2型糖尿病患者結(jié)膜上皮細胞中TGFβ1和NFκB的表達

2型糖尿病患者結(jié)膜上皮細胞中TGF1和NFB的表達 目的觀察2型糖尿病患者結(jié)膜上皮細胞中轉(zhuǎn)化生長因子1 (TGF1）和核轉(zhuǎn)錄因子B（NFB）的表達情況.方法選擇2型糖尿病患者92例和正常人70例，任意選取一眼進行淚膜破裂時間（BUT）、基礎(chǔ)淚液分泌試驗及角膜熒光染色試驗，并應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測結(jié)膜上皮細胞中TGF1及NFB的表達.結(jié)果糖尿病組患者BUT值小于10s和基礎(chǔ)淚液分泌值小于5mm者所占比例較對照組明顯升高，角膜熒光染色程度較對照組明顯增強.結(jié)膜上皮細胞TGF1和NFB的染色程度均較對照組明顯增強;糖尿病組患者結(jié)膜上皮細胞TGF1與NFB的染色程度呈正相關(guān).結(jié)論2型糖尿病患者BUT值和基礎(chǔ)淚液分泌試驗值降低，角膜熒光染色程度增強，是干眼癥易患人群.糖尿病 2型 轉(zhuǎn)化生長因子 干眼癥ABSTRACT:OBJECTIVETo study the expression of transforming growth factor1(TGF1) and nuclear factorB (NFB) on conjunctiva endepidermis cells in patients with diabetes mellitus (DM).METHODS92 patients of DM and 70 cases of health adult were randomly selected. One eye in patients was selected to do the tear film breakup time (BUT),Schirmertest and cornea fluorescein staining,and the expression of NFB and TGF1 on bulbar conjunctiva endepidermis was detected by immunohistochemistry.RESULTSThe ratios of BUT value (10s) and Schirmer value (5mm) in DM increased significantly as compared with the control group, and the degree of cornea fluorescein staining in DM was higher than that in control group. The staining level of NFB and TGF1 of bulbar conjunctiva endepidermis in DM was higher than that in control group and was positive correlation. CONCLUSIONIn type 2 DM,the value of BUT and Schirmer decrease and the degree of cornea fluorescein staining increase is incident to the xeroma.Key words: diabetes mellitus, type 2; transforming growth factor beta ;xerophthalmia干眼癥患者結(jié)膜上皮細胞內(nèi)各種炎性因子的表達水平明顯高于正常人，如表皮生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子1 (transforming growth factor1，TGF1）及核轉(zhuǎn)錄因子B（nuclear factorB，NFB）等1,2.TGF1是多功能細胞因子，對上皮細胞具有較明顯的抑制作用，對成纖維細胞及其他間葉組織來源的細胞均具有明顯的刺激作用，表現(xiàn)為膠原合成增加，有利于組織修復(fù)及傷口愈合3，4.NFB是具有轉(zhuǎn)錄激活功能的蛋白質(zhì)，幾乎存在于所有細胞中,它可調(diào)節(jié)多種參與炎癥反應(yīng)的細胞因子、黏附分子和蛋白酶類的基因轉(zhuǎn)錄過程，與炎癥的發(fā)生密切相關(guān)5.本研究采用免疫組織化學(xué)方法對2型糖尿病患者結(jié)膜上皮細胞中TGF1和NFB的表達情況進行了檢測，并比較分析了正常人群和2型糖尿病患者的眼表狀態(tài).1材料與方法1.1材料1.1.1實驗對象本研究對象2型糖尿病患者和正常健康人共為162人，其中正常對照組為70人（70眼）、2型糖尿病組為92例（92眼），兩組研究對象年齡及性別構(gòu)成比間無顯著性差異,具有可比性.1.1.2試劑TGF1多克隆抗體，經(jīng)親和層析純化的兔抗人IgG多克隆抗體，稀釋度為1200；NFBp65多克隆抗體，經(jīng)親和層析純化的兔抗人IgG多克隆抗體，稀釋度為1200.SP試劑盒(通用型SP kit)及DAB顯色劑均為北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品；PBS及Mayer蘇木素均為福建邁新公司產(chǎn)品.1.1.3儀器CMIAS系列真彩色病理圖像分析系統(tǒng)為北京航空航天大學(xué)產(chǎn)品，RM2135型石蠟切片機為德國產(chǎn)品，CD1型快速生物醫(yī)學(xué)微波爐為上海創(chuàng)大科技有限公司產(chǎn)品.1.2方法1.2.1臨床檢查BUT重復(fù)測定3次，取平均值，BUT值小于10s判定為異常，基礎(chǔ)淚液分泌試驗以濕潤長度小于5mm時判定為異常.角膜熒光素染色評分方法將角膜分為4個象限：0級為無染色（-），1級為散狀點狀染色（+），2級為密集型點狀染色（），3級為片狀染色（）.1.2.2免疫組織化學(xué)染色將乙酸纖維素薄膜剪成3mm3mm大小紙條，用培養(yǎng)皿包裝進行消毒，預(yù)備貼有5mm5mm大小雙面膠的載玻片.取材時，囑患者注視鼻側(cè)，用眼科無齒鑷夾住乙酸纖維素薄膜一角輕輕置于患者顳側(cè)球結(jié)膜表面，用玻璃棒輕壓少許后取出，貼于載玻片上，每個對象至少取2次標(biāo)本，待薄膜稍干后，用950mL/L乙醇固定5min，置于-80超低溫冰箱保存?zhèn)溆?進行免疫組織化學(xué)染色，檢測TGF1及NFB的表達情況.采用過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉菌抗生物素蛋白行免疫組織化學(xué)染色，陰性對照以PBS代替一抗進行，陽性對照為乳腺癌標(biāo)本.染色結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：用光學(xué)顯微鏡觀察，見細胞膜邊界清晰，無特異性細胞膜或胞漿染色者為陰性(-)；細胞膜或胞漿有特異性著色，呈淺棕黃色、棕色及深棕色者分別為弱陽性(+)、中度陽性()及強陽性().將表達陰性和弱陽性者納入陰性組，中度陽性和強陽性者納入陽性組.1.2.3統(tǒng)計學(xué)處理應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理，兩組間BUT 檢查、基礎(chǔ)淚液分泌試驗、角膜熒光素染色比較及糖尿病組TGF和NFB表達相關(guān)性分析采用2檢驗進行.TGF1和NFB表達與各項臨床檢查之間的相關(guān)性分析采用Spearmans檢驗進行.2結(jié)果2.1BUT值測定和基礎(chǔ)淚液分泌試驗糖尿病組患者BUT值異常者為56眼（60.89%），基礎(chǔ)淚液分泌試驗異常者為52眼（56.52%），均明顯多于對照組，相比較均具有顯著性差異（P0.01）.