《環(huán)境微生物學(xué)》實驗三微生物培養(yǎng)基的配制和滅菌

實 驗 三微生物培養(yǎng)基的配制和滅菌 微生物培養(yǎng)基的配制和滅菌目的要求實驗材料實驗程序 目 的 要 求了 解 培 養(yǎng) 基 的 配 制 原 理 和 方 法 ， 掌 握 其配 制 過 程 。了 解 幾 種 滅 菌 方 法 ， 掌 握 干 熱 滅 菌 法 和加 壓 蒸 汽 滅 菌 法 的 原 理 及 其 使 用 方 法 。熟 悉 分 離 、 培 養(yǎng) 微 生 物 前 的 有 關(guān) 準(zhǔn) 備 工作 及 操 作 方 法 。 實 驗 材 料藥 品 ： 牛 肉 膏 、 蛋 白 胨 、 氯 化 鈉 、 瓊 脂 、 馬 鈴 薯 、 蔗 糖 ；可 溶 性 淀 粉 、 K2HPO4、 KNO3、 MgSO47H2O、FeSO47H2O等 。高 壓 蒸 汽 滅 菌 器 、 恒 溫 干 熱 滅 菌 箱 、 細(xì) 菌 過 濾 器 、 紫 外 線殺 菌 燈 。其 它 ： 天 平 、 牛 角 匙 、 電 爐 、 1N HCl、 1N NaOH、 pH試 紙 、刻 度 搪 瓷 杯 、 量 筒 、 漏 斗 、 漏 斗 架 、 玻 棒 、 帶 玻 璃 珠 的 三角 瓶 、 帶 棉 塞 的 無 菌 試 管 、 無 棉 塞 的 空 試 管 、 培 養(yǎng) 皿 、 吸管 、 各 種 包 裝 紙 、 防 水 紙 、 繩 索 、 棉 花 、 標(biāo) 簽 等 。 實 驗 程 序培 養(yǎng) 基 的 配 制分 離 培 養(yǎng) 微 生 物 常 用 器 皿 的 準(zhǔn) 備培 養(yǎng) 基 和 玻 璃 器 材 的 滅 菌 方 法 實 驗 程 序 1 （ 培 養(yǎng) 基 的 配 制 ）培 養(yǎng) 基 的 種 類培 養(yǎng) 基 的 配 制 方 法 和 步 驟三 種 培 養(yǎng) 基 的 配 方 及 配 制無 菌 水 的 制 備 實 驗 程 序 2 （ 培 養(yǎng) 基 的 種 類 ）據(jù) 組 成 成 分 可 分 為 : 1.合 成 培 養(yǎng) 基 ： 由 各 種 純 化 學(xué) 物 質(zhì) 按 一 定 比 例 配 制 而 成 。 2.半 合 成 培 養(yǎng) 基 ： 有 一 部 分 純 化 學(xué) 物 質(zhì) 和 另 一 部 分 天 然 物 質(zhì) 配 制而 成 。 3.天 然 培 養(yǎng) 基 ： 利 用 天 然 來 源 的 有 機 物 配 制 而 成 。從 培 養(yǎng) 基 的 物 理 狀 態(tài) 可 分 為 1.液 體 培 養(yǎng) 基 ： 不 加 凝 固 劑 的 液 體 狀 態(tài) 培 養(yǎng) 基 。 2.固 體 培 養(yǎng) 基 ： 在 液 體 培 養(yǎng) 基 中 加 入 2%左 右 的 凝 固 劑 的 固 體 狀態(tài) 的 培 養(yǎng) 基 或 農(nóng) 副 產(chǎn) 品 培 養(yǎng) 基 。 3.半 固 體 培 養(yǎng) 基 ： 在 液 體 培 養(yǎng) 基 中 加 入 0.20.5%凝 固 劑 而 成的 半 固 體 狀 培 養(yǎng) 基 。 實 驗 程 序 3 （ 培 養(yǎng) 基 的 種 類 ）常 用 凝 固 劑 為 瓊 脂 （ 其 次 為 明 膠 ） ， 又 叫 洋 菜 、 凍 粉 。 實 驗 程 序 4 （ 培 養(yǎng) 基 的 配 制 方 法 和 步 驟 ）稱 量 ： 按 照 配 方 正 確 稱 取 各 種 原 料 放 于 搪 瓷 杯 中 。溶 化 ： 在 搪 瓷 杯 中 加 入 所 需 水 量 ， 玻 棒 攪 勻 ， 加 熱 溶 解 。調(diào) pH值 ： 用 1N NaOH或 1N HCl調(diào) pH， 用 pH試 紙 對 照 。加 瓊 脂 溶 化 ： 加 熱 過 程 中 要 不 斷 攪 拌 ， 可 適 當(dāng) 補 水 。分 裝 ： 注 意 不 要 污 染 棉 塞 。包 扎 成 捆 ， 掛 上 標(biāo) 簽 （ 必 須 用 鉛 筆 寫 ） ， 注 明 何 種 培 養(yǎng) 基 。滅 菌 備 用 ： 培 養(yǎng) 基 滅 菌 后 必 須 在 37 0C下 恒 溫 培 養(yǎng) 24h， 確 定 無菌 生 長 ， 方 可 使 用 。 實 驗 程 序 5 （ 培 養(yǎng) 基 的 配 制 方 法 和 步 驟 ） 實 驗 程 序 6 （ 培 養(yǎng) 基 的 配 制 方 法 和 步 驟 ） 實 驗 程 序 7 （ 三 種 培 養(yǎng) 基 的 配 方 及 配 制 ）牛 肉 膏 蛋 白 胨 瓊 脂 培 養(yǎng) 基 （ 用 于 分 離 和 培 養(yǎng) 細(xì)菌 ， 是 一 種 天 然 培 養(yǎng) 基 ） 配 方 如 下 ： 牛 肉 膏 3g 蛋 白 胨 5g 氯 化 鈉 3g 瓊 脂 20g 自 來 水 1000mL pH 7.27.4 滅 菌 1.05kg/cm 2， 2530min 實 驗 程 序 8 （ 三 種 培 養(yǎng) 基 的 配 方 及 配 制 ）馬 鈴 薯 （ 或 豆 芽 汁 ） 蔗 糖 （ 或 葡 萄 糖 ） 瓊 脂 培 養(yǎng) 基（ 用 于 分 離 和 培 養(yǎng) 真 菌 之 用 ， 是 一 種 半 合 成 培 養(yǎng) 基 ） ，其 配 方 如 下 ： 去 皮 馬 鈴 薯 （ 或 鮮 豆 芽 ） 200g 蔗 糖 （ 或 葡 萄 糖 ） 20g 自 來 水 1000mL 瓊 脂 20g pH 自 然 滅 菌 ： （ 含 蔗 糖 ） 1.05kg/cm 2 20min （ 含 葡 萄 糖 ） 0.1kg/cm2 30min 實 驗 程 序 9 （ 三 種 培 養(yǎng) 基 的 配 方 及 配 制 ）淀 粉 瓊 脂 培 養(yǎng) 基 （ 高 氏 一 號 Gause1） ， 用 于 分 離和 培 養(yǎng) 放 線 菌 ， 是 一 種 合 成 培 養(yǎng) 基 。 配 方 如 下 ：可 溶 性 淀 粉 20.0g KNO3 1.0g K2HPO4 0.5g MgSO4 7H2O 0.5g NaCl 0.5g FeSO 4 7H2O 0.01g 瓊 脂 20g 自 來 水 1000mL 滅 菌 ： 1.05kg/cm2 30min 實 驗 程 序 10 （ 三 種 培 養(yǎng) 基 的 配 方 及 配 制 ）無 菌 水 的 制 備 無 菌 水 為 下 一 次 微 生 物 分 離實 驗 中 所 需 要 的 材 料 。 100mL三 角 燒 瓶 （ 裝 有 玻 璃 珠 ） ， 裝 自 來 水45.0mL， 試 管 中 裝 9.0mL自 來 水 ， 塞 上 棉 塞 ，包 扎 、 滅 菌 備 用 。 三 角 燒 瓶 和 試 管 須 預(yù) 先 塞 好棉 塞 ， 并 經(jīng) 干 熱 滅 菌 。 實 驗 程 序 11 （ 分 離 培 養(yǎng) 微 生 物 常 用 器 皿 的 準(zhǔn) 備 ）清 洗 一 些 玻 璃 儀 器 ： 如 三 角 燒 瓶 、 試 管 、 培 養(yǎng) 皿 、 吸 管 等 。棉 塞 的 制 作 包 裝 培 養(yǎng) 皿 和 吸 管 等 。 實 驗 程 序 12 （ 培 養(yǎng) 基 和 玻 璃 器 材 的 滅 菌 方 法 ）干 熱 滅 菌 法 ： 電 熱 烘 箱 作 為 干 熱 滅 菌 器加 壓 蒸 汽 滅 菌 法 其 步 驟 如 下 ： 1.滅 菌 器 內(nèi) 加 入 一 定 量 的 水 ， 將 用 防 水 紙 包 扎 好 的 物 品 放 入 其 中 。2.接 通 電 源 ， 進(jìn) 行 加 熱 。 3. 排 除 高 壓 鍋 內(nèi) 的 冷 空 氣 ， 可 將 排 氣 閥 打 開 ， 待 排 出 大 氣 后 關(guān)閉 排 氣 閥 ； 或 關(guān) 閉 排 氣 閥 ， 待 壓 力 上 升 到 0.5kg/cm2時 再 打 開排 氣 閥 ， 待 壓 力 回 復(fù) 到 0時 再 關(guān) 閉 排 氣 閥 。 4.當(dāng) 壓 力 達(dá) 15bl/in 2（ 即 1.05kg/cm2） 時 ， 此 時 滅 菌 器 內(nèi) 的 溫度 為 1210C， 維 持 30min。 對 熱 不 穩(wěn) 定 的 培 養(yǎng) 基 如 含 有 葡 萄 糖 、氨 基 酸 等 物 時 ， 應(yīng) 適 當(dāng) 降 低 壓 力 ， 延 長 時 間 。 5.滅 菌 時 間 一 到 ， 切 斷 電 源 ， 待 壓 力 降 至 零 時 ， 才 能 打 開 排 氣 閥 ，然 后 打 開 滅 菌 器 蓋 ， 取 出 物 品 。 實 驗 程 序 13 實 驗 程 序 14 實 驗 程 序 15 （ 培 養(yǎng) 基 和 玻 璃 器 材 的 滅 菌 方 法 ）間 歇 滅 菌 法 ： 待 滅 菌 的 物 品 放 在 滅 菌 器 或 蒸 籠 里 ， 每 天 蒸 煮 1次 ， 每次 煮 沸 1h， 連 續(xù) 3d重 復(fù) 進(jìn) 行 。 在 每 兩 次 蒸 煮 之 間 ， 將物 品 （ 指 培 養(yǎng) 基 ） 放 在 370C恒 溫 條 件 下 培 養(yǎng) 過 夜 ， 這樣 可 以 使 每 次 蒸 煮 后 未 殺 死 殘 留 的 芽 孢 萌 發(fā) 成 營 養(yǎng) 體 ，以 便 下 次 蒸 煮 時 殺 滅 。過 濾 除 菌 法 ： 不 能 用 加 熱 滅 菌 的 液 體 物 質(zhì) （ 如 維 生 素 、 血 清 ） ， 一 般可 用 細(xì) 菌 過 濾 器 進(jìn) 行 除 菌 。 （ 教 師 示 范 ） 實 驗 程 序 16 （ 培 養(yǎng) 基 和 玻 璃 器 材 的 滅 菌 方 法 ） 實 驗 程 序 17 （ 培 養(yǎng) 基 和 玻 璃 器 材 的 滅 菌 方 法 ）紫 外 線 滅 菌 法 ： 一 般 30W燈 管 ， 9m3空 間 ， 距 地 面 2m每 次 打 開 紫 外 線 照 射 0.5h，就 使 室 內(nèi) 空 氣 滅 菌 。 若 照 射 紫 外 線 時 先 噴 灑 石 炭 酸 等 化 學(xué) 消 毒 劑 ，可 增 強 滅 菌 效 果 。 紫 外 線 雖 有 較 強 的 殺 菌 力 ， 但 穿 透 力 弱 ， 即 使一 薄 層 玻 璃 或 水 層 就 能 將 大 部 分 紫 外 線 濾 除 ， 因 此 只 適 用 于 空 氣及 表 面 殺 菌 ?；?學(xué) 藥 劑 消 毒 滅 菌 ： 微 生 物 實 驗 室 中 常 用 的 化 學(xué) 殺 菌 劑 有 升 汞 、 甲 醛 、 高 錳 酸 鉀 、 酒精 、 碘 酒 、 龍 膽 紫 、 石 炭 酸 、 漂 白 粉 、 新 潔 爾 滅 、 煤 酚 皂 溶 液 ，它 們 有 的 是 殺 菌 劑 ， 有 的 是 抑 菌 劑 ， 詳 見 表 64。 實 驗 程 序 18 （ 培 養(yǎng) 基 和 玻 璃 器 材 的 滅 菌 方 法 ） 思 考 題固 體 培 養(yǎng) 基 加 瓊 脂 后 加 熱 溶 化 時 要 注 意 哪 些 問題 ？培 養(yǎng) 基 中 加 瓊 脂 的 作 用 是 什 么 ？干 熱 滅 菌 、 高 壓 蒸 汽 滅 菌 和 間 歇 滅 菌 的 場 合 有何 不 同 ？如 何 檢 查 培 養(yǎng) 基 滅 菌 是 否 徹 底 ？ 實 驗 三結(jié) 束