高中生物《大腸桿菌的培養(yǎng)和分離》課件1（26張PPT）（浙教版選修1）

歡迎進入生物課堂 實驗1大腸桿菌的培養(yǎng)和分離 實驗目的 1 進行大腸桿菌的擴增 利用液體培養(yǎng)基進行細菌培養(yǎng)的操作 2 進行大腸桿菌的分離 用固體平面培養(yǎng)基本進行細菌的劃線培養(yǎng) 3 說明大腸桿菌培養(yǎng)的條件和實驗原理 一 基礎知識 一 微生物 1 特點 結(jié)構(gòu)都相當簡單 個體多數(shù)十分微小 通常要用光學顯微鏡或電子顯微鏡才能看到 有的甚至沒有細胞結(jié)構(gòu) 且體內(nèi)一般不含有葉綠素 不能進行光合作用 2 微生物包括五類 病毒細菌放線菌真菌原生動物 二 培養(yǎng)基 1 分類 按物理形態(tài)分 1 液體培養(yǎng)基 2 固體培養(yǎng)基 常用的固體培養(yǎng)基 瓊脂固體培養(yǎng)基 微生物在固體培養(yǎng)基表面生長 可以形成肉眼可見的菌落 2 培養(yǎng)基內(nèi)所含的基本物質(zhì) 1 水 2 碳源 3 氮源 4 無機鹽 1 pH值如 培養(yǎng)霉菌需酸性 培養(yǎng)細菌需中性或微堿性 2 特殊營養(yǎng)物質(zhì) 如 培養(yǎng)乳酸桿菌需要在培養(yǎng)基中添加維生素 3 氧氣的含量如 培養(yǎng)厭氧微生物時需要提供無氧的條件 3 培養(yǎng)基內(nèi)所需的其他條件 生長因子 三 無菌技術(shù) 1 獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵 2 無菌技術(shù)的四個方面 參看教材20頁 3 消毒與滅菌 1 消毒 概念 使用較為溫和的物理或化學方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物 包括芽孢和孢子嗎 方法 煮沸消毒法巴氏消毒法 如牛奶的消毒化學藥劑消毒 酒精 氯氣 石碳酸 煤酚皂溶液等紫外線消毒 不包括芽孢和孢子 防止外來雜菌的入侵 2 滅菌 概念 使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物 包括芽孢和孢子 方法 a灼燒滅菌b干熱滅菌c高壓蒸汽滅菌 灼燒滅菌 微生物的接種工具 接種環(huán) 接種針 或其他金屬用具直接在火焰的充分燃燒層灼燒 注意適用范圍 干熱滅菌160 170 1 2h 能耐高溫的需要保持干燥的物品 玻璃器皿 高壓蒸汽滅菌100kPa121 15 30min 通常用于培養(yǎng)基的滅菌 二 實驗操作 一 制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基計算 稱量 溶化 滅菌 倒平板 二 純化大腸桿菌接種方法有 平板劃線法和稀釋涂布平板法 三 將接種后的培養(yǎng)基和一個未接種的培養(yǎng)基放入37 恒溫箱中培養(yǎng)12h和24h后 觀察并記錄 三 課題延伸 菌種的保藏 1 斜面保藏 臨時保存 2 甘油保藏 長期保存 實驗1 大腸桿菌的培養(yǎng)和分離 設備及用品 滅菌鍋或高壓鍋 250ml的三角瓶 封口膜和橡皮圈 直徑90mm的培養(yǎng)皿 接種環(huán)和玻璃三角刮刀 恒溫培養(yǎng)箱 搖床 酒精燈和超凈臺 一次性塑料手套 裝有酒精棉球的廣口瓶 鑷子 有棉塞的試管 15mm 120mm 5支實驗材料 1 50mlLB液體培養(yǎng)基 蛋白胨0 5g 酵母提取物0 25g NaCl0 5g 加水50ml 2 大腸桿菌菌種斜面 3 空白斜面 實驗步驟 1 滅菌 將配制好的50mlLB液體培養(yǎng)基和50mlLB液體培養(yǎng)基分別裝入兩個250ml的三角瓶中 加上封口膜 用高壓鍋進行滅菌 2 制平板 在酒精燈火焰旁將固體培養(yǎng)基分別倒在4個培養(yǎng)皿中 使培養(yǎng)基鋪平皿底部 待凝 使之形成平面 3 接種擴大培養(yǎng) 靠近酒精燈火焰將大腸桿菌接種到三角燒瓶的液體培養(yǎng)基中 三角燒瓶在37 搖床振蕩培養(yǎng)12h 4 劃線分離 將搖床上培養(yǎng)12h的菌液在固體培養(yǎng)基的平板上連續(xù)劃線 然后將蓋好的培養(yǎng)皿倒置 放在37 恒溫培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng) 5 單菌落接種培養(yǎng) 在無菌操作下將單菌落用接種環(huán)取出 再用劃線法接種在空白斜面上 在37 下培養(yǎng)24h 4 冰箱保存 實驗討論實驗完成后 接觸過細菌的器皿應如何處理 實驗完成后 所有接觸過細菌的器皿都必須先高壓滅菌后再洗滌 特別是培養(yǎng)基 有可能被有害菌體污染 在培養(yǎng)繁殖后 大量有害菌體影響人畜健康 也污染環(huán)境 因此必須高壓滅菌 使用后的廢棄物也要高壓滅菌后再拋棄 對于取樣器的取樣頭 通常是滅菌后在超聲波清洗器中加洗衣粉洗滌綸30min 再用清水洗凈 仍可再用 封口膜也可再用 無菌技術(shù)的四個方面 1 對實驗操作空間 操作者的衣著和手進行清潔和消毒 2 將培養(yǎng)器皿 接種用具和培養(yǎng)基等器具進行滅菌 3 為避免周圍微生物污染 實驗操作應在酒精燈火焰附近旁進行 4 避免已滅菌處理的材料用具與周圍物品相接觸 三 無菌技術(shù)返回 倒平板 討論 1 培養(yǎng)基滅菌后 需要冷卻到50 左右時 才能用來倒平板 你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度 2 為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰 3 平板冷凝后 為什么要將平板倒置 4 在倒平板的過程中 如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位 這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎 為什么 提示 可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶 感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時 就可以進行倒平板了 答 通過灼燒滅菌 防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基 答 平板冷凝后 皿蓋上會凝結(jié)水珠 凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高 將平板倒置 既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā) 又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基 造成污染 答 空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生 因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物 返回 1 平板劃線法 1 為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán) 在劃線操作結(jié)束時 仍然需要灼燒接種環(huán)嗎 為什么 2 在灼燒接種環(huán)之后 為什么要等其冷卻后再進行劃線 3 在作第二次以及其后的劃線操作時 為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線 討論 答 操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物 每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后 接種環(huán)上殘留的菌種 使下一次劃線時 接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端 從而通過劃線次數(shù)的增加 使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少 以便得到菌落 劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán) 能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種 避免細菌污染環(huán)境和感染操作者 答 以免接種環(huán)溫度太高 殺死菌種 答 劃線后 線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少 每次從上一次劃線的末端開始 能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少 最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落 返回 2 稀釋涂布法 1 系列稀釋操作 涂布平板操作 提示 應從操作的各個細節(jié)保證 無菌 例如 酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適 吸管頭不要接觸任何其他物體 吸管要在酒精燈火焰周圍 等等 討論 涂布平板的所有操作都應在火焰附近進行 結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求 想一想 第2步應如何進行無菌操作 返回 返回 菌落 單個或少數(shù)細菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時 就會形成一個肉眼可見的 具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細胞群體 叫做菌落 不同的細菌的菌落特征不同菌落是鑒定菌種的重要依據(jù) 2 碳源 可作為碳源的物質(zhì)有 含碳無機物 含碳有機物 蛋白質(zhì) 脂肪酸 返回 不同微生物所利用的碳源不同異養(yǎng)型微生物的碳源為自養(yǎng)型微生物的碳源為 碳酸鹽 碳酸氫鹽 二氧化碳 糖類 主要 含碳有機物 有機碳 含碳無機物 無機碳 3 氮源 可作為氮源的物質(zhì)有 含氮無機物 含氮有機物 蛋白胨 牛肉膏 尿素 返回 固氮微生物所利用的氮源是 氮氣 氨氣 硝酸鹽 氨鹽 氮氣 再見 同學們 來學校和回家的路上要注意安全 同學們 來學校和回家的路上要注意安全