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穿心蓮內(nèi)酯體內(nèi)外抗炎

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穿心蓮內(nèi)酯體內(nèi)外抗炎

單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級,第三級,第四級,第五級,*,新穿心蓮內(nèi)酯在體內(nèi)外抗炎活性研究,選自:The American Journal of Chinese Medicine,SCI影響因子0.710,Abstract,新穿心蓮內(nèi)酯,是一個來自穿心蓮植物的一種提取物。本文主要研究新穿心蓮內(nèi)酯在體內(nèi)和體外的抗炎作用及機(jī)制。研究發(fā)現(xiàn)口服新穿心蓮內(nèi)酯(150毫克/千克)顯著抑制二甲苯所致小鼠耳腫脹??诜麓┬纳弮?nèi)酯(100150毫克/千克)也能減少醋酸致小鼠血管通透性增加。在體外進(jìn)行研究,利用巨噬細(xì)胞系RAW 264.7探討新穿心蓮內(nèi)酯抑制phorbol-12-myristate-13-acetate刺激呼吸系統(tǒng)和脂多糖誘導(dǎo)產(chǎn)生一氧化氮、腫瘤壞死因子(腫瘤壞死因子-)。,通過光學(xué)測量,結(jié)果顯示新穿心蓮內(nèi)酯抑制有刺激因子刺激呼吸系統(tǒng)產(chǎn)生炎癥因子,新穿心蓮內(nèi)酯抑制LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的一氧化氮和腫瘤壞死因子-,促進(jìn)抗炎活性的作用。這些結(jié)果表明,新穿心蓮內(nèi)酯具有顯著的抗炎作用。,關(guān)鍵詞:新穿心蓮內(nèi)酯;耳水腫;血管通透性;一氧化氮;腫瘤壞死因子-;巨噬細(xì)胞炎癥。,Materials and Methods,制備新穿心蓮內(nèi)酯的主要方法:冷浸法,干葉(1千克)被浸漬在95%乙醇在室溫下保存三天。過濾后,乙醇溶液是在真空蒸發(fā)去除溶劑。殘留(320克)浸膏用乙酸乙酯對水和乙酸乙酯部分(45克)在硅膠柱進(jìn)行層析,洗脫用石油醚/丙酮(7:3),產(chǎn)生2克純新穿心蓮內(nèi)酯。新穿心蓮內(nèi)酯的化學(xué)結(jié)構(gòu)鑒定紅外,紫外,核磁共振和質(zhì)譜等進(jìn)行測定。其純度大于96%,以高效液相色譜分析(圖1)。該新穿心蓮內(nèi)酯溶解在二甲基亞砜(DMSO)存放在20的環(huán)境中。,其他化學(xué)試劑:醋酸豆寇酯、內(nèi)毒素(脂多糖),青霉素,鏈球菌霉素,魯米諾(苯巴比妥),三乙胺和其他生化試劑等。醋酸豆寇酯溶解在DMSO中,脂多糖(50克/毫升)不是加入的磷酸緩沖溶液。都存放到-20C 的環(huán)境中。,實驗動物:小白鼠(282克),抗炎活性的新穿心蓮內(nèi)酯化學(xué)結(jié)構(gòu),實驗一:二甲苯引起的小鼠耳腫脹,局部應(yīng)用二甲苯50微升,涂于老鼠的左耳,右耳為對照。新穿心蓮內(nèi)酯分為三個不同的劑量(50,100和150毫克/千克)一小時前讓小白鼠口服,再加一組地塞米松(20毫克/公斤)作為陽性對照,實驗二:醋酸刺激誘導(dǎo)小鼠內(nèi)臟痛模型,把小鼠分成5組,分別給予動物腹腔注射1毫升/100克醋酸(0.6%,體積比)。30分鐘后注射醋酸和腹腔沖洗正常鹽水(3毫升)1小時后口服新穿心蓮內(nèi)酯(50,100和150毫克/千克),0.2毫升伊萬斯藍(lán)染料(0.25%生理鹽水)靜脈注射部位在尾靜脈。對照組注入地塞米松(20毫克/千克)同等劑量和生理鹽水相比較。在610納米條件下對染料進(jìn)行檢測。,實驗三:新穿心蓮內(nèi)酯對LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞中一氧化氮生產(chǎn)的影響,新穿心蓮內(nèi)酯并沒有顯著影響基底原料264.7巨噬細(xì)胞。然而,新穿心蓮內(nèi)酯在沒有生產(chǎn)的巨噬細(xì)胞治療內(nèi)毒素的情況下是劑量依賴性地抑制內(nèi)毒素(圖4),在濃度從30到150m。結(jié)果的基礎(chǔ)上的微量細(xì)胞活力檢測,新穿心蓮內(nèi)酯無毒性從30到90m(細(xì)胞存活超過95%與對照組相比)。只有在最高劑量(150m),一些細(xì)胞(細(xì)胞存活率明顯低于65%與對照組相比)。,實驗四:在LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞下新穿心蓮內(nèi)酯對腫瘤壞死因子-生產(chǎn)的影響。,腫瘤壞死因子-是一個重要的炎癥介質(zhì)分泌的脂多糖,誘導(dǎo)264.7巨噬細(xì)胞系巨噬細(xì)胞。圖5顯示,新穿心蓮內(nèi)酯從30到150m,腫瘤壞死因子-濃度在LPS處理組劑量依賴性減少,相比于對照組在無脂多糖誘導(dǎo)下。,Result,實驗一:新穿心蓮內(nèi)酯顯著(0.05)的二甲基苯致耳毒水腫在150毫克/千克劑量后二甲基苯應(yīng)用(表1)。地塞米松也有顯著抑制水腫。新穿心蓮內(nèi)酯對在不同時間段由醋酸刺激小鼠所引起的內(nèi)臟絞痛誘導(dǎo)模型,而使其血管統(tǒng)透性增加有一定的抑制和調(diào)解作用?;瘜W(xué)誘導(dǎo)的血管通透性(如乙酸)會立即持續(xù)反應(yīng)??诜?00150毫克/公斤新穿心蓮內(nèi)酯誘發(fā)一個明顯的劑量相關(guān)的抑制醋酸致小鼠血管通透性增加(表2)。抑制表明,新穿心蓮內(nèi)酯可有效地抑制急性炎癥的滲出期。,實驗二:新穿心蓮內(nèi)酯隨著劑量的增加能顯著增加血管的通透性。,實驗三:新穿心蓮內(nèi)酯對LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞中一氧化氮的生產(chǎn) 具有明顯的抑制作用,實驗四:在LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞新穿心蓮內(nèi)酯對腫瘤壞死因子-生產(chǎn)有明顯的抑制作用。,Discussion,穿心蓮提取物已被用于傳統(tǒng)中醫(yī)治療細(xì)菌性感染和炎癥性疾病。然而,這些機(jī)制的生物活性尚未完全澄清。在目前的研究,一個從穿心蓮植物中分離出來的二萜內(nèi)酯類化合物新穿心蓮內(nèi)酯在體內(nèi)和體外的抗炎機(jī)制和作用我們發(fā)現(xiàn):體內(nèi)藥理結(jié)果發(fā)現(xiàn)新穿心蓮內(nèi)酯具有抗炎活性在甲基苯致小鼠耳腫脹模型和醋酸所致刺激的內(nèi)臟傷害小鼠模型。為了澄清新穿心蓮內(nèi)酯抗炎機(jī)制,新穿心蓮內(nèi)酯對活化巨噬細(xì)胞的抑制作用介紹在體外進(jìn)行試驗。在炎癥過程,在具體的和非特異性免疫過程中。被激活的巨噬細(xì)胞釋放大量的炎癥介質(zhì),如活性氧、白三烯、白細(xì)胞介素、腫瘤壞死因子-等。所有這些抗炎物質(zhì)有能力誘導(dǎo)組織損傷直接或間接增加炎癥反應(yīng)。因此,一種藥物能夠防止釋放炎癥介質(zhì)應(yīng)該可能具有抗炎作用。,從本報告數(shù)據(jù)表明,新穿心蓮內(nèi)酯引起劑量依賴性抑制一氧化氮和腫瘤壞死因子-產(chǎn)生在LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞中。新穿心蓮內(nèi)酯,對加脂多糖誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥介質(zhì)產(chǎn)生有抑制作用但沒有細(xì)胞毒作用。這表明,新穿心蓮內(nèi)酯并不是由于細(xì)胞死亡從而減少和減輕炎癥介質(zhì)的釋放和作用。低濃度新穿心蓮內(nèi)酯有輕度刺激免疫反應(yīng)的作用對在體內(nèi)沒有生產(chǎn)免疫因子的時候。這可能意味著,新穿心蓮內(nèi)酯,在低濃度時,可作為免疫刺激劑??梢赃M(jìn)一步的研究其機(jī)制和構(gòu)效關(guān)系的進(jìn)展。,總之,新穿心蓮內(nèi)酯的抗炎活性可能有助于對改善炎癥性疾病在早期階段的巨噬細(xì)胞活化。因此,穿心蓮植物中所含的新穿心蓮內(nèi)酯是其一個主要參與抗炎作用的組成部分。,

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