《畢業(yè)答辯模板》PPT課件

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1、LOGO江香薷乙酸乙酯提取物對 -葡萄糖苷酶的抑制作用n班級：n 學生：xxxn 學 號：n指導 教 師： 概 述 江 香 薷 江 香 薷 (Mosla chinensis Maxmi . cv. jiangxiangru CV. nov. )為 唇 形 科 一 年 生 草 本 植 物 , 以 干 燥 地 上 部 分 入 藥 , 用 于 暑 濕 感 冒 、 惡 寒 發(fā) 熱 、頭 痛 無 汗 、 腹 痛 吐 瀉 、 小 便 不 利 、 水 腫 等 癥 , 是 江西 省 的 地 道 藥 材 之 一 , 主 產(chǎn) 于 江 西 省 新 余 市 渝 水 區(qū)、 分 宜 縣 等 地 。 但 目 前 的 研 究

2、 大 部 分 集 中 在 江 香薷 揮 發(fā) 油 總 成 分 的 抗 菌 、 抗 炎 、 抗 病 毒 、 對 神 經(jīng)系 統(tǒng) 的 抑 制 作 用 等 ， 而 對 于 非 揮 發(fā) 性 成 分 尤 其 是多 糖 及 黃 酮 類 化 合 物 這 些 具 有 廣 泛 生 物 活 性 的 物質(zhì) 的 研 究 很 少 。 因 此 ， 我 們 認 為 ， 從 江 香 薷 的 非揮 發(fā) 性 成 分 中 分 離 出 新 的 生 物 活 性 物 質(zhì) 并 深 入 研究 其 生 物 活 性 作 用 具 有 重 要 的 研 究 意 義 。 實 驗 材 料材 料 ： 江 香 薷 購 自 江 西 省 南 昌 市 黃 慶 仁 棧

3、華 氏 大 藥 房 。u 試 劑 ： -葡 萄 糖 苷 酶 (-G lucosidase)； 4-硝 基 苯 -D-吡 喃 葡 萄 糖 苷 (4-N- trophenyl-D-glucopyranosodide， pNPG )及 還 原 型 谷 胱 甘 肽 均 系 美 國Sigma公 司 產(chǎn) 品 ； 拜 唐 蘋 （ 阿 卡 波 糖 ， 每 片 含 50mg） ， 拜 耳 醫(yī) 藥 保 健 有 限公 司 ； PH 7.4磷 酸 鹽 緩 沖 液 （ Na2H PO412H 2O、 NaH 2PO42H 2O） ； 無 水碳 酸 鈉 （ Na 2CO3） ； 二 甲 亞 砜 (DMSO)； 無 水 乙

4、 醇 ； 石 油 醚 ； 乙 酸 乙 酯 ；正 丁 醇 及 超 純 水 均 為 國 產(chǎn) 分 析 純 。u 儀 器 ： Uv-2550紫 外 分 光 光 度 計 （ 日 本 島 津 公 司 ） ， 智 能 恒 溫 電 熱 套 及 加熱 回 流 裝 置 ； RE-52A旋 轉(zhuǎn) 蒸 發(fā) 儀 ； 分 液 漏 斗 ； 圓 底 燒 瓶 ； sarorius BP211D電 子 天 平 ； JJ200精 密 電 子 天 平 ； H H -4數(shù) 顯 恒 溫 水 浴 箱 ； 各 種 規(guī)格 移 液 器 及 槍 頭 ； KQ-300DE型 數(shù) 控 超 聲 波 清 洗 器 ； JC101型 電 鼓 風 干 燥箱 ；

5、凍 干 機 等 。 實 驗 流 程提 取濃 縮萃 取測 定凍 干 將 乙 酸 乙 酯 萃 取 液 濃縮 后 進 行 冷 凍 干 燥分 別 用 石 油 醚 、 乙 酸乙 酯 、 正 丁 醇 萃 取用 10倍 量 80%乙醇 、 水 各 提 取 2小 時用 旋 轉(zhuǎn) 蒸 發(fā) 儀 濃 縮至 100200ml測 定 乙 酸 乙 酯 提 取 物 對 -葡 萄 糖 苷 酶 抑 制 作 用 實 驗 方 案u江 香 薷 提 取 物 抑 制 -葡 萄 糖 苷 酶 的 純 酶 活 性 測 定1. 方 案 原 理 ： 在 適 宜 的 條 件 下 ， 底 物 pNPG 在 -葡 萄 糖 苷 酶 的催 化 作 用 下 生

6、 成 pNP和 葡 萄 糖 ， 可 表 示 為 : pNP-G lu -G lucosidase pNP + 葡 萄 糖 其 中 pNP在 410nm下 有 特 征 吸 收 峰 ， 而 pNPG 、 葡 萄 糖 在410nm下 的 紫 外 吸 收 很 小 ， 對 結(jié) 果 影 響 可 以 忽 略 不 計 。通 過 酶 與 底 物 反 應 進 行 實 驗 ， 對 -葡 萄 糖 苷 酶 與 底 物 反 應 的 底物 濃 度 與 反 應 時 間 進 行 優(yōu) 化 。江 香 薷 提 取 物 抑 酶 活 性 篩 選 方 案 （ 1） 測 定 江 香 薷 石 油 醚 提 取 物 及 萃 取 剩 余 物 各 需

7、 五 支 微 型離 心 管 ， 分 別 為 A管 、 B管 、 C管 、 D 管 、 E管 （ 2） 各 管 作 用 如 下 ： A管B管E管C管D管 江 香 薷 提 取 物 測 定 管陽 性 對 照 管調(diào) 零 管測 定 提 取 物 吸 光 度未 被 抑 制 酶 活 性 反 應 管 測 定 方 法磷 酸 鉀 緩 沖 液 谷 胱 甘 肽 溶 液 +相 應 提 取 液-葡 萄 糖 苷 酶 溶 液 磷 酸 鉀 緩 沖 液 谷 胱 甘 肽 溶 液 +蒸 餾 水 -葡 萄 糖 苷 酶 溶 液 磷 酸 鉀 緩 沖 液 谷 胱 甘 肽 溶 液 +蒸 餾 水 -葡 萄 糖 苷 酶 溶 液 磷 酸 鉀 緩 沖

8、液 谷 胱 甘 肽 溶 液 +阿 卡 波 糖 -葡 萄 糖 苷 酶 溶 液 磷 酸 鉀 緩 沖 液 谷 胱 甘 肽 溶 液 +相 應 提 取 液-葡 萄 糖 苷 酶 溶 液 加 入 PNPG反 應 10min加 入 Na2CO3溶 液 終 止 反 應 A管B管C管D管E管加 入 PNPG反 應 10min 加 入 PNPG反 應 10min加 入 Na2CO3溶 液 終 止 反 應加 入 Na2CO3溶 液 終 止 反 應加 入 Na2CO3溶 液 終 止 反 應加 入 蒸 餾 水 反 應 10min加 入 Na2CO3溶 液 終 止 反 應加 入 蒸 餾 水 反 應 10min 結(jié) 果 與

9、討 論u實驗條件優(yōu)化結(jié)果（1）底物濃度優(yōu)化 -葡萄糖苷酶與底物反應對底物濃度進行優(yōu)化的結(jié)果見表1與圖1。底 物 濃 度 吸 光 度 1 吸 光 度 2 吸 光 度 3 平 均 值0.020mg/mL 0.095 0.095 0.105 0.098 0.050mg/mL 0.209 0.209 0.207 0.208 0.100mg/mL 0.313 0.316 0.314 0.314 0.200mg/mL 0.565 0.566 0.563 0.565 0.500mg/mL 1.402 1.392 1.403 1.399 表 1 圖 1 （ 2） 反 應 時 間 優(yōu) 化 -葡 萄 糖 苷 酶

10、與 底 物 反 應 對 反 應 時 間 進 行 優(yōu) 化 的 結(jié) 果 見 表2與 圖 2。時 間 吸 光 度1 吸 光 度2 吸 光 度3 平 均 值5 min 0.363 0.369 0.367 0.366 10 min 0.483 0.491 0.498 0.491 15 min 0.328 0.326 0.332 0.329 20 min 0.442 0.432 0.438 0.437 25 min 0.335 0.357 0.361 0.351 30 min 0.380 0.390 0.394 0.388 表 2 圖 2 由以上實驗確定最佳底物濃度確定為為0.200mg/mL ；最佳反應

11、時間確定為10min 。 u江 香 薷 提 取 物 抑 酶 活 性 篩 選 結(jié) 果 根 據(jù) 優(yōu) 化 結(jié) 果 進 行 實 驗 。 E管 （ 酶 +底 物 ） pNP吸 光 度 平 均 值 為 0.63； 在 平 行 條件 下 測 得 陽 性 對 照 阿 卡 波 糖 在 濃 度 為 5.0mg/mL時 抑 制 率 為47.51%。 -葡 萄 糖 苷 酶 抑 制 率 計 算 公 式 如 下 : 酶 活 性 抑 制 率 =AE-(AA-AC)/AE 100%采 用 幾 個 濃 度 梯 度 測 定 乙 酸 乙 酯 萃 取 組 分 對 -葡 萄 糖 苷 酶的 體 外 抑 制 活 性 ， 各 萃 取 組 分

12、 在 各 濃 度 下 對 -葡 萄 糖 苷酶 的 體 外 抑 制 活 性 見 表 3。 根 據(jù) 表 3作 圖 ， 得 圖 3。 濃 度 管 號 吸 光 度 1 吸 光 度 2 吸 光 度 3 平 均 值 A-C差 值 抑 制 率8mg/mL A 1.556 1.555 1.557 1.556 -0.053 108.41%C 1.61 1.607 1.61 1.609 4mg/mL A 0.926 0.928 0.929 0.928 0.212 66.30%C 0.713 0.718 0.715 0.715 2mg/mL A 0.823 0.825 0.825 0.824 0.452 28.31

13、%C 0.373 0.372 0.373 0.373 1mg/mL A 0.735 0.735 0.732 0.734 0.536 14.87%C 0.198 0.198 0.197 0.198 0.5mg/mL A 0.672 0.675 0.676 0.674 0.561 11.01%C 0.115 0.116 0.11 0.114 表 3 圖 3 實 驗 結(jié) 果 表 明 ， 江 香 薷 乙 酸 乙 酯 提 取 物 具 有 較 高 的 抑 制 活 性 ，濃 度 為 4.0mg/mL呈 現(xiàn) 66.30%的 抑 制 率 ， 濃 度 為 8.0mg/mL呈 現(xiàn) 108.41%的 抑 制 率 ，

14、強 于 陽 性 對 照 市 售 -葡 萄 糖 苷 酶 抑 制 劑 阿 卡波 糖 （ 濃 度 5.0mg/mL抑 制 率 為 47.51%） ， 濃 度 2.0mg/mL時 具有 較 好 的 抑 制 活 性 ， 但 其 抑 制 率 已 經(jīng) 低 于 陽 性 對 照 市 售 -葡 萄糖 苷 酶 抑 制 劑 阿 卡 波 糖 。 u大 學 本 科 的 學 習 生 活 即 將 結(jié) 束 。 在 此 ， 我要 感 謝 所 有 曾 經(jīng) 教 導 過 我 的 老 師 和 關(guān) 心 過我 的 同 學 ， 他 們 在 我 成 長 過 程 中 給 予 了 我很 大 的 幫 助 。 本 文 能 夠 順 利 完 成 ， 要 特 別感 謝 我 的 指 導 老 師 xxx老 師 和 xx副 教 授 ，感 謝 各 位 系 的 老 師 的 關(guān) 心 和 幫 助 。u最 后 向 所 有 關(guān) 心 和 幫 助 過 我 的 人 表 示 真 心的 感 謝 。致 謝