羊水細(xì)胞培養(yǎng)在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用價值論文.doc

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畢業(yè)論文/畢業(yè)論文范文 羊水細(xì)胞培養(yǎng)在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用價值論文 　　資料與方法 　　一般資料 選擇2017年4月～2017年4月在本院產(chǎn)科就診的具有產(chǎn)前診斷指征的178例孕婦， 年齡20～47歲， 孕周16～25周， 有70例孕婦唐氏綜合征篩查為陽性， 23例孕婦有異常生育史， 60例孕婦年齡35歲， 14例婦女于早孕服藥， 6例孕婦神經(jīng)管急性篩查為陽性， 5例孕婦丈夫染色體異常。 　　方法 　　羊膜穿刺 經(jīng)b超定位后， 在無菌條件下， 用一次性羊水穿刺針行羊膜穿刺術(shù)。舍棄最開始的2 ml羊水， 再抽取20～30 ml的羊水放入2支無菌離心試管中。 　　羊水細(xì)胞培養(yǎng) 以1000 r/min的離心速度將2支無菌試管中的羊水進(jìn)行離心處理達(dá)10 min， 舍棄上層清液， 保留管內(nèi)沉淀細(xì)胞和0.5 ml羊水， 加入20%胎牛血清及含張氏成分的5 ml f10培養(yǎng)基， 用細(xì)管使之混勻， 將其接種于t-25的無菌試管中， 在37℃有5%二氧化碳培養(yǎng)環(huán)境中進(jìn)行培育， 5 d后觀察細(xì)胞生長情況， 若發(fā)現(xiàn)纖維狀或者梭狀細(xì)胞生長是， 則可更換5 ml新鮮培養(yǎng)液進(jìn)行傳代培養(yǎng)[2]。 　　收獲細(xì)胞并進(jìn)行制片 在對羊水細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)6～7 d后， 在倒置的顯微鏡下對正在培養(yǎng)的羊水細(xì)胞進(jìn)行觀察， 觀察其生長情況， 發(fā)現(xiàn)有不同大小的梭長形細(xì)胞正在進(jìn)行克隆并生長， 每個克隆過的細(xì)胞其生長狀態(tài)良好并且已經(jīng)形成細(xì)胞島。對培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)液進(jìn)行定時的更換， 每天對細(xì)胞進(jìn)行觀察， 在觀察2～3 d后， 發(fā)現(xiàn)每個形成的細(xì)胞島已經(jīng)逐漸長成為透亮細(xì)胞， 這些細(xì)胞較大， 細(xì)胞融合度達(dá)到70%～80%， 并且數(shù)目不等， 形狀多呈圓形或類圓形， 這時即可對細(xì)胞進(jìn)行收獲。在對細(xì)胞進(jìn)行收獲的前1 d， 更換新鮮培養(yǎng)液， 在培養(yǎng)液中加入秋水仙素， 使其濃度達(dá)到0.1 mg/ml， 在4～5 h后， 使用顯微鏡觀察， 發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液中出現(xiàn)大量的呈魚眼狀的細(xì)胞時， 即可對細(xì)胞終止培養(yǎng)并進(jìn)行收獲。加入0.25%的2 ml胰酶消化液， 在37℃的環(huán)境下放置5 min， 使得瓶壁上細(xì)胞脫落， 再以1500r的轉(zhuǎn)速離心處理8 min， 棄上清液。加入1.5 ml的0.4%枸緣酸鈉和0.4%的氯化鉀混合液低滲7 min， 滴片， 常規(guī)g顯帶。每張玻片有20～30個細(xì)胞分裂相， 進(jìn)行染色體核型分析， 每例分析核型5個。 　　核型統(tǒng)計分析 使用顯微鏡對細(xì)胞核型進(jìn)行觀察， 常規(guī)技術(shù)分散良好的細(xì)胞核型有30個中期分裂相， 細(xì)胞核型計數(shù)發(fā)生異常的則有50個分裂相， 如出現(xiàn)2個細(xì)胞核型計數(shù)異常， 則對所有分裂相進(jìn)行計數(shù)， 使用染色體核型分析軟件對核型圖像進(jìn)行采集， 對3～5個核型進(jìn)行分析， 并完成報告， 為遺傳咨詢提供意見。