《基因工程操作步驟【行業(yè)特制】》由會員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《基因工程操作步驟【行業(yè)特制】（45頁珍藏版）》請在裝配圖網(wǎng)上搜索。
1、1.2 基因工程的基本操作程序1講課課件知識回顧：1 1、目的基因的獲取、目的基因的獲取2 2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、基因表達(dá)載體的構(gòu)建3 3、目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞4 4、目的基因的檢測與鑒定、目的基因的檢測與鑒定有了目的基因，我們才能賦有了目的基因，我們才能賦予一種生物以另一種生物的予一種生物以另一種生物的遺傳特性。遺傳特性。使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并可進(jìn)行遺傳、表定存在，并可進(jìn)行遺傳、表達(dá)和發(fā)揮作用達(dá)和發(fā)揮作用 載體進(jìn)入受體細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)，載體進(jìn)入受體細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)，才能實現(xiàn)一種生物的基因在才能實現(xiàn)一種生物的基因在另一種生物中的轉(zhuǎn)化。另一種生
2、物中的轉(zhuǎn)化。才能確定目的基因是否真正才能確定目的基因是否真正在受體細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳和正在受體細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳和正確表達(dá)。確表達(dá)。2講課課件一、目的基因的獲取1 1目的基因主要是目的基因主要是編碼蛋白質(zhì)的基因編碼蛋白質(zhì)的基因：如：與生物抗性相關(guān)的基因、與優(yōu)良品質(zhì)相關(guān)的基因、與生物藥物和保健品相關(guān)的基因、與毒物降解相關(guān)的基因、與工業(yè)用酶相關(guān)的基因、具調(diào)控作用的因子等。2 2獲取目的獲取目的基因基因的常用方法：的常用方法：1 1、從基因文庫中獲取、從基因文庫中獲取2 2、利用、利用PCRPCR技術(shù)擴(kuò)增技術(shù)擴(kuò)增3 3、人工合成、人工合成3講課課件原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)編碼
3、區(qū)編碼區(qū)上游編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游編碼區(qū)下游 與與RNARNA聚合酶結(jié)合位點聚合酶結(jié)合位點啟動子啟動子終止子終止子不編碼蛋白質(zhì)。不編碼蛋白質(zhì)。：編碼蛋白質(zhì)：編碼蛋白質(zhì) ,連續(xù)不間斷連續(xù)不間斷編碼區(qū)編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)調(diào)控遺傳信息表達(dá)調(diào)控遺傳信息表達(dá),上上 游有游有RNARNA聚合酶結(jié)合位點聚合酶結(jié)合位點:基因結(jié)構(gòu)基因結(jié)構(gòu)4講課課件真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)編碼區(qū)編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)內(nèi)含子內(nèi)含子 外顯子外顯子 啟動子啟動子終止子終止子編碼區(qū)上游編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游編碼區(qū)下游 編碼區(qū)編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)外顯子：能編碼蛋白質(zhì)的序列外顯子：能編碼蛋白質(zhì)的序列內(nèi)含子：不能編碼蛋白質(zhì)的序列
4、內(nèi)含子：不能編碼蛋白質(zhì)的序列：有調(diào)控作用：有調(diào)控作用,上游有上游有RNARNA聚合聚合 酶結(jié)合位點酶結(jié)合位點(啟動子啟動子)。與與RNARNA聚合酶聚合酶結(jié)合位點結(jié)合位點基因結(jié)構(gòu)基因結(jié)構(gòu)5講課課件1.從基因文庫中獲取目的基因?qū)⒑心撤N生物不同基因的許多將含有某種生物不同基因的許多DNA片斷，導(dǎo)入到受片斷，導(dǎo)入到受體菌的群體中，各個受體菌分別含有這種生物的不同體菌的群體中，各個受體菌分別含有這種生物的不同基因?；颉；蚪M文庫：基因組文庫：含有一種生物的含有一種生物的全部全部基因基因部分基因文庫：部分基因文庫：只包含了一種生物的只包含了一種生物的部分部分基因，基因，如：如：cDNA文庫文庫6講課
5、課件基因組DNA文庫與cDNA文庫某生物體內(nèi)全部某生物體內(nèi)全部DNADNA 許多許多DNADNA片段片段受體菌群體受體菌群體限制酶限制酶與運(yùn)載體連接導(dǎo)入與運(yùn)載體連接導(dǎo)入基因組文庫基因組文庫cDNAcDNA反轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄受體菌群體受體菌群體與運(yùn)載體連接導(dǎo)入與運(yùn)載體連接導(dǎo)入cDNA文庫文庫某種生物某個時期的某種生物某個時期的mRNAmRNA7講課課件真核細(xì)胞的cDNA的獲取DNA聚合酶聚合酶剪接有關(guān)的酶剪接有關(guān)的酶RNA聚合酶聚合酶mRNA前體前體mRNA單鏈單鏈DNAcDNA逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄酶轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄剪接剪接逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄復(fù)制復(fù)制終止子終止子基因基因不含不含非編碼非編碼序列序列。即不。即不含含非編碼區(qū)
6、非編碼區(qū)和和內(nèi)含子內(nèi)含子8講課課件基因組DNA文庫與cDNA文庫的比較 文庫類型文庫類型 cDNA文庫文庫 基因組文庫基因組文庫 文庫大小文庫大小基因中啟動子（具有基因中啟動子（具有啟動作用的啟動作用的DNA片段）片段）基因中內(nèi)含子基因中內(nèi)含子(位于編位于編碼蛋白質(zhì)序列的非編碼蛋白質(zhì)序列的非編碼碼DNA片段）片段）基因多少基因多少 物種間的基因交流物種間的基因交流小小大大無無有有無無有有某種生物的部分基因某種生物的部分基因 某種生物的全部基因某種生物的全部基因可以可以部分基因可以部分基因可以9講課課件怎樣從基因文庫中找到我們所需要的目的基因怎樣從基因文庫中找到我們所需要的目的基因 根據(jù)目的基因
7、的有關(guān)信息，例如，根據(jù)基因根據(jù)目的基因的有關(guān)信息，例如，根據(jù)基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色體上的的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色體上的位置、基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物位置、基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA，以及基因的表達(dá)，以及基因的表達(dá)產(chǎn)物蛋白質(zhì)等特性來獲取目的基因。產(chǎn)物蛋白質(zhì)等特性來獲取目的基因。10講課課件2.利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因1 1概念：概念：PCRPCR全稱為全稱為_，是一項，是一項 在生物在生物_復(fù)制復(fù)制_的核酸合成技術(shù)。的核酸合成技術(shù)。2 2原理：原理：DNADNA復(fù)制復(fù)制原料：原料：模板模板DNADNA；DNADNA引物；四種脫氧核苷引物；四種脫氧核苷酸；熱穩(wěn)定酸；熱穩(wěn)定DNAD
8、NA聚合酶聚合酶多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)體外體外特定特定DNADNA片段片段3 3前提：前提：已知目的基因的一段核苷酸序列已知目的基因的一段核苷酸序列11講課課件PCR技術(shù)的操作過程a a、DNADNA變性變性（90-9590-95）：）：雙鏈雙鏈DNADNA模板在熱作用下，模板在熱作用下，_斷裂，形成斷裂，形成_b b、退火、退火（復(fù)性復(fù)性55-6555-65）：）：系統(tǒng)溫度降低，系統(tǒng)溫度降低，引物引物與與DNADNA模板結(jié)合，形成局部模板結(jié)合，形成局部_。c c、延伸、延伸（70-7570-75）：在）：在TaqTaq酶酶的作用下，合成與模的作用下，合成與模板互補(bǔ)的板互補(bǔ)的_。氫鍵氫鍵
9、單鏈單鏈DNADNA雙鏈雙鏈DNADNA鏈鏈d.重復(fù)重復(fù)a.b.ca.b.c步驟：每重復(fù)步驟：每重復(fù)一次，目的基因增加一次，目的基因增加_倍倍一一12講課課件5 5/3 3/G GG GT TC C3 3/5 5/G GA AC CC C5 5/3 3/引物引物G GG G變性變性復(fù)性復(fù)性延伸延伸1.目的基因目的基因DNA受熱變性，解鏈；受熱變性，解鏈；2.引物與單鏈互補(bǔ)結(jié)合；引物與單鏈互補(bǔ)結(jié)合；3.合成鏈在合成鏈在DNA聚合酶作用下進(jìn)行延伸。聚合酶作用下進(jìn)行延伸。5 5/3 3/A AG G引物引物13講課課件過程：過程：14講課課件PCR技術(shù)的操作過程15講課課件PCR技術(shù)擴(kuò)增與技術(shù)擴(kuò)增與
10、DNA復(fù)制的比較復(fù)制的比較DNA復(fù)制復(fù)制PCR技術(shù)技術(shù)場所場所原理原理條件條件解旋方式解旋方式酶酶特點特點結(jié)果結(jié)果堿基互補(bǔ)配對原則堿基互補(bǔ)配對原則堿基互補(bǔ)配對原則堿基互補(bǔ)配對原則四種脫氧核苷酸、模四種脫氧核苷酸、模板、酶、板、酶、ATP四種脫氧核苷酸、四種脫氧核苷酸、模板、酶、模板、酶、引物引物DNA在高溫下變性解旋在高溫下變性解旋解旋酶催化解旋解旋酶催化解旋半保留復(fù)制、半保留復(fù)制、邊解旋變復(fù)制邊解旋變復(fù)制半保留復(fù)制、半保留復(fù)制、全解旋再復(fù)制全解旋再復(fù)制體外復(fù)制體外復(fù)制主要在細(xì)胞核內(nèi)主要在細(xì)胞核內(nèi)大量的大量的DNA片段片段形成整個形成整個DNA分子分子熱穩(wěn)定的熱穩(wěn)定的DNA聚合酶聚合酶細(xì)胞內(nèi)的
11、細(xì)胞內(nèi)的DNA聚合酶、聚合酶、解旋酶、解旋酶、DNA連接酶等連接酶等16講課課件PCRPCR技術(shù)擴(kuò)增過程技術(shù)擴(kuò)增過程a a、DNADNA變性（變性（90-9590-95）：雙鏈）：雙鏈DNADNA模板模板 在熱作用下，在熱作用下，斷裂，形成斷裂，形成_ _ b b、復(fù)性（、復(fù)性（55-6055-60）：系統(tǒng)溫度降低，引物）：系統(tǒng)溫度降低，引物 與與DNADNA模板結(jié)合，形成局部模板結(jié)合，形成局部_。c c、延伸（、延伸（70-7570-75）：在）：在TaqTaq酶的作用下，從酶的作用下，從 引物的引物的55端端33端延伸，合成與模板互補(bǔ)端延伸，合成與模板互補(bǔ) 的的_。氫鍵氫鍵單鏈單鏈DNAD
12、NA雙鏈雙鏈DNADNA鏈鏈17講課課件3.人工合成法 在基因較小，核苷酸序列已知的情況下，可在基因較小，核苷酸序列已知的情況下，可以利用以利用DNADNA合成儀人工合成合成儀人工合成蛋白質(zhì)的氨基酸序列蛋白質(zhì)的氨基酸序列mRNAmRNA的核苷酸序列的核苷酸序列基因的核苷酸序列基因的核苷酸序列目的基因目的基因化學(xué)合成化學(xué)合成推測推測推測推測思考：思考：化學(xué)法合化學(xué)法合成的目的基因含成的目的基因含內(nèi)含內(nèi)含子、啟動子和終止子子、啟動子和終止子嗎？嗎？18講課課件人工合成法（真核生物真核生物）反轉(zhuǎn)錄法反轉(zhuǎn)錄法目的基因的信使目的基因的信使RNARNA目的基因目的基因化學(xué)合成法化學(xué)合成法肽鏈氨基酸序列肽鏈
13、氨基酸序列信使信使RNARNA序列序列基因的核苷酸序列基因的核苷酸序列目的基因目的基因合成合成推測推測推測推測單鏈單鏈DNADNA合成合成19講課課件課堂小結(jié)目的基因的獲取目的基因的獲取1 1、從基因文庫中獲取、從基因文庫中獲取2 2、利用、利用PCRPCR技術(shù)擴(kuò)增技術(shù)擴(kuò)增3 3、人工合成、人工合成種種類類基因組文庫：基因組文庫：含有一種生物的含有一種生物的全部全部基因基因部分基因文庫：部分基因文庫：只包含了一種生物的只包含了一種生物的部分部分基因，基因，如：如：cDNA文庫文庫20講課課件二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建 基因工程的核心基因工程的核心1 1目的：目的：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并
14、且可以遺傳給下一代，同時使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。2 2基因基因表達(dá)載體表達(dá)載體的組成：的組成：復(fù)制原點復(fù)制原點+目的基因目的基因+啟動子啟動子+終止子終止子+標(biāo)記基因標(biāo)記基因21講課課件二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建核心核心（1 1）用一定的）用一定的_切切割質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個切口割質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個切口，露出，露出_。（2 2）用）用_切斷目切斷目 的基因，使其產(chǎn)生的基因，使其產(chǎn)生_ _ _。（3 3）將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的）將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的_處，再加入適量處，再加入適量_，形成了一個重組，形成了一個重組 DNADNA分子（重組質(zhì)粒）分子（重組質(zhì)粒）
15、限制酶限制酶黏性末端黏性末端同一種限制酶同一種限制酶的黏性末端的黏性末端切口切口DNADNA連接酶連接酶相同相同1.1.過程過程:22講課課件質(zhì)粒質(zhì)粒DNADNA分子分子一個一個切口切口兩個兩個黏性末端黏性末端兩個兩個切口切口獲得目的基因獲得目的基因DNA DNA 連接酶連接酶重組重組DNADNA分子（重組質(zhì)粒）分子（重組質(zhì)粒）同一種同一種 限制酶限制酶表達(dá)載體表達(dá)載體過程過程:23講課課件基因表達(dá)載體的構(gòu)建基因表達(dá)載體的構(gòu)建基因工程的核心基因工程的核心 1、目的：、目的：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時使目的并且可以遺傳給下一代，同時
16、使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用?；蚰軌虮磉_(dá)和發(fā)揮作用。24講課課件2 2、基因表達(dá)載體的組成：、基因表達(dá)載體的組成：復(fù)制原點復(fù)制原點+目的基因目的基因+啟動子啟動子+終止子終止子+標(biāo)記基因標(biāo)記基因它們各自它們各自的作用是的作用是什么什么?25講課課件啟動子：啟動子：位于基因的首端的位于基因的首端的一段特殊的一段特殊的DNADNA片斷，它是片斷，它是RNARNA聚合酶識別和結(jié)合的部聚合酶識別和結(jié)合的部位，有了它才能位，有了它才能驅(qū)動基因轉(zhuǎn)驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出錄出mRNAmRNA，最終獲得蛋白質(zhì)，最終獲得蛋白質(zhì)終止子：終止子：位于基因的尾端的位于基因的尾端的一段特殊的一段特殊的DNADNA片斷，片斷，能
17、終能終止止mRNAmRNA的轉(zhuǎn)錄的轉(zhuǎn)錄標(biāo)記基因標(biāo)記基因的作用是的作用是為了為了鑒別鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將有目的基因的細(xì)因，從而將有目的基因的細(xì)胞篩選出來胞篩選出來26講課課件3.3.基因表達(dá)載體的組成：基因表達(dá)載體的組成：它們有什么作用？它們有什么作用？a、目的基因、目的基因b、啟動子、啟動子c、終止子、終止子d、標(biāo)記基因、標(biāo)記基因位于基因的首端位于基因的首端,是是mRNA結(jié)合位點結(jié)合位點位于基因的末端位于基因的末端,終終止轉(zhuǎn)錄止轉(zhuǎn)錄檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞27講課課件 三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞1 1轉(zhuǎn)化：轉(zhuǎn)化：目的基因
18、進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程。2 2常用的受體細(xì)胞：常用的受體細(xì)胞：大腸桿菌、枯草桿菌、土壤農(nóng)桿菌、酵母菌大腸桿菌、枯草桿菌、土壤農(nóng)桿菌、酵母菌和動植物細(xì)胞等。和動植物細(xì)胞等。3 3目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的原理：目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的原理：借鑒細(xì)菌或病毒侵染細(xì)胞的途徑。借鑒細(xì)菌或病毒侵染細(xì)胞的途徑。28講課課件1、目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法（1 1）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 農(nóng)桿菌特點：易感染雙子葉植物和裸子植農(nóng)桿菌特點：易感染雙子葉植物和裸子植 物，對大多數(shù)單子葉植物沒有感染能力。物，對大多數(shù)單子葉植物沒有感染能力。原理：原理：TiTi質(zhì)粒上的質(zhì)粒上的T-DNAT-D
19、NA可以轉(zhuǎn)移到受可以轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞染色體的體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞染色體的DNADNA上。上。29講課課件三、目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞三、目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞構(gòu)建基因表達(dá)載體構(gòu)建基因表達(dá)載體轉(zhuǎn)入轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌農(nóng)桿菌植物細(xì)胞植物細(xì)胞導(dǎo)入導(dǎo)入穩(wěn)定維持和表達(dá)穩(wěn)定維持和表達(dá)過程：過程：30講課課件1、目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法（2 2）基因槍法：）基因槍法：目的基因?qū)雴巫尤~植物細(xì)胞目的基因?qū)雴巫尤~植物細(xì)胞 操作方法：利用壓縮氣體產(chǎn)生的動力操作方法：利用壓縮氣體產(chǎn)生的動力，將，將包裹在金屬粒表面的表達(dá)載體包裹在金屬粒表面的表達(dá)載體DNA打入受體打入受體細(xì)胞中，使目的基因與其整合并表達(dá)的方法
20、細(xì)胞中，使目的基因與其整合并表達(dá)的方法。鎢粉粒子和金粉粒子，粒子的直徑一般在鎢粉粒子和金粉粒子，粒子的直徑一般在0.64um。適用：適用：單子葉植物單子葉植物31講課課件1、目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法（3 3）花粉管通道法：）花粉管通道法：將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞 操作方法：在植物花受粉后，花粉形成花操作方法：在植物花受粉后，花粉形成花粉管還末愈合前期，剪去柱頭，然后，滴入粉管還末愈合前期，剪去柱頭，然后，滴入DNA（含的基因）使目的基因借助花粉管通（含的基因）使目的基因借助花粉管通道進(jìn)入受體細(xì)胞道進(jìn)入受體細(xì)胞 特點特點:十分簡便經(jīng)濟(jì)。十分簡便經(jīng)濟(jì)。例：轉(zhuǎn)基因抗蟲棉例：轉(zhuǎn)基
21、因抗蟲棉32講課課件2、將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞方法：顯微注射法方法：顯微注射法程序程序目的基因表達(dá)載體提純目的基因表達(dá)載體提純 取卵（受精卵）取卵（受精卵）顯微注射顯微注射 受精卵受精卵 新性狀動物新性狀動物33講課課件3、將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞微生物作受體細(xì)胞原因：微生物作受體細(xì)胞原因：繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對少繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對少常用菌：大腸桿菌常用菌：大腸桿菌常用法：常用法：CaCa 處理獲得感受態(tài)細(xì)胞處理獲得感受態(tài)細(xì)胞過程：過程：34講課課件小結(jié)：將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞生物種類生物種類植物細(xì)胞植物細(xì)胞動物細(xì)胞動物細(xì)胞微生物細(xì)胞微生物細(xì)胞常用方法常用方法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化
22、法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法顯微注射技術(shù)顯微注射技術(shù)CaCa2+2+處理法處理法受體細(xì)胞受體細(xì)胞體細(xì)胞體細(xì)胞受精卵受精卵原核細(xì)胞原核細(xì)胞轉(zhuǎn)化過程轉(zhuǎn)化過程將目的基因插入到將目的基因插入到TiTi質(zhì)粒的質(zhì)粒的T-DNAT-DNA上上農(nóng)桿菌農(nóng)桿菌導(dǎo)入植導(dǎo)入植物細(xì)胞物細(xì)胞整合到受整合到受體細(xì)胞的體細(xì)胞的DNADNA表表達(dá)達(dá)將含有目的基因?qū)⒑心康幕虻谋磉_(dá)載體提純的表達(dá)載體提純?nèi)÷眩ㄊ芫眩┤÷眩ㄊ芫眩╋@微注射顯微注射受受精卵發(fā)育精卵發(fā)育獲得獲得具有新性狀的動具有新性狀的動物物CaCa2+2+處理細(xì)胞處理細(xì)胞感受態(tài)細(xì)胞感受態(tài)細(xì)胞重組表達(dá)載重組表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)體與感受態(tài)細(xì)胞混合胞混合感受感受態(tài)細(xì)胞吸收態(tài)細(xì)胞吸收D
23、NADNA分子分子35講課課件 四、目的基因的檢測與鑒定導(dǎo)入過程完成后，全部受體細(xì)胞都能攝導(dǎo)入過程完成后，全部受體細(xì)胞都能攝 入重組入重組DNADNA分子嗎？分子嗎？1 12 2目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞后，是否都能穩(wěn)定目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞后，是否都能穩(wěn)定維持和表達(dá)？維持和表達(dá)？36講課課件1、鑒定分子水平的鑒定轉(zhuǎn)基因生轉(zhuǎn)基因生物的物的DNA探針探針15151414方法方法 DNA分子雜交技術(shù)分子雜交技術(shù)37講課課件1、鑒定分子水平的鑒定方法方法 分子雜交技術(shù)分子雜交技術(shù)探針探針1515轉(zhuǎn)基因生物轉(zhuǎn)基因生物的的mRNA141438講課課件1、鑒定分子水平的鑒定提取提取蘇云金桿菌蘇云金桿菌Bt毒素蛋白
24、毒素蛋白將將Bt毒蛋白注毒蛋白注射小鼠體內(nèi)射小鼠體內(nèi)從小鼠血管抽出從小鼠血管抽出血液分離出抗血液分離出抗Bt毒素的抗體毒素的抗體抗體抗體蛋白質(zhì)蛋白質(zhì) 出現(xiàn)出現(xiàn)雜交帶雜交帶脫分化脫分化組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)39講課課件2、鑒定個體水平的鑒定抗蟲、抗病接種實驗，活性比較實驗抗蟲、抗病接種實驗，活性比較實驗例：用棉鈴飼喂棉例：用棉鈴飼喂棉鈴蟲，如蟲吃后不出現(xiàn)鈴蟲，如蟲吃后不出現(xiàn)中毒癥狀，說明未攝入中毒癥狀，說明未攝入目的基因或攝入目的基目的基因或攝入目的基因未表達(dá)。如蟲吃后中因未表達(dá)。如蟲吃后中毒死亡，則說明攝入了毒死亡，則說明攝入了抗蟲基因并得到表達(dá)?？瓜x基因并得到表達(dá)。40講課課件目的基因的檢測與鑒定
25、目的基因的檢測與鑒定檢測檢測導(dǎo)入檢測：目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞導(dǎo)入檢測：目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞方法方法 DNADNA分子雜交分子雜交表達(dá)檢測表達(dá)檢測轉(zhuǎn)錄檢測轉(zhuǎn)錄檢測分子雜交分子雜交翻譯檢測翻譯檢測抗原抗體抗原抗體雜交雜交分分子子檢檢測測法法鑒定鑒定抗蟲鑒定抗蟲鑒定抗病鑒定抗病鑒定活性鑒定等活性鑒定等個體水平的鑒定個體水平的鑒定41講課課件類類型型步驟步驟 檢測內(nèi)容檢測內(nèi)容方法方法結(jié)果顯示結(jié)果顯示分分子子檢檢測測第一第一步步目的基因是否進(jìn)目的基因是否進(jìn)入受體細(xì)胞入受體細(xì)胞DNADNA分子雜交分子雜交（DNADNA和和DNADNA之間）之間）是否成功顯示是否成功顯示出雜交帶出雜交帶第二第二步步目
26、的基因是否轉(zhuǎn)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出錄出mRNAmRNA分子雜交技術(shù)分子雜交技術(shù)（DNADNA和和mRNAmRNA之間）之間）是否成功顯示是否成功顯示出雜交帶出雜交帶第三第三步步目的基因是否翻目的基因是否翻譯出蛋白質(zhì)譯出蛋白質(zhì)抗原抗原抗體雜交抗體雜交是否成功顯示是否成功顯示出雜交帶出雜交帶個個體體水水平平鑒鑒定定 包括抗蟲、抗病的包括抗蟲、抗病的接種實驗接種實驗，以確定是否有抗性以及，以確定是否有抗性以及抗性的程度；抗性的程度；基因工程產(chǎn)品與天然產(chǎn)品的活性比較，以確定功能是基因工程產(chǎn)品與天然產(chǎn)品的活性比較，以確定功能是否相同等。否相同等。42講課課件課堂練習(xí)1 1、有關(guān)基因工程的敘述中，錯誤的是有關(guān)
27、基因工程的敘述中，錯誤的是()()A A、DNADNA連接酶將黏性末端的堿基對連接起來連接酶將黏性末端的堿基對連接起來 B B、限制性內(nèi)切酶用于目的基因的獲得、限制性內(nèi)切酶用于目的基因的獲得 C C、目的基因須由運(yùn)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞、目的基因須由運(yùn)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞 D D、人工合成目的基因不用限制性內(nèi)切酶、人工合成目的基因不用限制性內(nèi)切酶A43講課課件課堂練習(xí)【拓展深化拓展深化】只有第三步將目的基因?qū)胧苤挥械谌綄⒛康幕驅(qū)胧荏w細(xì)胞不需堿基互補(bǔ)配對，其余三個步驟都涉體細(xì)胞不需堿基互補(bǔ)配對，其余三個步驟都涉及堿基互補(bǔ)配對及堿基互補(bǔ)配對44講課課件課堂練習(xí)即時應(yīng)用即時應(yīng)用(隨學(xué)隨練，輕松奪冠隨學(xué)隨練，輕松奪冠)3(2009年高考浙江卷年高考浙江卷)下列關(guān)于基因工程的敘述，下列關(guān)于基因工程的敘述，錯誤的是錯誤的是()A目的基因和受體細(xì)胞均可來自動、植物或微生目的基因和受體細(xì)胞均可來自動、植物或微生物物B限制性核酸內(nèi)切酶和限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶是兩類常用的連接酶是兩類常用的工具酶工具酶C人胰島素原基因在大腸桿菌中表達(dá)的胰島素原人胰島素原基因在大腸桿菌中表達(dá)的胰島素原無生物活性無生物活性D載體上的抗性基因有利于篩選含重組載體上的抗性基因有利于篩選含重組DNA的細(xì)的細(xì)胞和促進(jìn)目的基因的表達(dá)胞和促進(jìn)目的基因的表達(dá)D D45講課課件
基因工程操作步驟【行業(yè)特制】
