2017-2018學(xué)年高中生物 第四部分 淺嘗現(xiàn)代生物技術(shù) 實(shí)驗(yàn)13 DNA片段的PCR擴(kuò)增學(xué)案 浙科版選修1

第四部分 淺嘗現(xiàn)代生物技術(shù) 實(shí)驗(yàn)13 DNA片段的PCR擴(kuò)增一、PCR技術(shù)1PCR的全稱是：_。2PCR技術(shù)是用于DNA片段復(fù)制、擴(kuò)增的生化技術(shù)。3PCR技術(shù)用途：除用于基因擴(kuò)增外，還用于_。4PCR技術(shù)的具體應(yīng)用：在法學(xué)、醫(yī)學(xué)、食品和考古學(xué)上也是重要的實(shí)用工具，如_鑒定、_鑒定、食品質(zhì)量的確定、_病診斷、腫瘤病和其他疾病的診斷以及考古中人種的確定等。答案：1.聚合酶鏈反應(yīng)3測(cè)定DNA序列4親子犯罪遺傳二、DNA的體內(nèi)自我復(fù)制與PCR技術(shù)DNA聚合酶在有_的存在時(shí)，利用4種_，可從_末端向_末端合成新鏈。PCR技術(shù)還需要_作為_，這一段叫_。答案：DNA模板脫氧核苷三磷酸53與DNA模板互補(bǔ)的一段單鏈DNA聚合酶作用的起點(diǎn)引物三、PCR作用的過程11個(gè)循環(huán)的操作：步驟具體操作雙鏈DNA_將雙鏈DNA加熱至_，DNA_，DNA之間的_打開，雙鏈分離(也叫做_)續(xù)表步驟具體操作與_結(jié)合雙鏈分離后，將溫度_，這一降溫過程叫_。退火后，引物可與2個(gè)_分別結(jié)合DNA新鏈的_ _下，聚合酶可利用_組裝模板的互補(bǔ)鏈，從引物延伸至_末端2.一般大約需要重復(fù)上述3步驟_個(gè)循環(huán)。3結(jié)果：一個(gè)循環(huán)形成_個(gè)雙鏈DNA，在20個(gè)循環(huán)后(大約1h),1個(gè)DNA片段可擴(kuò)增上百萬個(gè)拷貝，30個(gè)循環(huán)可產(chǎn)生10億個(gè)拷貝。答案：1.分開95變性氫鍵解鏈引物迅速降至4060退火單鏈的DNA模板延伸724種dNTP32153032四、實(shí)驗(yàn)操作1設(shè)備、用品(略)2材料：凝膠、DNA標(biāo)樣、PCR試劑盒、TBE緩沖液、0.1%亞甲藍(lán)3.步驟：文字說明：取3個(gè)0.5 mL微量離心管，分別記做1、2、3號(hào)。用取樣器按表一加入試劑，關(guān)閉上蓋并在振蕩器上振蕩20 s，使之混合均勻?qū)?個(gè)微量離心管放在固定器上，保證每管中的液面在水浴中的水面以下。依表二的時(shí)間依次放入3個(gè)水浴進(jìn)行PCR將TBE緩沖液加入到電泳槽中，使緩沖液高出凝膠面34 mm，再將樣品加入凝膠板的加樣孔中。所加順序內(nèi)容依次為：凝膠板中的加樣情況說明表加樣孔編號(hào)（對(duì)應(yīng)右圖所示）1234離心管中樣品標(biāo)號(hào)SA1A2A3所加樣品1號(hào)樣品20微升DNA標(biāo)準(zhǔn)溶液PCR產(chǎn)物1（72 1min后得到的）PCR產(chǎn)物2（72 1min、70 2min后得到的）對(duì)照組產(chǎn)物2號(hào)樣品2微升藍(lán)色緩沖液1號(hào)樣品與2號(hào)樣品必須充分混勻后再加入開始進(jìn)行電泳，若用18 V電池的電泳46 h；若甲直流電泳儀電源，80 V可電泳40 min電泳后將凝膠緩沖液倒出，緩沖液可再利用。將10 mL染色劑（亞甲藍(lán)）覆蓋在凝膠表面，1520 min后移去（可再利用），再加入5 mL70%乙醇，不斷搖動(dòng)12 min，使其分布均勻，再除去，加入冷水，幾分鐘后看到藍(lán)色的區(qū)帶出現(xiàn)，這就是擴(kuò)增的DNA比較、判斷膠片結(jié)果圖表輔助：表一：試劑1號(hào)管(12個(gè)循環(huán))2號(hào)管(14個(gè)循環(huán))3號(hào)管(對(duì)照)PCR混合液2020蒸餾水20引物202020模板DNA101010總體積505050表二：時(shí)間溫度目的2 min30 s30 s1 min2 min95 95 49 72 70 開始變性(解鏈)最后擴(kuò)增膠片染色結(jié)果4