高考生物一輪復(fù)習(xí) 選修三 現(xiàn)代生物科技專題 第34講 基因工程課件.ppt

第34講基因工程 2017備考 江蘇最新考綱 1 基因工程的誕生 A 2 基因工程的原理及技術(shù) B 3 基因工程的應(yīng)用 B 4 蛋白質(zhì)工程 A 5 轉(zhuǎn)基因生物的安全性問題 A 6 生物武器對人類的威脅 A 考點一基因工程的基本工具及操作過程 自主梳理 1 基因工程的基本工具 1 限制性 核酸 內(nèi)切酶 來源 主要從生物中分離純化而來 作用 識別并切開相應(yīng)兩個核苷酸之間的 原核 特定的核苷酸序列 磷酸二酯鍵 結(jié)果 產(chǎn)生或平末端 如下圖所示 EcoR 限制酶識別的堿基序列是 切割位點在之間 Sma 限制酶識別的堿基序列是 切割位點在之間 說明限制酶具有 黏性末端 GAATTC G和A CCCGGG G和C 專一性 2 DNA連接酶 作用 將限制酶切割下來的DNA片段 類型 大腸桿菌 黏性末端 黏性末端和平末端 磷酸二酯鍵 拼接成DNA分子 雙鏈環(huán)狀DNA分子 限制酶切割位點 標(biāo)記基因 動植物病毒 2 基因工程的操作程序 基因文庫 PCR 啟動子 標(biāo)記基因 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 花粉 管通道 顯微注射 DNA分子雜交 分子雜交 抗原 抗體雜交 個體生物學(xué)水平 跟進題組 1 限制性核酸內(nèi)切酶Mun 和限制性核酸內(nèi)切酶EcoR 的識別序列及切割位點分別是 C AATTG 和 G AATTC 如圖表示四種質(zhì)粒和目的基因 其中箭頭所指部位為限制性核酸內(nèi)切酶的識別位點 質(zhì)粒的陰影部分表示標(biāo)記基因 適于作為圖示目的基因載體的質(zhì)粒是 解析由圖可知 質(zhì)粒B上無標(biāo)記基因 不適合作為載體 質(zhì)粒C和D的標(biāo)記基因上都有限制性核酸內(nèi)切酶的識別位點 只有質(zhì)粒A上既有標(biāo)記基因 且Mun 的切割點不在標(biāo)記基因上 答案A 基因工程操作基本工具的8個易錯點 1 限制酶是一類酶 而不是一種酶 2 限制酶的成分為蛋白質(zhì) 其作用的發(fā)揮需要適宜的理化條件 高溫 強酸或強堿均易使之變性失活 3 在切割目的基因和載體時要求用同一種限制酶 目的是產(chǎn)生相同的黏性末端 4 將一個基因從DNA分子上切割下來 需要切兩處 同時產(chǎn)生4個黏性末端 5 不同DNA分子用同一種限制酶切割產(chǎn)生的黏性末端都相同 同一個DNA分子用不同的限制酶切割 產(chǎn)生的黏性末端一般不相同 6 限制酶切割位點應(yīng)位于標(biāo)記基因之外 不能破壞標(biāo)記基因 以便進行檢測 7 基因工程中的載體與細胞膜上物質(zhì)運輸?shù)妮d體不同 基因工程中的載體是DNA分子 能將目的基因?qū)胧荏w細胞內(nèi) 膜載體是蛋白質(zhì) 與細胞膜的通透性有關(guān) 8 基因工程中有3種工具 但工具酶只有2種 2 2015 四川卷 9 將蘇云金桿菌Bt蛋白的基因?qū)朊藁毎?可獲得抗棉鈴蟲的轉(zhuǎn)基因棉 其過程如下圖所示 注 農(nóng)桿菌中Ti質(zhì)粒上只有T DNA片段能轉(zhuǎn)移到植物細胞中 1 過程 需用同種 酶對含Bt基因的DNA和Ti質(zhì)粒進行酶切 為將過程 獲得的含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌篩選出來 應(yīng)使用 培養(yǎng)基 2 過程 中將棉花細胞與農(nóng)桿菌混合后共同培養(yǎng) 旨在讓 進入棉花細胞 除盡農(nóng)桿菌后 還須轉(zhuǎn)接到含卡那霉素的培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng) 目的是 3 若過程 僅獲得大量的根 則應(yīng)在培養(yǎng)基中增加 以獲得芽 部分接種在無激素培養(yǎng)基上的芽也能長根 原因是 4 檢驗轉(zhuǎn)基因棉的抗蟲性狀 常用方法是 種植轉(zhuǎn)基因抗蟲棉能減少 的使用 以減輕環(huán)境污染 解析本題考查基因工程與植物細胞工程的相關(guān)知識 1 同種限制酶切割質(zhì)粒和含目的基因的DNA 可獲得相同的黏性末端 以構(gòu)建基因表達載體 重組質(zhì)粒含完整的卡那霉素抗性基因 故應(yīng)使用含卡那霉素的選擇培養(yǎng)基篩選含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌 2 實驗過程中將棉花細胞與農(nóng)桿菌混合后共同培養(yǎng) 其目的是利用含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌將T DNA導(dǎo)入棉花細胞中 除去農(nóng)桿菌后在含卡那霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng) 其目的是篩選出含有目的基因的棉花細胞 3 培養(yǎng)基中生長素用量與細胞分裂素用量比值高時 利于根的分化 抑制芽的形成 反之 有利于芽的分化 抑制根的形成 因芽頂端可合成生長素 故接種在無激素的培養(yǎng)基上的芽也能長根 4 可用投放棉鈴蟲的方法檢測抗蟲棉的抗蟲效果 轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的種植可減少農(nóng)藥使用量 從而減輕環(huán)境污染 答案 1 限制性核酸內(nèi)切選擇 2 T DNA篩選獲得T DNA片段的植物細胞 3 細胞分裂素濃度芽頂端合成的生長素向基部運輸 促進根的分化 4 投放棉鈴蟲農(nóng)藥 基因工程操作程序中的 三 三 四 一 1 目的基因 三種獲取方法 從基因文庫中獲取 基因組文庫 cDNA文庫如反轉(zhuǎn)錄形成的DNA 利用PCR技術(shù)擴增 其實質(zhì)是在體外對目的基因進行大量復(fù)制 用PCR儀控制溫度 變性 95 復(fù)性 55 延伸 72 通過DNA合成儀用化學(xué)方法人工合成 用于序列已知 且核苷酸數(shù)目較少者 2 將目的基因?qū)胧荏w細胞的 三種類型 導(dǎo)入植物細胞 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 花粉管通道法 基因槍法 導(dǎo)入動物細胞 顯微注射法 導(dǎo)入受精卵 導(dǎo)入微生物細胞 使用Ca2 處理細胞 3 目的基因檢測與鑒定的 四個層面 4 基因工程操作的 一個核心 基因表達載體的構(gòu)建 基因表達載體的組成 構(gòu)建過程 考點二基因工程的應(yīng)用及蛋白質(zhì)工程 自主梳理 1 基因工程的應(yīng)用 1 動物基因工程 用于提高動物從而提高產(chǎn)品產(chǎn)量 用于改善畜產(chǎn)品品質(zhì) 用轉(zhuǎn)基因動物生產(chǎn) 用轉(zhuǎn)基因動物作器官移植的等 2 植物基因工程 培育抗蟲轉(zhuǎn)基因植物 抗病轉(zhuǎn)基因植物和轉(zhuǎn)基因植物 利用轉(zhuǎn)基因改良植物的 生長速度 藥物 供體 抗逆 品質(zhì) 3 比較基因治療與基因診斷 基因表達 正?；?堿基互補配對 DNA探針 2 蛋白質(zhì)工程 1 概念理解 基礎(chǔ) 蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系 操作 或基因合成 結(jié)果 改造了現(xiàn)有蛋白質(zhì)或制造出 目的 根據(jù)人們對蛋白質(zhì)功能的特定需求 對進行分子設(shè)計 2 蛋白質(zhì)工程的設(shè)計流程 基因修飾 新的蛋白質(zhì) 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu) 功能 蛋白 質(zhì)結(jié)構(gòu) 氨基 酸序列 脫氧核 苷酸序列 跟進題組 1 2015 課標(biāo)卷 40 生物 選修3 現(xiàn)代生物科技專題 HIV屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒 是艾滋病的病原體 回答下列問題 1 用基因工程方法制備HIV的某蛋白 目的蛋白 時 可先提取HIV中的 以其作為模板 在 的作用下合成 獲取該目的蛋白的基因 構(gòu)建重組表達載體 隨后導(dǎo)入受體細胞 2 從受體細胞中分離純化出目的蛋白 該蛋白作為抗原注入機體后 刺激機體產(chǎn)生的可與此蛋白結(jié)合的相應(yīng)分泌蛋白是 該分泌蛋白可用于檢測受試者血清中的HIV 檢測的原理是 3 已知某種菌導(dǎo)致的肺炎在健康人群中罕見 但是在艾滋病患者中卻多發(fā) 引起這種現(xiàn)象的根本原因是HIV主要感染和破壞了患者的部分 細胞 降低了患者免疫系統(tǒng)的防衛(wèi)功能 4 人的免疫系統(tǒng)有 癌細胞的功能 艾滋病患者由于免疫功能缺陷 易發(fā)生惡性腫瘤 解析 1 HIV是RNA病毒 其核酸是單鏈RNA 而在基因工程中構(gòu)建目的基因表達載體時 載體一般用的是質(zhì)粒 為雙鏈DNA 故先用逆轉(zhuǎn)錄酶催化HIV的RNA逆轉(zhuǎn)錄為DNA分子再進行基因工程操作 2 本題涉及到了免疫學(xué)方面知識 抗原進入機體后可以產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng) 產(chǎn)生相應(yīng)的抗體 抗體與抗原特異性結(jié)合 3 HIV病毒主要破壞人體T細胞 4 免疫系統(tǒng)除了具有防衛(wèi)功能外 還有監(jiān)控和清除功能 監(jiān)控并清除體內(nèi)已經(jīng)衰老或因其他因素而被破壞的細胞 以及癌變的細胞 答案 1 RNA逆轉(zhuǎn)錄酶cDNA 或DNA 2 抗體抗原抗體特異性結(jié)合 3 T 或T淋巴 4 監(jiān)控和清除 2 2015 全國卷 40 已知生物體內(nèi)有一種蛋白質(zhì) P 該蛋白質(zhì)是一種轉(zhuǎn)運蛋白 由305個氨基酸組成 如果將P分子中158位的絲氨酸變成亮氨酸 240位的谷氨酰胺變成苯丙氨酸 改變后的蛋白質(zhì) P1 不但保留P的功能 而且具有了酶的催化活性 回答下列問題 1 從上述資料可知 若要改變蛋白質(zhì)的功能 可以考慮對蛋白質(zhì)的 進行改造 2 以P基因序列為基礎(chǔ) 獲得P1基因的途徑有修飾 基因或合成 基因 所獲得的基因表達時是遵循中心法則的 中心法則的全部內(nèi)容包括 的復(fù)制 以及遺傳信息在不同分子之間的流動 即 3 蛋白質(zhì)工程也被稱為第二代基因工程 其基本途徑是從預(yù)期蛋白質(zhì)功能出發(fā) 通過 和 進而確定相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列 據(jù)此獲得基因 再經(jīng)表達 純化獲得蛋白質(zhì) 之后還需要對合成蛋白質(zhì)的生物 進行鑒定 答案 1 氨基酸序列 或結(jié)構(gòu) 2 PP1DNA和RNA 或遺傳物質(zhì) DNA RNA RNA DNA RNA 蛋白質(zhì) 或轉(zhuǎn)錄 逆轉(zhuǎn)錄 翻譯 3 設(shè)計蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)推測氨基酸序列功能 蛋白質(zhì)工程與基因工程的比較 易錯易混防范清零 易錯清零 易錯點1誤認(rèn)為目的基因的插入是 隨機 的 點撥目的基因的插入位點不是隨意的 基因表達需要啟動子與終止子的調(diào)控 所以目的基因應(yīng)插入到啟動子與終止子之間的部位 若目的基因插入到啟動子內(nèi)部 啟動子將失去原功能 易錯點2混淆啟動子與起始密碼子 終止子與終止密碼子 不明確標(biāo)記基因的作用 點撥啟動子 起始密碼子 終止子 終止密碼子 1 啟動子 一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段 位于基因的首端 它是RNA聚合酶識別 結(jié)合的部位 2 終止子 一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段 位于基因的尾端 作用是使轉(zhuǎn)錄過程停止 3 起始密碼子和終止密碼子位于mRNA上 分別控制翻譯過程的啟動和終止 4 標(biāo)記基因 一般為抗生素抗性基因或熒光基因等 其作用是鑒別受體細胞中是否含有目的基因 目的基因是否導(dǎo)入成功 從而將含目的基因的細胞篩選出來 易錯點3誤認(rèn)為切取目的基因與切取載體時 只能 使用 同一種酶 點撥 1 在獲取目的基因和切割載體時通常用同種限制酶 以獲得相同的黏性末端 但如果用兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端相同時 在DNA連接酶的作用下目的基因與載體也可以連接起來 2 為了防止載體或目的基因的黏性末端自己連接即所謂 環(huán)化 可用不同的限制酶分別處理目的基因和載體 使目的基因兩側(cè)及載體上具有兩個不同的黏性末端 易錯點4不能依據(jù)目的基因兩端的識別位點與運載體中 啟動子 終止子 之間的特定序列準(zhǔn)確選擇 限制酶 點撥限制酶選擇的注意事項 1 根據(jù)目的基因兩端的限制酶切點確定限制酶的種類 應(yīng)選擇切點位于目的基因兩端的限制酶 如圖甲可選擇Pst 不能選擇切點位于目的基因內(nèi)部的限制酶 如圖甲不能選擇Sma 為避免目的基因和質(zhì)粒的自身環(huán)化和隨意連接 也可使用不同的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒 如圖甲也可選擇用Pst 和EcoR 兩種限制酶 但要確保質(zhì)粒上也有這兩種酶的切點 2 根據(jù)質(zhì)粒的特點確定限制酶的種類 所選限制酶要與切割目的基因的限制酶相一致 以確保具有相同的黏性末端 質(zhì)粒作為載體必須具備標(biāo)記基因等 所以所選擇的限制酶盡量不要破壞這些結(jié)構(gòu) 如圖乙中限制酶Sma 會破壞標(biāo)記基因 如果所選酶的切點不是一個 則切割重組后可能丟失某些片段 若丟失的片段含復(fù)制起點區(qū) 則切割重組后的片段進入受體細胞后不能自主復(fù)制 規(guī)范答題 轉(zhuǎn)基因育種是利用遺傳轉(zhuǎn)化方法將有價值的外源基因?qū)胧荏w物種獲得轉(zhuǎn)化體 再將轉(zhuǎn)化體植株經(jīng)過常規(guī)育種程序加以選擇和培育 最后選育出具有優(yōu)良性狀的新品種 對于作物育種具有重大的意義 圖甲表示我國自主研發(fā)的轉(zhuǎn)基因抗蟲玉米的主要培育流程 圖乙表示天然土壤農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒結(jié)構(gòu) 部分基因及限制性內(nèi)切酶作用位點如圖所示 請回答 1 找錯 糾錯 錯答序號 正答 錯答序號 正答 錯答序號 正答 錯答序號 正答 卡那霉素 四環(huán)素 害蟲抗性接種實驗法 2 錯因分析 序號 未能考慮到限制酶 也能識別限制酶 識別位點中的 GATC 片段 因此 若使用酶 切取質(zhì)粒將會導(dǎo)致T DNA片段全部切除序號 忽視了四環(huán)素抗性基因片段中含限制酶 識別位點 切割時已被破壞 而卡那霉素抗性基因并未被破壞序號 錯將 個體水平 答作 分子水平 注序號 也可答作 或 或