實(shí)驗(yàn)五用大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定.ppt

大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定水 環(huán)境中微生物的測(cè)定 林親雄閻春蘭李曉華 了解光電比濁計(jì)數(shù)法的原理 學(xué)習(xí) 掌握光電比濁計(jì)數(shù)的操作方法 通過(guò)細(xì)菌數(shù)量的測(cè)量了解大腸桿菌的生物特征和規(guī)律 繪制生長(zhǎng)曲線 實(shí)驗(yàn)31大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定 一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?生長(zhǎng)曲線將少量純種單細(xì)胞微生物接種到定量的液體培養(yǎng)基中 定時(shí)取樣測(cè)定細(xì)胞數(shù)量 以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo) 以菌數(shù)為縱坐標(biāo)作圖 得到一條反映單細(xì)胞微生物在整個(gè)培養(yǎng)期間菌數(shù)變化規(guī)律的曲線 二 實(shí)驗(yàn)原理 一個(gè)典型的生長(zhǎng)曲線分為延緩期 對(duì)數(shù)期 穩(wěn)定期和衰亡期四個(gè)時(shí)期 微生物數(shù)量的測(cè)定方法 稀釋平板計(jì)數(shù)法顯微鏡直接計(jì)數(shù)法最大概率法光電比濁法 稀釋平板計(jì)數(shù)法 對(duì)樣品稀釋培養(yǎng) 據(jù)形成的菌落數(shù)計(jì)數(shù) 優(yōu)點(diǎn) 活菌計(jì)數(shù)方法 對(duì)設(shè)備要求不高 缺點(diǎn) 操作復(fù)雜 顯微鏡直接計(jì)數(shù)法 使用血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下直接計(jì)數(shù) 優(yōu)點(diǎn) 操作簡(jiǎn)便 計(jì)數(shù)直觀 缺點(diǎn) 計(jì)數(shù)結(jié)果為活細(xì)菌和死菌體的總和 最大概率法 待測(cè)菌液經(jīng)十倍系列稀釋 每稀釋度做3 5個(gè)重復(fù) 經(jīng)培養(yǎng)后 檢查細(xì)菌的生長(zhǎng) 以有細(xì)菌生長(zhǎng)的最后三個(gè)稀釋度的管數(shù)作數(shù)量指標(biāo) 由數(shù)理統(tǒng)計(jì)表查出近似值 再乘以數(shù)量指標(biāo)第一位的稀釋倍數(shù) 即為原菌液中的菌數(shù) 最大概率法 例如 某細(xì)菌在稀釋培養(yǎng)法中生長(zhǎng)情況如下 稀釋度 10 310 410 510 610 710 8重復(fù)數(shù) 555555有菌生長(zhǎng)管數(shù) 555410根據(jù)上述結(jié)果 數(shù)量指標(biāo)為 541 查表得近似值為17 乘以第一位數(shù)的稀釋倍數(shù) 得出原始培養(yǎng)物的活菌數(shù) 17 105個(gè) 優(yōu)點(diǎn) 活菌計(jì)數(shù) 適用于特殊細(xì)菌 缺點(diǎn) 計(jì)數(shù)結(jié)果為概值 光電比濁法 光電比濁法是利用在一定的范圍內(nèi) 微生物細(xì)胞濃度與透光度成反比的原理 當(dāng)細(xì)菌細(xì)胞在溶液中數(shù)量越多 濁度越大 在光電比色計(jì)中測(cè)定時(shí)所吸收的光線越多 優(yōu)點(diǎn) 簡(jiǎn)便快速 適合于自動(dòng)控制 缺點(diǎn) 測(cè)定結(jié)果受培養(yǎng)液成分影響 某些樣品樣品不適合用此法 菌種培養(yǎng)不同時(shí)段的大腸桿菌 儀器或其他用具分光光度計(jì) 比色皿等 三 實(shí)驗(yàn)器材 開(kāi)電源 儀器預(yù)熱20min 將波長(zhǎng)調(diào)至600nm處 打開(kāi)樣品室 將擋光體插入比色皿架 將其推或拉入光路 蓋好樣品室蓋 在TMODE下 按0 T鍵調(diào)零透射比 取出擋光體 按100 T OA鍵調(diào)100 透射比 四 實(shí)驗(yàn)步驟 1 樣品測(cè)試前的調(diào)試 2 樣品測(cè)定 將參比溶液 未接種的LB液體培養(yǎng)基 以及被測(cè)溶液倒入比色皿中 打開(kāi)樣品室蓋 將參比溶液放在樣品架的第一個(gè)槽位中 將被測(cè)溶液依次放入其它槽位 將參比溶液推入光路 按100 T OA鍵調(diào)滿度 按MODE 將測(cè)試方式調(diào)至吸光度方式 A 此時(shí) 顯示器顯示 0 000 將被測(cè)溶液推入光路 顯示器顯示為被測(cè)樣品的吸光值 在600nm波長(zhǎng)下 用未接種的LB液體培養(yǎng)基作空白對(duì)照 分別對(duì)培養(yǎng)了0 4 8 12 16和20h的大腸桿菌培養(yǎng)液 進(jìn)行光電比濁測(cè)定 對(duì)于高濃度的大腸桿菌培養(yǎng)液 要用未接種的LB培養(yǎng)基進(jìn)行稀釋 使其吸光值在0 1 0 65范圍內(nèi) 比色皿經(jīng)蒸餾水清洗后 必須經(jīng)待測(cè)樣品潤(rùn)洗 比色皿的毛面用吸水紙擦干 而光面只能用吸水紙吸干 以免光面被劃破 比色皿之間吸光度進(jìn)行比較 四 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 記錄不同大腸桿菌培養(yǎng)液的OD600值 并繪制大腸桿菌的生長(zhǎng)曲線 五 思考題 光電比濁計(jì)數(shù)的原理是什么 這種計(jì)數(shù)法有何優(yōu)缺點(diǎn) 如果用活菌計(jì)數(shù)法制作生長(zhǎng)曲線 你認(rèn)為會(huì)有什么不同 兩者各有什么優(yōu)缺點(diǎn) 比較不同場(chǎng)所和不同條件下細(xì)菌的數(shù)量和類(lèi)型 觀察不同類(lèi)群微生物的菌落形態(tài)特征 體會(huì)無(wú)菌操作的重要性 掌握水和環(huán)境中微生物的測(cè)定方法 檢測(cè)污染水域微生物的類(lèi)型和數(shù)量 實(shí)驗(yàn)67水 環(huán)境中微生物的測(cè)定 一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?應(yīng)用平板菌落計(jì)數(shù)技術(shù)測(cè)定污染水的細(xì)菌總數(shù) 由于細(xì)菌種類(lèi)繁多 不可能找到一種培養(yǎng)基在一種條件下 使所有的細(xì)菌均能生長(zhǎng)繁殖 因此 計(jì)算出來(lái)的細(xì)菌總數(shù)僅是一種近似值 利用普通牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基可以大致測(cè)定不同環(huán)境中存在的微生物 二 實(shí)驗(yàn)原理 樣品的采取自來(lái)水取自自來(lái)水管道 橙汁購(gòu)于超市 口腔 人民幣 門(mén)把手和實(shí)驗(yàn)環(huán)境中的微生物 南湖水距水面10 15cm的深層水樣 培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基 儀器或其他用具滅菌培養(yǎng)皿 無(wú)菌槍頭 涂棒等 三 實(shí)驗(yàn)器材 無(wú)菌操作采用10 1 10 2 10 3稀釋液涂布牛肉膏蛋白胨平板 每個(gè)稀釋度2個(gè)重復(fù) N 乙酰葡糖胺 四 實(shí)驗(yàn)步驟 1 南湖水中微生物的測(cè)定 每個(gè)培養(yǎng)皿加0 1ml稀釋液 LTA 2 口腔 人民幣和門(mén)把手微生物的測(cè)定 用棉簽分別從牙周 人民幣紙幣和門(mén)把手表面挑取微生物 然后放入裝有0 5ml無(wú)菌水的EP管中 顛倒均勻后 用移液器全部吸入牛肉膏蛋白胨平板中 涂布均勻 3 實(shí)驗(yàn)室空氣中微生物的測(cè)定 將牛肉膏蛋白胨平板蓋揭開(kāi) 分別置實(shí)驗(yàn)臺(tái)10 20 30 40 50 60min后 蓋上皿蓋 倒置培養(yǎng) 4 自來(lái)水 橙汁中微生物的測(cè)定 取1ml涂布牛肉膏蛋白胨平板 自來(lái)水用無(wú)菌三角瓶收集 四 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 計(jì)算每ml南湖水中含有微生物的數(shù)量 你所測(cè)定的環(huán)境中微生物的數(shù)量和種類(lèi) 并試著分別記錄每種細(xì)菌的大小 形態(tài) 干濕 透明度 顏色以及邊緣等特征 觀測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)間 五 思考題 你所測(cè)定的南湖水的污染程度如何 通過(guò)本次實(shí)驗(yàn) 在防止培養(yǎng)物的污染與防止細(xì)菌的擴(kuò)散方面 你學(xué)到了什么 有什么體會(huì) 本次實(shí)驗(yàn)安排 比濁法測(cè)定大腸桿菌生長(zhǎng)曲線 倒牛肉膏蛋白胨平板12個(gè) 南湖水稀釋分離涂布 6皿 口腔 人民幣 門(mén)把手 空氣 10 20 30 40 50 60min 自來(lái)水和橙汁微生物的測(cè)定 1種 人 每組6人 本次實(shí)驗(yàn)完