植物病害診斷的技術(shù)與防治.ppt

作物病害診斷與防治,項(xiàng)目一 植物病害診斷的技術(shù) 項(xiàng)目二 農(nóng)作物病害發(fā)生監(jiān)測(cè)與預(yù)警技術(shù) 項(xiàng)目三 作物病害綜合防控技術(shù),項(xiàng)目一作物物病害診斷技術(shù),一、植物病害診斷的方法與步驟,（一）、植物病害診斷應(yīng)具有的知識(shí)：病害、病原、觀察技能 （二）、植物病害的診斷方法與步驟 田間觀察癥狀鏡檢病原分離、培養(yǎng)、接種。,二、診斷的一般程序,1、癥狀的識(shí)別與描述；（植物病害的田間觀察） 2、調(diào)查詢(xún)問(wèn)病史與有關(guān)檔案； 3、采樣檢查(鏡儉與剖檢等)； 4、專(zhuān)項(xiàng)檢測(cè)； 5、逐步排除法得出適當(dāng)結(jié)論。 一般性病害確診必須做到：癥狀吻合，病原形態(tài)吻合。,三、病害類(lèi)別識(shí)別,傳染性病害,非傳染性病害,真菌病害,細(xì)菌病害,病毒病害,線蟲(chóng)病害,寄生性種子植物病害,營(yíng)養(yǎng)條件不適宜,水分失調(diào),溫度不適宜,光照不適宜,中 毒,（一）非傳染性病害的識(shí)別,田間病害觀察,解 剖 檢 驗(yàn),環(huán)境條件調(diào)查,病 原 鑒 定,（一）非傳染性病害的識(shí)別,田間病害觀察,病害田間分布狀況：均勻發(fā)生、發(fā)病程度由輕到重、沒(méi)有發(fā)病中心。,病株表現(xiàn)：全株性（除高溫日灼和藥害外）。,癥狀鑒別：有病狀沒(méi)有病征?？蛇M(jìn)行保溫濕培養(yǎng)，觀查病征情況，可按病毒診斷治療。,田間調(diào)查：病害發(fā)生的普遍性和嚴(yán)重性、發(fā)病快慢、田間分布、發(fā)病時(shí)期、寄主品種等。,（一）非傳染性病害的識(shí)別,解 剖 檢 驗(yàn),環(huán)境條件調(diào)查,病組織切片,染色處理,鏡 檢,土壤、肥料、 氣象等條件的不適宜,接觸化學(xué)毒物、氣體引起,（一）非傳染性病害的識(shí)別,病 原 鑒 定,1、化學(xué)診斷法：土樣分析、測(cè)其營(yíng)養(yǎng)成分。（對(duì)缺素癥及鹽堿害有效）,2、人工誘發(fā)及排除病因的檢驗(yàn)法： 對(duì)可疑病因，人為地提供發(fā)病條件或采取治療的辦法觀察病害的發(fā)生條件。,3、指示植物鑒定法：用于缺素癥的鑒定。（指示植物是該植物缺某一營(yíng)養(yǎng)元素其癥狀表現(xiàn)出來(lái)。）,診斷方法：現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查、排除侵染性病害、治療診斷。 非侵染性病害的主要特點(diǎn)： （1）沒(méi)有病征。 （2）成片發(fā)生。 （3）沒(méi)有傳染性。（4）可以恢復(fù)。,（二）傳染性病害的識(shí)別,1、田間觀察：呈分散狀分布，由點(diǎn)到面，由一個(gè)發(fā)病中心向四周擴(kuò)展，有傳染性。 2、癥狀鑒別：傳染性病害一般有病征。 3、發(fā)病以后不能恢復(fù) 4、病原鑒定,（1）常見(jiàn)病害診斷：癥狀鑒別鏡檢病原查閱資料 （2）少見(jiàn)病害診斷：分離培養(yǎng)接種再分離 （柯赫氏證病律-Kochs Rule) 在病植物上常伴隨有一種病原生物存在； 該病原生物可在離體的或人工培養(yǎng)上分離純化而得到純培養(yǎng)； 將純培養(yǎng)接種到相同品種的健株上，表現(xiàn)出相同癥狀的病害； 從接種發(fā)病的植物上再分離到純培養(yǎng)，性狀與原來(lái)的記錄相同。,（二）傳染性病害的識(shí)別,四、病害診斷注意事項(xiàng),1、病害癥狀的復(fù)雜性,不同植物、或在同一植物不同部位、不同發(fā)育時(shí)期、不同的環(huán)境條件。,不同植物、或在同一植物不同部位、不同發(fā)育時(shí)期、不同的環(huán)境條件。,同一病原,癥狀可不一樣,不同病原,癥狀可相同,四、病害診斷注意事項(xiàng),2、傷害與病害的區(qū)別,傷害包括蟲(chóng)害、雹害、風(fēng)害等機(jī)械損傷,蟲(chóng)害如螨類(lèi)、蚜蟲(chóng)等可使葉變色、卷曲等不能與病害混淆,四、病害診斷注意事項(xiàng),3、病原菌與腐生菌的區(qū)分,植物受病原菌侵染，前期感染了病原菌、后期感染了腐生菌，鏡檢時(shí)要區(qū)分開(kāi)來(lái)。,4、并發(fā)性病害與續(xù)發(fā)性病害的區(qū)別,并發(fā)性病害當(dāng)植物發(fā)生一種病害時(shí)的同時(shí)，有另一種病害伴隨發(fā)生。如柑桔線蟲(chóng)病發(fā)生時(shí)常并發(fā)衰退病發(fā)生。,續(xù)發(fā)性病害當(dāng)植物發(fā)生一種病害后，可繼續(xù)發(fā)生另一種病害。感染蘋(píng)果花葉病的果實(shí)常發(fā)生炭疽病。,五、植物病原鑒定技術(shù),植物病原菌的分離和培養(yǎng) (一）植物病原真菌的分離 1、分離材料的選擇 2、分離方法： （組織分離法) （二)植物病原真菌的培養(yǎng) 1、培養(yǎng)基的制備 2、病原菌接種 3、病原菌培養(yǎng) （三）觀察記錄培養(yǎng)性狀,分離材料的選擇,分離材料的選擇對(duì)分離培養(yǎng)的成敗有著決定的影響，因?yàn)樵诟胁≈参锸芎Σ课坏膬?nèi)外，常有多種腐生菌，為減少腐生菌的污染，分離所用的病害材料應(yīng)盡可能新鮮，并且最好在病、健交接處選材取樣。病、健交接處，除材料新鮮，污染的可能性小外，病原菌的生活力強(qiáng)、比較活躍，容易分離成功。,分離方法,病原菌分離的方法因材料不同而異，植病實(shí)驗(yàn)室常見(jiàn)的方法有組織分離法和稀釋分離法； 其中最常用的方法是組織分離法， 而稀釋分離法主要用于病組織上產(chǎn)生大量孢子的病原真菌的分離。,組織分離法,組織分離法適用于大部分病菌的分離。 1.培養(yǎng)皿準(zhǔn)備: 取滅菌培養(yǎng)皿1個(gè),置于濕紗布上，在皿蓋上注明分離日期、材料和分離人姓名。 2 .培養(yǎng)皿平板制備： 用無(wú)菌操作法向培養(yǎng)皿中加入25乳酸12滴(可減少細(xì)菌污染)，然后將融化而冷至45左右的PDA培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中，每皿倒1015 ml，輕輕搖動(dòng)使之成平面。凝固后即成平板培養(yǎng)基。 注：分離細(xì)菌時(shí)不加乳酸,3.切取病組織小塊(葉斑病類(lèi)): 取新鮮病葉，選擇典型的單個(gè)病斑，用剪刀或解剖刀從病斑邊緣(病健交界處，)切取小塊(每邊長(zhǎng)34 mm)病組織數(shù)塊。 4.表面消毒: 將病組織放入70酒精中浸35s后，按無(wú)菌操作法將病組織移入0.1升汞液中分別表面消毒1-3min (也可使用其他表面消毒劑)，如植物組織柔嫩，則表面消毒時(shí)間宜短；反之則可長(zhǎng)些。然后放入滅菌水中連續(xù)漂洗三次，除去殘留的消毒劑。 果實(shí)、塊莖、枝稈等組織內(nèi)部的病原菌可用脫脂棉蘸70%酒精涂試病部表面，通過(guò)火焰去表面酒精。重復(fù)進(jìn)行2-3次，達(dá)到表面消毒。,5.用無(wú)菌操作法將病組織移至平板培養(yǎng)基上，每皿內(nèi)放45塊。 6.將培養(yǎng)皿倒置放入25左右恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)。一般34 d后觀察待分離菌的生長(zhǎng)結(jié)果。 7.若病組織小塊上均長(zhǎng)出較為一致的菌落，則多半為要分離的病原菌。在無(wú)菌條件下，用接種針(鏟)自菌落邊緣挑取小塊移入斜面培養(yǎng)基上，在25 左右恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)，數(shù)日后，觀察菌落生長(zhǎng)情況，如無(wú)雜菌生長(zhǎng)即得該分離病菌純菌種，便可置于冰箱中保存。,如果長(zhǎng)出幾種菌落,對(duì)長(zhǎng)出的菌落分別轉(zhuǎn)出，通過(guò)進(jìn)一步的接種實(shí)驗(yàn)明確哪一種為其病原菌。在組織分離工作中，如果植物材料體積較大且較軟(如患灰霉病的番茄果實(shí))，在分離過(guò)程中可直接挖取內(nèi)部患病組織移r入平板培養(yǎng)基上，完成分離工作。,討論,分離植物病原物時(shí)，為什么要選擇新鮮病材料，并且在病健交界處取樣?,植物病理徒手制片技術(shù),徒手制片的方法有整體封藏法、徒手切片法、組織透明制片法和涂抹制片法等多種。 最為常用的整體封藏法和徒手切片法兩種。,整體封藏法,對(duì)于生長(zhǎng)在植物病部表面或培基上的菌絲體、分生孢子、分生孢子梗和其他孢子器官以及線蟲(chóng)等，可直接擇取少許封藏在適當(dāng)?shù)母≥d劑中，在顯微鏡下觀察，根據(jù)材料的特點(diǎn)和觀察的目的可采用不同的方法封藏制片。 常用方法的概括為挑、刮、撥、撕四種。,挑：對(duì)于在植物受病部位或基質(zhì)表面生長(zhǎng)繁茂的霉?fàn)畈≡w(如霜霉菌)粉狀病原體(如銹菌、白粉菌)以及培養(yǎng)基上的許多培養(yǎng)菌，可用尖細(xì)的解剖針等直接挑取封埋制片，挑取病原體的量，在保證選材典型的前提下，越少越好，以免互相重疊，分辯不清。 取黃瓜霜霉病葉，小麥白粉病葉分別挑取霉?fàn)钗锖头蹱钗镧R檢病原菌的形態(tài)特點(diǎn)。,刮：對(duì)病部病原體稀少，或用放大鏡也難辯認(rèn)霉層的病害標(biāo)本，可采用兩側(cè)具刀的三角刮針(或可用刀片代替)刮取病原物制片。刮的方法是，用刮針的一刃，蘸浮載劑少許，在病部順同一個(gè)方向刮取23次，將刮得的病原體蘸在載玻片的浮載劑中封片鏡檢。浮載劑在保證浮載質(zhì)量的前提下要盡量少，否則少量的病原體在大滴的浮載劑中極易分散漂流，在顯微鏡下難以尋找。,撥：對(duì)于產(chǎn)生在植物表皮下或半埋生于基物內(nèi)的病原體孢子器官。如子囊殼、分生孢子器、閉囊殼等，可將病原體連同寄主組織一同撥下，放入浮載劑中，用兩支解剖針，一支穩(wěn)定材料，另一支撥出植物組織，使病原體外露制片。,撕：對(duì)于寄生在植物表皮細(xì)胞上的病原真菌，也可以將此有病原物的表皮撕下來(lái)制片鏡檢，這種方法不僅能看到病原物形態(tài)，而且可以觀察病原物與寄主的解剖學(xué)關(guān)系。 自田間取回感染白粉病的葉片，用刀片割破葉背表皮再用小鑷子輕輕撕下，放在浮載劑中制片鏡檢白粉病菌分生孢子梗、分生孢子形態(tài)。,徒手切片法,欲觀察受病組織病變，病菌侵入和寄主體內(nèi)擴(kuò)展過(guò)程，以及埋生在基物內(nèi)真菌子實(shí)體的形態(tài)結(jié)構(gòu)等，都需將有關(guān)材料切成薄片，進(jìn)行鏡檢，徒手切片是最常用的簡(jiǎn)便易行的方法，不需要特殊的設(shè)備，而且節(jié)省時(shí)間，切成的片子不僅可作臨時(shí)觀察，也可進(jìn)一步制成永久性玻片標(biāo)本。,徒手切片的基本用具是剃刀或刀片。 切片時(shí)以左手的食指和姆指捏住材料，中指頂住材料下端，使材料上端突出于手指以上23毫米。 右手握穩(wěn)刀，從左向右后方斜向切割。 注意刀口必須以材料面垂直，否則所得切面不正。 同時(shí)雙手不應(yīng)緊靠身體，而是要活動(dòng)自如。 用臂力均勻地沿刀口后部起拉向前方，連續(xù)切割45片后，用毛筆蘸水輕輕沿刀口取下，放入盛有水的淺玻皿中，在此過(guò)程中左手握著的材料不要放下，否則再切時(shí)難按原位置拿材料。 此外，在切片過(guò)程中，必須常用毛筆蘸水濕潤(rùn)材料，以免材料干涸不便切割。,切割一定數(shù)量的薄片后，用移置環(huán)在淺玻皿中選取合用的材料薄片，放在載玻片的水滴中，鏡檢合格者即酒精燈上將水烘干并擺正材料，然后加一滴乳酚油或其浮載劑；放在展片臺(tái)上略加熱，鏡檢如無(wú)氣泡，即可小心加蓋片，用吸水紙吸除多余的浮載劑，最后貼好標(biāo)簽，平放于切片板上，待干燥適宜時(shí)封固。 徒手切片的缺點(diǎn)是對(duì)于微小或過(guò)大，柔軟、多汁、肉質(zhì)及堅(jiān)硬的材料不易切取，也難制成連續(xù)切片，此外切片的厚薄也難一致。切片機(jī)切片即可克服這些缺點(diǎn)。,項(xiàng)目一 植物病害診斷技術(shù)概述小結(jié),一、作物病害診斷的步驟 田間觀察癥狀鏡檢病原分離、培養(yǎng)、接種。 二、作物病害診斷技術(shù) 植物病害的癥狀觀察與描述 病原物鑒定,謝 謝！,