2018屆高考生物一輪復習 考點加強課7 微生物的篩選、鑒定、分離與計數(shù)學案

考點加強課7 微生物的篩選、鑒定、分離與計數(shù)從近五年全國卷高考看，生物技術實踐專題的命題絕大多數(shù)立足于微生物培養(yǎng)、應用、分離、計數(shù)等。答題過程中須明確所有操作都要圍繞著“目的”進行：（1）如果實驗目的是分離某種特定的目標微生物；關鍵點在于如何依據(jù)該微生物某方面特點制備特定選擇培養(yǎng)基；（2）如果是測定細菌的數(shù)量，則必須明確可能會引發(fā)數(shù)量變化誤差的操作（稀釋時的倍數(shù)、接種過程的無菌操作）備考時務必強化“選擇”與“鑒定”的界定及實驗方案制定，同時必須熟練把握計數(shù)方法及公式套用等?！纠C】 （2014·全國卷）植物秸稈中的纖維素可被某些微生物分解?；卮鹣铝袉栴}。（1）分解秸稈中纖維素的微生物能分泌纖維素酶，該酶是由3種組分組成的復合酶，其中的葡萄糖苷酶可將分解成。（2）在含纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅（CR）時，CR可與纖維素形成色復合物。用含有CR的該種培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時，培養(yǎng)基上會出現(xiàn)以該菌的菌落為中心的。（3）為從富含纖維素的土壤中分離獲得纖維素分解菌的單菌落，某同學設計了甲、乙兩種培養(yǎng)基（成分見下表）：酵母膏無機鹽淀粉纖維素粉瓊脂CR溶液水培養(yǎng)基甲培養(yǎng)基乙注：“”表示有，“”表示無。據(jù)表判斷，培養(yǎng)基甲（填“能”或“不能”）用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是；培養(yǎng)基乙（填“能”或“不能”）用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是_。解析（1）纖維素是一種由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物，是含量最豐富的多糖類物質。纖維素能被土壤中某些微生物分解利用，如下圖：（2）剛果紅可與纖維素形成紅色復合物，當纖維素被纖維素酶分解后，紅色復合物無法形成，出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，我們可以通過觀察是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。（3）分離和鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，且需以纖維素為唯一碳源。答案（1）纖維二糖葡萄糖（2）紅透明圈（3）不能液體培養(yǎng)基不能用于分離單菌落不能培養(yǎng)基中沒有纖維素，不會形成CR纖維素紅色復合物，即使出現(xiàn)單菌落也不能確定其為纖維素分解菌1.分離微生物的原理與措施（1）原理：自然環(huán)境中的微生物是混雜在一起的，因此分離獲得純培養(yǎng)物應首先采用的方法是將單個的細胞與其他細胞分離，再給細胞提供合適的營養(yǎng)和條件，使其生長成為可見的群體。（2）常用措施接種過程中盡量使細胞分散開來，如平板劃線法、稀釋涂布平板法。運用選擇培養(yǎng)基的作用特點，在培養(yǎng)基中添加某種特定的物質，抑制不需要的微生物的生長，促進所需微生物的生長。2.選擇培養(yǎng)基四種常見制備方法或實例下面是篩選抗鏈霉素大腸桿菌的實驗步驟及相關圖解。實驗步驟：把大量對鏈霉素敏感的大腸桿菌接種在不含鏈霉素的培養(yǎng)基1的表面，進行培養(yǎng)。待其長出密集的小菌落后，用影印法接種到不含鏈霉素的培養(yǎng)基2上，隨即再影印到含有鏈霉素的培養(yǎng)基3上，進行培養(yǎng)。在培養(yǎng)基3上出現(xiàn)了個別抗鏈霉素的菌落，將其挑選出。請回答：（1）配制培養(yǎng)基時除了滿足基本的營養(yǎng)條件外，還需滿足微生物生長對特殊營養(yǎng)物質、的要求。（2）從功能上看，含有鏈霉素的培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基。若在培養(yǎng)基中加入伊紅和美藍，則培養(yǎng)皿中長出的菌落顏色為。由圖可知，1號培養(yǎng)基接種的方法為_。（3）對2和3進行比較，在2上找到與3上相應的菌落，挑取其中一個菌落接種到（填“含鏈霉素”或“不含鏈霉素”）的培養(yǎng)基上，如果有較多的菌落出現(xiàn)，則說明該抗性基因突變發(fā)生在該菌接觸鏈霉素之（填“前”或“后”）。（4）3中的菌落比1、2中的菌落少很多，這說明了基因突變具有的特點。解析（1）配制培養(yǎng)基時在提供幾種基本營養(yǎng)條件的基礎上，還需滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質以及氧氣的要求。（2）鏈霉素是抗生素，對大腸桿菌具有選擇作用。在伊紅和美藍培養(yǎng)基上.大腸桿菌菌落顏色為黑色。由題圖可知，1號培養(yǎng)基接種的方法為稀釋涂布平板法。（3）培養(yǎng)基2和培養(yǎng)基3上相同的菌落，是具有相同性狀的大腸桿菌形成的，將培養(yǎng)基2中一個相應菌落接種到含鏈霉素的培養(yǎng)基上，若出現(xiàn)較多的菌落，則說明該抗性基因突變發(fā)生在該菌接觸鏈霉素之前。（4）抗鏈霉素性狀是大腸桿菌基因突變后獲得的性狀.3號培養(yǎng)皿中的菌落比1號、2號中的菌落少很多，這說明了基因突變頻率很低。答案（1）pH氧氣（2）選擇黑色稀釋涂布平板法（3）含鏈霉素前（4）頻率低/低頻性影印法接種的具體過程是：將待測的濃縮菌懸液涂在合適的平板上，等其長好后作為母平板（每個平板上的菌落控制在30300個）；用一小塊滅菌的絲絨固定在直徑較平板略小的圓柱形木塊上，構成印章（即接種工具）；然后把長有菌落的母平板倒置在絲絨的印章上，輕輕印一下；再把此印章在另一含有選擇培養(yǎng)基的平板上輕輕印一下，經(jīng)培養(yǎng)后，選擇培養(yǎng)基平板上長出的菌落與母平板上的菌落位置對應，比較影印平板與母平板上菌落生長情況，即可從相應位置的母平板上選出待測的突變型菌落。影印法最初是為證明微生物的抗藥性突變是自發(fā)的、與相應的環(huán)境因素無關而設計的接種方法，目前已廣泛應用于營養(yǎng)缺陷型微生物的篩選以及抗藥性菌株篩選等研究工作中?！纠C】 （2014·全國卷，39）為了調查某河流的水質狀況，某研究小組測定了該河流水樣中的細菌含量，并進行了細菌分離等工作。回答下列問題：（1）該小組采用稀釋涂布平板法檢測水樣中細菌含量。在涂布接種前，隨機取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時間，這樣做的目的是_；然后，將1 mL水樣稀釋100倍，在3個平板上用涂布法分別接入0.1 mL稀釋液；經(jīng)適當培養(yǎng)后，3個平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為。（2）該小組采用平板劃線法分離水樣中的細菌，操作時，接種環(huán)通過滅菌。在第二次及以后的劃線時，總是從上一次劃線的末端開始劃線。這樣做的目的是_。（3）示意圖A和B中，表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結果。（4）該小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻，一部分進行靜置培養(yǎng)，另一部分進行振蕩培養(yǎng)。結果發(fā)現(xiàn)：振蕩培養(yǎng)的細菌比靜置培養(yǎng)的細菌生長速度快。分析其原因是：振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中的含量，同時可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高的利用率。解析（1）在涂布接種前，隨機取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)一段時間，檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格；每升水樣中的活菌數(shù)為：（393837）/338，再除以0.1乘以100，得到1毫升中的菌數(shù)，再乘以1000就是1升中的菌數(shù)，故為3.8×107。（2）用平板劃線法應先將接種環(huán)灼燒滅菌再劃線。第二次及以后的劃線時，總是從上一次劃線的末端開始劃線，達到稀釋的目的，使得最后能夠得到單個菌落。（3）根據(jù)圖示可知，B為稀釋涂布平板法接種后培養(yǎng)得到的菌落。（4）振蕩的作用相當于攪拌，可以提高培養(yǎng)液中溶解氧的含量，還可以使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高了營養(yǎng)物質的利用率，因此振蕩培養(yǎng)的細菌比靜置培養(yǎng)的細菌生長速度快。答案（1）檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格3.8×107（2）灼燒將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個菌落（3）B（4）溶解氧營養(yǎng)物質微生物計數(shù)的方法專項歸納1.間接計數(shù)法（也叫活菌計數(shù)法）常用的是稀釋涂布平板法。（1）原理：當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少個活菌。（2）操作：設置重復組，增強實驗的說服力與準確性。將待測樣品經(jīng)一系列10倍稀釋，選擇三個稀釋度的菌液，分別取0.1 mL接種到已制備好的平板上，然后用無菌涂布器將菌液涂布于整個平板表面，放在適宜的溫度下培養(yǎng)，計算菌落數(shù)。為使結果接近真實值，可將同一稀釋度的樣液加到三個或三個以上的平板上，經(jīng)涂布、培養(yǎng)，計算出菌落平均數(shù)。為了保證結果準確，一般選擇菌落數(shù)為30300個的平板進行計數(shù)，若設置的重復組中結果相差太遠，意味著操作有誤，需重新實驗。計算公式：每克樣品中的細菌數(shù)（C/V）×M，其中C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（mL），M代表稀釋倍數(shù)。提醒此種方法統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目低。這是因為當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。2.顯微鏡直接計數(shù)法（1）原理：利用特定細菌計數(shù)板或血球計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量，但不能區(qū)分細菌的死活。計數(shù)板是一塊特制的載玻片，上面有一個特定面積（1 mm2）和高（0.1 mm）的計數(shù)室，在1 mm2的面積里又被劃分成25個（或16個）中格，每個中格進一步劃分成16個（或25個）小格，但計數(shù)室都是由400個小格組成的。（2）操作：將清潔干燥的血球計數(shù)板蓋上蓋玻片，再將稀釋的樣品滴在計數(shù)板上，稍等片刻，待細菌全部沉降到計數(shù)室底部再在顯微鏡下統(tǒng)計45個中格中的細菌數(shù)，并求出每個小格所含細菌的平均數(shù)，再按公式求出每毫升樣品中所含的細菌數(shù)。（3）計算公式：每毫升原液所含細菌數(shù)每小格平均細菌數(shù)×400×10 000×稀釋倍數(shù)。 3.濾膜法以測定飲用水中大腸桿菌的數(shù)目為例，將已知體積的水過濾后，將濾膜放于伊紅美藍培養(yǎng)基上培養(yǎng)，在該培養(yǎng)基上，大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)黑色，可根據(jù)培養(yǎng)基上黑色菌落的數(shù)目，計算出水樣中大腸桿菌的數(shù)量。（2017·吉林松原模擬）研究人員用有機化合物X、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基成功地從土壤中篩選出能高效降解有機化合物X的細菌（目的菌）。下圖是從土壤中篩選出該細菌的過程示意圖，下表是分離純化的結果。請回答下列問題：記錄項目：透明圈直徑/菌落直徑菌落編號12348小時1.62.83.072小時2.21.25.096小時2.31.24.2（1）培養(yǎng)基中的有機化合物X主要為目的菌提供等營養(yǎng)要素。從土壤中富集能有效降解有機化合物X的細菌時，應選用（填“固體”或“液體”）培養(yǎng)基。（2）配制成10倍稀釋液時，用無菌移液管從富集液中吸取1 mL，移入盛有mL無菌水的試管中，并依次配制1021010的梯度稀釋液。（3）在分離、純化過程中，圖中過程接種的方法分別為、。在倒平板前，應對玻璃器皿和培養(yǎng)基滅菌，滅菌方法是。（4）分析菌種的分離純化結果，應選擇號菌落進行擴大生產(chǎn)，原因是_。解析（1）篩選微生物用選擇培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中的有機化合物X主要為目的菌提供碳源、氮源等營養(yǎng)要素，不能降解有機化合物X的微生物不能生存。從土壤中富集能有效降解有機化合物X的細菌時，應選用液體培養(yǎng)基，有利于富集培養(yǎng)。（2）配制成10倍稀釋液時，用無菌移液管從富集液中吸取1 mL，移入盛有9 mL無菌水的試管中，并依次配制1021010的梯度稀釋液。（3）在分離、純化過程中，微生物接種方法常用稀釋涂布平板法、平板劃線法。在倒平板前，對玻璃器皿和培養(yǎng)基滅菌的方法是高壓蒸汽滅菌法。（4）由于目的菌能有效降解有機化合物X產(chǎn)生透明圈，透明圈直徑/菌落直徑越大，說明降解有機化合物X的能力越強，因此應選擇3號菌落進行擴大生產(chǎn)。答案（1）碳源（或碳源、氮源）液體（2）9（3）稀釋涂布平板法平板劃線法高壓蒸汽滅菌法（4）3透明圈直徑/菌落直徑越大，降解有機化合物X的能力越強隨堂·真題&預測1.（2014·四川理綜，節(jié)選）有機農(nóng)藥苯磺隆是一種除草劑，長期使用會污染環(huán)境。研究發(fā)現(xiàn)，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分離降解苯磺隆的菌株和探索其降解機制的實驗過程如圖甲、乙所示。（1）微生物生長繁殖所需的主要營養(yǎng)物質有碳源、水、四類，該實驗所用的選擇培養(yǎng)基只能以苯磺隆作為唯一碳源，其原因是_。（2）與微生物培養(yǎng)基相比，植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基常需添加生長素和，這些植物激素一般需要事先單獨配制成保存?zhèn)溆?。?）為探究苯磺隆的降解機制，將該菌種的培養(yǎng)液過濾離心，取上清液做圖乙所示實驗。該實驗的假設是，該實驗設計是否合理？為什么？。解析（1）微生物生長所需要的主要營養(yǎng)物質包括：碳源、氮源、水和無機鹽。使用選擇培養(yǎng)基是因為它是允許特定的微生物生長和增殖，同時又能抑制或阻止其他微生物的生長和增殖的培養(yǎng)基，該實驗所用培養(yǎng)基只有能利用苯磺隆的微生物才能正常生長和增殖。（2）植物組織培養(yǎng)常需要添加的植物激素有生長素和細胞分裂素，調整二者的比例可以誘導脫分化和再分化。MS培養(yǎng)基的成分一般先分別配制成母液備用。（3）題中實驗為將該菌種的培養(yǎng)液過濾后離心，取上清液加入蛋白酶處理后，測得其對苯磺隆的降解率，意為假設目的菌種能產(chǎn)生降解苯磺隆的蛋白質，若用蛋白酶處理后，可使該蛋白質分解，苯磺隆降解率下降，則假設成立。但由于缺乏空白對照，不能比較蛋白酶處理是否降低苯磺隆降解率，該實驗不能得出相應結論。答案（1）氮源和無機鹽只有能利用苯磺隆的微生物能正常生長和繁殖（2）細胞分裂素母液（3）目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白質不合理，缺少空白對照2.（2019·高考預測）纖維素分解菌能夠產(chǎn)生纖維素酶分解纖維素?；卮鹣铝袉栴}：（1）在篩選纖維素分解菌的過程中，通常用染色法，這種方法能夠通過顏色反應直接對纖維素分解菌進行篩選。甲同學在實驗時得到了如圖所示的結果，則纖維素分解菌位于。A. B.C. D.（2）乙同學打算從牛胃中分離纖維素分解菌并計數(shù)，與分離醋酸菌相比，進行培養(yǎng)時除了營養(yǎng)不同，最主要的實驗條件差別是_。該同學采用活菌計數(shù)法統(tǒng)計的菌落數(shù)目往往比活菌的實際數(shù)目_。（3）丙同學在提取和分離纖維素酶的過程中，為了抵制外界酸和堿對酶活性的影響，采取的措施是向提取液和分離液中添加。若探究纖維素酶活性的最適溫度，如何設置對照？ _。解析（1）剛果紅與纖維素形成的紅色復合物在纖維素被分解后將不再形成，則在培養(yǎng)基上會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。（2）牛胃是一個厭氧環(huán)境，所以其中的纖維素分解菌與需氧的醋酸菌相比培養(yǎng)條件有所不同。因是活菌計數(shù)法，所以當兩個或多個細菌連在一起時平板上只觀察到一個菌落，所以菌落數(shù)目比實際的少。（3）探究最適溫度可設置一系列的溫度梯度進行相互對照，其他無關變量要保持相同且適宜。答案（1）剛果紅A（2）保證無氧環(huán)境少（低）（3）緩沖溶液設置一系列的溫度梯度進行相互對照（時間：30分鐘滿分：100分）1.（2017·河南十所名校聯(lián)考，23）如圖表示研究者從土壤中篩選分解尿素的細菌并計數(shù)的相關實驗，請據(jù)圖回答下列問題：（1）進行過程和的目的分別是和；圖中弧線箭頭上“？”的具體操作是。（2）進行培養(yǎng)基配制和滅菌時，滅菌與調節(jié)pH的先后順序是_。倒平板時，待平板冷卻凝固后，應將平板倒過來放置，并用記號筆在皿底上標明培養(yǎng)微生物名稱、平板上培養(yǎng)樣品的稀釋度、制作者姓名、培養(yǎng)日期及等信息。純化菌種時為了得到單一菌落，常采用的接種方法是和。（3）在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入。培養(yǎng)后，若出現(xiàn)色就可以鑒定其中含有能夠分解尿素的細菌。（4）研究者可以通過觀察培養(yǎng)形成的菌落的、隆起程度等特征，來判斷培養(yǎng)基上是否感染了其他細菌。在實驗中，研究者每隔24小時統(tǒng)計一次菌落數(shù)目，并選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結果，這樣可以防止_。解析（1）根據(jù)圖示過程可知，和的目的分別是選擇培養(yǎng)、增加分解尿素細菌的數(shù)量。圖中弧線箭頭上“？”的具體操作是挑出分解尿素細菌的菌落。（2）配制培養(yǎng)基和滅菌時，應該是先調pH，再進行滅菌。培養(yǎng)基的種類、培養(yǎng)日期、平板上培養(yǎng)樣品的稀釋度、培養(yǎng)微生物名稱及制作者姓名等信息要用記號筆在皿底上標明。純化菌種時為了得到單一菌落，常采用的接種方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法。（3）分解尿素的細菌鑒定時應該加入酚紅指示劑，培養(yǎng)過程中pH升高，酚紅指示劑會變?yōu)榧t色，原因是細菌合成的脲酶將尿素分解成氨，使培養(yǎng)基的堿性增強，出現(xiàn)紅色說明含有能夠分解尿素的細菌。（4）可以根據(jù)菌落特征來判斷不同的細菌，菌落特征一般體現(xiàn)在形狀、大小、顏色和隆起程度。實驗中，研究者每隔24小時統(tǒng)計一次菌落數(shù)目，并選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結果，這樣可以防止因培養(yǎng)時間不足導致遺漏細菌數(shù)目。答案（1）選擇培養(yǎng)增加分解尿素的細菌的數(shù)量挑出菌落（2）先調節(jié)pH后滅菌培養(yǎng)基種類平板劃線法稀釋涂布平板法（后兩空位置可顛倒）（3）酚紅指示劑紅 （4）形狀、大小、顏色因培養(yǎng)時間不足導致遺漏細菌數(shù)目2.（2017·河南十所名校聯(lián)考，37）微生物的培養(yǎng)在生物科學史和現(xiàn)代生物工程中都是極其重要的基礎技術。下圖1是某學生重復艾弗里證明DNA是遺傳物質實驗的其中一組實驗；下圖2是基因工程中運用影印法將培養(yǎng)基A上的菌落按原來方向印在培養(yǎng)基B上，以檢測重組質粒是否導入大腸桿菌的示意圖。請據(jù)圖回答下列相關問題：（1）圖1、圖2的培養(yǎng)結果顯示，兩實驗中使用的都是（填物理狀態(tài)）培養(yǎng)基。（2）在配制圖2中的培養(yǎng)基時，除考慮營養(yǎng)、pH、滲透壓等條件外，還要考慮在培養(yǎng)基A和B中加入（填“相同”或“不同”）種類的抗生素。在配制含瓊脂的培養(yǎng)基和倒平板的過程中，下列選項不需要的是（填序號）。酒精燈 接種環(huán) 高壓蒸汽滅菌鍋 培養(yǎng)皿（3）培養(yǎng)基滅菌是避免雜菌污染的有效手段之一，適用于圖1、圖2所示培養(yǎng)基的滅菌方法是_；接種前還需檢測滅菌效果，方法是將置于恒溫箱中，在適宜溫度下培養(yǎng)一段時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生。（4）實驗證明，上述兩項實驗中R型菌和大腸桿菌的轉化率都很低，為獲得圖1、圖2所示的培養(yǎng)結果，一是要設法提高圖1中S型菌的；二是要使用恰當?shù)姆椒ń臃N。兩實驗都不能用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種，而應采用不加稀釋的涂布平板法接種R型菌和大腸桿菌，理由是_。接種培養(yǎng)4天后，可通過觀察的形態(tài)特征來識別R型菌和大腸桿菌。解析本題考查微生物的培養(yǎng)與分離的知識，旨在考查考生的理解能力和獲取信息的能力。（1）從圖1、圖2可以看出，兩實驗中使用的都是固體培養(yǎng)基。（2）要檢測重組質粒是否導入大腸桿菌，檢測的依據(jù)一般是重組質粒的抗性發(fā)生了改變，因此在培養(yǎng)基A和培養(yǎng)基B中應加入不同種類的抗生素。在配制含瓊脂的培養(yǎng)基和倒平板的過程中，不需要接種環(huán)。（3）對培養(yǎng)基滅菌一般采用高壓蒸汽滅菌法，接種前需要檢測滅菌效果，其方法是進行空白對照，將未接種的培養(yǎng)基置于恒溫箱中，在適宜溫度下培養(yǎng)一段時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生。（4）上述兩項實驗中R型菌和大腸桿菌的轉化率都很低，為獲得圖1、圖2所示的培養(yǎng)結果，一是要提高圖1中S型菌的DNA純度；二是要使用恰當?shù)姆椒ń臃N，不選用平板劃線法和稀釋涂布平板法，而采用不加稀釋的涂布平板法接種R型菌和大腸桿菌，是因為這兩種方法都可能因稀釋后菌種數(shù)量極少而無法觀察到轉化成功的菌落。識別不同類型的細菌，一般可通過觀察菌落的特征來加以區(qū)分。答案（1）固體（2）不同（3）高壓蒸汽滅菌法未接種的培養(yǎng)基（4）DNA純度平板劃線法和稀釋涂布平板法都可能因稀釋后菌種數(shù)量極少而無法觀察到轉化成功的菌落菌落3.（2017·開封市三模，37）有些細菌可分解原油，從而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同學欲從受原油污染的土壤中篩選出高效降解原油的菌株?；卮饐栴}：（1）在篩選過程中，應將土壤樣品稀釋液接種于以為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，從功能上講，這種培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基。（2）制備培養(yǎng)基時需采取方法滅菌，目的是_。（3）純化菌種時，為了得到單菌落，常采用的接種方法有兩種，下面兩圖是兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖解。獲得圖A效果的接種方法是_，獲得圖B效果的接種方法是_?，F(xiàn)發(fā)現(xiàn)某一培養(yǎng)基上的菌落連成一片，最可能的原因是_。（4）在進行分離該菌實驗時，某同學從培養(yǎng)基上篩選出大約150個菌落，而其他同學只選擇出大約50個菌落。該同學的實驗結果產(chǎn)生的原因可能有（填序號）由于土樣不同由于培養(yǎng)基污染由于操作失誤沒有設置對照答案（1）原油選擇（2）高壓蒸汽滅菌殺死微生物及芽孢（3）稀釋涂布平板法平板劃線法菌液濃度過高（或培養(yǎng)過程被雜菌污染，或用接種針劃下一區(qū)域前接種針沒有滅菌導致菌液沒有稀釋開等）（4）4.（2017·安陽市二模，37）“口嚼酒”因日本著名動畫電影導演新海誠的新作你的名字而引起人們的關注。世界上有些地方很早就有口嚼酒的記載。請回答下列相關問題：（1）口嚼酒的做法是：首先需要將米煮熟，然后放入口中咀嚼一段時間，直至米粒變?yōu)楹隣?，再將其吐入特制容器中，令其發(fā)酵，經(jīng)過幾天便成為甜酸味的酒。上述的制作過程中，“咀嚼”可能具有兩個作用，分別是 和。參與口嚼酒形成初期的微生物主要是來自空氣中的，末期形成酸味，可能是因為密封不嚴，產(chǎn)生了等物質。（2）口嚼酒是一種自釀酒，不僅品質不高，而且衛(wèi)生條件難以把握，會有雜菌滋生的危險。某生物興趣小組想探究口嚼酒制作過程中會滋生哪些微生物，進行了進一步的實驗，實驗步驟如下：制作口嚼酒。制作培養(yǎng)基：計算稱量溶化倒平板。接種：每天同一時間將口嚼酒液體搖勻后按照圖1和圖2的方法進行操作，該方法是。并在每天接種的培養(yǎng)皿上注明培養(yǎng)日期，最后將所有培養(yǎng)基放在相同且適宜的環(huán)境下培養(yǎng)。經(jīng)過一段適宜的時間后，觀察不同培養(yǎng)基上的菌落數(shù)和菌落的形態(tài)，并進行品種鑒定。圖3是三個不同時間獲得的培養(yǎng)基，其時間先后為（填字母）。上述實驗在時間上形成前后對照，但是還需要設置一個空白對照，目的是_。（3）興趣小組成員在實驗后期看到培養(yǎng)基上長滿了許多雜菌菌落，若他們采用圖4的方法對雜菌中的目的菌進行純化，則在（填數(shù)字）區(qū)最可能獲得純凈的目的菌。答案（1）增大酶與米飯的接觸面積，有利于發(fā)酵使唾液淀粉酶將米飯中的淀粉分解成麥芽糖酵母菌醋酸（2）滅菌（或高壓蒸汽滅菌）稀釋涂布平板法B、C、A檢驗培養(yǎng)基滅菌是否合格（3）513