[doc格式] 金胺“O”熒光染色法在結核病細菌學檢驗中的應用

金胺“O”熒光染色法在結核病細菌學檢驗中的應用中國衛(wèi)生檢驗雜志2008年5月第l8卷第5期ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology,May2008;Vol18No5851【微生物檢測方法】金胺”0”熒光染色法在結核病細菌學檢驗中的應用戴學海,金法祥,湯佳良,許鵬(浙江省紹興市第六人民醫(yī)院,浙江紹興312000)摘要目的:比較兩種抗酸桿菌染色方法的差異.方法:采用金胺”0”熒光染色法和萋一尼染色法同時對同一病人標本進行檢測.結果:經過240例標本對比實驗,熒光染色組84例陽性,其陽性率為35.O%,萋一尼染色組7O例,陽性率為29.2%,經檢驗,X2=1.88,P>0.05,無顯著性差異.在兩組結果1+的陽性對比中,熒光染色組為15.8%,而抗酸染色組為9.6%,經檢驗=5.56,P<0.05,兩種方法有差異;而2+,3+,4+的陽性率P值均大于0.05,無顯著性差異.結論:金胺”0”熒光染色組檢出率明顯高于萋一尼染色組,尤其是痰液標本菌量是1+,對那些病變輕,排菌量少的肺結核病人的診斷具有重要意義.熒光染色鏡檢時間短,工作效率高,適用于大量標本的檢測.關鍵詞熒光染色;抗酸染色;抗酸桿菌中圖分類號R446文獻標識碼A文章編號10048685(2008)05085102ApplicationoffluorescencestainofauramineOtoinspectionoftuberculosisbacteriologyDaiXuehai,JinFaxiang,TangJialiang,XuPeng(ShaoxingSixthPeopleSHospital,Shaoxing312000,China)Abstract0bjective:Tocomparethedifferencesbetweenthesetwowaysofacidfaststains.Methods:TestsimultaneouslyonthespecimensfromthesamepatientsbythewaysoffluorescencestainofAuramineOandZiehiNeelsenstain.Results:Care.fulcontrastofthe240specimens,thereare84onesinthegroupofflouescencestain,whicharepositive,whosepositiverateis35.O%.WhileinthegroupofZiehiNeelsenstain,thereare70specimensprovedpositive,whosepositiverateisjust29.2%.Throughtheinspectionof,resultingin=1.88,P>0.05,wecanseethereisondifferencebetweenthesetwoways.Intermsofwatchingtheirpositivecontrastof1+.therateoffluorescencestainis15.8%.buttherateofacidfaststainisonly9.6%.Meanwhile,throughtheinspectionofX,whichresultedin=5.56,P<0.05,obviously,therearesomedifferencesbetweenthem.WhatSparedwiththeirpositiveratesof2+.3+.4+.theyareallover0.05.whichiSalmostthesame.Conclusion:ComparedwithZiehiNeelsenstain,fluorescencestainofauramineOhasaclearadvantageinseekingrates.Especiallytothepatientsofpulmonarytuberculosis.whosebacteriumvolumeofsputumspecimensis1+andthepathologicalchangesarelighterandthebacteriumcapacitiesaresmaller,atthesametime.Becauseoffluorescencestain,weneedspendlesstimeonlensexams.Whichisevenmoreefficient.Nodouhisfitsfortestingagreatspecimen.KeywordsFluorescencestain;Acidfaststain;Acidfastbacillus目前,臨床上結核病細菌學的診斷主要采用抗酸染色法,即萋一尼染色法,該法已成為抗酸桿菌檢測的經典方法,但因該法檢測時間長,陽性檢出率低,已無法滿足臨床診斷需要.我們采用金胺”O(jiān)”熒光染色法檢測240例痰液標本,通過與萋一尼法對比試驗,證明熒光染色法能提高抗酸桿菌的陽性檢出率.1材料與方法1.1熒光染色液的配制染色液:金胺”0”1g溶于95%乙醇100ml中,加5%石炭酸液900ml混勻即可.脫色劑:3%鹽酸酒精.復染劑:高錳酸鉀0.5g,溶于100ml蒸餾水.1.2抗酸染色液配制作者簡介戴學海(1962),男,學士,副主任醫(yī)師,主要從事老年內年及基礎研究工作.按照”全國結核病診斷細菌學檢驗規(guī)程”進行.1.3標本來源結核病人痰液標本來自我院門診或住院結核病人,這些病人均經CT,PPD試驗及結核抗體檢測等臨床診斷為肺結核病人.1.4操作方法每份痰液標本按標準(2cm1cm)涂兩張大小及厚度相當的片子待干,火焰固定,將痰涂片隨機分成熒光染色組和抗酸染色兩組進行染色和鏡檢.1.5染色方法將痰液涂片用熒光染色液染10min,水洗后用3%的鹽酸酒精脫色12min,至外觀無黃色為止,水洗后加復染劑12min,水洗,晾干待檢.抗酸染色法按全國結核病細菌學檢驗規(guī)程進行.(下轉第923頁)中國衛(wèi)生檢驗雜志2008年5月第18卷第5期ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology,May2008:Vol18No5923統(tǒng)計結果顯示,微生物性病原是導致食物中毒的主要因素,其中2003,2004年副溶血性弧菌導致的食源性疾病分別占微生物性食源性疾病的40%和23%,已經超過沙門氏菌成為微生物性食物中毒最大的致病菌,而深圳市20032006年細菌性食物中毒的病因分析中,副溶血性弧菌也是排在首位.副溶血性弧菌嗜鹽畏酸,在無鹽培養(yǎng)基上不能生長,在食醋中只能存活1min,加熱至56C510min滅活.由該菌引起的食物中毒多為進食海產品或鹽腌漬品,其次為蛋品,肉類或蔬菜.進食肉類或蔬菜而致病者,多因食物容器或砧板污染所引起.根據中毒患者的臨床癥狀,流行病學調查和實驗室檢查結果,可以確定本次食物中毒是一起由副溶血性弧菌引起的食物中毒.造成這起中毒事故發(fā)生的原因:一方面是由于該店環(huán)境衛(wèi)生條件不良,操作間管理混亂,冰箱內存放的食品生熟不分,冰箱內有血跡及積霜并出現滴水現象;廚房沒有粗加工間,砧板生熟不分,有一塊砧板出現爆裂現象(砧板1),裂縫內有食物殘渣,未及時清除干凈;而廚房當班廚師均留有長指甲,帶戒指,這些都可能存在交叉污染,為細菌的繁殖提供了條件;另一方面消費者的預防意識不夠也是一個主要原因.認為經過火鍋的高溫煮燙食物就滅菌了,為了保證肉的鮮嫩,甚至煮很短時間就撈出食用,殊不知在高溫下作用一定時間細菌才會被殺死,時間過短將起不到應有的殺菌作用.4建議應加強對從業(yè)人員的衛(wèi)生知識培訓,提高其食品衛(wèi)生管理水平,降低操作不當及食品加工過程可能發(fā)生的危害因素,保證食物安全衛(wèi)生;同時也提醒我們衛(wèi)生部門應加強傳染病防治法宣傳,加大衛(wèi)生知識執(zhí)法力度,在食品衛(wèi)生監(jiān)督管理中,預防細菌性食物中毒應重點抓住3個環(huán)節(jié):防止食品污染;控制細菌繁殖;食品食用前應徹底加熱,以消滅病原菌的傳播.消費者也應多了解一些傳染病的預防知識,增加自我保護能力.參考文獻1扈慶華,鄭薇薇,石曉路,等.雙重實時PCR快速同時檢測霍亂弧菌和副溶血弧菌J.中華微生物學和免疫學雜志,2004,24(12):1004一l007.(收稿日期:2008一O118)(上接第851頁)1.6鏡檢熒光染色組采用OLYMPUSBX41顯微鏡觀察,20X物鏡計數,40X物鏡觀察抗酸桿菌菌體形態(tài),在暗視野背景下抗酸桿菌發(fā)出黃綠色熒光.抗酸染色組涂片采用普通光學顯微鏡進行檢測.熒光染色和抗酸染色鏡檢時間和結果報告標準均以全國結核病細菌學檢驗規(guī)程為準,以鏡檢1+以上者作陽性計算,對于13條/50個視野不作陽性計算,應重留標本復杏.2結果240例肺結核病人痰液標本抗酸染色和熒光染色檢測結果見表1.表1熒光染色和抗酸染色抗酸桿菌陽性檢測結果3討論近年來,診斷結核病仍主要依靠實驗室檢測抗酸桿菌,雖然分子生物學方法如聚合酶鏈反應(PCR),脈沖電場凝膠電泳(PEGE),IS6110一RFLP等方法檢測結核桿菌DNA,具有快速,敏感等優(yōu)點,但臨床診斷需要仍采用痰液涂片抗酸桿菌檢測,作為結核病最重要,最直接的依據.常用的萋一尼抗酸染色操作繁瑣,染色加熱時易產生氣溶膠;技術要求較高,油鏡觀察視野范圍小,鏡檢時間長,檢驗人員易疲勞,同時對于涂片中存在的少量細菌難以發(fā)現.從表中資料結果顯示,兩組結果中抗酸桿菌1+的陽性率,熒光染色組為15.8%,抗酸染色組為9.6%,=5.56,P<0.05,差別有顯著性,而2+以上,均無顯著性差異,這表明熒光染色和抗酸染色陽性率差異主要體現在1+(即含菌量較少的痰液標本).對于那些病變輕,排菌量少的肺結核的診斷具有重要價值,通過熒光染色可明顯提高陽性檢測率,有利于臨床診斷.熒光染色鏡檢的注意事項:熒光染色后涂片應在24h內鏡檢完成,遇需隔夜時,置4C保存,次Et完成鏡檢,否則熒光減退,會造成陽性結果的不確定或者漏檢;熒光素染色液應放置于棕色瓶中暗處存放,且時間不超過2周;有個別菌體40X暗色背景難以區(qū)別的抗酸桿菌,一定要轉到IOOX油鏡下加以確認.熒光染色鏡檢抗酸桿菌在暗色背景下會發(fā)出黃綠色熒光,非常醒目,容易發(fā)現,而且40X物鏡視野大,鏡檢速度快,而抗酸染色IOOX油鏡視野較小,鏡檢較慢,因此,應用金胺“0”熒光染色法檢測抗酸桿菌是一種簡便,準確方法,適合于大批量標本檢測,值得在臨床上推廣.參考文獻1中國防癆協(xié)會.結核病細菌學檢驗規(guī)程J.中國防癆雜志,1996,18(1):2829.2KunimotoDY,PeppierMS,TalbotJ,eta1.AnalysisofmycobactefiumaviumcomplexisolatesfrombloodsamplesofAIDSpatientsbypulsedfieldgelelectrophoresisJ.JClinMicrobiol,2003,41(1):498499.3WillamHB,KerryHL,RandallH,eta1.Identificationofacontami.natingmycobacteriumtuberculosisstrainwithatranspositionofanIS6110insertionelementresultinginanalteredspoligotypeJ.JClinMicrobiol,2001,39(3):10921096.(收稿日期:200710一l8)