P450 1A1基因IleVal多態(tài)性與子宮頸癌的相關(guān)性研究4700字

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1、P450 1A1基因IleVal多態(tài)性與子宮頸癌的相關(guān)性研究4700字 　　 摘　要：目的：研究P450 1A1基因IleVal位點(diǎn)多態(tài)性與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生的關(guān)系。方法：用PCR-RFLP法檢測(cè)32例子宮頸癌患者和114例對(duì)照者P450 1A1基因IleVal位點(diǎn)多態(tài)性。結(jié)果：對(duì)照組和觀察組的CYPlAl基因IleVal多態(tài)野生型、雜合型和突變型基因型頻率分別為42.5%、39.2%、8.2%和30.2%、44.5%、15.2%，觀察組雜合型和突變型基因型頻率明顯高于對(duì)照組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。合并雜合型和突變型與野生型相比，觀察組和對(duì)照

2、組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論：P450 1A1基因IleVal多態(tài)中突變等位基因可顯著增加子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)表達(dá)不同反映了不同類型的子宮頸癌組織雌激素調(diào)節(jié)水平不同，可能為子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機(jī)制找到了理論依據(jù)。 /html/zongjie/ 關(guān)鍵詞：子宮頸癌；P450 1A1基因；IleVal多態(tài)性；PCR-RFLP 　　子宮頸癌發(fā)病率高，病因和發(fā)病機(jī)理仍不十分明確。對(duì)子宮頸癌的家族及環(huán)境影響因素的研究表明子宮頸癌是由遺傳基因的易感性和環(huán)境影響共同作用而形成的，子宮頸癌有一定的遺傳基礎(chǔ)和家族聚集傾向。最近，研究表明子宮頸癌患者異位內(nèi)膜組織不只有

3、P450 1A1基因的表達(dá)，而且子宮頸癌患者血漿及腹腔液中的P450 1A1水平也比正常非子宮頸癌婦女有明顯提高[1]。當(dāng)某一特定的基因突變或缺失被固定在某一人群中并呈現(xiàn)高發(fā)時(shí)，這一基因就被稱為具有多態(tài)性[2]。正常人群對(duì)某一類藥物的代謝一般表現(xiàn)為強(qiáng)代謝。弱代謝者則與特定藥物在體內(nèi)不能代謝而造成堆積有關(guān)，往往是由常染色體的隱性遺傳引起的，主要是兩個(gè)等位基因的突變和（或）缺失引起表型的改變[3]。對(duì)于某些治療藥物或環(huán)境及職業(yè)致癌物，藥物代謝酶的遺傳多態(tài)性在治療藥物的不良反應(yīng)和與接觸相關(guān)的的癌癥發(fā)生率方面扮演著非常重要的角色。因此，測(cè)定這些基因的遺傳多態(tài)性在預(yù)測(cè)對(duì)某一治療藥物的不良反應(yīng)或療效，以及

4、預(yù)測(cè)環(huán)境或職業(yè)相關(guān)疾病的發(fā)病危險(xiǎn)性方面是有非?？尚械呐R床意義。本試驗(yàn)為此通過PCR方法研究了P450 1A1基因IleVal多態(tài)性與子宮頸癌的相關(guān)性。 / 1 資料與方法1.1 一般資料：隨機(jī)選擇自2008年10月～2010年2月在我院經(jīng)開腹或腹腔鏡手術(shù)切除的，并經(jīng)大體及病理檢查確診為Ⅳ期卵巢子宮頸癌32例（據(jù)AFS修訂的子宮頸癌分期法進(jìn)行評(píng)分，均＞40分）為觀察組，年齡26～45歲，平均36.5歲。對(duì)照組：選擇同期有正常生育史，在我院行輸卵管復(fù)通術(shù)或漿膜下子宮肌瘤剔除術(shù)的患者32例，術(shù)中排除子宮頸癌。兩組術(shù)前均經(jīng)超聲檢查排除乳腺癌及其他婦科疾病，排除家族性遺傳病如糖尿病、高血壓等。兩組年齡

5、、疾病發(fā)生等方面比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。1.2 PCR檢驗(yàn)1.2.1 組織總RNA提?。悍謩e取兩組離體癌組織、正常組織各約100 mg在液氮環(huán)境下，搗碎并研磨成粉，迅速置于1.5 ml eppendof管中，加1 ml Trizol RNA提取液，4℃離心12 000 r/min15 min，吸取上清到另一eppendof管中，加入O.5 ml異丙醇混勻，冰浴沉淀lO min，離心12 000 r/min10 min，棄上清，沉淀加75%乙醇1 ml洗滌1次，沉淀溶于O.1% DEPC水中，待用。1.2.2 cDNA的合成：取RNA 1 μg，用SUPER SCRIPTI逆轉(zhuǎn)

6、錄試劑盒l(wèi)進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，所得cDNA用于PCR擴(kuò)增。①引物設(shè)計(jì)：P450 1A1引物（理論擴(kuò)增片段為182 bp）。上游引物：5’＞ATTGAATGAAAACATCAGGATTG＜3’；下游引物：5’＞GAG GGT TGT TGATGT CCATC＜3’。內(nèi)參照βactin引物（理論擴(kuò)增片段為250bp）。上游引物：5’＞TTC CAG CCTTCCTTC CTGGG＜3’；下游引物：5’＞TTG CGC TCAGGAGGAGCAAT＜3’。②半定量檢測(cè)：取20 μl PCR產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖電泳，溴化乙錠染色，然后應(yīng)用相關(guān)軟件進(jìn)行定量分析。 / 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：本文所有數(shù)據(jù)用SPSS

7、 13.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。兩組之間等位基因及基因型頻率比較用用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2 結(jié)果　　對(duì)照組中的CYPlAl基因IleVal多態(tài)位點(diǎn)的基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡。對(duì)照組和觀察組的CYPlAl基因IleVal多態(tài)野生型、雜合型和突變型基因型頻率分別為42.5%、39.2%、8.2%和30.2%、44.5%、15.2%，觀察組雜合型和突變型基因型頻率明顯高于對(duì)照組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。合并雜合型和突變型與野生型相比，觀察組和對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。詳見圖1。圖1 CYPlAl基因IleVal多態(tài)位點(diǎn)的基因型分布P

8、CR注：M：marker；1、3：突變型；2、6：野生型；4、5：雜合型；7：βactin3 討論　　宮頸癌是最常見的女性生殖系統(tǒng)腫瘤之一，其發(fā)生機(jī)制至今尚不清楚。HPV特別是HPV 16、18等高危型別感染是引起宮頸癌變的首要因素。但HPV感染并非誘發(fā)宮頸癌的唯一因素，尚需與其他因素協(xié)同作用，才能導(dǎo)致宮頸惡性病變的發(fā)生[4]。臨床資料提示，HPV感染與雌激素及其受體在宮頸病變的發(fā)生發(fā)展中可能存在某些協(xié)同作用[5]。 /html/zongjie/ 　　細(xì)胞色素P450芳香化酶是細(xì)胞色素P450的一種，是細(xì)胞色素P450產(chǎn)物中唯一有單基因編碼的酶，是雌激素合成過程中的最后一步限速酶，主要作

9、用是將雄烯二酮和睪酮轉(zhuǎn)化為雌酮和雌二醇。調(diào)節(jié)芳香化酶表達(dá)的啟動(dòng)因子具有組織特異性，正常子宮內(nèi)膜存在抑制轉(zhuǎn)錄因子，連接到P450的啟動(dòng)基因，使子宮內(nèi)膜無(wú)該酶的表達(dá)。腫瘤上皮細(xì)胞可通過自分泌芳香化酶合成雌激素，其周圍的間質(zhì)細(xì)胞通過增加合成或釋放生長(zhǎng)因子以旁分泌方式產(chǎn)生雌激素，促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)。P450 1A1基因定位于第15號(hào)染色體，有7個(gè)外顯子。目前，發(fā)現(xiàn)P450 1A1基因有4個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)。這些多態(tài)性在不同人群的分布表現(xiàn)出較大的差異，如IleVal多態(tài)突變型C/C基因型頻率中國(guó)人為25%，而拉丁美洲人為95%[6]。已有研究表明，芳香酶表達(dá)的調(diào)控主要是在轉(zhuǎn)錄水平，由啟動(dòng)因子調(diào)節(jié)的[7]。多種啟動(dòng)

10、因子在芳香酶在位和異位子宮內(nèi)膜中的表達(dá)、轉(zhuǎn)錄起著決定性的作用。某些染色體基因的關(guān)鍵區(qū)、某些抑癌基因可以抑制子宮頸癌患者在位及異位的子宮內(nèi)膜中芳香酶啟動(dòng)因子的活性[8]?！　”狙芯堪l(fā)現(xiàn)，P450 1A1基因在子宮頸癌患者在位子宮內(nèi)膜腺細(xì)胞胞質(zhì)中強(qiáng)表達(dá)，在正常內(nèi)膜中弱表達(dá)或不表達(dá)，與國(guó)外研究的研究結(jié)果一致，提示芳P450 1A1基因可能對(duì)正常子宮內(nèi)膜的生理功能影響不大，而P450 1A1基因的陽(yáng)性表達(dá)與促進(jìn)子宮內(nèi)膜局部雌激素的轉(zhuǎn)化作用有關(guān)，可能是導(dǎo)致子宮內(nèi)膜異癥發(fā)生的因素。在IleVal多態(tài)性與子宮頸癌的相關(guān)性方面，本研究結(jié)果顯示P450 1A1基因密碼子119、432多態(tài)位點(diǎn)的基因型分布