玉米赤霉烯酮毒素標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)規(guī)程

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1、-玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1 1、目的目的為了規(guī)范親和柱凈化樣本中玉米赤霉烯酮的操作流程，特制訂本操作規(guī)程。2 2、范圍范圍本標(biāo)準(zhǔn)適用于糧食、飼料、食品中玉米赤霉烯酮的檢測(cè)。3 3、檢出限和定量限檢出限和定量限島津項(xiàng)目樣本檢出限（g/kg）ZEN2.96安捷倫樣本檢出限（g/kg）75.9樣本定量限（g/kg）8.96樣本定量限（g/kg）253.24 4、職責(zé)職責(zé)部門(mén)職責(zé)1、2、負(fù)責(zé)本制度的實(shí)施。負(fù)責(zé)本制度的監(jiān)督執(zhí)行。部門(mén)名稱(chēng)質(zhì)量管理部5 5、程序程序5.15.1原理原理測(cè)定的基礎(chǔ)是抗原、抗體反應(yīng)，抗體連接在柱體內(nèi)，樣品經(jīng)過(guò)提取、過(guò)濾后，緩慢的通過(guò)玉米赤霉烯酮免疫親和

2、柱，在免疫親和柱內(nèi)毒素與抗體結(jié)合，之后洗滌免疫親和柱除去沒(méi)有被結(jié)合的其他無(wú)關(guān)物質(zhì)。用甲醇洗脫玉米赤霉烯酮，然后注入到高效液相色譜儀中用于檢測(cè)。5.25.2溶液配制溶液配制5.2.1提取液：80%乙腈-用量筒移取 800mL 乙腈，加入超純水定容至至 1L。5.2.2稀釋液：0.01M PBST 溶液-稱(chēng)取 8g NaCl、0.2g KCl、0.2g KH2PO4和 1.16g Na2HPO4.12H2O，加入 800mL 超純水溶解，加入 2mL Tween-20，定容至 1L。5.2.3玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)工作液：用色譜級(jí)甲醇將儲(chǔ)備工作液分別稀釋到 1000 ng/ml、500 ng/ml、20

3、0ng/ml、100 ng/ml、50 ng/ml。5.35.3 樣品前處理樣品前處理-20g0.01g 樣品（固體樣品需粉碎，并過(guò) 2mm 分樣篩）加入 100mL 提取液（80%-乙腈-水溶液）混勻；-高速均質(zhì)（10,000r/min）1min，或搖床（200r/min300r/min）劇烈振蕩 20min，用快速定性濾紙過(guò)濾，收集濾液；-取 10mL 濾液加入 40mL 稀釋液稀釋?zhuān)儆梦⒗w維濾紙過(guò)濾，并收集濾液作為上樣液；-取 25mL 上樣液過(guò)免疫親和柱凈化。稀釋倍數(shù)：15.45.4凈化凈化-取出免疫親和柱，將上方塞子取出斜剪斷，再插回親和柱上；(3mL 的免疫親和柱去掉上方塞子，安

4、裝上轉(zhuǎn)接頭，將轉(zhuǎn)接頭另一端與注射器固定后使用)-將柱子與氣控操作架上的注射器連接固定，取適量處理后的溶液上樣；-去掉親和柱下方堵頭，調(diào)節(jié)開(kāi)關(guān)，使液體以 12 滴/秒速度流出；-待液體排干后，用 10mL 去離子水洗滌 2 次，流速 23 滴/秒；-待液體排干后，上樣 1mL 甲醇，流速 1 滴/秒，收集洗脫液并定容至 1mL；-洗脫液用 0.22m 微孔濾器過(guò)濾后轉(zhuǎn)移至樣品瓶用于 HPLC 分析。*每次上樣前都要將上次液體完全排干。*谷物樣本也適用于 GB/T 5009.209-20085.55.5液相測(cè)定液相測(cè)定5.5.1液相色譜條件C18 柱：250mm（長(zhǎng)）4.6mm（直徑），填料粒徑

5、5m；流動(dòng)相：60%乙腈流速：1.0 mL/min；柱溫：40；進(jìn)樣體積：20L熒光檢測(cè)器：激發(fā)波長(zhǎng)：274nm發(fā)射波長(zhǎng)：440nm5.5.2色譜定量分別取相同體積樣液和標(biāo)準(zhǔn)工作液注入高效液相色譜儀，在上述色譜條件下測(cè)定試樣的響應(yīng)值（峰高或峰面積），以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，將未知樣本中玉米赤霉烯酮的峰面積帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得到試樣中玉米赤霉烯酮的濃度，標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖參考下圖：-數(shù)據(jù)文件名:ZEN-500ppb.lcd樣品名:ZEN-500ppbZENmV25檢測(cè)器 A Ex:274nm,Em:440nm201510500.01.02.03.04.05.06.07.08.09.

6、010.011.012.0min附圖：附圖：ZEN-500ppbZEN-500ppb 標(biāo)準(zhǔn)品液相圖譜標(biāo)準(zhǔn)品液相圖譜5.65.6注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)-使用前，免疫親和柱需回至室溫（2225）。-親和柱 28儲(chǔ)存，不得凍存。-不要使用過(guò)了有效日期的免疫親和柱。-取樣量：根據(jù)需要可以適當(dāng)增加或減少取樣量，注意提取液量要相應(yīng)改變。-柱容量：2000ng，當(dāng)樣本中待檢毒素的含量除以稀釋倍數(shù)高于柱容量時(shí)，需要適當(dāng)降低上樣液的體積，重新檢測(cè)。-pH：親和柱的上樣溶液 pH 需在 68 之間，若偏離此范圍需要用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié) pH。-玉米赤霉烯酮可致癌，應(yīng)戴手套操作。-使用過(guò)的容器及標(biāo)準(zhǔn)品溶液最好用次氯酸鈉溶液（5%V/V）浸泡過(guò)夜。-上機(jī)檢測(cè)時(shí)的溶劑與流動(dòng)相保持一致，可以消除溶劑效應(yīng)的影響。6 6、相關(guān)文件相關(guān)文件免疫親和柱檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)免疫親和柱檢驗(yàn)操作規(guī)程島津液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程安捷倫液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程7 7、相關(guān)記錄相關(guān)記錄N/A8 8、附件附件N/A9 9、修改歷史記錄修改歷史記錄變更類(lèi)型修改條款及主要內(nèi)容修改人修改日期編號(hào)-01AN/A魏丹丹2016.2.26變更類(lèi)型：A新起草M-修訂-