhì)量管理質(zhì)量保證,質(zhì)量保證,檢測方法和試劑的選擇,用于臨床診斷的檢測方法應(yīng)使用經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準的試劑，應(yīng)選擇敏感性高、特異性好的試劑。性病參比實驗室和省級性病中心實驗室應(yīng)定期組織開展梅毒診斷試劑的臨床質(zhì)量評價和新方法與技術(shù)的評估,。,質(zhì)量保證檢測方法和試劑的選擇,質(zhì)量評價,所有梅毒檢測實驗室應(yīng)參加外部質(zhì)量

15、評價,省級中心實驗室應(yīng)參加國家級職能工作考核和,PT,其他實驗室應(yīng)參加省級職能工作考核和,PT,。,質(zhì)量評價所有梅毒檢測實驗室應(yīng)參加外部質(zhì)量評價,質(zhì)量評價,考評組織單位根據(jù),PT,考核結(jié)果、職能工作評價結(jié)果及對部分實驗室現(xiàn)場評價情況，匯總各實驗室的最終考評結(jié)果，上報相關(guān)機構(gòu)。,考評單位應(yīng)將考評得分及扣分原因反饋各參評實驗室，以適當?shù)姆绞皆谶m當范圍內(nèi)公開發(fā)布考評結(jié)果。為合格者頒發(fā)合格證書。,質(zhì)量評價考評組織單位根據(jù)PT考核結(jié)果、職能工作評價結(jié)果及對部,小結(jié),1,、非梅毒螺旋體抗原血清學試驗陽性往往是梅毒現(xiàn)癥感染者，臨床上即可開展治療。,2,、非梅毒螺旋體抗原血清學試驗定量試驗可作為療效觀察的指標。,3、完善操作的標準化，杜絕有個人特點的操作。,4、根據(jù)目的選擇檢測方法及檢測策略。可采用任何一類梅毒血清學檢測方法作為篩查試驗。,5、,臨床上采用兩種方法同時檢測，可以快速診斷梅毒，使病人能夠得到及時治療。,小結(jié)1、非梅毒螺旋體抗原血清學試驗陽性往往是梅毒現(xiàn)癥感染者，,知識回顧,Knowledge Review,知識回顧Knowledge Review,