三年高考（2017-2019）高考生物真題分項匯編 專題15 現(xiàn)代生物科技專題（含解析）

專題15 現(xiàn)代生物科技專題1（2019北京卷·4）甲、乙是嚴重危害某二倍體觀賞植物的病害。研究者先分別獲得抗甲、乙的轉(zhuǎn)基因植株。再將二者雜交后得到F1，結(jié)合單倍體育種技術(shù)，培育出同時抗甲、乙的植物新品種，以下對相關(guān)操作及結(jié)果的敘述，錯誤的是A將含有目的基因和標記基因的載體導(dǎo)入受體細胞B通過接種病原體對轉(zhuǎn)基因的植株進行抗病性鑒定C調(diào)整培養(yǎng)基中植物激素比例獲得F1花粉再生植株D經(jīng)花粉離體培養(yǎng)獲得的若干再生植株均為二倍體【答案】D【解析】【分析】由題意可知，同時抗甲、乙的植物新品種的培養(yǎng)過程為：把含抗甲的目的基因的重組質(zhì)粒導(dǎo)入植物細胞，獲得抗甲植株，同時把含抗乙的目的基因的重組質(zhì)粒導(dǎo)入植物細胞，獲得抗乙植株，通過雜交獲得F1（二倍體植株），取F1的花粉經(jīng)花藥離體培養(yǎng)獲得單倍體植株，用秋水仙素處理單倍體植株獲得純合的同時抗甲、乙的植物新品種（二倍體）?！驹斀狻恳@得轉(zhuǎn)基因的抗甲或抗乙植株，需要構(gòu)建基因表達載體（含目的基因、標記基因、啟動子、終止子、復(fù)制原點），再把基因表達載體導(dǎo)入受體細胞中，A正確；對轉(zhuǎn)基因植株進行檢測時，可以通過抗病接種實驗進行個體水平的檢測，B正確；對F1的花粉進行組織培養(yǎng)時，需要經(jīng)過脫分化和再分化過程，其中生長素/細胞分裂素比例高時利于根的分化，比例低時利于芽的分化，C正確；經(jīng)花粉離體培養(yǎng)獲得的植株是單倍體，D錯誤。因此，本題答案選D。2（2019江蘇卷·16）下列生物技術(shù)操作對遺傳物質(zhì)的改造，不會遺傳給子代的是A將胰島素基因表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌，篩選獲得基因工程菌B將花青素代謝基因?qū)胫参矬w細胞，經(jīng)組培獲得花色變異植株C將腸乳糖酶基因?qū)肽膛Ｊ芫?，培育出產(chǎn)低乳糖牛乳的奶牛D將腺苷酸脫氨酶基因轉(zhuǎn)入淋巴細胞后回輸患者，進行基因治療【答案】D【解析】【分析】轉(zhuǎn)基因技術(shù)的原理是基因重組?；蛑亟M和基因突變、染色體變異均屬于可遺傳的變異。基因治療：指把正?；?qū)氩∪梭w內(nèi)，使該基因的表達產(chǎn)物發(fā)揮功能，從而達到治療疾病的目的，這是治療遺傳病的最有效的手段?！驹斀狻繉⒑葝u素基因表達載體的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌獲得的轉(zhuǎn)基因菌，可以通過二分裂將胰島素基因傳給后代，A不符合題意；將花青素代謝基因?qū)胫参矬w細胞，再經(jīng)植物組織培養(yǎng)獲得的植株所有細胞均含有花青素代謝基因，花青素代謝基因會隨該植物傳給后代，B不符合題意；將腸乳糖酶基因?qū)肽膛Ｊ芫眩嘤霎a(chǎn)低乳糖牛乳的奶牛所有細胞均含有腸乳糖酶基因，可以遺傳給后代，C不符合題意；該患者進行基因治療時，只有淋巴細胞含有該腺苷酸脫氨酶基因，性原細胞不含該基因，故不能遺傳給后代，D符合題意。3（2019江蘇卷·23）下圖為雜交瘤細胞制備示意圖。骨髓瘤細胞由于缺乏次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（HGPRT-），在HAT篩選培養(yǎng)液中不能正常合成DNA，無法生長。下列敘述正確的是A可用滅活的仙臺病毒誘導(dǎo)細胞融合B兩兩融合的細胞都能在HAT培養(yǎng)液中生長C雜交瘤細胞需進一步篩選才能用于生產(chǎn)D細胞膜的流動性是細胞融合的基礎(chǔ)【答案】ACD【解析】【分析】（1）動物細胞融合的原理是細胞膜的流動性、細胞的增殖，誘導(dǎo)手段有電激、聚乙二醇、滅活的病毒等，結(jié)果產(chǎn)生雜交細胞，主要用于制備單克隆抗體。（2）單克隆抗體制備的原理包括：免疫理：B淋巴細胞能產(chǎn)生特異性抗體；細胞融合原理：利用病毒對宿主細胞的穿透性使B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合；動物細胞培養(yǎng)技術(shù)：對雜交瘤細胞進行體內(nèi)、體外培養(yǎng)。（3）制備單克隆抗體過程中的幾種細胞：免疫B細胞（漿細胞）：能產(chǎn)生單一抗體，但不能無限增殖；骨髓瘤細胞：能無限增殖，但不能產(chǎn)生抗體；雜交瘤細胞：既能產(chǎn)生單一抗體，又能在體外培養(yǎng)條件下無限增殖?！驹斀狻空T導(dǎo)動物細胞融合的方法有電激、聚乙二醇、滅活的病毒（如滅活的仙臺病毒）等，A正確；兩兩融合的細胞包括免疫B細胞與免疫B細胞融合的具有同種核的細胞、骨髓瘤細胞與骨髓瘤細胞融合的具有同種核的細胞、免疫B細胞與骨髓瘤細胞融合的雜交瘤細胞，骨髓瘤細胞雖然能無限增殖，但缺乏次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，免疫B細胞雖然有次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，但不具有無限增殖的本領(lǐng)，所以在HAT篩選培養(yǎng)液中，兩兩融合的具有同種核的細胞都無法生長，只有雜交瘤細胞才能生長，B錯誤；因每個免疫B細胞只分泌一種特異性抗體，因此在HAT篩選培養(yǎng)液中篩選出來的眾多的雜交瘤細胞所分泌的抗體，不一定都是人類所需要的，還需要進一步把能分泌人類所需要抗體的雜交瘤細胞篩選出來，C正確；動物細胞融合是以細胞膜的流動性為基礎(chǔ)的，D正確。4（2018江蘇卷·10）下列關(guān)于采用胚胎工程技術(shù)實現(xiàn)某良種肉用?？焖俜敝车臄⑹?，正確的是（）A采取激素注射等方法對良種母牛作超數(shù)排卵處理B體外培養(yǎng)發(fā)育到原腸胚期的胚胎即可進行移植C使用免疫抑制劑以避免代孕牛對植入胚胎的排斥反應(yīng)D利用胚胎分割技術(shù)，同卵多胎較同卵雙胎成功率更高【答案】A【解析】用促性腺激素對良種奶牛進行注射處理，可促使其超數(shù)排卵，A正確；進行移植的胚胎是桑椹胚或囊胚，B錯誤；受體對移植的胚胎幾乎不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，因此無需使用免疫抑制劑，C錯誤；利用胚胎分割技術(shù)，同卵雙胎較同卵多胎成功率更高，D錯誤。5（2018北京卷·5）用XhoI和SalI兩種限制性核酸內(nèi)切酶分別處理同一DNA片段，酶切位點及酶切產(chǎn)物分離結(jié)果如圖。以下敘述不正確的是A如圖中兩種酶識別的核苷酸序列不同B如圖中酶切產(chǎn)物可用于構(gòu)建重組DNAC泳道中是用SalI處理得到的酶切產(chǎn)物D圖中被酶切的DNA片段是單鏈DNA【答案】D【解析】限制酶識別特定的脫氧核苷酸序列，不同的限制酶能識別不同的核苷酸序列，由電泳圖可知XhoI和SalI兩種酶分別切割時，識別的序列不同，A正確；同種限制酶切割出的DNA片段，具有相同的粘性末端，再用DNA連接酶進行連接，可以構(gòu)成重組DNA，B正確；SalI將DNA片段切成4段，XhoI將DNA片段切成3段，根據(jù)電泳結(jié)果可知泳道為SalI，泳道為XhoI，C正確；限制酶切割雙鏈DNA，酶切后的DNA片段仍然是雙鏈DNA，D錯誤。6（2018江蘇卷·22）如圖為細胞融合的示意圖，下列敘述正確的是A若a細胞和b細胞是植物細胞，需先去分化再誘導(dǎo)融合Ba細胞和b細胞之間的融合需要促融處理后才能實現(xiàn)Cc細胞的形成與a、b細胞膜的流動性都有關(guān)Dc細胞將同時表達a細胞和b細胞中的所有基因【答案】BC【解析】若a細胞和b細胞是植物細胞，應(yīng)該先用酶解法去掉它們的細胞壁再誘導(dǎo)融合，A錯誤；無論是動物細胞還是植物細胞，兩個細胞的融合都需要促融處理后才能實現(xiàn)，B正確；兩個細胞融合成一個細胞，利用了細胞膜的流動性，C正確；c細胞同時具備了a細胞和b細胞中的所有基因，但是基因是選擇性表達的，因此c細胞中基因不一定都能夠表達，D錯誤。7（2017江蘇卷·11）牛雄性胚胎中存在特異性H-Y 抗原，可在牛早期胚胎培養(yǎng)液中添加H-Y 單克隆抗體，篩選胚胎進行移植，以利用乳腺生物反應(yīng)器進行生物制藥。下列相關(guān)敘述正確的是AH-Y 單克隆抗體由骨髓瘤細胞分泌B應(yīng)選用原腸胚做雌雄鑒別C鑒別后的雄性胚胎可直接做胚胎移植D用H-Y 抗原免疫母牛可獲得相應(yīng)抗體【答案】D【解析】單克隆抗體由雜交瘤細胞分泌，A錯誤；做雌雄性別鑒別應(yīng)選擇囊胚期的滋養(yǎng)層細胞，B錯誤；由于是利用乳腺生物反應(yīng)器進行生物制藥，則鑒別后的雌性胚胎可直接做胚胎移植，雄性胚胎沒有意義，C錯誤；H-Y抗原免疫母牛，使其體內(nèi)產(chǎn)生體液免疫，產(chǎn)生相應(yīng)的漿細胞，獲得相應(yīng)抗體，D正確?！究键c定位】單克隆抗體，雜交瘤細胞，體液免疫，乳腺生物反應(yīng)器?！久麕燑c睛】本題主要考查單克隆抗體的制備，要求學生理解單克隆抗體制備的過程，理解乳腺生物反應(yīng)器的操作過程。8（2017江蘇卷·14）下列關(guān)于小鼠體外受精及胚胎發(fā)育的敘述，錯誤的是A精子在獲能液中于37、5% CO2 條件下培養(yǎng)的目的是使精子獲能B小鼠在特定光控周期條件下飼養(yǎng)，注射相關(guān)激素有促進超數(shù)排卵的作用C分割的胚胎細胞有相同的遺傳物質(zhì)，因此發(fā)育成的個體沒有形態(tài)學差異D注射到囊胚腔中的胚胎干細胞可以參與個體器官的發(fā)育【答案】C【解析】精子在獲能液中于37 、5%CO2條件下培養(yǎng)，可使精子獲能，A正確；給小鼠注射促性腺激素可促進其超數(shù)排卵，B正確；分割的胚胎細胞具有相同的遺傳物質(zhì)，但發(fā)育過程中基因突變或環(huán)境因素影響等，最終發(fā)育成的個體可能會有形態(tài)學差異，C錯誤；胚胎干細胞具有發(fā)育的全能性，能分化成各種組織器官，D正確?！究键c定位】體外受精，胚胎發(fā)育?！久麕燑c睛】本題主要考查體外受精和胚胎發(fā)育的相關(guān)知識，要求學生理解精子獲能和超數(shù)排卵、胚胎干細胞的功能特點，難度中等。9（2017北京卷·5）為了增加菊花花色類型，研究者從其他植物中克隆出花色基因C（圖1），擬將其與質(zhì)粒（圖2）重組，再借助農(nóng)桿菌導(dǎo)入菊花中。下列操作與實驗?zāi)康牟环氖茿用限制性核酸內(nèi)切酶EcoRI和連接酶構(gòu)建重組質(zhì)粒B用含C基因的農(nóng)桿菌侵染菊花愈傷組織，將C基因?qū)爰毎鸆在培養(yǎng)基中添加卡那霉素，篩選被轉(zhuǎn)化的菊花細胞D用分子雜交方法檢測C基因是否整合到菊花染色體上【答案】C【解析】用限制性核酸內(nèi)切酶EcoRI處理目的基因和質(zhì)粒，可以使目的基因兩側(cè)和質(zhì)粒產(chǎn)生相同的黏性末端，再用連接酶把切口連起來就能構(gòu)建成重組質(zhì)粒，A正確；農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法適用于雙子葉植物或裸子植物，菊花屬于雙子葉植物，故可用含C基因的農(nóng)桿菌侵染菊花愈傷組織，將C基因?qū)爰毎?，B正確；質(zhì)粒中只有潮霉素抗性基因，被轉(zhuǎn)化的菊花細胞只對潮霉素具有抗性，在培養(yǎng)基中添加卡那霉素，不能篩選被轉(zhuǎn)化的菊花細胞，C錯誤；檢測目的基因是否整合到受體細胞的染色體上，可采用DNA分子雜交技術(shù)，D正確?！究键c定位】基因工程【名師點睛】本題考查基因工程的相關(guān)知識，掌握基因工程操作流程及各個操作依據(jù)的原理是正確解答該題的關(guān)鍵。10（2019全國卷·38）基因工程中可以通過PCR技術(shù)擴增目的基因。回答下列問題。（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括_和_。（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是_。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是_。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的_。（3）目前在PCR反應(yīng)中使用Taq酶而不使用大腸桿菌DNA聚合酶的主要原因是_?！敬鸢浮浚?）基因組文庫 cDNA文庫（2）解旋酶 加熱至9095 氫鍵（3）Taq酶熱穩(wěn)定性高，而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下會失活【解析】【分析】基因工程的操作步驟：目的基因的獲?。ɑ蛭膸飓@取、PCR、人工合成）；構(gòu)建基因表達載體（含目的基因、標記基因、啟動子、終止子、復(fù)制原點）；把目的基因?qū)胧荏w細胞（顯微注射法、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、鈣離子處理法）；目的基因的檢測和鑒定（分子水平DNA分子雜交法、分子雜交法、抗原抗體雜交法和個體水平抗蟲、抗病接種實驗等）。【詳解】（1）基因文庫包括基因組文庫和部分基因文庫（CDNA文庫），前者包括一種生物的全部基因，后者只包括一種生物的部分基因。（2）體內(nèi)進行DNA復(fù)制時，需要解旋酶和DNA聚合酶，解旋酶可以打開雙鏈之間的氫鍵， DNA聚合酶可以催化磷酸二酯鍵的形成。在體外進行PCR擴增時，利用高溫變性即加熱至90-95，破壞雙鏈之間的氫鍵，使DNA成為單鏈。解旋酶和高溫處理都破壞了DNA雙鏈中堿基對之間的氫鍵。（3）由于在PCR過程中，需要不斷的改變溫度，該過程中涉及較高溫度處理變性，大腸桿菌細胞內(nèi)的DNA聚合酶在高溫處理下會變性失活，因此PCR過程中需要用耐高溫的Taq DNA聚合酶催化。【點睛】PCR的原理是DNA雙鏈的復(fù)制，故類似于細胞內(nèi)的DNA復(fù)制過程，需要模板、原料等條件。由于該過程中特殊的高溫條件，需要用耐高溫的DNA聚合酶。11（2019全國卷II·38）植物組織培養(yǎng)技術(shù)在科學研究和生產(chǎn)實踐中得到了廣泛的應(yīng)用?；卮鹣铝袉栴}。（1）植物微型繁殖是植物繁殖的一種途徑。與常規(guī)的種子繁殖方法相比，這種微型繁殖技術(shù)的特點有_（答出2點即可）。（2）通過組織培養(yǎng)技術(shù)，可把植物組織細胞培養(yǎng)成胚狀體，再通過人工種皮（人工薄膜）包裝得到人工種子（如圖所示），這種人工種子在適宜條件下可萌發(fā)生長。人工種皮具備透氣性的作用是_。人工胚乳能夠為胚狀體生長提供所需的物質(zhì)，因此應(yīng)含有植物激素、_和_等幾類物質(zhì)（3）用脫毒苗進行繁殖，可以減少作物感染病毒。為了獲得脫毒苗，可以選取植物的_進行組織培養(yǎng)。（4）植物組織培養(yǎng)技術(shù)可與基因工程技術(shù)相結(jié)合獲得轉(zhuǎn)基因植株。將含有目的基因的細胞培養(yǎng)成一個完整植株的基本程序是_（用流程圖表示）。【答案】（1）能保持植物原有的遺傳特性，繁殖速度快（2）有利于胚狀體進行呼吸作用 礦質(zhì)元素 糖（3）莖尖（4）含目的基因的細胞愈傷組織小植株【解析】【分析】植物組織培養(yǎng)的流程是：離體的植物器官、組織或細胞經(jīng)脫分化形成愈傷組織，經(jīng)再分化形成芽、根或胚狀體，進而形成完整植株。植物組織培養(yǎng)技術(shù)在微型繁殖、制造人工種子、作物脫毒等方面具有廣泛的應(yīng)用。微型繁殖屬于無性生殖的范疇，能夠保持親本的優(yōu)良特性，實現(xiàn)種苗的快速大量繁殖。人工種子是以通過植物組織培養(yǎng)得到的胚狀體、不定芽、頂芽和腋芽等為材料，經(jīng)過人工薄膜包裝得到的種子，其中的如果胚乳可為“種子”的萌發(fā)提所需的供營養(yǎng)物質(zhì)。以無病毒或病毒極少的莖尖為材料進行組織培養(yǎng)可獲得高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的無病毒植株。【詳解】（1）植物微型繁殖是指用于快速繁殖優(yōu)良品種的植物組織培養(yǎng)技術(shù)，與常規(guī)的種子繁殖方法相比，這種微型繁殖技術(shù)的特點有：保持優(yōu)良品種的遺傳特性；高效快速地實現(xiàn)種苗的大量繁殖。 （2）人工種子的胚狀體在進行細胞呼吸時，需要從外界環(huán)境吸收O2，并將產(chǎn)生的CO2釋放到外界環(huán)境中，因此人工種皮具備透氣性的作用是：有利于胚狀體進行呼吸作用，以保持胚狀體的活力。人工胚乳的作用是為胚狀體的發(fā)育提供營養(yǎng)，因此應(yīng)含有植物激素、礦質(zhì)元素、糖等物質(zhì)。（3）植物分生區(qū)附近（如莖尖）的病毒極少，甚至無病毒，因此為了獲得脫毒苗，可以選取植物的莖尖進行組織培養(yǎng)。（4）將含有目的基因的植物細胞培養(yǎng)為一個完整的轉(zhuǎn)基因植物，需借助植物組織培養(yǎng)技術(shù)才能實現(xiàn)，其基本程序是：。【點睛】解題的關(guān)鍵是識記并理解植物組織培養(yǎng)的過程和植物組織培養(yǎng)技術(shù)在微型繁殖、制造人工種子、作物脫毒等方面的實際應(yīng)用。在此基礎(chǔ)上，從題意中提取有效信息，進而對各問題情境進行分析解答。12（2019全國卷III·38）培養(yǎng)胡蘿卜根組織可獲得試管苗，獲得試管苗的過程如圖所示?；卮鹣铝袉栴}。（1）利用胡蘿卜根段進行組織培養(yǎng)可以形成試管苗。用分化的植物細胞可以培養(yǎng)成完整的植株，這是因為植物細胞具有_。（2）步驟切取的組織塊中要帶有形成層，原因是_。（3）從步驟到步驟需要更換新的培養(yǎng)基，其原因是_。在新的培養(yǎng)基上愈傷組織通過細胞的_過程，最終可形成試管苗。（4）步驟要進行照光培養(yǎng)，其作用是_。（5）經(jīng)組織培養(yǎng)得到的植株，一般可保持原品種的_，這種繁殖方式屬于_繁殖?！敬鸢浮浚?）全能性（或答：形成完整植株所需的全部基因）（2）形成層容易誘導(dǎo)形成愈傷組織（3）誘導(dǎo)愈傷組織形成和誘導(dǎo)愈傷組織分化形成試管苗所需的生長素和細胞分裂素的比例不同 分化（或答：再分化）（4）誘導(dǎo)葉綠素的形成，使試管苗能夠進行光合作用（5）遺傳特性 無性【解析】【分析】根據(jù)題干信息分析，培養(yǎng)胡蘿卜組織獲得試管苗的過程利用了植物組織培養(yǎng)技術(shù)，該技術(shù)的原理是植物細胞的全能性；該過程中離體的組織塊脫分化形成愈傷組織，愈傷組織再分化形成胚狀體，最終培育成試管苗?！驹斀狻浚?）根據(jù)題意分析，用胡蘿卜的組織細胞可以培育成完整的植株，其原理是植物細胞的全能性。（2）形成層細胞具有分裂能力，分化程度低，易形成愈傷組織，因此步驟中切取胡蘿卜塊時強調(diào)要切取含有形成層的部分。（3）步驟為脫分化過程，步驟為再分化過程，由于營養(yǎng)物質(zhì)的消耗以及兩個過程需要激素的比例要求等有所不同，因此由步驟到步驟的過程需要更換新的培養(yǎng)基；愈傷組織形成試管苗的過程為再分化。（4）步驟為再分化過程，需要進行光照，以利于葉綠素的合成。（5）植物組織培養(yǎng)技術(shù)屬于無性繁殖，獲得的后代可以保持親本的優(yōu)良性狀?！军c睛】解答本題的關(guān)鍵是掌握植物組織培養(yǎng)的詳細過程及其原理，明確離體的組織需要經(jīng)過脫分化和再分化過程才能發(fā)育為完整的植株，并能夠?qū)Σ煌^程進行合理的分析。13（2019北京卷·31）光合作用是地球上最重要的化學反應(yīng)，發(fā)生在高等植物、激類和光合細菌中。（1）地球上生命活動所需的能量主要來源于光反應(yīng)吸收的_，在碳（暗）反應(yīng)中，RuBP羧化酶（R酶）催化CO2與RuBP（C5）結(jié)合，生成2分子C3，影響該反應(yīng)的外部因素，除光照條件外還包括_（寫出兩個）；內(nèi)部因素包括_（寫出兩個）。（2）R酶由8個大亞基蛋白（L）和8個小亞基蛋白（S）組成。高等植物細胞中L由葉綠體基因編碼并在葉綠體中合成，S由細胞核基因編碼并在_中由核糖體合成后進入葉綠體，在葉綠體的_中與L組裝成有功能的酶。（3）研究發(fā)現(xiàn)，原核生物藍藻（藍細菌）R酶的活性高于高等植物，有人設(shè)想通過基因工程技術(shù)將藍藻R酶的S、L基因轉(zhuǎn)入高等植物，以提高后者的光合作用效率。研究人員將藍藻S、L基因轉(zhuǎn)入某高等植物（甲）的葉綠體DNA中，同時去除甲的L基因。轉(zhuǎn)基因植株能夠存活并生長。檢測結(jié)果表明，轉(zhuǎn)基因植株中的R酶活性高于未轉(zhuǎn)基因的正常植株。由上述實驗?zāi)芊竦贸觥稗D(zhuǎn)基因植株中有活性的R酶是由藍藻的S、L組裝而成”的推測？請說明理由?；谏鲜鰧嶒灒铝袛⑹鲋心軌蝮w現(xiàn)生物統(tǒng)一性的選項包括_。a藍藻與甲都以DNA作為遺傳物質(zhì)b藍藻與甲都以R酶催化CO2的固定c藍藻R酶大亞基蛋白可在甲的葉綠體中合成d在藍藻與甲的葉肉細胞中R酶組裝的位置不同【答案】（1）光能 溫度、CO2濃度 R酶活性、R酶含量、C5含量、pH（其中兩個）（2）細胞質(zhì) 基質(zhì)（3）不能，轉(zhuǎn)入藍藻S、L基因的同時沒有去除甲的S基因，無法排除轉(zhuǎn)基因植株R酶中的S是甲的S基因的表達產(chǎn)物的可能性。a、b、c【解析】【分析】本題主要考查光合作用、基因工程及基因?qū)π誀畹目刂频挠嘘P(guān)知識。影響光合作用的外界因素主要有光照、溫度、水、無機鹽和CO2濃度等，內(nèi)部因素主要有色素的含量和種類、酶的含量及活性；要將新的基因轉(zhuǎn)入，首先得將“原配”基因從受體植株的細胞核和它的葉綠體基因組中給敲除掉。然后導(dǎo)入目的基因，等待它們將老片段“替換”掉了之后，用專門的培養(yǎng)基篩選出只含有這種葉綠體的細胞，再通過組織培養(yǎng)最終獲得R酶活性很高的轉(zhuǎn)基因植株?！驹斀狻浚?）地球上生物生命活動所需的能量來自有機物，有機物主要來自植物的光合作用，光合作用合成有機物需要光反應(yīng)吸收光能，轉(zhuǎn)化為ATP的化學能，然后ATP為暗反應(yīng)中C3的還原提供能量，合成糖類。在暗反應(yīng)中，RuBP 羧化酶（R酶）催化CO2與RuBP（C5）結(jié)合，生成2分子C3，這是光合作用的暗反應(yīng)的二氧化碳的固定。暗反應(yīng)的進行需要相關(guān)酶的催化，二氧化碳做原料，需要光反應(yīng)提供H和ATP，光反應(yīng)需要色素、酶、水、光照等，故影響該反應(yīng)的外部因素有光照、溫度、CO2濃度、水、無機鹽等；內(nèi)部因素包括色素含量及種類、酶的含量及活性等。（2）高等植物細胞中L由葉綠體基因編碼并在葉綠體中合成，S由細胞核基因通過轉(zhuǎn)錄成mRNA ，mRNA 進入細胞質(zhì)基質(zhì)，與核糖體結(jié)合，合成為S蛋白；因R酶是催化CO2與C5結(jié)合的，在葉綠體基質(zhì)中進行，故S蛋白要進入葉綠體，在葉綠體的基質(zhì)中與L組裝成有功能的酶。（3）據(jù)題設(shè)條件可知，將藍藻S、L基因轉(zhuǎn)入某高等植物（甲）的葉綠體DNA中，只去除甲的L基因，沒有去除甲的S基因。因此，轉(zhuǎn)基因植株仍包含甲植株的S基因，不能排除轉(zhuǎn)基因植株中R酶是由藍藻的L蛋白和甲的S蛋白共同組成。故由上述實驗不能得出“轉(zhuǎn)基因植株中有活性的R酶是由藍藻的S、L組裝而成”的推測。根據(jù)上述實驗，可以看出藍藻的基因能導(dǎo)入到甲的DNA中，說明藍藻和甲植株都以DNA為遺傳物質(zhì)；藍藻中 R酶的活性高于高等植物，說明兩者都以R酶催化CO2的固定；由于藍藻S、L基因均轉(zhuǎn)入甲的葉綠體DNA中，且去除了甲的L基因，結(jié)果轉(zhuǎn)基因植株合成了R酶，說明藍藻R酶大亞基蛋白L在甲的葉綠體中合成，以上體現(xiàn)了生物界的統(tǒng)一性。在藍藻中R酶組裝是在細胞質(zhì)基質(zhì)，甲的葉肉細胞組裝R酶是在葉綠體基質(zhì)，則說明了不同生物之間具有差異性。因此，選abc。【點睛】解答本題關(guān)鍵抓住“將藍藻S、L基因轉(zhuǎn)入某高等植物（甲）的葉綠體DNA中，同時去除甲的L基因?！边@一條件，得知甲的S基因還在，可以合成S蛋白，推知轉(zhuǎn)基因植株中有活性的R酶并不完全是由藍藻的S、L組裝而成。14（2019天津卷·9）B基因存在于水稻基因組中，其僅在體細胞（2n）和精子中正常表達，但在卵細胞中不轉(zhuǎn)錄。為研究B基因表達對卵細胞的影響，設(shè)計了如下實驗。據(jù)圖回答：（1）B基因在水稻卵細胞中不轉(zhuǎn)錄，推測其可能的原因是卵細胞中 （單選）。A含B基因的染色體缺失 BDNA聚合酶失活CB基因發(fā)生基因突變 DB基因的啟動子無法啟動轉(zhuǎn)錄（2）從水稻體細胞或 中提取總RNA，構(gòu)建 文庫，進而獲得B基因編碼蛋白的序列。將該序列與Luc基因（表達的熒光素酶能催化熒光素產(chǎn)生熒光）連接成融合基因（表達的蛋白質(zhì)能保留兩種蛋白質(zhì)各自的功能），然后構(gòu)建重組表達載體。（3） 在過程、轉(zhuǎn)化篩選時，過程 中T-DNA整合到受體細胞染色體DNA上，過程 在培養(yǎng)基中應(yīng)加入卡那霉素。（4） 獲得轉(zhuǎn)基因植株過程中，以下鑒定篩選方式正確的是 （多選）。A將隨機斷裂的B基因片段制備成探針進行DNA分子雜交B以Luc基因為模板設(shè)計探針進行DNA分子雜交C以B基因編碼蛋白的序列為模板設(shè)計探針與從卵細胞提取的mRNA雜交D檢測加入熒光素的卵細胞中是否發(fā)出熒光（5）從轉(zhuǎn)基因植株未成熟種子中分離出胚，觀察到細胞內(nèi)僅含一個染色體組，判定該胚是由未受精的卵細胞發(fā)育形成的，而一般情況下水稻卵細胞在未受精時不進行發(fā)育，由此表明 ?！敬鸢浮浚?）D（2）精子 cDNA（3） （4）BCD（5）B基因表達能使卵細胞不經(jīng)受精直接發(fā)育成胚【解析】【分析】基因工程的基本操作程序：1、目的基因的獲?。海?）目的基因是指： 編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因。（2）獲取方法：從基因文庫中獲??；人工合成（反轉(zhuǎn)錄法和化學合成法）；PCR技術(shù)擴增目的基因。2、基因表達載體的構(gòu)建:（1）目的：使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳至下一代，使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用。（2）組成：目的基因+啟動子+終止子+標記基因。啟動子：是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，能驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得所需的蛋白質(zhì)。終止子：也是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的尾端。標記基因的作用：是為了鑒定受體細胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細胞篩選出來。常用的標記基因是抗生素基因。（3）基因表達載體的構(gòu)建過程： 3、將目的基因?qū)胧荏w細胞:（1）轉(zhuǎn)化的概念：是目的基因進入受體細胞內(nèi)，并且在受體細胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達的過程。（2）常用的轉(zhuǎn)化方法：常用方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、顯微注射技術(shù)、Ca2+處理法。（3）重組細胞導(dǎo)入受體細胞后，篩選含有基因表達載體受體細胞的依據(jù)是標記基因是否表達。4、目的基因的檢測和表達：（1）首先要檢測轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子雜交技術(shù)。（2）其次還要檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA，方法是用標記的目的基因作探針與mRNA雜交。（3）最后檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，方法是從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進行抗原-抗體雜交。（4）有時還需進行個體生物學水平的鑒定。如轉(zhuǎn)基因抗蟲植物是否出現(xiàn)抗蟲性狀?！驹斀狻浚?）通過題干信息可知，B基因可以在體細胞和精子中，說明含B基因的染色體未缺失，也沒有發(fā)生基因突變，AC錯誤；基因表達過程中的轉(zhuǎn)錄需要RNA聚合酶，不是DNA聚合酶，B錯誤；B基因在卵細胞中不能轉(zhuǎn)錄，可能是B基因的啟動子在卵細胞中不能啟動轉(zhuǎn)錄，D正確；故選D。（2）通過題干信息可知，水稻的體細胞和精子中B基因可表達，故可從水稻的體細胞和精子中提取RNA。通過逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生DNA，從而構(gòu)建CDNA文庫，進而獲得B基因編碼蛋白的序列。（3）圖示中過程表示篩選含有目的基因的重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌，圖示中質(zhì)粒有抗卡那霉素標記基因和抗潮霉素標記基因，如果選擇培養(yǎng)基中加入的是卡那霉素，起作用的是抗卡那霉素標記基因。過程表示將篩選出含有重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌，將其T-DNA整合到水稻細胞染色體DNA上。（4）獲得轉(zhuǎn)基因植株，鑒定篩選方式有：DNA分子雜交技術(shù)，即以Luc基因為模板設(shè)計探針進行DNA分子雜交，故A錯誤；B正確；用標記的目的基因作探針與mRNA雜交，即以B基因編碼蛋白的序列為模板設(shè)計探針與從卵細胞提取的mRNA雜交，C正確；檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，通過（2）可知B基因與Luc基因連接形成B-Luc融合基因，即可通過Luc基因表達，檢測加入熒光素的卵細胞中是否發(fā)出熒光，D正確；故選BCD。（5）當從轉(zhuǎn)基因植株未成熟種子中分離出胚，觀察到細胞內(nèi)僅含有一個染色體組，推斷該胚是由未受精的卵細胞發(fā)育形成的，而一般情況下水稻卵細胞在未受精時不進行發(fā)育，由此表明B基因表達能使卵細胞不經(jīng)受精作用直接發(fā)育成胚?！军c睛】本題考查了基因工程的相關(guān)知識，要求考生能夠識記基因工程的操作步驟；明確農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法在植物基因工程中的應(yīng)用；并能夠掌握植物組織培養(yǎng)技術(shù)的過程等知識。15（2019江蘇卷·29）利用基因編輯技術(shù)將病毒外殼蛋白基因?qū)胴i細胞中，然后通過核移植技術(shù)培育基因編輯豬，可用于生產(chǎn)基因工程疫苗。下圖為基因編輯豬培育流程，請回答下列問題：（1）對1號豬使用_處理，使其超數(shù)排卵，收集并選取處在_時期的卵母細胞用于核移植。（2）采集2號豬的組織塊，用_處理獲得分散的成纖維細胞，放置于37 的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，其中CO2的作用是_。（3）為獲得更多基因編輯豬，可在胚胎移植前對胚胎進行_。產(chǎn)出的基因編輯豬的性染色體來自于_號豬。（4）為檢測病毒外殼蛋白基因是否被導(dǎo)入4號豬并正常表達，可采用的方法有_（填序號）。DNA測序 染色體倍性分析體細胞結(jié)構(gòu)分析 抗原抗體雜交【答案】（1）促性腺激素 減數(shù)第二次分裂中期（2）胰蛋白酶（膠原蛋白酶） 維持培養(yǎng)液的pH（3）分割 2（4）【解析】【分析】據(jù)圖分析，圖示基因編輯豬培育過程涉及的技術(shù)手段有轉(zhuǎn)基因技術(shù)、核移植技術(shù)、早期胚胎培養(yǎng)技術(shù)和胚胎移植技術(shù)等，利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)將病毒外殼蛋白基因（目的基因）導(dǎo)入2號豬的體細胞核中，然后將2號豬的體細胞核移植到1號豬的去核卵母細胞中，再將重組細胞培養(yǎng)到囊胚并移植到3號豬的子宮中去，最后分娩產(chǎn)生了4號轉(zhuǎn)基因克隆豬。【詳解】（1）據(jù)圖分析可知，1號豬提供的是卵母細胞，對其注射促性腺激素可使其超數(shù)排卵，獲得的卵母細胞需要培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂中期才能進行核移植。（2）將2號豬的組織塊分散成單個的成纖維細胞需要用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理，該細胞的培養(yǎng)應(yīng)在37含5%的CO2的恒溫培養(yǎng)箱中進行，其中CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。（3）利用胚胎分割技術(shù)對圖示早期胚胎進行分割，可以獲得更多的基因編輯豬；據(jù)圖分析可知，核移植的細胞核來自于2號豬，因此產(chǎn)出的基因編輯豬的性染色體來自于2號豬。（4）檢測病毒外殼蛋白基因（目的基因）是否導(dǎo)入4號豬，可以采用DNA分子雜交法檢測目的基因的序列；目的基因表達的最終產(chǎn)物是蛋白質(zhì)（病毒外殼蛋白），可以利用抗原-抗體雜交法進行檢測，故選?！军c睛】解答本題的關(guān)鍵是掌握轉(zhuǎn)基因技術(shù)、動物細胞培養(yǎng)、胚胎移植等過程，能夠弄清楚題圖中不同的豬提供的結(jié)構(gòu)和作用，明確核移植時的卵母細胞需要培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂中期，并能夠選擇正確的方法檢測目的基因是否表達。16（2019江蘇卷·31）（8分）圖1為T細胞通過表面受體（TCR）識別抗原遞呈細胞呈遞的腫瘤抗原后被激活，進而攻擊腫瘤細胞的示意圖。圖2為腫瘤細胞的一種免疫逃逸機制示意圖。腫瘤細胞大量表達PD-L1，與T細胞表面的PD-1結(jié)合，抑制T細胞活化，逃避T細胞的攻擊。請回答下列問題：（1）圖1中抗原遞呈細胞通過_方式攝取腫瘤抗原。（2）圖1中T細胞識別腫瘤抗原后被激活，增殖并_形成效應(yīng)T細胞群和_細胞群。（3）圖1中效應(yīng)T細胞通過TCR只能識別帶有同樣抗原的腫瘤細胞，故發(fā)揮的免疫作用具有_性，效應(yīng)T細胞分泌毒素，使腫瘤細胞_死亡。（4）為阻斷圖2中腫瘤細胞的免疫逃逸通路，利用單克隆抗體制備技術(shù)，制備了抗PD-L1抗體。該抗體注入體內(nèi)后通過_傳送與_結(jié)合，可解除T細胞的活化抑制。（5）為應(yīng)用于腫瘤的臨床免疫治療，需對該抗體進行人源化改造，除抗原結(jié)合區(qū)域外，其他部分都替換為人抗體區(qū)段，目的是_?！敬鸢浮浚?）胞吞 （2）分化 記憶 （3）特異 裂解（4）體液 腫瘤細胞表面的PD-L1（5）降低免疫排斥【解析】【分析】由圖1可知，TCR是T細胞表面的特異性受體，可以識別腫瘤抗原。TCR識別吞噬細胞處理呈遞的腫瘤抗原后，可以增殖分化出記憶T細胞和效應(yīng)T細胞，效應(yīng)T細胞可以識別并攻擊腫瘤細胞，引起腫瘤細胞的裂解死亡。由圖2可知，腫瘤細胞表面的PD-L1通過與T細胞表面的PD-1蛋白特異性結(jié)合，抑制T細胞增殖分化，從而逃避免疫系統(tǒng)的攻擊。【詳解】（1）抗原屬于大分子物質(zhì)，抗原呈遞細胞通過胞吞攝取腫瘤抗原，處理后呈遞給T細胞，引起T細胞的增殖分化。（2）圖1中，T細胞表面的TCR識別腫瘤抗原后，可以增殖分化出記憶T細胞和效應(yīng)T細胞。其中的效應(yīng)T細胞會攻擊腫瘤細胞，引起其裂解死亡。（3）效應(yīng)T細胞通過TCR特異性識別攜帶同種腫瘤抗原的腫瘤細胞，該過程具有特異性。由圖可知，效應(yīng)T細胞可以分泌毒素，引起腫瘤細胞的裂解死亡。（4）由圖2可知，腫瘤細胞表面的PD-L1通過與T細胞表面的PD-1蛋白特異性結(jié)合，抑制T細胞增殖分化，從而逃避免疫系統(tǒng)的攻擊，故可以通過注射抗PD-L1抗體阻斷腫瘤細胞的逃逸通路?？筆D-L1抗體進入人體后，通過體液運輸與腫瘤細胞表面的PD-1蛋白結(jié)合，從而接觸T細胞的活化抑制。（5）由于單克隆抗體是利用鼠的骨髓瘤細胞與漿細胞融合的雜交瘤細胞分泌產(chǎn)生，對人來說是異物，為了降低免疫排斥，需要對單克隆抗體進行改造，出抗原結(jié)合區(qū)域外，其他部分都替換成人抗體區(qū)段?！军c睛】由圖分析可知，腫瘤細胞的一種免疫逃逸機制即通過腫瘤細胞表面的PD-L1與T細胞表面的PD-1蛋白特異性結(jié)合，抑制T細胞增殖分化，從而逃避T細胞的攻擊，故可以用抗PD-L1蛋白或抗PD-1蛋白的抗體進行治療。17（2019江蘇卷·33）（8分）圖1是某基因工程中構(gòu)建重組質(zhì)粒的過程示意圖，載體質(zhì)粒P0具有四環(huán)素抗性基因（tetr）和氨芐青霉素抗性基因（ampr）。請回答下列問題： （1）EcoR V酶切位點為，EcoR V酶切出來的線性載體P1為_未端。（2）用Taq DNA聚合酶進行PCR擴增獲得的目的基因片段，其兩端各自帶有一個腺嘌呤脫氧核苷酸。載體P1用酶處理，在兩端各添加了一個堿基為_的脫氧核苷酸，形成P2；P2和目的基因片段在_酶作用下，形成重組質(zhì)粒P3。（3）為篩選出含有重組質(zhì)粒P3的菌落，采用含有不同抗生素的平板進行篩選，得到A、B、C三類菌落，其生長情況如下表（“+”代表生長，“”代表不生長）。根據(jù)表中結(jié)果判斷，應(yīng)選擇的菌落是_（填表中字母）類，另外兩類菌落質(zhì)粒導(dǎo)入情況分別是_、_。菌落類型平板類型ABC無抗生素氨芐青霉素四環(huán)素氨芐青霉素+四環(huán)素（4）為鑒定篩選出的菌落中是否含有正確插入目的基因的重組質(zhì)粒，擬設(shè)計引物進行PCR鑒定。圖2所示為甲、乙、丙3條引物在正確重組質(zhì)粒中的相應(yīng)位置，PCR鑒定時應(yīng)選擇的一對引物是_。某學生嘗試用圖中另外一對引物從某一菌落的質(zhì)粒中擴增出了400 bp片段，原因是_。【答案】（1）平（2）胸腺嘧啶（T） DNA連接（3）B A類菌落含有P0 C類菌落未轉(zhuǎn)入質(zhì)粒（4）乙丙 目的基因反向連接【解析】【分析】基因表達載體的基本結(jié)構(gòu)包括復(fù)制原點、目的基因、標記基因、啟動子、終止子等。根據(jù)題干信息和圖形分析，P0是載體質(zhì)粒，其含有的氨芐青霉素抗性基因（ampr）和四環(huán)素抗性基因（tetr）都屬于標記基因，可以用檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細胞；EcoRV酶為限制酶，其切割質(zhì)粒后悔破壞了四環(huán)素抗性基因（tetr）?！驹斀狻浚?）根據(jù)題意分析，EcoRV酶識別的序列是-GATATC-，并且兩條鏈都在中間的T與A之間進行切割，因此其切出來的線性載體P1為平末端。（2）據(jù)圖分析，目的基因兩側(cè)為粘性末端，且漏出的堿基為A，則在載體P1的兩端需要個加一個堿基T形成具有粘性末端的載體P2，再用DNA連接酶將P2與目的基因連接起來形成重組質(zhì)粒P3。（3）根據(jù)以上分析已知，限制酶切割后破壞了四環(huán)素抗性基因，但是沒有破壞氨芐青霉素抗性基因，因此含有重組質(zhì)粒P3的菌落在四環(huán)素中應(yīng)該不能生長，而在氨芐青霉素的培養(yǎng)基中能生長，結(jié)合表格分析可知，應(yīng)該選擇B類菌落。根據(jù)表格分析，A類菌落在氨芐青霉素和四環(huán)素的培養(yǎng)基中都能夠生長，說明其導(dǎo)入的是P0；C類菌落在任何抗生素的培養(yǎng)基中都不能生長，說明其沒有導(dǎo)入任何質(zhì)粒。（4）據(jù)圖分析，根據(jù)目的基因插入的位置和PCR技術(shù)的原理分析，PCR鑒定時應(yīng)該選擇的一對引物是乙和丙；根據(jù)題意和圖形分析，某同學用圖中的另外一對引物（甲、乙）從某一菌落的質(zhì)粒中擴增出了400bp的片段，說明其目的基因發(fā)生了反向連接?！军c睛】解答本題的關(guān)鍵是識記并理解基因工程的四個基本步驟，尤其是對核心步驟構(gòu)建基因表達載體步驟的理解，明確基因表達載體的幾個必須的成分及其作用，進而結(jié)合題干要求分析答題。18（2019浙江4月選考·32）回答下列（二）小題：（二）回答與利用生物技術(shù)培育抗病品種有關(guān)的問題：（1）通過抗病性強的植株獲取抗病目的基因有多種方法?，F(xiàn)已獲得純度高的抗病蛋白（可作為抗原），可通過_技術(shù)獲得特異性探針，并將_中所有基因進行表達，然后利用該探針，找出能與探針特異性結(jié)合的表達產(chǎn)物，進而獲得與之對應(yīng)的目的基因。（2）將上述抗病基因通過轉(zhuǎn)基因的方法導(dǎo)入植物的分生組織可獲得抗病性強的植株。若在試管苗期間用分子水平方法判斷抗病基因是否表達，應(yīng)檢測_（A質(zhì)粒載體 B轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 C抗性基因 D病原微生物）。（3）植物細胞在培養(yǎng)過程中往往會發(fā)生_，可利用這一特性篩選抗致病真菌能力強的細胞。篩選時在培養(yǎng)基中加入_，并將存活的細胞進一步培養(yǎng)至再生植株。若利用_培養(yǎng)建立的細胞系用于篩選，則可快速獲得穩(wěn)定遺傳的抗病植株。（4）用抗病品種與高產(chǎn)品種進行雜交育種過程中，有時會遇到因胚發(fā)育中止而得不到可育種子的情況。若要使該胚繼續(xù)發(fā)育獲得植株，可采用的方法是_?！敬鸢浮浚ǘ?）單克隆抗體 基因文庫 （2）B （3）變異 高濃度致病真菌 花粉離體 （4）胚的離體培養(yǎng)【解析】【分析】（二）目的基因表達產(chǎn)物在分子水平的檢測包括DNA分子雜交、DNA-RNA分子雜交和抗原抗體雜交；生物變異在生產(chǎn)上應(yīng)用時，可通過雜交育種、單倍體育種的方式獲得穩(wěn)定遺傳的植株，單倍體育種的速度更快，相對的操作更加復(fù)雜。【詳解】（二）（1）抗病蛋白可作抗原，則特異性探針應(yīng)為抗體，則需要通過單克隆抗體技術(shù)獲得特異性探針；基因文庫包含了某個DNA分子的所有基因，故是將基因文庫中的所有基因進行表達，再利用探針獲得目的基因；（2）質(zhì)粒載體只能檢測目的基因是否轉(zhuǎn)入受體細胞，A選項錯誤；轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為RNA，可以通過DNA-RNA分子雜交檢測抗病基因是否表達，B選項正確；檢測抗性基因只能檢測抗性基因是否導(dǎo)入受體細胞，無法檢測該基因是否表達，C選項錯誤；檢測病原微生物是個體水平檢測目的基因是否表達的方式，D選項錯誤；故正確的選項選擇B；（3）抗致病真菌基因是原本植物細胞不含的基因，則需要利用植物細胞在培養(yǎng)過程中的變異來篩選抗致病真菌能力強的細胞；由于需要篩選抗致病真菌能力強的細胞，故需要在培養(yǎng)基中加入高濃度致病真菌；快速穩(wěn)定遺傳的抗病植株需要通過單倍體培養(yǎng)獲得，故需要利用花粉離體培養(yǎng)建立細胞系用于篩選；（4）要利用胚的發(fā)育獲得植株，可利用胚細胞的全能性，采用胚的離體培養(yǎng)獲得植株。19（2018全國卷·38）回答下列問題：（1）博耶（HBoyer）和科恩（SCoben）將非洲爪蟾核糖體蛋白基因與質(zhì)粒重組后導(dǎo)入大腸桿菌細胞中進行了表達，該研究除證明了質(zhì)?？梢宰鳛檩d體外，還證明了_（答出兩點即可）。（2）體外重組的質(zhì)?？赏ㄟ^Ca2+參與的_方法導(dǎo)入大腸桿菌細胞：而體外重組的噬菌體DNA通常需與_組裝成完整噬菌體后，才能通過侵染的方法將重組的噬菌體DNA導(dǎo)入宿主細胞，在細菌、心肌細胞、葉肉細胞中，可作為重組噬菌體宿主細胞的是_。（3）真核生物基因（目的基因）在大腸桿菌細胞內(nèi)表達時，表達出的蛋白質(zhì)可能會被降解。為防止蛋白質(zhì)被降解，在實驗中應(yīng)選用_的大腸桿菌作為受體細胞，在蛋白質(zhì)純化的過程中應(yīng)添加_的抑制劑?！敬鸢浮浚?）體外重組的質(zhì)?？梢赃M入體細胞；真核生物基因可在原核細胞中表達（2）轉(zhuǎn)化外殼蛋白（噬菌體蛋白）細菌（3）蛋白酶缺陷型蛋白酶【解析】（1）將非洲爪蟾核糖體蛋白基因與質(zhì)粒重組后導(dǎo)入大腸桿細胞中進行了表達，該過程證明了體外重組的質(zhì)?？梢赃M入體細胞，真核生物基因可在原核細胞中表達等。（2）體外重組的質(zhì)?？赏ㄟ^Ca2+處理，目的是以增大細胞的通透性，使重組的質(zhì)粒能夠?qū)氲绞荏w細胞內(nèi)，因此體外重組的質(zhì)?？赏ㄟ^Ca2+參與的轉(zhuǎn)化方法導(dǎo)入大腸桿菌細胞。體外重組的噬菌體DNA通常需與蛋白質(zhì)外殼組裝成完整的噬菌體后，才能通過侵染的方法將重組噬菌體DNA導(dǎo)入受體細胞，噬菌體侵染的是細菌，而不能寄生在其它細胞中，因此可作為重組噬菌體宿主細胞的是細菌。（3）真核生物基因（目的基因）在大腸桿菌細胞內(nèi)表達時，表達出的蛋白質(zhì)可能會被降解，為防止蛋白質(zhì)被降解，可以選用不能產(chǎn)生該蛋白酶的缺陷細菌以及使用能夠抑制蛋白酶活性的藥物，因此為防止蛋白質(zhì)被降解，在實驗中應(yīng)選用蛋白酶缺陷型的大腸桿菌作為受體細胞，在蛋白質(zhì)純化的過程中應(yīng)添加蛋白酶的抑制劑。20（2018全國卷·38）某種熒光蛋白（GFP）在紫外光或藍光激發(fā)下會發(fā)出綠色熒光，這一特性可用于檢測細胞中目的基因的表達。某科研團隊將某種病毒的外殼蛋白（L1）基因連接在GFP基因的5末端，獲得了L1-GFP融合基因（簡稱為甲），并將其插入質(zhì)粒P0，構(gòu)建了真核表達載體P1，其部分結(jié)構(gòu)和酶切位點的示意圖如下，圖中E1E4四種限制酶產(chǎn)生的黏性末端各不相同?；卮鹣铝袉栴}：（1）據(jù)圖推斷，該團隊在將甲插入質(zhì)粒P0時，使用了兩種限制酶，這兩種酶是_。使用這兩種酶進行酶切是為了保證_，也是為了保證_。（2）將P1轉(zhuǎn)入體外培養(yǎng)的牛皮膚細胞后，若在該細胞中觀察到了綠色熒光，則說明L1基因在牛的皮膚細胞中完成了_和_過程。（3）為了獲得含有甲的牛，該團隊需要做的工作包括：將能夠產(chǎn)生綠色熒光細胞的_移入牛的_中、體外培養(yǎng)、胚胎移植等。（4）為了檢測甲是否存在于克隆牛的不同組織細胞中，某同學用PCR方法進行鑒定。在鑒定時應(yīng)分別以該牛不同組織細胞中的_（填“mRNA”“總RNA”或“核DNA”）作為PCR模板。【答案】（1）E1和E4甲的完整甲與載體正確連接（2）轉(zhuǎn)錄翻譯（3）細胞核去核卵母細胞（4）核DNA【解析】（1）要保證目的基因在受體細胞中能夠正確表達，目的基因的首端應(yīng)有啟動子，尾端應(yīng)有終止子。甲是將某種病毒的外殼蛋白（L1）基因連接在GFP基因的5末端而獲得的L1-GFP融合基因，據(jù)此結(jié)合題意并分析圖示可知：該團隊在將甲插入質(zhì)粒P0時，如果用E2或E3，則目的基因不完整，而使用E1和E4這兩種限制酶進行酶切保證了甲的完整，而且也保證了甲與載體正確連接，因此，使用的兩種限制酶，是E1和E4。（2）構(gòu)建的真核表達載體P1中含有GFP基因，而GFP基因的表達產(chǎn)物“某種熒光蛋白（GFP）”在紫外光或藍光激發(fā)下會發(fā)出綠色熒光。若在導(dǎo)入P1的牛皮膚細胞中觀察到了綠色熒光，則說明L1基因在牛的皮膚細胞中完成了表達，基因的表達過程包括轉(zhuǎn)錄和翻譯。（3）若要獲得含有甲的牛，可采用核移植技術(shù)，即將能夠產(chǎn)生綠色熒光細胞的細胞核移入牛的去核卵母細胞中獲得重組細胞，并將該重組細胞在體外培養(yǎng)成重組胚胎，再經(jīng)過胚胎移植等獲得含有甲的牛。（4）PCR是多聚酶鏈式反應(yīng)的縮寫，是一種在生物體外復(fù)制特定DNA片斷的核酸合成技術(shù)。若利用PCR方法檢測甲是否存在于克隆牛的不同組織細胞中，則應(yīng)分別以該牛不同組織細胞中的核DNA作為PCR模板。21（2018全國卷·38）2018年細胞期刊報道，中國科學家率先成功地應(yīng)用體細胞對非人靈長類動物進行克隆，獲得兩只克隆猴“中中”和“華華”?；卮鹣铝袉栴}：（1）“中中”和“華華”的獲得涉及核移植過程，核移植是指_。通過核移植方法獲得的克隆猴，與核供體相比，克隆猴體細胞的染色體數(shù)目_（填“減半”“加倍”或“不變”）（2）哺乳動物的核移植可以分為胚胎細胞核移植和體細胞核移植，胚胎細胞核移植獲得克隆動物的難度_（填“大于”或“小于”）體細胞核移植，其原因是_。（3）在哺乳動物核移植的過程中，若分別以雌性個體和雄性個體的體細胞作為核供體，通常，所得到的兩個克隆動物體細胞的常染色體數(shù)目_（填“相同”或“不相同”），性染色體組合_（填“相同”或“不相同”）?！敬鸢浮浚?）將動物的一個細胞核，移入一個已去掉細胞核的卵母細胞不變（2）小于胚胎細胞分化程度低，恢復(fù)全能性相對容易（3）相同不同【解析】（1）核移植是指將動物的一個細胞的細胞核，移入一個已經(jīng)去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，這個胚胎最后發(fā)育成為動物個體；通過核移植方法獲得的克隆猴的細胞核來自供體，因此克隆猴體細胞的染色體數(shù)目和供體一致。（2）胚胎細胞核移植的難度小于體細胞核移植，其原因是動物胚胎細胞分化程度低，恢復(fù)其全能性相對容易。（3）哺乳動物雌性個體和雄性個體的體細胞染色體常染色體相同，性染色體前者是XX，后者是XY，因此分別以雌性個體和雄性個體的體細胞作為核供體，通常所得到的兩個克隆動物體細胞的常染色體數(shù)目相同，性染色體組合不同。22（2018江蘇卷·32）為生產(chǎn)具有特定性能的-淀粉酶，研究人員從某種海洋細菌中克隆了-淀粉酶基因（1656個堿基對），利用基因工程大量制備琢-淀粉酶，實驗流程見下圖。請回答下列問題：（1）利用PCR技術(shù)擴增-淀粉酶基因前，需先獲得細菌的_。（2）為了便于擴增的DNA片段與表達載體連接，需在引物的_端加上限制性酶切位點，且常在兩條引物上設(shè)計加入不同的限制性酶切位點，主要目的是_。（3）進行擴增時，反應(yīng)的溫度和時間需根據(jù)具體情況進行設(shè)定，下列選項中_的設(shè)定與引物有關(guān)，_的設(shè)定與擴增片段的長度有關(guān)。（填序號）變性溫度退火溫度延伸溫度變性時間退火時間延伸時間（4）下圖表示篩選獲得的工程菌中編碼-淀粉酶的mRNA的部分堿基序列：圖中虛線框內(nèi)mRNA片段包含_個密碼子，如虛線框后的序列未知，預(yù)測虛線框后的第一個密碼子最多有_種。（5）獲得工程菌表達的-淀粉酶后，為探究影響酶活性的因素，以濃度為1%的可溶性淀粉為底物測定酶活性，結(jié)果如下：緩沖液50mmol/LNa2HPO4-KH2PO450mmol/LTris-HCl50mmol/LGly-NaOHpH6.06.57.07.57.58.08.59.09.09.510.010.5酶相對活性%25.440.249.863.2