2022高考生物大一輪復(fù)習(xí) 生物技術(shù)實踐 第2講 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用真題演練 新人教版選修1
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1、2022高考生物大一輪復(fù)習(xí) 生物技術(shù)實踐 第2講 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用真題演練 新人教版選修1 1.(2017年全國新課標(biāo)Ⅰ卷)某些土壤細(xì)菌可將尿素分解成CO2和NH3,供植物吸收和利用?;卮鹣铝袉栴}: (1)有些細(xì)菌能分解尿素,有些細(xì)菌則不能,原因是前者能產(chǎn)生__________。能分解尿素的細(xì)菌不能以尿素的分解產(chǎn)物CO2作為碳源,原因是__________________________,但可用葡萄糖作為碳源,進(jìn)入細(xì)菌體內(nèi)的葡萄糖的主要作用是___________________(答出兩點即可)。 (2)為了篩選可分解尿素的細(xì)菌,在配制培養(yǎng)基時,應(yīng)選擇________________
2、____(填“尿素”“NH4NO3”或“尿素+NH4NO3”)作為氮源,不選擇其他兩組的原因是___________________________________________________。 (3)用來篩選分解尿素細(xì)菌的培養(yǎng)基含有KH2PO4和Na2HPO4,其作用有__________________________________________________________(答出兩點即可)。 【答案】(1)脲酶 分解尿素的細(xì)菌是異養(yǎng)型生物,不能利用CO2來合成有機物 為細(xì)胞生命活動提供能量,為其他有機物的合成提供原料 (2)尿素 其他兩組都含有NH4NO3,能分解尿素的細(xì)
3、菌和不能分解尿素的細(xì)菌都能利用NH4NO3,不能起到篩選作用 (3)為細(xì)菌生長提供無機營養(yǎng),作為緩沖劑保持細(xì)胞生長過程中pH的穩(wěn)定 【解析】(1)能分解尿素的細(xì)菌體內(nèi)應(yīng)含有脲酶;能分解尿素的細(xì)菌是異養(yǎng)型生物,不能利用CO2來合成有機物,可用葡萄糖等有機物作為碳源。進(jìn)入細(xì)胞體內(nèi)的葡萄糖既可為細(xì)胞生命活動提供能量,又可作為合成其他物質(zhì)的原料。(2)分解尿素的細(xì)菌能以尿素作為氮源,但其他細(xì)菌不能。以NH4NO3為氮源的細(xì)菌有很多種。如果選用含有NH4NO3的其他兩組,會在培養(yǎng)基中長出以NH4NO3為氮源的雜菌,不能起到篩選作用。(3)KH2PO4和Na2HPO4為無機鹽,可以提供營養(yǎng)物質(zhì),并能維
4、持滲透壓,同時HPO和H2PO為一對緩沖對,所以可以維持細(xì)胞生長過程中pH的穩(wěn)定。 2.(2017年江蘇卷)苯酚及其衍生物廣泛存在于工業(yè)廢水中,對環(huán)境有嚴(yán)重危害。小明同學(xué)準(zhǔn)備依據(jù)下圖操作步驟,從處理廢水的活性污泥中分離篩選酚降解高效菌株。請回答下列問題: (1)酚降解菌富集培養(yǎng)基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水,其中可作為碳源的有________________________________。 (2)將采集到的樣品接種培養(yǎng),苯酚用量應(yīng)隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增加而逐漸________,以達(dá)到富集酚降解菌的目的。若上圖平板中菌落過于密集,應(yīng)進(jìn)一步________________,以便
5、于菌落計數(shù)與分離。制備平板培養(yǎng)基時除了需要水、營養(yǎng)物質(zhì)外,還必須添加________________________________________________________________________。 (3)下圖為連續(xù)劃線法示意圖,在圖中________(填圖中序號)區(qū)域更易獲得單菌落。 (4)采用比色測定法(使用苯酚顯色劑)檢測降解后的廢水中苯酚殘留量。先制作系列濃度梯度并進(jìn)行顯色反應(yīng),下表中第1~5號比色管的苯酚濃度應(yīng)分別為______________________。 管號 1 2 3 4 5 6 苯酚濃度/(mg·L-1) 1
6、 如果廢水為50 mg/L苯酚溶液,降解后約有21%的苯酚殘留,則需將殘留液稀釋______(填序號:①5?、?0?、?0)倍后,再進(jìn)行比色。 【答案】(1)蛋白胨、苯酚 (2)增加 稀釋涂布 凝固劑 (3)③ (4)0、0.2、0.4、0.6、0.8?、? 【解析】本題考查土壤微生物的分離及計數(shù)。(1)培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)一般都包括水、無機鹽、碳源、氮源,其中蛋白胨和苯酚中含有C元素,可作為碳源。(2)要富集該菌,應(yīng)提高營養(yǎng)物質(zhì)含量。若菌落過于密集,說明稀釋倍數(shù)太小,應(yīng)進(jìn)一步稀釋,然后再劃平板。制備固體培養(yǎng)基時需加入凝固劑瓊脂。(3)用平板劃線法接種菌體,隨劃線次數(shù)的增加,菌體數(shù)量逐
7、漸減少,故③區(qū)域更易獲得單菌落。(4)題中已給出6號比色管中的苯酚濃度為1 mg/L,根據(jù)濃度梯度的設(shè)計原則以及空白對照原則,1~5號比色管中的苯酚濃度應(yīng)依次為0 mg/L、0.2 mg/L、0.4 mg/L、0.6 mg/L、0.8 mg/L。若廢水中苯酚的濃度為50 mg/L,降解后約有21%的苯酚殘留,則降解后廢水中苯酚的濃度為50×21%=10.5(mg/L),因為比色管中苯酚的濃度范圍為0~1 mg/L,若將降解后的廢水稀釋5倍或10倍,則稀釋后廢水中苯酚的濃度均大于1 mg/L,若稀釋20倍,則稀釋后廢水中苯酚的濃度為0.525 mg/L,介于0~1 mg/L之間,故需將降解后的廢
8、水稀釋20倍后再進(jìn)行比色。 3.(2016年全國新課標(biāo)Ⅰ卷)空氣中的微生物在重力等作用下,可以一定程度地沉降。某研究小組欲用平板收集教室空氣中的微生物,以了解教室內(nèi)不同高度空氣中微生物的分布情況。實驗步驟如下: ①配制培養(yǎng)基(成分:牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O); ②制作無菌平板; ③設(shè)置空白對照組和若干實驗組,進(jìn)行相關(guān)操作; ④將各組平板置于37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)一段時間,統(tǒng)計各組平板上菌落的平均數(shù)。 回答下列問題: (1)該培養(yǎng)基中微生物所需的氮來源于__________________________________。若要完成步驟②,該培養(yǎng)基中的成分X通常是__
9、______________。 (2)步驟③中,實驗組的操作是_____________________________________________ ________________________________________________________________________。 (3)若在某次調(diào)查中,某一實驗組平板上菌落平均數(shù)為36個/平板,而空白對照組的一個平板上出現(xiàn)了6個菌落,這種結(jié)果說明在此次調(diào)查中出現(xiàn)了_____________現(xiàn)象。若將30(即36-6)個/平板作為本組菌落數(shù)的平均值,該做法__________(填“正確”或“不正確”)。 【答案】(1)
10、牛肉膏、蛋白胨 瓊脂 (2)將各實驗組平板分別放置在教室不同高度的位置上,開蓋暴露一段時間 (3)污染 不正確 【解析】(1)牛肉膏和蛋白胨都含有蛋白質(zhì)的水解產(chǎn)物,都可以作為氮源;平板為固體培養(yǎng)基,故需要加入凝固劑瓊脂。(2)實驗探究的是教室內(nèi)“不同高度空氣”中微生物的分布,其中自變量為不同高度,故需在不同高度下放置開蓋平板。同時,為了保證單一變量,需要保證開蓋放置的時間一致。為了保證實驗的可靠性,需要設(shè)置多個平行組。(3)在完全正確的操作情況下,空白對照組中不應(yīng)出現(xiàn)菌落。若出現(xiàn)菌落,則表明操作過程中存在雜菌污染的現(xiàn)象,屬于實驗失誤,所有實驗數(shù)據(jù)均不應(yīng)采用。 4.(2016年全國新課標(biāo)
11、Ⅲ卷)某同學(xué)用新鮮的泡菜濾液為實驗材料分離純化乳酸菌。分離純化所用固體培養(yǎng)基中因含有碳酸鈣而不透明,乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣?;卮鹣铝袉栴}: (1)分離純化乳酸菌時,首先需要用__________________________________________對泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋,進(jìn)行梯度稀釋的理由是____________________________________。 (2)推測在分離純化所用的培養(yǎng)基中加入碳酸鈣的作用有________________和________________。分離純化時應(yīng)挑選出______________的菌落作為候選菌。 (3)乳酸菌在
12、-20 ℃長期保存時,菌液中常需要加入一定量的_________(填“蒸餾水”“甘油”或“碳酸鈣”)。 【答案】(1)無菌水 泡菜濾液中乳酸菌的濃度高,直接培養(yǎng)很難分離得到單菌落 (2)鑒別乳酸菌 中和產(chǎn)生的乳酸(或酸) 具有透明圈 (3)甘油 【解析】(1)分離純化乳酸菌過程中,需要在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)乳酸菌并得到單菌落。由于泡菜濾液中菌的濃度高,直接培養(yǎng)很難分離得到單菌落,故分離純化乳酸菌時,首先需要用無菌水對泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋。(2)由于乳酸菌代謝產(chǎn)生的乳酸可以溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣,形成透明圈,故培養(yǎng)基中加入碳酸鈣可用于鑒別乳酸菌,同時碳酸鈣也可以中和乳酸菌產(chǎn)生的乳酸。(3)乳酸
13、菌在-20 ℃長期保存時,菌液中需要加入一定量的甘油,加甘油是為了避免水結(jié)冰產(chǎn)生冰晶損傷細(xì)胞。 5.(2016年四川卷)圖甲是從土壤中篩選產(chǎn)脲酶細(xì)菌的過程,圖乙是脲酶基因轉(zhuǎn)錄的mRNA部分序列。 (1)圖中選擇培養(yǎng)基應(yīng)以________作為唯一氮源;鑒別培養(yǎng)基還需添加________作指示劑,產(chǎn)脲酶細(xì)菌在該培養(yǎng)基上生長一段時間后,其菌落周圍的指示劑將變成________色。 (2)在5個細(xì)菌培養(yǎng)基平板上,均接種稀釋倍數(shù)為105的土壤樣品液0.1 mL,培養(yǎng)一段時間后,平板上長出的細(xì)菌菌落數(shù)分別為13、156、462、178和191。該過程采取的接種方法是_____________
14、_,每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)量為______×108個;與血細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)法相比,此計數(shù)方法測得的細(xì)菌數(shù)較________。 (3)現(xiàn)有一菌株的脲酶由于基因突變而失活,突變后基因轉(zhuǎn)錄的mRNA在圖乙箭頭所示位置增加了70個核苷酸,使圖乙序列中出現(xiàn)終止密碼(終止密碼有UAG、UGA和UAA)。突變基因轉(zhuǎn)錄的mRNA中,終止密碼為________,突變基因表達(dá)的蛋白質(zhì)含____個氨基酸。 【答案】(1)尿素 酚紅 紅 (2)稀釋涂布平板法 1.75 少 (3)UGA 115 【解析】(1)脲酶能夠催化尿素分解為氨,故圖中選擇培養(yǎng)基應(yīng)以尿素作為唯一氮源。由于尿素被分解成氨,氨會使培養(yǎng)基的堿性
15、增強,pH升高,使酚紅指示劑變紅色。(2)用于計數(shù)細(xì)菌菌落數(shù)的接種方法是稀釋涂布平板法,統(tǒng)計的菌落數(shù)應(yīng)介于30~300之間,故選擇細(xì)菌菌落數(shù)為156、178和191的平板計數(shù),每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)量為(156+178+191)÷3÷0.1×105=1.75×108(個)。由于兩個或多個細(xì)菌連接在一起時,往往統(tǒng)計的是一個菌落,故用此方法測得的細(xì)菌數(shù)偏少。(3)密碼子由三個相鄰的堿基組成,271個堿基和后面2個堿基一起共構(gòu)成91個密碼子,插入的70個核苷酸和后面2個堿基一起共構(gòu)成24個密碼子,緊隨其后的是UGA,應(yīng)為終止密碼,翻譯結(jié)束,因此突變基因表達(dá)的蛋白質(zhì)含115個氨基酸。 6.(2015
16、年全國新課標(biāo)Ⅰ卷)已知微生物A可以產(chǎn)生油脂,微生物B可以產(chǎn)生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生產(chǎn)。回答有關(guān)問題: (1)顯微觀察時,微生物A菌體中的油脂通常可用________染色。微生物A產(chǎn)生的油脂不易揮發(fā),可選用__________(填“萃取法”或“水蒸氣蒸餾法”)從菌體中提取。 (2)為了從自然界中獲得能產(chǎn)生脂肪酶的微生物B的單菌落,可從含有油料作物種子腐爛物的土壤中取樣,并應(yīng)選用以__________為碳源的固體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。 (3)若要測定培養(yǎng)液中微生物B的菌體數(shù),可在顯微鏡下用________________直接計數(shù);若要測定其活菌數(shù)量,可選用_____________
17、_法進(jìn)行計數(shù)。 (4)為了確定微生物B產(chǎn)生脂肪酶的最適溫度,某同學(xué)測得相同時間內(nèi),在35 ℃、40 ℃、45 ℃溫度下降解10 g油脂所需酶量依次為4 mg、1 mg、6 mg,則上述三個溫度中,__________℃條件下該酶活力最小。為了進(jìn)一步確定該酶的最適溫度,應(yīng)圍繞________℃設(shè)計后續(xù)實驗。 【答案】(1)蘇丹Ⅲ(或蘇丹Ⅳ) 萃取法 (2)油脂 (3)血細(xì)胞計數(shù)板 稀釋涂布平板 (4)45 40 【解析】本題主要考查了植物油脂的染色和提取方法、選擇培養(yǎng)基的配制、微生物的計數(shù)以及確定酶的最適溫度的實驗設(shè)計等。(1)脂肪可用蘇丹Ⅲ(或蘇丹Ⅳ)染液進(jìn)行染色。微生物A產(chǎn)生的油脂不
18、易揮發(fā),不能用水蒸氣蒸餾法提取,應(yīng)用萃取法加以提取。(2)能產(chǎn)生脂肪酶的微生物B可存在于含有油料作物種子的腐爛物的土壤中,為了選擇培養(yǎng),固體培養(yǎng)基上應(yīng)以油脂作為唯一碳源。(3)測定培養(yǎng)液中的微生物的菌體數(shù),可在顯微鏡下用血細(xì)胞計數(shù)板直接計數(shù);若要測定活菌數(shù),則可利用稀釋涂布平板法進(jìn)行計數(shù)。(4)酶量需要最多的溫度下,其酶活力最小,即酶活力最小的溫度應(yīng)為45 ℃。三個溫度下酶活力最大的溫度是40 ℃,但40 ℃不一定是該酶的最適溫度,故為了確定酶的最適溫度應(yīng)圍繞40 ℃設(shè)計后續(xù)實驗。 7.(2014年全國新課標(biāo)Ⅰ卷)植物秸稈中的纖維素可被某些微生物分解?;卮鹣铝袉栴}: (1)分解秸稈中纖維素
19、的微生物能分泌纖維素酶,該酶是由3種組分組成的復(fù)合酶,其中的葡萄糖苷酶可將__________分解成____________。 (2)在含纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅(CR)時,CR可與纖維素形成________色復(fù)合物。用含有CR的該種培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時,培養(yǎng)基上會出現(xiàn)以該菌的菌落為中心的________。 (3)為從富含纖維素的土壤中分離獲得纖維素分解菌的單菌落,某同學(xué)設(shè)計了甲、乙兩種培養(yǎng)基(成分見下表): 培養(yǎng)基 酵母膏 無機鹽 淀粉 纖維素粉 瓊脂 CR溶液 水 甲 + + + + - + + 乙 + + + - + + + 注
20、:“+”表示有,“-”表示無。 據(jù)表判斷,培養(yǎng)基甲________(填“能”或“不能”)用于分離和鑒別纖維素分解菌,原因是________________________________________;培養(yǎng)基乙________(填“能”或“不能”)用于分離和鑒別纖維素分解菌,原因是__________________________________。 【答案】(1)纖維二糖 葡萄糖 (2)紅 透明圈 (3)不能 液體培養(yǎng)基不能用于分離單菌落 不能 培養(yǎng)基中沒有纖維素,不會形成CR—纖維素紅色復(fù)合物,即使出現(xiàn)單菌落也不能確定其為纖維素分解菌 【解析】(1)纖維素酶是一種復(fù)合酶,一般認(rèn)為
21、它至少包括三種組分:C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶,前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖,葡萄糖苷酶將纖維二糖分解成葡萄糖。(2)剛果紅可與纖維素形成紅色復(fù)合物,但并不與水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。用含有剛果紅的纖維素培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時,由于纖維素被分解,紅色復(fù)合物無法形成,培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌的菌落為中心的透明圈。(3)培養(yǎng)基甲未使用瓊脂,為液體培養(yǎng)基,不能用于分離單菌落。含有纖維素和剛果紅(CR)的培養(yǎng)基可分離和鑒別纖維素分解菌。 8.(2014年全國新課標(biāo)Ⅱ卷)為了調(diào)查某河流的水質(zhì)狀況,某研究小組測定了該河流水樣中的細(xì)菌含量,并進(jìn)行了細(xì)菌分離等工作。回答下列問題: (1
22、)該小組采用稀釋涂布平板法檢測水樣中的細(xì)菌含量。在涂布接種前,隨機取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時間,這樣做的目的是______________________________;然后,將1 mL水樣稀釋100倍,在3個平板上用涂布法分別接入0.1 mL稀釋液;經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后,3個平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為__________個。 (2)該小組采用平板劃線法分離水樣中的細(xì)菌。操作時,接種環(huán)通過______滅菌,在第二次及以后的劃線時,總是從上一次劃線的末端開始劃線。這樣做的目的是___________________________________
23、_____________________________________。 (3)下圖A和B中,________表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。 (4)該小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻,一部分進(jìn)行靜置培養(yǎng),另一部分進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn):振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長速度快。分析其原因是:振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中____________的含量,同時可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸,提高_(dá)_____________的利用率。 【答案】(1)檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格 3.8×107 (2)灼燒 將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個菌落 (3)B (4)溶解氧 營養(yǎng)物
24、質(zhì) 【解析】(1)取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)一段時間,可依據(jù)是否產(chǎn)生菌落確定培養(yǎng)基的滅菌效果是否合格。由樣品中菌株數(shù)計算公式(C÷V)×M知:1 mL水樣中菌株數(shù)為(38÷0.1)×100=3.8×104(個),故每升水樣中的活菌數(shù)為3.8×107(個)。(2)利用接種環(huán)接種時,接種環(huán)需灼燒滅菌。利用平板劃線法分離細(xì)菌時,在第二次及以后劃線時,總是從上一次劃線的末端開始,可以將聚集的菌體逐步稀釋以便得到單個菌落。(3)稀釋涂布平板法是用涂布器將菌液均勻涂布在培養(yǎng)基表面,故培養(yǎng)后產(chǎn)生的菌落應(yīng)隨機分布在培養(yǎng)基表面,即B表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。(4)液體培養(yǎng)基通過振蕩可提
25、高溶氧量,同時使菌體與營養(yǎng)物質(zhì)充分接觸,提高營養(yǎng)物質(zhì)的利用率,從而提高細(xì)菌的生長速率。 9.(2014年四川卷)有機農(nóng)藥苯磺隆是一種除草劑,長期使用會污染環(huán)境。研究發(fā)現(xiàn),苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分離降解苯磺隆的菌株和探索其降解機制的實驗過程如圖甲、乙所示。 (1)微生物生長繁殖所需的主要營養(yǎng)物質(zhì)有碳源、水、________________四類,該實驗所用的選擇培養(yǎng)基只能以苯磺隆作為唯一碳源,其原因是_____________________________________。 (2)與微生物培養(yǎng)基相比,植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基常需添加生長素和________________,這些植
26、物激素一般需要事先單獨配制成________________保存?zhèn)溆谩? (3)純化菌株時,通常使用的劃線工具是___________________________________。 劃線的某個平板培養(yǎng)后,第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長滿了菌,第二劃線區(qū)域所劃的第一條線上無菌落,其他劃線上有菌落。造成劃線無菌落可能的操作失誤有________________________________________________________________________ __________________________________________________________
27、______________。 (4)為探究苯磺隆的降解機制,將該菌種的培養(yǎng)液過濾離心,取上清液做圖乙所示實驗。該實驗的假設(shè)是________________________________________________________, 該實驗設(shè)計是否合理?為什么? ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 【答案】(1)氮源和無機
28、鹽 只有能利用苯磺隆的微生物能正常生長繁殖 (2)細(xì)胞分裂素 母液 (3)接種環(huán) 接種環(huán)灼燒后未冷卻;劃線未從第一區(qū)域末端開始 (4)目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白質(zhì) 不合理,缺少空白對照 【解析】(1)微生物生長繁殖所需的主要營養(yǎng)物質(zhì)包括水、碳源、氮源和無機鹽;在培養(yǎng)基中加入苯磺隆作為唯一碳源,可將只能利用此碳源的菌種篩選出來。(3)純化菌株時,通常用接種環(huán)進(jìn)行劃線操作;第二區(qū)域劃第一條線時,接種環(huán)灼燒后未冷卻,致使所劃第一條線上無菌落,或若第二次劃線未從第一區(qū)域末端開始,則也會導(dǎo)致第二劃線區(qū)域第一條線上無菌落。(4)由圖乙可知本實驗的目的是探究能降解苯磺隆的物質(zhì)是否是該菌種所產(chǎn)生的蛋白質(zhì)。為使實驗設(shè)計更合理還需再設(shè)置一個對照組,將蛋白酶溶液改為等量的蒸餾水,其余設(shè)置不變。
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