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1、液質(zhì)聯(lián)用基礎(chǔ)知識和名詞術(shù)語 （ LC/MS/MS） 2019-08-01 什么 是液質(zhì)聯(lián)用？ LC-MS/MS：是一種將液相色譜的高效分離能力與質(zhì)譜的特異、靈敏、多 組分檢測能力相結(jié)合，實現(xiàn)復(fù)雜混合物更準(zhǔn)確的定量和定性分析技術(shù)。 在藥物分析、食品分析和環(huán)境分析等許多領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。 液相色譜 樣品引入 離子化 質(zhì)量分析器 檢測器 數(shù)據(jù)分析 質(zhì)譜圖 什么是質(zhì)譜分析法 質(zhì)譜分析法是先將中性分子離 子化，變?yōu)闅鈶B(tài)離子混合物，并按質(zhì)荷比 （ m/z）分 離、豐度記錄的一種分析方法 ; 質(zhì) 譜儀是實現(xiàn)上述分離 分析 技 術(shù)，從 而測定物質(zhì)的質(zhì)量與含量及其結(jié)構(gòu) 的儀器 。由樣品
2、導(dǎo)入系統(tǒng)、離子源、檢測器、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。 質(zhì) 譜分析法是一種快速 ,有效的分析方 法，利 用質(zhì)譜儀可進(jìn)行 同位 素分析 , 化合物分 析，氣 體成分分析以及金屬和非金屬固體樣品的超純痕量分析 。 什么是質(zhì) 譜 (MS) mass spectrometry 質(zhì)譜圖：不同質(zhì)荷比的離子經(jīng)質(zhì)量分析器分離，然后被檢測并記錄下來的譜圖叫 做質(zhì)譜圖，簡稱質(zhì)譜。 質(zhì)譜 圖的橫坐標(biāo)是質(zhì)荷比（ m/z），縱坐標(biāo)是離子強(qiáng)度。 原子 量：一種元素的所有同位素的重量平均值 1H(氕 ， H)， 2H(氘 ， D)， 3H(氚 ， T) 同位 素：具有相同原子序數(shù)而又具有不同的質(zhì)量數(shù)的原子叫做同
3、位素 同位 素豐度：自然界中某同位素原子所占的百分?jǐn)?shù)叫做該元素的相對豐 度 質(zhì)量 數(shù) =質(zhì) 子 +中子 原子序數(shù) =質(zhì)子數(shù) 質(zhì)荷比：離子的質(zhì)量與它所帶電荷的比值（ m/z） 質(zhì)荷 比是質(zhì)譜圖的橫坐標(biāo)，是質(zhì)譜定性的基礎(chǔ)。 基峰：在譜圖中，指定質(zhì)荷比范圍內(nèi)強(qiáng)度最大的離子峰叫做基峰?；?的相對豐度為 100% 豐 度：主 要用于描述離子響應(yīng)強(qiáng)度，即在某一質(zhì)譜圖中以離子響應(yīng)強(qiáng)度最大的峰 為基峰，以它的強(qiáng)度為 100%，其他離子峰強(qiáng)與之的比例為相對豐度 總離子流圖（ Total ions current, TIC） :在選定質(zhì)量范圍內(nèi)，所有離子強(qiáng) 度的總和對時間或掃描次數(shù)
4、所做的圖。液質(zhì)聯(lián)用是 TIC即色譜圖 質(zhì) 量色譜圖 （ Mass chromatogram ） 叫 提取離子色譜 圖 （ extract ion Chromatography， XIC）： 制定某一質(zhì)荷比的離子強(qiáng)度對時間掃描號所作 的圖 ，是質(zhì)譜法處理數(shù)據(jù)的一種方 式。 質(zhì)譜中采用 的質(zhì)量單 位 Da=Dalton(道爾頓 ) 質(zhì)量單 位，等于一個碳原子（ 12C）質(zhì)量的十二分之一，約 1.66 10-24克；一克約為 6 1023道爾頓 amu=atomic mass unit原子質(zhì)量單位 1amu=1Da 儀 器的使用范圍 儀器的測試條件決定了其使用范圍 色譜
5、條 件（液相色譜條件） 質(zhì)譜條 件（離子源的選擇） HPLC條件的選擇 根據(jù)化合物的類型選擇選擇流動相的組成；（甲醇 -水、乙腈 -水或甲醇 -乙腈 -水 DMF DMSO THF） 某 些 化合 物 質(zhì)有某 種流動相體系才可以出峰 一 般正離子方式用甲醇，負(fù)離子方式用乙腈 梯度的設(shè)定：梯度變化太快時對離子化效率影響很大，相應(yīng)源參數(shù)也應(yīng)該改變， 所以很定流動相可以滿足要求時，盡量不用梯度，尤其是定量時。 流動 相中加入甲酸、乙酸可以提高正離子離子化效率 ;負(fù)離子方式分析酸性化合 物時可用氨水調(diào)節(jié) PH值 常用的鹽： CH3COONH4 HCOONH4 KH2
6、PO3 色譜柱的選擇 LC的流速一般根據(jù)色譜柱的規(guī)格和電離方式來確定 APCI 0.2-2mL/min ESI 5-300 uL /min routinely (1ml/min possible) Flow Rate Column I.D. 1.0 mL/min 4.6mm 0.5 mL/min 3.0mm 0.2 mL/min 2.1mm 50 mL/min 1.0mm <10 uL/min capillary 離子 化方法選擇 根據(jù)樣品類型確定離子化方式 適 合 ESI的樣品類型：極性物質(zhì)的檢測 高極性化合 物、蛋白質(zhì)、肽類、低聚糖核苷酸、 胺類、季銨 鹽 適合 APCI的樣品類型：弱極性、中等極性小分子 通常認(rèn)為 ESI有利于分析生物大分子及其它分子量大的化合物。而 APCI更適 合于分析極性較小的化合物 ESI譜圖示例 正離子模式 M+H+ M+Na+ M+K+ 2M+H+ M+H+CH3OH+ M+NH4+ 負(fù)離 子模式 M-H- M+Cl- M+OH- Thank you for your attantion!
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