實驗十四血清膽固醇測定(膽固醇氧化酶法)

實驗十四 血清膽固醇測定（膽固醇氧化酶法）膽固醇的測定方法很多；通常可分為化學試劑比色法、酶法、氣相色譜法、高效液相色譜法、核素稀釋質(zhì)譜法五大類?；瘜W試劑比色法中有直接法和間接法；前者可用血清直接測定，后者是用溶劑或其它方法提取膽固醇后再作定量。酶法由于操作簡便、結果準確，試劑無腐蝕性，而且因使用特異性酶，大大減少了血液中其它成分的干擾，目前已成為測定膽固醇的主要方法?！灸康摹?了解膽固醇氧化酶法測定血清膽固醇的原理，能進行血清膽固醇測定的操作。2.掌握血清膽固醇測定的臨床意義?！驹怼垦逯锌偰懝檀迹═C）包括膽固醇酯(CE)和游離型膽固醇(FC),酯型占70%，游離型占30%。膽固醇酯酶（CEH）先將膽固醇酯水解為膽固醇和游離脂肪酸（FFA），膽固醇在膽固醇氧化酶（COD）的作用下氧化生成4-膽甾烯酮和過氧化氫。后者經(jīng)過氧化物酶（POD）催化氫與4-氨基安替比林（4-AAP）和酚反應，生成紅色的醌亞胺，其顏色深淺與膽固醇的含量呈正比，在500nm波長處測定吸光度，與標準管比較可計算出血清膽固醇的含量。反應式如下：【器材】試管、吸管、試管架、微量加樣器、恒溫水浴箱、分光光度計?！驹噭棵阜y定膽固醇多采用市售試劑盒。1. 酶應用液 膽固醇酶試劑的組成為：pH6.7磷酸鹽緩沖液 50mmol/L膽固醇酯酶 200U/L膽固醇氧化酶100U/L過氧化物酶3 000U/L1 / 34-氨基安替比林 0.3 mmol/L苯酚 5 mmol/L此外還含有膽酸鈉和Triton X-100，膽酸鈉是膽固醇酯酶的激活劑，表面活性劑Triton X-100能促進脂蛋白釋放膽固醇和膽固醇酯，有利于膽固醇酯的水解。2 5.17 mmol/L（200mg /dl）膽固醇標準液 精確稱取膽固醇 200mg溶于無水乙醇，移入100ml容量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度(也可用異丙醇等配制)?！静僮鳌咳≡嚬?支，編號，按下操作。表3-15 酶法測定血清膽固醇操作步驟加入物（ml）測定管標準管空白管血清0.02膽固醇標準液0.02蒸餾水0.02酶應用液2.002.002.00混勻后，37水浴保溫15分鐘，在500nm波長處比色，以空白管調(diào)零，讀取各管吸光度?！居嬎恪俊咀⒁馐马棥?. 黃疸血清過高的膽紅素可還原部分反應中的H2O2，降低顯色反應，使結果偏低。但測定膽固醇，膽紅素對酶法的干擾比化學法小。2. 用膽固醇標準液引起的誤差較大，故目前提倡采用膽固醇定值血清為標準。3. 輕度溶血對測定結果無影響，但明顯溶血可使結果增高，此時可用一個不加COD的空白管從結果中減去后糾正。4. 其它影響因素，如維生素C、谷胱甘肽、氟化物引起負偏差?！菊⒖挤秶?.105.70mmol/L【臨床意義】1. 血清膽固醇增高 常見于動脈粥樣硬化、原發(fā)性高脂血癥、糖尿病、腎病綜合征、膽管阻塞、甲狀腺功能減退。2. 血清膽固醇降低 常見嚴重貧血、甲狀腺功能亢進、長期營養(yǎng)不良等。【結果及分析】【思考題】1膽固醇有哪些重要的生理功能，血清膽固醇升高對機體最嚴重的危害是什么？2膽固醇在體內(nèi)可轉(zhuǎn)變?yōu)槟男┪镔|(zhì)，如何排泄？3實驗中需要哪幾種酶參加，各有什么作用？ 溫馨提示：最好仔細閱讀后才下載使用，萬分感謝！