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2017-2018學(xué)年高中生物 第四部分 淺嘗現(xiàn)代生物技術(shù) 實(shí)驗(yàn)13 DNA片段的PCR擴(kuò)增學(xué)案 浙科版選修1

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2017-2018學(xué)年高中生物 第四部分 淺嘗現(xiàn)代生物技術(shù) 實(shí)驗(yàn)13 DNA片段的PCR擴(kuò)增學(xué)案 浙科版選修1

第四部分 淺嘗現(xiàn)代生物技術(shù) 實(shí)驗(yàn)13 DNA片段的PCR擴(kuò)增一、PCR技術(shù)1PCR的全稱是:_。2PCR技術(shù)是用于DNA片段復(fù)制、擴(kuò)增的生化技術(shù)。3PCR技術(shù)用途:除用于基因擴(kuò)增外,還用于_。4PCR技術(shù)的具體應(yīng)用:在法學(xué)、醫(yī)學(xué)、食品和考古學(xué)上也是重要的實(shí)用工具,如_鑒定、_鑒定、食品質(zhì)量的確定、_病診斷、腫瘤病和其他疾病的診斷以及考古中人種的確定等。答案:1.聚合酶鏈反應(yīng)3測(cè)定DNA序列4親子犯罪遺傳二、DNA的體內(nèi)自我復(fù)制與PCR技術(shù)DNA聚合酶在有_的存在時(shí),利用4種_,可從_末端向_末端合成新鏈。PCR技術(shù)還需要_作為_,這一段叫_。答案:DNA模板脫氧核苷三磷酸53與DNA模板互補(bǔ)的一段單鏈DNA聚合酶作用的起點(diǎn)引物三、PCR作用的過程11個(gè)循環(huán)的操作:步驟具體操作雙鏈DNA_將雙鏈DNA加熱至_,DNA_,DNA之間的_打開,雙鏈分離(也叫做_)續(xù)表步驟具體操作與_結(jié)合雙鏈分離后,將溫度_,這一降溫過程叫_。退火后,引物可與2個(gè)_分別結(jié)合DNA新鏈的_ _下,聚合酶可利用_組裝模板的互補(bǔ)鏈,從引物延伸至_末端2.一般大約需要重復(fù)上述3步驟_個(gè)循環(huán)。3結(jié)果:一個(gè)循環(huán)形成_個(gè)雙鏈DNA,在20個(gè)循環(huán)后(大約1h),1個(gè)DNA片段可擴(kuò)增上百萬個(gè)拷貝,30個(gè)循環(huán)可產(chǎn)生10億個(gè)拷貝。答案:1.分開95變性氫鍵解鏈引物迅速降至4060退火單鏈的DNA模板延伸724種dNTP32153032四、實(shí)驗(yàn)操作1設(shè)備、用品(略)2材料:凝膠、DNA標(biāo)樣、PCR試劑盒、TBE緩沖液、0.1%亞甲藍(lán)3.步驟:文字說明:取3個(gè)0.5 mL微量離心管,分別記做1、2、3號(hào)。用取樣器按表一加入試劑,關(guān)閉上蓋并在振蕩器上振蕩20 s,使之混合均勻?qū)?個(gè)微量離心管放在固定器上,保證每管中的液面在水浴中的水面以下。依表二的時(shí)間依次放入3個(gè)水浴進(jìn)行PCR將TBE緩沖液加入到電泳槽中,使緩沖液高出凝膠面34 mm,再將樣品加入凝膠板的加樣孔中。所加順序內(nèi)容依次為:凝膠板中的加樣情況說明表加樣孔編號(hào)(對(duì)應(yīng)右圖所示)1234離心管中樣品標(biāo)號(hào)SA1A2A3所加樣品1號(hào)樣品20微升DNA標(biāo)準(zhǔn)溶液PCR產(chǎn)物1(72 1min后得到的)PCR產(chǎn)物2(72 1min、70 2min后得到的)對(duì)照組產(chǎn)物2號(hào)樣品2微升藍(lán)色緩沖液1號(hào)樣品與2號(hào)樣品必須充分混勻后再加入開始進(jìn)行電泳,若用18 V電池的電泳46 h;若甲直流電泳儀電源,80 V可電泳40 min電泳后將凝膠緩沖液倒出,緩沖液可再利用。將10 mL染色劑(亞甲藍(lán))覆蓋在凝膠表面,1520 min后移去(可再利用),再加入5 mL70%乙醇,不斷搖動(dòng)12 min,使其分布均勻,再除去,加入冷水,幾分鐘后看到藍(lán)色的區(qū)帶出現(xiàn),這就是擴(kuò)增的DNA比較、判斷膠片結(jié)果圖表輔助:表一:試劑1號(hào)管(12個(gè)循環(huán))2號(hào)管(14個(gè)循環(huán))3號(hào)管(對(duì)照)PCR混合液2020蒸餾水20引物202020模板DNA101010總體積505050表二:時(shí)間溫度目的2 min30 s30 s1 min2 min95 95 49 72 70 開始變性(解鏈)最后擴(kuò)增膠片染色結(jié)果4

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