《環(huán)境微生物學(xué)》和《大氣污染控制工程》實(shí)驗(yàn)教案共39頁

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1、三、 環(huán)境微生物學(xué)和大氣污染控制工程部分實(shí)驗(yàn)一 水中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定一、目的要求l 學(xué)習(xí)水樣的采取方法和水樣細(xì)菌總數(shù)測(cè)定的方法。2了解水源水的平板菌落計(jì)數(shù)的原則。二、基本原理本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用平板菌落計(jì)數(shù)技術(shù)測(cè)定水中細(xì)菌總數(shù)。由于水中細(xì)菌種類繁多，它們對(duì)營養(yǎng)和其他生長(zhǎng)條件的要求差別很大， 不可能找到一種培養(yǎng)基在一種條件下， 使水中所有的細(xì)菌均能生長(zhǎng)繁殖， 因此， 以一定的培養(yǎng)基平板上生長(zhǎng)出來的菌落， 計(jì)算出來的水中細(xì)菌總數(shù)僅是一種近似值。 目前一般是采用普通肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基。三、器材l 培養(yǎng)基：肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，無菌水。2 . 儀器或其他用具：滅菌三角燒瓶，滅菌的帶玻璃塞瓶，滅菌培養(yǎng)皿，滅菌吸管

2、，滅菌試管等。3 .玻璃器皿的洗滌和滅菌3.1 玻璃器皿的洗滌新購置的玻璃器皿，因含游離堿，應(yīng)先在此2%a酸中浸泡數(shù)小時(shí)，用自來水沖洗干凈，再用蒸餾水沖洗1-2 次并瀝干。培養(yǎng)細(xì)菌的玻璃器皿， 應(yīng)先經(jīng)高壓蒸汽滅菌， 趁熱倒出培養(yǎng)基， 用熱肥皂水或洗滌劑洗刷殘漬，再用清水沖洗干凈，最后用蒸餾水沖洗1-2 次，瀝干。洗滌劑吸管量，可先置3豚蘇液內(nèi)浸30min或高壓政策蒸汽滅菌，再用洗滌劑洗滌，用清水及蒸餾水沖洗干凈。洗滌染色瓶時(shí)，可在5%g白粉中浸泡24h后，再用常規(guī)方法洗滌干凈。含油脂的玻璃器皿，應(yīng)單獨(dú)高壓滅菌洗滌，趁熱倒出污物，置 100c干燥箱內(nèi)烘 0.5h ，再放入5%碳酸氫鈉水中煮沸，先

3、去脂再行常規(guī)洗滌。3.2 玻璃器皿的滅菌（ 1）高壓蒸汽滅菌這是應(yīng)用研究最廣泛的滅菌方法， 滅菌是用高壓蒸汽滅菌鍋進(jìn)行。 手提式高壓蒸汽滅菌器，使用方便，其操作方法主注意事項(xiàng)如下：打開鍋蓋或從加入口處向鍋內(nèi)加入適量的水。加水后，將待滅菌器皿放入鍋內(nèi)，不要塞得過緊，以使鍋內(nèi)溫度均勻，再 將鍋蓋蓋好，擰緊螺旋，使其密封。打開放氣閥， 打開熱源加熱至水沸騰， 讓鍋內(nèi)冷空氣充分逸出。 否則鍋內(nèi)溫度達(dá)不到壓力表所指示的對(duì)應(yīng)溫度，滅菌不徹底。當(dāng)冷空氣由排氣孔排盡后，再關(guān)緊放氣活塞。等鍋內(nèi)蒸汽壓上升至所需壓力時(shí)，控制熱源，維持所需時(shí)間，一般為 0.10343MPa(121C)表壓，保持 20min。滅菌完畢

4、，關(guān)閉熱源，必須待壓力自然降至“0”時(shí)，方可啟蓋取出滅菌物品，否則易發(fā)生危險(xiǎn)。( 2)干熱滅菌實(shí)驗(yàn)室中常用的還有熱空氣滅菌的方法， 即將洗干凈的待滅菌器皿均勻放入恒溫干燥箱內(nèi)，便不得與內(nèi)層底板直接接觸。關(guān)閉箱門，開戶電源開關(guān)，用恒溫調(diào)節(jié)器，使溫度上升至160-170 C,維持2h,即可達(dá)到滅菌目的。滅菌完畢后，需關(guān)閉電源開關(guān)，待溫度降至50以下時(shí)，方可開門取物，否則玻璃器皿可因驟冷而爆裂。4. 培養(yǎng)基的制備配制一般培養(yǎng)基的主要程序可分為：調(diào)配、溶化、調(diào)節(jié)Ph、澄清過濾、分裝、滅菌、鑒定等步驟。調(diào)配：按培養(yǎng)基配方準(zhǔn)確稱取各成分，用少量水溶解。對(duì)于肉膏之類粘、膠狀物，可盛在小燒杯或表面皿中稱量，然

5、后加水移入培養(yǎng)基中。此外，也可放在稱量紙上稱量后直接放入水中， 這時(shí)如稍微加熱， 肉膏便會(huì)與稱量紙分離， 然后立即取出紙片。 蛋白胨等極易吸潮物質(zhì)， 在稱取時(shí)動(dòng)作要迅速。 此外， 維生素、氨基酸、 無機(jī)鹽等微量成分， 可預(yù)先配制高深度的貯備液， 在配制培養(yǎng)基過程中再按配方比例取一定量加入培養(yǎng)液中即可。融化：將各成分混勻于水中，最好以流通蒸汽融化0.5h,如在電爐上融化應(yīng)隨時(shí)攪拌，如有瓊脂成分時(shí)，應(yīng)注意防止外溢。融化后，應(yīng)注意補(bǔ)充失去的水分，補(bǔ)足至原體積。制備大量培養(yǎng)基時(shí)，除玻璃器皿外，還可用搪瓷桶、鋁鍋等容器加熱融化，但不可用鍋或鐵鍋，以免金屬離子進(jìn)入培養(yǎng)基中影響細(xì)菌生長(zhǎng)。調(diào)節(jié)pH值：一般細(xì)菌

6、用的培養(yǎng)pH調(diào)整在6.8-7.2之間，但也有需要酸性 或堿性的培養(yǎng)基。 培養(yǎng)基高壓滅菌后， 壓滅菌后，pH值約降低0.1-0.2 ,故調(diào)節(jié)時(shí)應(yīng)比實(shí)際 需要的pH值高0.1-0.2。但有時(shí)也可降低0.4,因所使用的滅菌器不同而不同。 調(diào)節(jié)pH值，用鹽酸和氫氧化鈉，因?yàn)樵谙嗤琾H值下，有機(jī)酸比無機(jī)更易抑制微 生物生長(zhǎng)，因此，除非特殊情況，最好不要用乙酸等有機(jī)酸來調(diào)節(jié)pH值。一般用精密pH試紙調(diào)節(jié)（精確到0.1pH單位），必要時(shí)也可酸度計(jì)。調(diào)節(jié)時(shí)需注意 逐步滴加，勿使過酸或過堿而破壞培養(yǎng)基中某些組分。過濾澄清：培養(yǎng)基配成后，一般都有沉渣或混濁，需過濾，使其清晰透明 方可使用。 液態(tài)培養(yǎng)基常用濾紙過濾

7、； 固態(tài)培養(yǎng)基如瓊脂培養(yǎng)基， 加熱后需趁熱 用脫脂棉或多層紗布過濾。分裝：將調(diào)節(jié)pH值后的培養(yǎng)基按需要趁熱分裝于三角瓶或試管內(nèi)，以免瓊脂冷凝。分裝量不宜超過容器的 2/3 ，以免滅菌時(shí)外溢。分裝時(shí)應(yīng)注意勿使培 養(yǎng)基粘附于管口與瓶口部位，以免沾染棉塞而滋生雜菌?；A(chǔ)培養(yǎng)基一般常分裝于三角瓶?jī)?nèi)，分裝的量應(yīng)根據(jù)使用目的和要求決定，但必須定量分裝，以便滅菌后使用。瓊脂斜面分裝量為試管容量的 1/5 ，滅菌后須趁熱放置成斜面，斜面長(zhǎng)度約為試管長(zhǎng)度的 2/3 。半固體培養(yǎng)基分裝量約占試管長(zhǎng)度的 1/3 ，滅菌后趁熱直立，待冷卻凝固。高層瓊脂分裝量約為試管長(zhǎng)度的 1/3 ，滅菌后直立凝固待用。瓊脂平板是將滅

8、菌后的培養(yǎng)基，冷卻至50左右，在無菌條件下傾入滅菌平皿內(nèi)。內(nèi)徑9cm的平皿傾注培養(yǎng)基約15ml左右，使培養(yǎng)基平鋪于皿底部，凝 固后即成。 傾注培養(yǎng)基時(shí)， 切勿將皿蓋全部啟開， 以免空氣中塵埃及細(xì)菌落入。新制成的培養(yǎng)平板， 表面水分較多， 不利于細(xì)菌的分離， 通常應(yīng)將平皿倒扣 置于37c培養(yǎng)多!內(nèi)約30min,待平板干燥后使用。滅菌：加熱配制培養(yǎng)基后，在 2h內(nèi)進(jìn)行了滅菌處理。不要把未滅菌的培養(yǎng)基冷藏或存放。絕大多數(shù)培養(yǎng)基都應(yīng)放在高壓滅菌器內(nèi)于 121滅菌，并應(yīng)在達(dá)到這一溫度后持續(xù)15min。 糖類液態(tài)培養(yǎng)基或含有其他特殊成分的培養(yǎng)基，高壓蒸汽滅菌會(huì)使其分解，一用濾膜過濾滅菌?；蛘邔⒉荒蜔嵛镔|(zhì)用

9、其他方法滅菌（如流通蒸汽滅菌）后，再加入已滅菌的培養(yǎng)基中。保存：配制好的培養(yǎng)基，不宜保存過久，以少量勤配制為宜。每批應(yīng)注明制作日期。已滅菌的培養(yǎng)基可在4-10 存放 1 個(gè)月。存放時(shí)應(yīng)避免陽光直射，并且要避免雜菌浸入和液體蒸發(fā)。當(dāng)發(fā)酵管中的液體培養(yǎng)基存放在冰箱或者適中的低溫時(shí)， 可能有空氣溶解進(jìn)去， 以致在37培養(yǎng)時(shí)，會(huì)在管內(nèi)形成空氣泡。 因此， 凡存放在低溫的發(fā)酵管，使用前應(yīng)先予以培養(yǎng)過夜，棄去有氣泡的管子。液態(tài)培養(yǎng)基在室溫下存放超過一周，可能有水分蒸發(fā)，如果管內(nèi)液體損失10%，應(yīng)棄去不用。5. 各種培養(yǎng)基的成分與制備為減少配制中的誤差，盡量選用市售已配好的綜合培養(yǎng)基。（ 1）營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基

10、蛋白凍 10g牛肉浸膏3g氯化鈉5 g瓊脂15-20 g蒸餾水1000ml將上述成分混勻后，調(diào)節(jié)pH為7.4-7.6 ,過濾去除沉淀，分裝于玻璃容器121 高壓蒸汽滅菌（ 2）乳糖蛋白胨培養(yǎng)液蛋白陳10g氯化鈉5 g1.6 溴甲酚紫乙醇溶液蒸餾水1000ml將蛋白胨、牛肉浸膏、乳糖、氧化鈉加熱溶解于昌、乳糖、15min,貯存于暗處備用牛肉浸膏乳糖1ml氧化鈉加熱溶解于3g5g1000 ml 蒸餾水中，調(diào)節(jié)1ml， 充分混勻， 分裝于含有倒pH為7.2-7.4 ,再加入1.6 %澳甲酚紫乙醇溶液置的小玻璃管的試管中，于高壓蒸汽滅菌器中，在115高壓蒸汽滅菌20min，貯于暗處備用。此培養(yǎng)基適用于

11、檢驗(yàn)大腸菌群時(shí)作發(fā)酵試驗(yàn)用。 根據(jù)實(shí)際需要， 也可按上述配方比例（除蒸餾水外）配成二倍、三倍或五倍濃縮的乳糖蛋白胨培養(yǎng)液，制法同上。蛋白陳 10g瓊脂 20-30 g無水亞硫酸鈉 5ml5堿性品紅乙醇溶液3）品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基（多管發(fā)酵用）乳糖 10g磷酸氫二鉀3.5 g蒸餾水1000ml1.1- ml貯備培養(yǎng)基：先將瓊脂加至900 ml蒸儲(chǔ)水中，加熱溶解，然后加入磷酸 氫二鉀及蛋白陳，渴勻使其溶解，再以蒸儲(chǔ)水補(bǔ)足至1000 ml,調(diào)節(jié)pH為1.2- 7.4 。 趁熱用脫脂棉或多層紗布過濾， 再加入乳糖， 混勻后定量分裝于燒瓶?jī)?nèi)，置高壓蒸汽器中，在115c高壓蒸汽滅菌20min。貯于暗處備用。

12、平板培養(yǎng)基： 將上述貯備培養(yǎng)基加熱融化。 以無菌操作， 根據(jù)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基的容量，用滅菌吸管按1： 50 的比例吸取一定量的5堿性品紅乙醇溶液置于滅菌空試管中； 再按 1： 200 的比例稱取所需的無水亞硫酸鈉置于另一滅菌空試管內(nèi)，加滅菌水少許使其溶解，再置于沸水浴中煮沸 10min 滅菌。用滅菌吸管吸取已滅菌的亞硫酸鈉溶液，滴加于堿性品紅乙醇溶液內(nèi)至深紅色褪成淡紅色為止（不宜多加）。將此混合液全部加入已融化的貯備培養(yǎng)基內(nèi)，并充分混勻（防止產(chǎn)生氣泡）。立即將此種培養(yǎng)基適量（約 15 ml ）傾入已滅菌的空平皿內(nèi)，待其冷卻凝固后，倒置冰箱內(nèi)備用。此種已制成的培養(yǎng)基于冰箱內(nèi)保存不宜超過兩周，如培養(yǎng)基已

13、由淡紅色變成深紅色，則不能再用。（4）伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基（ERBW養(yǎng)基）蛋白陳 10g乳糖 10g瓊脂20 g磷酸氫二鉀2.0 g蒸餾水1000ml2伊紅（曙紅）水溶液20ml0.5 美藍(lán)（亞甲基藍(lán)）水溶液13 ml貯備培養(yǎng)基：先將瓊脂加至900 ml蒸儲(chǔ)水中，加熱溶解，然后加入磷酸氫二鉀及蛋白陳，渴勻使其溶解，再以蒸儲(chǔ)水補(bǔ)足至1000 ml,調(diào)節(jié)pH為1.3- 7.4 。 趁熱用脫脂棉或多層紗布過濾， 再加入乳糖， 混勻后定量分裝于燒瓶?jī)?nèi)，置高壓蒸汽器中，在115c高壓蒸汽滅菌20min。貯于暗處備用。平板培養(yǎng)基： 將上述貯備培養(yǎng)基加熱融化。 以無菌操作， 根據(jù)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基的容量， 用滅菌吸管按比

14、例吸取一定量的2伊紅水溶液及0.5 美藍(lán)水溶液加入已融化的培養(yǎng)基內(nèi)，并充分混勻(防止產(chǎn)生氣泡)。當(dāng)混合好的培養(yǎng)基冷卻至 45，便立即將此種培養(yǎng)基適量(約15 ml )傾入已滅菌的空平皿內(nèi)，待其冷卻凝固后，倒置冰箱內(nèi)備用。四、操作步驟l 水樣的采取(1) 自來水：先將自來水龍頭用火焰燒灼 3min 滅菌，再開放水龍頭使水流5min 后，以滅菌三角燒瓶接取水樣，以待分析。(2)池水、河水或湖水：應(yīng)取距水面1015cm的深層水樣，先將滅菌的帶玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻轉(zhuǎn)過來，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛滿后，將瓶塞蓋好，再從水中取出，最好立即檢查，否則需放入冰箱中保存2細(xì)菌總數(shù)測(cè)定(2) 自

15、來水用滅菌吸管吸取1m1 水樣，注入滅菌培養(yǎng)皿中。共做兩個(gè)平皿。分別傾注約15mL己溶化并冷卻到45c左右的肉膏蛋白陳瓊脂培養(yǎng)基，并立即在桌上作平面旋搖，使水樣與培養(yǎng)基充分混勻。另取一空的滅菌培養(yǎng)皿，傾注肉膏蛋白陳瓊脂培養(yǎng)基15mL作空自對(duì)照。培養(yǎng)基凝固后，倒置于37c 溫箱中，培養(yǎng)24h,進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。兩個(gè)平板的平均菌落數(shù)即為 1m1 水樣的細(xì)菌總數(shù)。(3) 池水、河水或湖水等稀釋水樣： 取 3 個(gè)滅菌空試管， 分別加入 9m1 滅菌水。 取 1m1 水樣注入第一管 9m1 滅菌水內(nèi)、 搖勻， 再自第一管取1m1 至下一管滅菌水內(nèi)， 如此稀釋到第三管，稀釋度分別為 10-1 、 10-2 與

16、 10-3 。稀釋倍數(shù)看水樣污濁程度而定，以培養(yǎng)后平板的菌落數(shù)在30300個(gè)之間的稀釋度最為合適，若三個(gè)稀釋度的菌數(shù)均 多到無法計(jì)數(shù)或少到無法計(jì)數(shù)，則需繼續(xù)稀釋或減小稀釋倍數(shù)。一般中等污穢水樣，取10-1 、 10-2 、 10-3 三個(gè)連續(xù)稀釋度，污穢嚴(yán)重的取10-2、 10-3、 10-4 三個(gè)連續(xù)稀釋度。自最后三個(gè)稀釋度的試管中各取lmL 稀釋水加入空的滅菌培養(yǎng)皿中， 每一稀釋度做兩個(gè)培養(yǎng)皿。各傾注 15ml 已溶化并冷卻至45左右的肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，立即放在桌上搖勻。凝固后倒置于37培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。3菌落計(jì)數(shù)方法(1) 先計(jì)算相同稀釋度的平均菌落數(shù)。若其中一個(gè)平板有較大片狀菌苔

17、生長(zhǎng)時(shí)， 則不應(yīng)采用， 而應(yīng)以無片狀菌苔生長(zhǎng)的平板作為該稀釋度的平均菌落數(shù)。 若片狀菌苔的大小不到平板的一半， 而其余的一半菌落分布又很均勻時(shí)， 則可將此一半的菌落數(shù)乘2 以代表全平板的菌落數(shù)，然后再計(jì)算該稀釋度的平均菌落數(shù)。(2) 首先選擇平均菌落數(shù)在30300 之間的， 當(dāng)只有一個(gè)稀釋度的平均菌落數(shù)符合此范圍時(shí)，則以該平均菌落數(shù)乘其稀釋倍數(shù)即為該水樣的細(xì)菌總數(shù)。(3)若有兩個(gè)稀釋度的平均菌落數(shù)均在30300之間，則按兩者菌落總數(shù)之比值來決定。若其比值小于2，應(yīng)采取兩者的平均數(shù)；若大于2，則取其中較小的菌落總數(shù)。(4) 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀

18、釋倍數(shù)。(5) 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30， 則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)。(6)若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30300之間，則以最近300或30的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)。五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告1結(jié)果( 1)自來水( 2)池水、河水或湖水等2思考題( 1)從自來水的細(xì)菌總數(shù)結(jié)果來看，是否合乎飲用水的標(biāo)準(zhǔn)？( 2）你所測(cè)的水源水的污穢程度如何？( 3）國家對(duì)自來水的細(xì)菌總數(shù)有一標(biāo)準(zhǔn)，那么各地能否自行設(shè)計(jì)其測(cè)定條件（諸如培養(yǎng)溫度，培養(yǎng)時(shí)間等）來測(cè)定水樣總數(shù)呢？為什么？實(shí)驗(yàn)二、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境和人體表面微生物的檢查一、目的要求1.證明實(shí)驗(yàn)室環(huán)境與體表存在微生物。2比較來自不同場(chǎng)所與不同條件下細(xì)

19、菌的數(shù)量和類型。3觀察不同類群微生物的菌落形態(tài)特征。4體會(huì)無菌操作的重要性。二、基本原理平板培養(yǎng)基含有細(xì)菌生長(zhǎng)所需要的營養(yǎng)成分， 當(dāng)取自不同來源的樣品接種于培養(yǎng)基上，在適宜溫度下培養(yǎng)12d內(nèi)每一菌體即能通過很多次細(xì)胞分裂而進(jìn)行繁殖， 形成一個(gè)可見的細(xì)胞群體集落， 稱為菌落。 每一種細(xì)菌所形成的菌落都有它自己的特點(diǎn)，例如菌落的大小，表面干燥或濕潤、隆起或扁平、粗糙或光滑，邊緣整齊或不整齊，菌落透明或半透明或不透明，顏色以及質(zhì)地疏松或緊密等。因此，可通過平板培養(yǎng)來檢查環(huán)境中細(xì)菌的數(shù)量和類型。三、器材l 培養(yǎng)基：肉膏蛋白胨瓊脂平板。2儀器或其他用具：無菌水，滅菌棉簽（ 裝在試管內(nèi) ） ，接種環(huán)，試管

20、架，酒精燈或煤氣燈，記號(hào)筆，廢物缸。四、操作步驟每組在“實(shí)驗(yàn)室”和“人體”兩大部分中各選擇一個(gè)內(nèi)容做實(shí)驗(yàn)， 或由教師指定分配，最后結(jié)果供全班討論。l 寫標(biāo)簽任何一個(gè)實(shí)驗(yàn)， 在動(dòng)手操作前均需首先將器皿用記號(hào)筆做上記號(hào)， 寫上班級(jí)、姓名、 日期， 本次實(shí)驗(yàn)還要寫上樣品來源（ 如實(shí)驗(yàn)室空氣或無菌室空氣或頭發(fā)等） ，字盡量小些，寫在皿底的一邊，不要寫在當(dāng)中，以免影響觀察結(jié)果。培養(yǎng)皿的記號(hào)一般寫在皿底上。 如果寫在皿蓋上， 同時(shí)觀察兩個(gè)以上培養(yǎng)皿 的結(jié)果，打開皿蓋時(shí)，容易混淆。2 實(shí)驗(yàn)室細(xì)菌檢查（1） 空氣 ： 將一個(gè)肉膏蛋白胨瓊脂平板放在當(dāng)時(shí)做實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室， 移去皿蓋，使瓊脂培養(yǎng)基表面暴露在空氣中；

21、將另一肉膏蛋白胨瓊脂平板放在無菌室或無人走動(dòng)的其他實(shí)驗(yàn)室，移去皿蓋。 lh 后蓋上兩個(gè)皿蓋。（2） 實(shí)驗(yàn)臺(tái)和門的旋鈕用記號(hào)筆在皿底外面中央畫一直線，再在此線中間處畫一垂直線。取棉簽： 左手拿裝有棉簽的試管， 在火焰旁用右手的手掌邊緣和小指、無名指夾持棉塞（ 或試管帽 ） ， 將其取出， 將管口很快地通過煤氣燈（ 或酒精燈 ） 的火焰，燒灼管口；輕輕地傾斜試管，用右手的拇指和食指將棉簽小心地取出。塞回棉塞 （ 或試管帽 ） ，并將空試管放在試管梁上。弄濕棉簽：左手取滅菌水試管，如上法撥出棉塞（或試管帽）并燒灼管口，將棉簽插入水中， 再提出水面， 在管壁上擠壓一下以除去過多的水分， 小心將棉簽取出

22、，燒灼管口，塞回棉塞（ 或試管帽 ） ，并將滅菌水試管放在試管梁上。取樣：將濕棉簽在實(shí)驗(yàn)臺(tái)面或門旋鈕上擦拭約2cm2的范圍。接種： 在火焰旁用左手拇指和食指或中指使平皿開啟成一縫， 再將棉簽伸人，在瓊脂表面頂端接種，即滾動(dòng)一下，立即閉合皿蓋。并按圖 27-2E和F,將原放棉簽的空試管撥出棉塞（ 或試管帽 ） ， 燒灼管口， 插入用過的棉簽， 將試管放回試管架。劃線：另取接種環(huán)在火焰上滅菌，按圖33方法進(jìn)行劃線，整個(gè)劃線操作均要求無菌操作，即靠近火焰，而且動(dòng)作要快。3 人體細(xì)菌的檢查（ 1）手指 （ 洗手前與洗手后 ）分別在兩個(gè)瓊脂平板上標(biāo)明洗手前與洗手后（ 班級(jí)、姓名日期 ） 。移去皿蓋， 將

23、未洗過的手指在瓊脂平板的表面，輕輕地來回劃線， 蓋上皿蓋。用肥皂和刷子，用力刷手，在流水中沖洗干凈，干燥后，在另一瓊脂平板表面來回移動(dòng)，蓋上皿蓋。（2） 頭發(fā) ：在揭開皿蓋的瓊脂平板的上方，用手將頭發(fā)用力搖動(dòng)數(shù)次，使細(xì)菌降落到玻脂平板表面，然后蓋上皿蓋。A. 接種時(shí)，用左手將平皿開啟一縫；B.棉簽伸入平板接種；C.用己滅菌并冷卻了的接種環(huán)劃線；D.第二部分劃線；E. 最后部分劃線(3)咳嗽：將去皿蓋的瓊脂平板放在離口約 68cm處，對(duì)著瓊脂表面用力咳 嗽，然后蓋上皿蓋。(4) 鼻腔按照實(shí)驗(yàn)臺(tái)檢查法的步驟和，取出棉簽，并將其弄濕。用濕棉簽在鼻腔內(nèi)滾動(dòng)數(shù)次。按實(shí)驗(yàn)臺(tái)檢查法的步驟和，接種與劃線，然后

24、蓋上皿蓋。4.將所有的瓊脂平板翻轉(zhuǎn)，使皿底朝上，放37c培養(yǎng)箱，培養(yǎng)12d。五、結(jié)果記錄方法(1) 菌落計(jì)數(shù)在劃線的平板上，如果菌落很多而重疊，則數(shù)平板最后1/4 面積內(nèi)的菌落數(shù)。不是劃線的平板，也一分為四，數(shù)l/4 面積的菌落數(shù)。(2) 根據(jù)菌落大小、形狀、高度、干濕等特征觀察不同的菌落類型。 但要注意， 如果細(xì)菌數(shù)量太多， 會(huì)使很多菌落生長(zhǎng)在一起， 或者限制了菌落生長(zhǎng)而變得很小，因而外觀不典型，故觀察菌落的特點(diǎn)時(shí)，要選擇分離得很開的單個(gè)菌落。菌落特征描寫方法如下：大?。捍蟆⒅?、小、針尖狀?？上葘⒄麄€(gè)平板上的菌落粗略觀察一下，再?zèng)Q定大、中、小的標(biāo)準(zhǔn)，或由教師指出一個(gè)大小范圍。顏色：黃色、金黃

25、色、灰色、乳白色、紅色、粉紅色等。干濕情況：干燥、濕潤、粘稠。形態(tài)：圓形、不規(guī)則等。高度：扁平、隆起、凹下。透明程度：透明、半透明、不透明。邊緣：整齊、不整齊。六、菌落總數(shù)計(jì)算方法T 平皿暴露時(shí)間 (分鐘 )七、實(shí)驗(yàn)報(bào)告1結(jié)果( 1)將你自已的平板結(jié)果記錄于下表中。( 2)與其他同學(xué)所做的結(jié)果進(jìn)行比較2思考題(1) 比較各種來源的樣品，哪一種樣品的平板菌落數(shù)與菌落類型最多？(2) 人多的實(shí)驗(yàn)室與無菌室 ( 或無人走動(dòng)的實(shí)驗(yàn)室 ) 相比，平板上的菌落數(shù)與菌落類型有什么區(qū)別？你能解釋一下造成這種區(qū)別的原因嗎？(3) 洗手前后的手指平板，菌落數(shù)有無區(qū)別？(4) 通過本次實(shí)驗(yàn)，在防止培養(yǎng)物的污染與防止

26、細(xì)菌的擴(kuò)散方面，你學(xué)到些什么？有什么體會(huì)。實(shí)驗(yàn)三 大氣環(huán)境中 TSP 的測(cè)定一、目的要求大氣環(huán)境中 TSP 是一種常規(guī)的污染物，它們對(duì)人體健康、植被生態(tài)和能見度等都有著非常重要的直接和間接影響。因此，對(duì)TSP 污染物的濃度監(jiān)測(cè)是環(huán)境監(jiān)測(cè)中一項(xiàng)重要的工作。本實(shí)驗(yàn)在校園中及附近的工業(yè)區(qū)、 公路傍進(jìn)行采樣分析。 通過本實(shí)驗(yàn)， 應(yīng)達(dá)到以下目的：(1 )掌握重量量測(cè)定大氣環(huán)境中TSP濃度的方法；(2) 了解TSP污染物對(duì)人體健康的危害；(3 )學(xué)習(xí)環(huán)境監(jiān)測(cè)中質(zhì)量控制和保證的概念。二、基本原理通過具有一定切割特性的采樣器， 以恒速抽取一定體積的空氣， 空氣中粒徑小于100仙m的懸浮顆粒物被截留在已恒重的濾

27、膜上。根據(jù)采樣前、后濾膜質(zhì)量之差及采樣體積， 計(jì)算總懸浮顆粒物的濃度。 濾膜經(jīng)處理后， 可再進(jìn)行組分分析。本方法適用于大流量或中流量總懸浮顆粒物采樣器 (簡(jiǎn)稱采樣器) 進(jìn)行空氣中總懸浮顆粒物的測(cè)定。 方法的檢測(cè)限為0.001mg/m3。 總懸浮顆粒物含量過高或霧天采樣使濾膜阻力大于 10kPa 時(shí)，本方法不適用。三、實(shí)驗(yàn)儀器和材料(1)大流量或中流量采樣器：1臺(tái)，應(yīng)按HYQ 1.1-89總懸浮顆粒物采 樣器技術(shù)要求（暫行） 的規(guī)定。（2）大流量孔口流量計(jì)： 1 個(gè)， 量程 0.7-1.4m 3/min ，流量分辨率0.01 m3/min ，精度優(yōu)于2。（ 3）中流量孔口流量計(jì)： 1 個(gè)，量程

28、70-160L/min ，流量分辨率1 L /min ，精度優(yōu)于2。（ 4） U型管壓差計(jì)：1個(gè)，最小刻度0.1hPa。（ 5） X 光看片機(jī)： 1 臺(tái)，用于檢查濾膜有無缺損。（ 6）打號(hào)機(jī)： 1 臺(tái)，用于在濾膜及濾袋上打號(hào)。（ 7）鑷子： 1 個(gè)，用于夾取濾膜。（ 8）超細(xì)玻璃纖維濾膜：10片，對(duì)0.3 m標(biāo)準(zhǔn)粒子的截留效率不低于99%, 在氣流速度為 0.45m/s 時(shí)，單張濾膜阻力不大于 3.5kPa ，在同樣氣流速度下， 抽取經(jīng)高效過濾器凈化的空氣5h, 1 cm2濾膜失重不大于0.012 mg。（ 9）濾膜袋： 10 個(gè)，用于存放采樣后對(duì)折的采塵濾膜，袋面印有編號(hào)、采樣日期、采樣地點(diǎn)

29、、采樣人等項(xiàng)欄目。（ 10）濾膜保存盒：1 個(gè)，用于保存、運(yùn)送濾膜，保證濾膜在采樣前處于平展不受折狀態(tài)。（ 11）恒溫恒濕箱：1 臺(tái)，箱內(nèi)空氣溫度要求在15-30范圍內(nèi)可調(diào)，控溫精度 1；箱內(nèi)空氣相對(duì)濕度控制在（ 50 5），恒溫恒濕箱可連續(xù)工作。（ 12）總懸浮顆粒物大盤天平：1 臺(tái)，用于大流量采樣器濾膜稱量，稱量范圍10g,感量1 mg,標(biāo)準(zhǔn)差0 2 mg。（ 13）分析天平：1臺(tái)，用于中流量采樣濾膜稱量，稱量范圍10g,感量 0.1 mg ,標(biāo)準(zhǔn)差0 0.2 mg。四、實(shí)驗(yàn)方法和步驟1 .采樣器的流量校準(zhǔn)新購置或維修后的采樣器在啟用前， 須進(jìn)行流量校準(zhǔn)。 其校準(zhǔn)方法按儀器使 用說明書進(jìn)行

30、。2 . 總懸浮顆粒物含量測(cè)試（1）濾膜準(zhǔn)備：每張濾膜均需用X光看片機(jī)進(jìn)行檢查，不得有針孔或任何缺陷。 在選中的濾膜光滑表面的兩個(gè)對(duì)角上打印編號(hào)。 濾膜袋上打印同樣編號(hào)備用。將濾膜放在恒溫恒濕箱中平衡24h,平衡溫度取15-30C中任一點(diǎn)，記錄下平衡溫度與濕度。 在上述平衡長(zhǎng)期保持下稱量濾膜， 大流量采樣器濾膜稱量精確到1 mg,中流量采樣器濾膜稱量精確到0.1 mg。記錄下濾膜質(zhì)量mo（g） 稱量好的濾膜平展地放在濾膜保存盒中,采樣前不得將濾膜彎曲或折疊。（2）安放濾膜及采樣：打開采樣頭頂蓋，取出濾膜夾。用清潔干布擦去采樣頭內(nèi)及濾膜夾上的灰塵。 將已編號(hào)并稱量過的濾膜絨面向上， 放在濾膜支持

31、網(wǎng)上，放上濾膜夾，對(duì)正，擰緊，使不漏氣。安裝好采樣頭頂蓋，按照采樣器使用使用說明，設(shè)置采樣時(shí)間，即可啟動(dòng)采樣。樣品采完后，打開采樣頭，用鑷子輕輕取下濾膜，采樣面向上，將濾膜對(duì)折，放入號(hào)碼相同的濾膜袋中。取濾膜時(shí)，如發(fā)現(xiàn)濾膜損壞，或?yàn)V膜上塵的邊緣輪廓不清晰、濾膜安裝歪斜（說明漏氣） ，則本次采樣作廢，需重新采樣（記錄表格見附錄C） 。（ 3）塵膜的平衡及稱量：塵膜在恒溫恒濕箱中，與二次濾膜平衡條件相同的溫度、濕度下，平衡24h0在上述平衡條件下稱量濾膜，大流量采樣器濾膜稱量精確到1 mg,中流量采樣器濾膜稱量精確到0.1 mg。記錄下濾膜質(zhì)量 m（g）（記錄表格見附錄D）。濾膜增重，大流量濾膜不

32、小于100 mg,中流量濾膜不小 于 10 mg。（ 4）計(jì)算：式中： t 累積采樣時(shí)間， min；QN采樣器平均抽氣流量，即式（1-3）或式（1-4） Qn或QMn的計(jì)算值;K-常數(shù)，大流量采樣器 K=1x 106,中流量采樣器K=1x 1090（ 5）測(cè)試方法的再現(xiàn)性：當(dāng)兩臺(tái)總懸浮顆粒物采樣器安放位置相距不大于4m,不少于2m時(shí)，同時(shí)采樣測(cè)定總懸浮顆粒物含量，相對(duì)偏差不大于15%。五、數(shù)據(jù)記錄與處理按下表進(jìn)行。六、問題分析與討論1 .大氣環(huán)境中的TSP 的主要污染來源有哪些？2 .大氣環(huán)境中的TSP有哪些危害？3 .如何預(yù)防TSP 的污染？實(shí)驗(yàn)四 空氣中甲醛污染的測(cè)定監(jiān)測(cè)一、目的要求室內(nèi)空

33、氣污染對(duì)人體健康的影響最為顯著， 與大氣環(huán)境相比有其特殊性。 室 內(nèi)空氣污染監(jiān)測(cè)是評(píng)價(jià)居住環(huán)境的一項(xiàng)重要工作。本實(shí)驗(yàn)選擇剛裝修完和裝修已久的不同房間， 或者在一個(gè)剛裝修完房間的不同通風(fēng)條件下，進(jìn)行采樣分析。通過本實(shí)驗(yàn)達(dá)到以下目的：（ 1）掌握酚試劑分光光度法測(cè)定空氣中甲醛濃度的方法；（ 2）初步了解影響室內(nèi)空氣質(zhì)量的因素。二、基本原理甲醛與酚試劑反應(yīng)生成嗪， 在高鐵分子存在下， 嗪與酚試劑的氧化產(chǎn)物反應(yīng)生成藍(lán)綠色化合物，在波長(zhǎng)630nm 處，用分光光度法測(cè)定。采樣體積為5mL時(shí)，村法檢出限為0.02 Ng/m3,當(dāng)采樣體積為10L時(shí)，最低檢出濃度為0.01mg/m3。三、實(shí)驗(yàn)儀器和試劑1儀器（

34、 1）大型氣泡吸收管： 10 只， 10mL 。（ 2）空氣采樣器：1 臺(tái)，流量范圍 0-2L/min 。（ 3）具塞比色管：10 只，10mL 。（ 4）分光光度計(jì)：1 臺(tái)。2試劑（1）吸收液：稱取0.10g 酚試劑（3-甲基 -苯并噻唑胺，C6H4SN（CH3）C：NNH2.HC1,簡(jiǎn)稱MBTH）,溶于水中，稀釋至100mL,即為吸收原液，貯存于棕色瓶中，在冰箱內(nèi)可以穩(wěn)定3 天。采樣時(shí)取5.0mL 原液加入95mL ，即為吸收液。（2）硫酸鐵銨溶液（10g/L） ：稱取1.0g 硫酸鐵銨，用 0.10mol/L 鹽酸溶液溶解，并稀釋至100mL 。（3）硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.10mol/

35、L）:稱取26g硫代硫酸鈉（Na2s2O3.5H2O）和 0.2無水碳酸鈉溶于 1000mL 水中，加入 10mL 異戊醇，充分混合，貯存于棕 色瓶中。（ 4 ）甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液：量取10mL 濃度為36 -38的甲醛，用水稀釋至500mL,用碘量法標(biāo)定甲醛溶液濃度。使用時(shí)，先用水稀釋至每毫升含10.0 Ng甲醛的溶液，然后立即吸收10.00 mL 此稀釋液于 100容量瓶中，加 5.0 吸收原液，用水稀釋至標(biāo)線。此溶液每毫升含1.0 Ng甲醛。放置30min后，用此溶液配制標(biāo)準(zhǔn)色列，此標(biāo)準(zhǔn)溶液可穩(wěn)定24h。標(biāo)定方法：吸取5.00mL甲醛溶液于250mLM量瓶中，加入40.00mL0.10mol/

36、L碘溶液，立即逐滴加入濃度為30%的氫氧化鈉溶液，至顏色褪至淡黃色為止。放置10min,用5.0mL鹽酸溶液（1:5）酸化（空白滴定時(shí)需多加 2mL。置暗處放 10min,加入100-150mL水，用0.1mol/L硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至淡黃色， 加 1.0mL新配制的5%粉指標(biāo)劑，繼續(xù)滴定至藍(lán)色剛剛褪去。加取5mLzK,同上述方法進(jìn)行空白滴定。按下式計(jì)算甲醛溶液濃度：式中： f 被標(biāo)定的溶液的濃度， g/L ；V。、V分別為滴定空白溶液、甲醛溶液所消耗的硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液體積， mL；cNa2S2O3 硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，；15.0 與 1L 1mol/L 的硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液等當(dāng)量的

37、甲醛質(zhì)量， g。四、采樣與測(cè)定1 .采樣用內(nèi)裝5.00mL吸收液的氣泡吸收管，以0.5l/min流量，采氣10L2 . 測(cè)定（1）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：取8支10mL比色管，按表2-1配制標(biāo)準(zhǔn)系列。然后 向各管中加入1%硫酸鐵錢溶液0.40mL,搖勻。在室溫下（8-35 C）顯色20min。 在波長(zhǎng)630nm處，用1cm比色皿，以水作為參比溶液，測(cè)定吸光度。以吸光度對(duì) 甲醛含量（g）,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。（ 2）樣品的測(cè)定：采樣后，將樣品溶液移入比色皿中，用少量吸收液洗滌吸收管、洗滌液并入比色兒，使總體積為5.0mL。室溫下（8-35 C）放置80min后，以下操作同標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制。表 2-1 甲醛標(biāo)準(zhǔn)系列

38、管號(hào)01234567/mL00.10 0.200.40 0.60 0.801.001.50吸收液 /mL5.004.904.804.604.404.204.003.50甲醛含量/ ag0.100.200.400.600.801.001.50mg/m3；五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算 式中： f 空氣中甲醛的含量，mi樣品中甲醛含量，g g;Vn標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)下米樣體積，L六、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)1）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)與樣品測(cè)定時(shí)溫差不超過2。（ 2） 標(biāo)定甲醛時(shí)，在搖動(dòng)下逐滴加入 30氫氧化鈉溶液， 至顏色明顯減退，再搖片刻，待褪成淡黃色，放置后應(yīng)褪至無色。若堿加入量過多，則5mLit酸溶液（ 1： 5）不足以使溶液酸化。（

39、 3）當(dāng)與二氧化硫共存時(shí)，會(huì)使結(jié)果偏低?？梢栽诓蓸訒r(shí)，使氣樣先通過裝有硫酸錳濾紙的過濾器，排除干擾。實(shí)驗(yàn)五 大氣環(huán)境中氮氧化物的測(cè)定鹽酸萘乙二胺分光光度法一、目的要求空氣中氮氧化物的種類很多，如亞硝酸、硝酸、N2O、 NO、 NO2、 N2O4、N2O5 等。其中NO2 和 NO 是大氣中的主要污染物質(zhì)。通常所指的氮氧化物即為中NO2和NO。測(cè)定環(huán)境中的氮氧化物常用的化學(xué)分析法為鹽酸萘乙二胺分光光度法， 其采樣與顯色同時(shí)進(jìn)行，操作簡(jiǎn)便、方法靈敏，目前被國內(nèi)外普遍采用。鹽酸萘乙二胺分光光度法有兩種采樣方法： 方法一吸收液用量少， 適用于短時(shí)間采樣，測(cè)定空氣中氮氧化物的短時(shí)濃度；方法二吸收液用量大

40、，適用于 24小時(shí)連續(xù)采樣，測(cè)定空氣中氮氧化物的日平均濃度。二、實(shí)驗(yàn)原理二氧化氮被吸收液吸收后， 生成亞硝酸和硝酸。 其中亞硝酸與對(duì)氨基苯磺酸起重氮化反應(yīng)，再與鹽酸萘乙二胺偶合，呈玫瑰紅色，根據(jù)顏色深淺，于波長(zhǎng)540 處用分光光度法測(cè)定。反應(yīng)方程式如下：空氣中的氮氧化物包括NO 及 NO2 等。在測(cè)定氮氧化物時(shí)，應(yīng)先用三氧化銘將NO氧化成NO2,然后測(cè)定NO2的濃度。短時(shí)間采樣（方法一）檢出限為0.01 Ng/mL （按與吸光度0.01相對(duì)應(yīng)的亞硝酸根含量計(jì)） ，當(dāng)采樣體積為 6L 時(shí)，氮氧化物（以二氧化氮計(jì)）的最低檢出濃度為0.01 mg/m3。24采樣（方法二）檢出限為0.01 mg/L

41、（按與吸光度0.01相 對(duì)應(yīng)的亞硝酸根含量計(jì)） ，當(dāng)用 50 mL 吸收液， 24 h 采氣樣 288 L 時(shí)，氮氧化物 （發(fā)二氧化氮計(jì)）的最低檢出濃度為0.002mg/m3。三、實(shí)驗(yàn)儀器和試劑1儀器（ 1）多孔玻板吸收管： 10 只，用于短時(shí)間采樣， 10 mL。（ 2）多孔板吸收瓶：10 個(gè)，用于 24 h 采樣，75mL。（ 3）雙球玻璃管：10 只。（ 4）恒溫自動(dòng)連續(xù)空氣采樣器：1 臺(tái)，流量范圍 0-1 L/min 。（ 5）分光光度計(jì)：1 臺(tái)。（ 6）具塞比色管：10 只。用于短時(shí)間采樣，10 mL。（ 7）具塞比色管： 10 只。用于 24 h 采樣， 25 mL。（ 8）容量瓶

42、： 10 只。用于 24 h 采樣， 50 mL。（ 9）移液管：若干，各種。2試劑所用試劑 均用不含亞硝酸根的重蒸餾水配制， 即所配吸收液的吸光度不超 過 0.005。（1）吸收原液：稱取5.0 g對(duì)氨基苯磺酸，通過玻璃小漏斗直接加入1000mL容量瓶中，加入50 mL冰乙酸和900 mL水的混合溶液，蓋塞振搖使其溶解， 待對(duì)氨基苯磺酸完全溶解后，加入 0.050 g 鹽酸萘乙二胺溶解后，用水稀釋至標(biāo) 線。此為吸收原液，貯于棕色瓶中，在冰箱中可保存兩個(gè)月。保存時(shí)岢用聚四氟 乙烯生料帶密封瓶口，以防止仰不愧天民吸收液接觸。（ 2）采樣用吸收液：按4 份吸收原液和 1 份水的比例混合。（ 3）三

43、氧化兒海砂（河砂）氧化管：篩取20-40 目海砂（河砂） ，用鹽酸溶液（1:2）浸泡一夜，再用水沖洗至中性，烘干。把三氧化銘及海砂（河砂） 按質(zhì)量比1: 20混合，加少量水調(diào)勻，放在紅外燈下或烘箱里于105c烘干，烘干過程中應(yīng)攪拌幾次。制備好的三氧化銘-海砂是松散的， 若黏在一起，說明三 氧化銘比例太大，可適當(dāng)增加一些砂子，重新制備。稱取約三氧化銘-海砂裝入雙球玻璃管中，兩端用少量脫指棉塞好，并用乳膠管或塑料管制的小帽將密封。使用時(shí)氧化管與吸收管之間用一小段乳膠管連 接，采集的氣體盡可能少和乳膠管接觸，以防止氮氧化物被吸附。（4）亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)貯備液：稱取 0.1500 g粒狀亞硝酸鈉（NaNO

44、2,預(yù)先在 干燥器內(nèi)放置24 h以上）,溶解于水，移入1000 mL容量瓶中，用水稀釋至標(biāo)線。 此溶液每毫升100.0仙g含亞硝酸根（NO2-）,貯存于棕色瓶并保存冰箱中，可穩(wěn) 定3個(gè)月。（5）亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液：臨用前，吸取5.00 mLE備7于100 mL容量瓶中， 用水稀釋至標(biāo)線。此溶液每毫升含 5.0 pg亞硝酸根（NG）。四、采樣與測(cè)定1 .采樣短時(shí)間采樣：將一支內(nèi)裝5.00 mL吸收液的多孔玻板吸收管進(jìn)氣口與氧化管 連接，并使氧化管稍微向下傾斜，以免當(dāng)濕空氣將氧化劑（Cr2O3）弄濕時(shí)，污染后面的吸收液。以0.2-0.3 L/min流量，避光采樣至吸收液呈微紅色為止， 記下 采樣時(shí)間

45、，密封好采樣管，帶回實(shí)驗(yàn)室，當(dāng)日測(cè)定。采樣時(shí)，若吸收液不變色， 米樣量應(yīng)不少于6L。長(zhǎng)時(shí)間采樣：將一個(gè)內(nèi)裝50 mL吸收液的多孔玻板吸收瓶進(jìn)氣口與氧化 管連接，并使氧化管稍微向下傾斜，以免當(dāng)濕空氣將氧化劑（Cr2O3）弄濕時(shí)，污染后面的吸收液。用恒溫、自動(dòng)連續(xù)空氣采樣器以0.2 L/min流量采樣24h,采氣體積約為288 Lo采樣后，將樣品帶回實(shí)驗(yàn)室，如當(dāng)天不測(cè)定，樣品溶液保 存在冰箱中，于3天內(nèi)測(cè)定。2 .測(cè)定（1）標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：分別取7支10 mL或25 mL具塞比色管，按表1-1和 表1-2分別配制短時(shí)間和24 h采樣的標(biāo)系列。二 呂勺0123456亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液/mL00.100.

46、200.300.400.500.60吸收原液/mL4.004.004.004.004.004.004.00水/mL1.000.900.800.700.600.500.40亞硝酸根含量/pg00.51.01.52.02.53.0表1-1亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)系列（短時(shí)間采樣）表1-2亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)系列（24 h采樣）二 呂勺0123456亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液/mL00.501.001.502.002.503.00吸收原液/mL20.0020.0020.0020.0020.0020.0020.00水/mL5.004.504.003.503.002.502.00亞硝酸根含量/pg02.55.07.510.0012.

47、515.0各管搖勻后，避開直射陽光，放置 15 min,在波長(zhǎng)處540 nm,用1 cm比色 皿，以水為參比，測(cè)定吸光度。以吸光度對(duì)亞硝酸根含量（ Ng）,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 或用最小二乘法計(jì)算回歸方程式：式中：y標(biāo)準(zhǔn)溶7吸光度（A）與試劑空白液吸光度（Ao）之差；x亞硝酸根含量，；b回歸方程式的斜率；a回歸方程式的截距。（2）樣品測(cè)定：對(duì)短時(shí)間采樣，采樣后，放置15 min,將樣品溶液移入1 cm比色皿中， 用繪制 標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法測(cè)定試劑空白液和樣品溶液的吸光度。 若樣品沉淪的吸 光度超過標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定上限，可用吸收液稀釋后，再測(cè)定吸光度，計(jì)算結(jié)果應(yīng) 乘以稀釋倍數(shù)。對(duì)24 h采樣，采樣后，將樣品溶

48、液移入 50 mL具塞比色管中或容量瓶中， 用少量吸收液洗滌吸收瓶，使樣品溶液定容至 50.0 mL混勻，放置。將樣品移 入1 cm比色皿，用繪制曲線的方法測(cè)定樣品溶液的吸光度。若樣品溶液的吸光 度超過曲線測(cè)定上限，可用吸收液稀釋后再測(cè)定吸光度。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算式中：NO2空氣中NO2的含量，mg/m3;A 樣品溶液吸光度；A0 試劑空白液吸光度；BS 校正因子(1/b);0.76 (氣)換為(液)的系數(shù)；b 回歸方程式的斜率；Vt 樣品溶液總體積，VS 測(cè)定時(shí)所取樣品溶液體積，Vn 標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)下的采樣體積k 采樣時(shí)溶液的體積與繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)溶液體積的比值，短時(shí)間采樣為1,采樣時(shí)為2。六、實(shí)驗(yàn)注

49、意事項(xiàng)(1)吸收液應(yīng)避光，并避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中，以防止光照使吸收液顯色或吸收空氣中的氮氧化物而使試劑空白值偏高。(2)氧化管適于在相對(duì)濕度為 30%-70%時(shí)使用，當(dāng)空氣中相對(duì)濕度大于70%時(shí)，應(yīng)勤換氧化管；相對(duì)濕度小于 30%時(shí)，則在使用前用經(jīng)過水面的潮濕 空氣通過氧化管，平衡1小時(shí)。使用過程中，應(yīng)注意氧化管是否吸濕引起板結(jié)或 變綠。若板結(jié)，會(huì)使采樣系統(tǒng)阻力增大，影響流量；若普綠則表示氧化管已失效。(3)亞硝酸鈉固體應(yīng)妥善保存。氧化成硝酸鈉或呈粉末狀的試劑都不適用 直接配制標(biāo)準(zhǔn)溶液。若無顆粒狀亞硝酸鈉試劑，則可用高鈕酸鉀容量法標(biāo)定出亞 硝酸鈉貯備液的準(zhǔn)確濃度后，再稀釋成每毫升含 5.0

50、Ng亞硝酸根的標(biāo)準(zhǔn)溶液。(4)在20c時(shí)，以5 mL樣品計(jì)，其標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率 b為(0.190 0.003)x10 6吸光度/g ,要求截距的絕對(duì)值a 0.008,若斜率達(dá)不到要求，應(yīng)檢查亞硝酸鈉試劑的質(zhì)量及標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制，重新配制標(biāo)準(zhǔn)溶液；若截距達(dá)不到要求，應(yīng)檢查 蒸儲(chǔ)水及試劑質(zhì)量，重新配制吸收液。性能好的分光光度計(jì)的靈敏度高， 斜率略 高于0.193。(5)吸收液若受三氧化銘污染，溶液呈黃棕色，該樣品應(yīng)報(bào)廢。(6)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，應(yīng)以均勻、緩慢的速度向各管中加亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液，否則將影響曲線的特性。（ 7） 空氣中二氧化硫濃度為氮氧化物濃度的 10 倍時(shí)， 對(duì)氮氧化物的測(cè)定無干擾； 30

51、倍時(shí)，使顏色有少許減退。實(shí)驗(yàn)六 環(huán)境空氣中SO2 濃度的測(cè)定鹽酸副玫瑰苯胺法一、目的要求空氣中的硫氧化物有二氧化硫、硫化氫、二硫化碳、羰甚佳硫、硫酸、硫酸鹽及微量有機(jī)硫等。 在環(huán)境監(jiān)測(cè)中， 對(duì)二氧化硫的測(cè)定具有代表性， 其污染源多來自煤和礦物油的燃燒等。空氣中二氧化硫的測(cè)定方法較多， 主要有分光光度法、 紫外熒光法、 氣相色譜法、電導(dǎo)法、庫侖滴定法等。下面重點(diǎn)鹽酸副玫瑰苯胺法介紹。二、實(shí)驗(yàn)原理鹽酸副玫瑰苯胺法系國際上采用的標(biāo)準(zhǔn)方法。 其靈敏度高， 適用于瞬時(shí)采樣，樣品采集后穩(wěn)定。缺點(diǎn)是使用四氯汞鉀吸收液，毒性較大。該法有兩種操作方法： 方法一所用的鹽酸副玫瑰苯胺使用液含磷酸量少， 最后溶液的

52、pH 為 1.6 0.1，其靈敏度較高，但試劑空白值高；方法二所用的鹽酸副玫瑰苯胺使用液含磷量多，最后溶液的 pH 為 1.2 0.1，其靈敏度低，但試劑空白值低。方法一的溶液呈紅紫色，最大吸收峰在548 nm 處；方法二的溶液呈藍(lán)紫色，最大吸收峰在575 nm 處。目前我國多采用方法二。二氧化硫被四氯汞鉀溶液吸收形成穩(wěn)定的絡(luò)合物， 再與甲醛及副玫瑰苯受作用，生成玫瑰紫色化合物。在波長(zhǎng)548nm 處（方法一）或575 nm 處（方法二）測(cè)定，根據(jù)顏色深淺比色定量。反應(yīng)式如下：HgCl42- + SO2 + H2O - HgCl2SO32- + 2 Cl-+ 2 H+HgCl2SO32- + H

53、CHO + 2 H+ f HgCl2 + HOCHSOH最低檢出限：方法一：當(dāng)采樣體積為30L時(shí)，最低檢出濃度為0.025 Ng/m3。方法二：當(dāng)采樣體積為 10L 時(shí)，最低檢出濃度為0.04mg/m3。三、實(shí)驗(yàn)儀器和試劑1儀器（ 1）多孔玻板吸收管： 10 個(gè)，用于短時(shí)間采樣， 10mL ?；蚨嗫装逦掌浚?0個(gè)，用于24h采樣，75-125mL（2）空氣采樣器：1 臺(tái)，流量0-1L/min 。（ 3）分光光度計(jì)：1 臺(tái)。（4）具塞比色管：10 mL， 10只。（5）容量瓶：25 mL， 10個(gè)。（ 6）移液管：若干，各種。2試劑（1）四氯甲汞（TCM）吸收液（0.04mol/L）:稱取的

54、10.9 g 的 HgCl2、6.0 g 的KCl和0.070 g的NazEDTA,溶解于水，稀釋至1000 mL,在密閉容器中貯存， 可 6 穩(wěn)定個(gè)月，如發(fā)現(xiàn)有沉淀，不可再用。（ 2）甲醛溶液（2.0 g/L） ：每天新配。（3）氨基磺酸胺溶液（6.0 g/L） ：每天新配。（4）鹽酸副玫瑰苯胺（PRA ，即對(duì)品紅）貯備液（2 g/L ） ：稱取經(jīng)提純的0.20g對(duì)品紅，溶解于100 mL濃度為1.0 mol/L的鹽酸溶液中。（5） 對(duì)品紅使用液（0.016%） ： 吸取 2 g/L 對(duì)品紅貯備液20.00 mL 于 250 mL容量瓶中，力口 3 mol/L磷酸溶液25 mL,用水稀釋至標(biāo)

55、線，至少放置 24h方可使 用，存于暗處，可穩(wěn)定9 個(gè)月。（6）碘貯備液（0.010 mol/L）。（7）碘溶液（0.010 mol/L）。（ 8）淀粉指示劑（ 3 g/L ） 。（9）碘酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液（3.0 g/L）:用優(yōu)級(jí)純KIO3于110c烘干2 h后配制。（ 10）鹽酸溶液（1.2 mol/L ） 。（ 11）硫代硫酸鈉溶液（ 0.1 mol/L ） ：用碘量法標(biāo)定其濃度。（ 12）硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.01mol/L）。（13）亞硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取0.20 g的Na2SO3及NazEDTA,溶解于200 mL 新煮沸并已冷卻的水中，輕輕搖勻，放置2-3h 后標(biāo)定，此溶液相當(dāng)于每毫

56、升含320-400仙 g 的 SO20（ 14）磷酸溶液（3mol/L ） 。四、采樣與測(cè)定1采樣短時(shí)間采樣：20 min-1 h,采用多孔玻板吸收管，內(nèi)裝10 mL （方法一）或5 mL （方法二）四氯甲汞吸收液，流量為 0.5 L/min,采樣體積依大氣中SO2濃度 增減。本法可測(cè)25-1000仙g/m3范圍的SO2。如采用方法二，一般避光采樣10-20L。長(zhǎng)時(shí)間采樣：24 h,采用125 mL多孔玻板吸收瓶，內(nèi)裝50 mL甲氯汞鉀吸收液，采樣流量為 0.2-0.3 L/min 。2測(cè)定（ 1）標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：配制0.10%亞硫酸鈉水溶液，用碘量標(biāo)定其濃度，用四氯汞鉀溶液稀釋，配成2.0Ng

57、/mL的SO2標(biāo)準(zhǔn)溶液，用于繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。方法 一、方法二的標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍分別為：以 25 mL計(jì)為1-20仙g,以7.5 mL計(jì) 為1.2-5.4仙g0斜率分別為0.0300.002及0.077 0.005。試劑空白值，方法一 不應(yīng)大于吸光度0.170，方法二不應(yīng)大于吸光度0.050。（ 2）樣品的測(cè)定：分別按下述步驟進(jìn)行。方法一： 采樣后將樣品放置20 min。取10.00 mL樣品移入25 mL容量瓶， 加入1.00 mL 0.6%氨基磺酸胺?液，放置10min。再力口 2.00 mL 0.2%甲醛溶液及 5.00 mL 0.016%對(duì)品紅溶液，用水稀釋至標(biāo)線。 于 20顯色30 mi

58、n， 生成紫紅色化合物，用1 cm比色皿，在波長(zhǎng)548 nm處，以水為參比，測(cè)定吸光度。方法二： 采樣后將樣品放置20 min。 取 5 mL 樣品移入比色管， 加入 0.50mL0.6%氨基磺酸胺溶液，放置10 min 后，再加 0.50 mL 0.2%甲醛溶液及1.50 mL0.016%對(duì)品紅使用液，搖勻。于 20c顯色20 min,生成藍(lán)紫色化合物，用1 cm 比色皿，于 575 nm 波長(zhǎng)處，以水作參比，測(cè)定吸光度。數(shù)據(jù)記錄格式見附錄E。 在測(cè)定每批樣品時(shí)，至少要加入一個(gè)已知濃度的SO2控制樣，同時(shí)測(cè)定，以保證計(jì)算因子（標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率的倒數(shù)）的可靠性。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算氣體中的濃度由下式計(jì)

59、算：式中： SO2 濃度，mg/m3；A樣品顯色液吸光度； Ao試劑空白液吸光度； B 0計(jì)算因子，Ng/吸光度；Vn換算成標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)下的采樣體積,L。六、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)(1)溫度對(duì)顯色有影響：溫度越高，空白值越大，溫度高時(shí)發(fā)色快，褪色 也快，最好使用恒溫水浴控制顯色溫度。 樣品的測(cè)定溫度和繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的溫度 之差不應(yīng)超過 2C。(2)對(duì)品紅試劑必須提純后方可使用，否則期中所含雜質(zhì)會(huì)引起試劑空白 值增高，使方法靈敏度降低。0.2 %對(duì)品紅溶液現(xiàn)已有經(jīng)提純合格的產(chǎn)品出售， 可直接購買使用。(3)四氯汞鉀溶液為劇毒試劑，使用時(shí)應(yīng)小心。如濺到皮膚上，應(yīng)立即用 水沖洗。使用過的廢液要集中處理，以免污染一半

60、。含四氯汞鉀廢液的處理方法： 在每升廢液中加約10g磷酸鈉至中性，再加10 g鋅粒，于黑布罩下攪拌24 h后, 將上層精液倒入玻璃缸內(nèi)，滴加飽和硫化鈉溶液，至不再產(chǎn)生沉淀為止，棄去溶 液，將沉淀物轉(zhuǎn)入一適當(dāng)?shù)娜萜鲀?nèi)貯存匯總處理。此法可去除廢水中99%的汞。(4)對(duì)本法有干擾物質(zhì)還有氮氧化物、臭氧、鈕、鐵、銘等。采樣后放置20 min使臭氧自行分解；加入氨基磺酸俊可消除氮氧化物的干擾； 加入磷酸和乙 二胺四乙酸二鈉鹽可消除或減小某些重金屬的干擾。附錄ESO2濃度測(cè)定記錄表測(cè)定次數(shù)米樣流里/(L,min-1)采樣時(shí)間/*Min采樣體積/Vn/L樣品吸光度空白液吸光度SO2濃度p /(mg.m-3)

61、注：*中流量采樣時(shí)間單位為min,大流量采樣時(shí)間單位則為h實(shí)驗(yàn)七、旋風(fēng)除塵器性能實(shí)驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握除塵器性能測(cè)定的基本方法。2、了解除塵器運(yùn)行工況對(duì)其效率和阻力的影響。3、了解煙塵采樣器的工作原理和使用方法。二、實(shí)驗(yàn)要求1、實(shí)驗(yàn)前認(rèn)真閱讀實(shí)驗(yàn)教材，掌握與實(shí)驗(yàn)相關(guān)的基本理論知識(shí)。2、熟練掌握實(shí)驗(yàn)內(nèi)容、方法和步驟，按規(guī)定進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。3、觀察旋風(fēng)除塵器內(nèi)氣流流動(dòng)現(xiàn)象，在某一工況下測(cè)定除塵器處理風(fēng)量、 除塵器的壓力損失以及除塵效率。4、記錄、分析、計(jì)算實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，提交實(shí)驗(yàn)報(bào)告。三、實(shí)驗(yàn)儀器、1、除塵器性能測(cè)定實(shí)驗(yàn)臺(tái)、2、皮托管、3微壓計(jì)、4、天平（精度0.01克）、4、秒表、5、煙塵采樣器，6、3#濾筒若