2020版高考生物一輪復(fù)習(xí) 課堂互動探究案1 微生物的培養(yǎng)和利用（含解析）

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1、課堂互動探究案1 微生物的培養(yǎng)和利用 考點突破　素養(yǎng)達成 　微生物的實驗室培養(yǎng)(國考5年7考) (全國卷：2018全國卷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ；2016全國卷Ⅲ；2015全國卷Ⅰ；2014全國卷Ⅰ、Ⅱ； 地方卷：2016江蘇卷；2015山東、江蘇卷； 2014四川、江蘇卷) 【師說考問】 考問1　據(jù)某微生物培養(yǎng)基的配方表回答下列問題 編號 ① ② ③ ④ ⑤ 成分 (NH4)2SO4 KH2PO4 FeSO4 CaCl2 H2O 含量 0.4 g 4.0 g 0.5 g 0.5 g 100 mL (1)此培養(yǎng)基按物理性質(zhì)劃分屬于液體培養(yǎng)基，因為沒有凝

2、固劑(如瓊脂)；按功能劃分屬于選擇培養(yǎng)基，因為沒有碳源，只有自養(yǎng)型微生物才能生長(利用空氣中的CO2)。 (2)此培養(yǎng)基含有的微生物的營養(yǎng)成分包括水、無機鹽和氮源三類，若加入氨基酸，則它可充當?shù)臓I養(yǎng)成分包括碳源、氮源和生長因子。 (3)若要觀察微生物的菌落特征，培養(yǎng)基中應(yīng)添加的成分是凝固劑(瓊脂)。 (4)若用該培養(yǎng)基來分離尿素分解菌，應(yīng)除去表中①成分(填表中序號)，加入尿素和不含氮元素的有機物。 考問2　據(jù)兩種接種方法產(chǎn)生的培養(yǎng)效果圖完成下列問題 (1)獲得圖A效果和圖B效果的接種方法分別是稀釋涂布平板法、平板劃線法。 (2)某同學(xué)在純化土壤中的細菌時，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上的菌落連成

3、一片，最可能的原因是什么？應(yīng)當怎樣操作才可避免此種現(xiàn)象。 提示：最可能的原因是菌液濃度過高或劃線時在劃下一區(qū)域前未將接種環(huán)滅菌。采取的措施是增大稀釋倍數(shù)或每次劃新區(qū)域前先將接種環(huán)滅菌。 考問3　大腸桿菌的純化培養(yǎng) (1)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基 ①操作步驟 →→→→ ②倒平板的操作方法及注意事項 a．請用文字和箭頭寫出正確的倒平板操作流程：丙→乙→甲→丁。 b．甲、乙、丙中的滅菌方法是灼燒滅菌。 c．丁中的操作需要等待平板冷卻凝固后才能進行。 (2)純化大腸桿菌的方法 ①純化培養(yǎng)原理：想方設(shè)法在培養(yǎng)基上得到由一個細菌繁殖而來的肉眼可見的菌落，即可獲得較純的菌種。

4、②純化大腸桿菌的關(guān)鍵步驟是接種。 ③常用的微生物接種方法有兩種 a．平板劃線法：是通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。 b．稀釋涂布平板法：是將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)。 系列稀釋操作(如下圖所示)： 涂布平板操作(如下圖所示)： (3)菌種的保存方法 ①對于頻繁使用的菌種，可以采用臨時保藏的方法。 ②對于需要長期保存的菌種，可以采用甘油管藏的方法。 特別提醒 (1)配制牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的注意事項 ①倒平板的適宜溫度是50 ℃左右，溫度過高會

5、燙手，過低培養(yǎng)基又會凝固。 ②平板需倒置，這樣既可使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。 (2)平板劃線操作的注意事項 ①第一次劃線及每次劃線之前都需要灼燒接種環(huán)。 ②灼燒接種環(huán)，待其冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種。 ③劃線時最后一區(qū)不要與第一區(qū)相連。 ④劃線用力大小要適當，防止用力過大將培養(yǎng)基劃破。 【題組跟進】 高考題組——研考向 　微生物培養(yǎng)與分離的考查 1．[2016·江蘇卷，25](多選)漆酶屬于木質(zhì)素降解酶類，在環(huán)境修復(fù)、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)等領(lǐng)域有著廣泛用途。下圖是分離、純化和保存漆酶菌株的過程，相關(guān)敘述正確的是(　　)

6、A．生活污水中含有大量微生物，是分離產(chǎn)漆酶菌株的首選樣品 B．篩選培養(yǎng)基中需要加入漆酶的底物，通過菌落特征挑出產(chǎn)漆酶的菌落 C．在涂布平板上長出的菌落，再通過劃線進一步純化 D．斜面培養(yǎng)基中含有大量營養(yǎng)物，可在常溫下長期保存菌株 解析：漆酶降解“木質(zhì)”，則漆酶菌株多存在于“木質(zhì)”豐富的場所，故生活污水中含有大量微生物，但不一定含有產(chǎn)漆酶的菌株，且漆酶為木質(zhì)降解酶類，不適合用分離產(chǎn)漆酶菌株，A錯誤；篩選生活污水中含有大量微生物，B正確；在涂布平板上長出的菌落，再通過劃線進一步純化，C正確；斜面培養(yǎng)基中含有大量營養(yǎng)物，可在低溫下長期保存菌株，D錯誤。 答案：BC 2．[2015·江蘇卷

7、，19]做“微生物的分離與培養(yǎng)”實驗時，下列敘述正確的是(　　) A．高壓滅菌加熱結(jié)束時，打開放氣閥使壓力表指針回到零后，開啟鍋蓋 B．倒平板時，應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上 C．為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落 D．用記號筆標記培養(yǎng)皿中菌落時，應(yīng)標記在皿底上 解析：A項錯，高壓滅菌加熱結(jié)束后，讓其自然冷卻后再慢慢打開排氣閥以排除余氣，然后才能開蓋取物；B項錯，倒平板時左手拿培養(yǎng)皿，右手拿錐形瓶，左手將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，倒入培養(yǎng)基后立即蓋上培養(yǎng)皿皿蓋；C項錯，灼燒接種環(huán)之后，要待其冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種；D項對，皿底的

8、標記不會因為蓋子混淆而混淆。 答案：D 3．[2012·全國卷，5]下列關(guān)于細菌的敘述，正確的是(　　) A．不同種類細菌的生長均需要相同碳源 B．常用液體培養(yǎng)基分離獲得細菌單菌落 C．細菌大量培養(yǎng)過程中，芽孢形成于細菌生長的調(diào)整期 D．培養(yǎng)基中含有高濃度NaCl有利于金黃色葡萄球菌的篩選 解析：本題考查微生物的營養(yǎng)、生長、篩選等相關(guān)知識。金黃色葡萄球菌能在含有高濃度NaCl的培養(yǎng)基中正常生長、繁殖，其他微生物則不能，故可用含高濃度NaCl的選擇培養(yǎng)基來篩選金黃色葡萄球菌，選項D正確；自養(yǎng)型細菌(如硝化細菌)可直接利用空氣中的CO2作碳源，異養(yǎng)型細菌(如大腸桿菌)只能利用培養(yǎng)基中

9、現(xiàn)成的有機碳源(如葡萄糖)，選項A錯誤；常利用固體培養(yǎng)基分離獲得細菌單菌落，選項B錯誤；細菌的生長曲線包括調(diào)整期、對數(shù)期、穩(wěn)定期、衰亡期四個階段，芽孢形成于細菌生長的穩(wěn)定期，選項C錯誤。 答案：D [題后拓展] 1．培養(yǎng)基的配制原則 (1)目的要明確：配制時應(yīng)根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的等確定配制的培養(yǎng)基種類。 (2)營養(yǎng)要協(xié)調(diào)：注意各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例。 (3)pH 要適宜：細菌為6.5～7.5，放線菌為7.5～8.5，真菌為5.0～6.0，培養(yǎng)不同微生物所需pH 不同。 2．培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成 (1)各種培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽。 (2)不

10、同培養(yǎng)基還要滿足不同微生物對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。 3．微生物和動植物營養(yǎng)要素的比較 　微生物實驗室培養(yǎng)的拓展應(yīng)用 4．[2018·全國卷Ⅱ，37]在生產(chǎn)、生活和科研實踐中，經(jīng)常通過消毒和滅菌來避免雜菌的污染。 回答下列問題： (1)在實驗室中，玻璃和金屬材質(zhì)的實驗器具________(填“可以”或“不可以”)放入干熱滅菌箱中進行干熱滅菌。 (2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高溫瞬時消毒法，與煮沸消毒法相比，這兩種方法的優(yōu)點是________________________。 (3)密閉空間內(nèi)的空氣可采用紫外線照射消毒，其原因是紫外線能________，在照射前，

11、適量噴灑________，可強化消毒效果。 (4)水廠供應(yīng)的自來水通常是經(jīng)過________(填“氯氣”“乙醇”或“高錳酸鉀”)消毒的。 (5)某同學(xué)在使用高壓蒸汽滅菌鍋時，若壓力達到設(shè)定要求，而鍋內(nèi)并沒有達到相應(yīng)溫度，最可能的原因是________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 解析：(1)能耐高溫的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿(吸管、培

12、養(yǎng)皿)和金屬用具等可以放入干熱滅菌箱中進行干熱滅菌。(2)煮沸消毒法即在100 ℃時煮沸5～6 min可以殺死微生物細胞和一部分芽孢；巴氏消毒法卻在70～75 ℃時煮30 min或在80 ℃時煮15 min，可以殺死微生物，并且保證營養(yǎng)物質(zhì)不被破壞。因此，與煮沸消毒法相比，牛奶消毒常采用巴氏消毒法。巴氏消毒法或高溫瞬時消毒法與煮沸消毒法相比，其優(yōu)點是達到消毒目的的同時，營養(yǎng)物質(zhì)損失較少。 (3)因紫外線能破壞DNA結(jié)構(gòu)，所以密閉空間內(nèi)的空氣可采用紫外線照射消毒。在照射前，適量噴灑消毒液，可強化消毒效果。(4)通常乙醇消毒是75%的酒精，有氣味，影響水質(zhì)，不適宜消毒自來水；高錳酸鉀本身有顏色，消

13、毒后溶液呈紫紅色，無法使用；因此水廠供應(yīng)的自來水通常是經(jīng)過氯氣消毒的。 (5)采用高壓蒸汽滅菌時，鍋內(nèi)的水加熱煮沸，將其中原有的冷空氣徹底排除后才能將鍋密閉。如果未將鍋內(nèi)冷空氣排盡，則會出現(xiàn)壓力達到設(shè)定要求，而鍋內(nèi)并沒有達到相應(yīng)溫度的現(xiàn)象。 答案：(1)可以 (2)在達到消毒目的的同時，營養(yǎng)物質(zhì)損失較少 (3)破壞DNA結(jié)構(gòu)　消毒液 (4)氯氣 (5)未將鍋內(nèi)冷空氣排盡 5．[2018·全國卷Ⅲ，37]回答下列與酵母菌有關(guān)的問題： (1)分離培養(yǎng)酵母菌通常使用________________(填“牛肉膏蛋白胨”“MS”或“麥芽汁瓊脂”)培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基應(yīng)采用_________

14、_滅菌法滅菌。若將酵母菌劃線接種在平板上，培養(yǎng)一段時間后會觀察到菌落，菌落的含義是________________。 (2)酵母菌液體培養(yǎng)時，若通入氧氣，可促進________________(填“菌體快速增殖”、“乙醇產(chǎn)生”或“乳酸產(chǎn)生”)；若進行厭氧培養(yǎng)，可促進______________(填“菌體快速增殖”、“乙醇產(chǎn)生”或“乳酸產(chǎn)生”)。 (3)制作面包時，為使面包松軟通常要在面粉中添加一定量的酵母菌，酵母菌引起面包松軟的原因是____________________。 解析：(1)麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基的碳氮比較高，而且含糖量高，更適合酵母菌；該培養(yǎng)基應(yīng)采用高壓蒸汽滅菌法滅菌；若將酵母

15、菌劃線接種在平板上，培養(yǎng)一段時間后可觀察到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體，這就是菌落。(2)酵母菌液體培養(yǎng)時，若通入氧氣，進行有氧呼吸可促進菌體快速增殖；若進行無氧培養(yǎng)，進行無氧呼吸，產(chǎn)生乙醇和CO2。(3)制作面包時，在面粉中添加一定量的酵母菌，因為酵母菌可以分解面粉中的葡萄糖產(chǎn)生二氧化碳，所以面包松軟多孔。 答案：(1)麥芽汁瓊脂　高壓蒸汽　由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體 (2)菌體快速增殖　乙醇產(chǎn)生 (3)酵母菌分解葡萄糖會產(chǎn)生CO2，CO2使面包松軟 6．[2013·全國卷Ⅱ，39]臨床使用抗生素前，有時需要做細菌耐藥實驗。實驗時，首先要從病人身上獲取少量樣

16、本，然后按照一定的實驗步驟操作，以確定某致病菌對不同抗生素的敏感性。 回答下列問題： (1)為了從樣本中獲取致病菌單菌落，可用__________法或__________法將樣本接種于固體培養(yǎng)基表面，經(jīng)過選擇培養(yǎng)、鑒別等步驟獲得。 (2)取該單菌落適當稀釋，用__________法接種于固體培養(yǎng)基表面，在37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，使其均勻生長，布滿平板。 (3)為了檢測該致病菌對于抗生素的敏感性，將分別含有A、B、C、D四種抗生素的濾紙片均勻置于該平板上的不同位置，培養(yǎng)一段時間后，含A的濾紙片周圍出現(xiàn)透明圈，說明該致病菌對抗生素A__________；含B的濾紙片周圍沒有出現(xiàn)透明圈

17、，說明該致病菌對抗生素B________；含C的濾紙片周圍的透明圈比含A的小，說明__________________________________；含D的濾紙片周圍的透明圈也比含A的小，且透明圈中出現(xiàn)了一個菌落，在排除雜菌污染的情況下，此菌落很可能是抗生素D的__________。 (4)根據(jù)上述實驗結(jié)果，為達到抗菌目的，最好應(yīng)選用抗生素__________。 解析：微生物純化的方法主要為平板劃線法和稀釋涂布平板法。根據(jù)微生物的特點對其進行一系列濃度梯度稀釋，然后用涂布法接種于固體培養(yǎng)基表面，最后置于在適宜條件下培養(yǎng)；抗生素是由真菌產(chǎn)生的，可以抑制生長、繁殖或殺死細菌等致病菌的一類物質(zhì)

18、，含A的濾紙片周圍出現(xiàn)透明圈，說明有抗生素A的地方該致病菌受到抑制；B的周圍沒有透明圈，說明致病菌對抗生素B不敏感，C的透明圈要比A的透明圈小，說明該致病菌對C的敏感性比對A的弱；D出現(xiàn)了透明圈，說明該致病菌對D敏感，但是在透明圈上出現(xiàn)一個菌落，又排除雜菌污染，判斷此菌落的微生物對抗生素D產(chǎn)生了耐藥性。根據(jù)以上分析，為達到抗菌的目的，最好選擇抗生素A。 答案：(1)平板劃線　稀釋涂布(平板) (2)稀釋涂布平板 (3)敏感　不敏感　該致病菌對C的敏感性比對A的弱　耐藥菌 (4)A 師說拓展 1.消毒與滅菌比較 條件 結(jié)果 常用方法 應(yīng)用范圍 消毒 較為溫和的物理

19、或化學(xué)方法 僅殺死物體表面或內(nèi)部的部分對人體有害的微生物 煮沸消毒法 日常用品 巴氏消毒法 不耐高溫的液體 化學(xué)藥劑消毒法 用酒精擦拭雙手，用氯氣消毒水源 滅菌 強烈的理化因素 殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子 灼燒滅 菌法 接種工具 干熱滅 菌法 玻璃器皿、 金屬工具 高壓蒸汽滅菌法 培養(yǎng)基及容器 2.純化微生物的接種方法比較 比較項目 平板劃線法 稀釋涂布平板法 關(guān)鍵操作 接種環(huán)在固體平板培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線 ①一系列的梯度稀釋； ②涂布平板法操作 注意事項 每次劃線前后均需灼燒接種環(huán) 稀釋度要足夠高，為確保實驗成功

20、可以增加稀釋度 菌體獲取 在具有顯著的菌落特征的菌落中挑取菌體 從適宜稀釋度的平板上的菌落中挑取菌體 優(yōu)點 可以根據(jù)菌落的特點獲得某種微生物的單細胞菌落 既可以獲得單細胞菌落，又能對微生物計數(shù) 缺點 不能對微生物計數(shù) 操作復(fù)雜，需要涂布多個平板 7.[2011·全國卷]有些細菌可分解原油，從而消除由原油泄漏造成的土壤污染，某同學(xué)欲從受原油污染的土壤中篩選出能高效降解原油的菌株?；卮饐栴}： (1)在篩選過程中，應(yīng)將土壤樣品稀釋液接種于以______為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，從功能上講，該培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基。 (2)純化菌種時，為了得到單菌落，常采用的接種

21、方法有兩種，即______________和______________。 (3)為了篩選出高效菌株，可比較單菌落周圍分解圈的大小，分解圈大說明該菌株的降解能力________。 (4)通常情況下，在微生物培養(yǎng)過程中，實驗室常用的滅菌方法有灼燒滅菌、________和________。無菌技術(shù)要求實驗操作應(yīng)在酒精燈________附近進行，以避免周圍環(huán)境中微生物的污染。 解析：(1)該同學(xué)篩選能降解原油的菌株，可以將樣品稀釋液置于以原油為唯一碳源的固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，該培養(yǎng)基在功能上屬于選擇培養(yǎng)基。(2)菌株的接種方法，常用的有兩種：平板劃線法和稀釋涂布平板法。(3)菌株分解周圍的營養(yǎng)物質(zhì)

22、，出現(xiàn)分解圈，分解圈大說明該菌株的降解能力強。(4)實驗室常用的滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌；微生物的培養(yǎng)要求嚴格的無菌技術(shù)，操作時在酒精燈火焰附近進行，以避免周圍其他細菌的污染。 答案：(1)原油　選擇 (2)平板劃線法　稀釋涂布平板法 (3)強 (4)干熱滅菌　高壓蒸汽滅菌　火焰 模擬題組——預(yù)趨勢 　培養(yǎng)基及其制備方法分析 1．[經(jīng)典模擬]下表為某培養(yǎng)基的配方，下列敘述正確的是(　　) 成分 蛋白胨 葡萄糖 K2HPO4 伊紅 美藍 蒸餾水 含量 10 g 10 g 2 g 0.4 g 0.065 g 1 000 mL A.從物理

23、性質(zhì)看該培養(yǎng)基屬于液體培養(yǎng)基，從用途看該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基 B．該培養(yǎng)基中屬于碳源的物質(zhì)主要是葡萄糖，屬于氮源的物質(zhì)是蛋白胨 C．該培養(yǎng)基缺少提供生長因子的物質(zhì) D．該培養(yǎng)基調(diào)節(jié)合適的pH后就可以接種使用 解析：分析表中成分可知，該培養(yǎng)基中沒有凝固劑，為液體培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分齊全，但存在伊紅、美藍等鑒別物質(zhì)，屬于鑒別培養(yǎng)基，A項錯誤；該培養(yǎng)基中的蛋白胨既是唯一的氮源，也是碳源，而葡萄糖是絕大多數(shù)生物最常利用的碳源，B項正確；該培養(yǎng)基中存在的無機鹽和蛋白胨中的某些物質(zhì)可以看作是生長因子，C項錯誤；培養(yǎng)基調(diào)節(jié)完pH還要進行滅菌等操作后，才能使用，D項錯誤。 答案：B 2．高溫

24、淀粉酶在大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)中有很大的實用性。研究者從熱泉中篩選出了能高效生產(chǎn)高溫淀粉酶的嗜熱菌，其篩選過程如下圖所示： (1)Ⅰ號培養(yǎng)基從物理狀態(tài)來看，屬于固體培養(yǎng)基，配制時要加入__________作為凝固劑，從用途來看屬于選擇培養(yǎng)基，應(yīng)以__________作為唯一碳源。 (2)配制固體培養(yǎng)基的基本步驟是(　　) A．計算、稱量、倒平板、溶化、滅菌 B．計算、稱量、溶化、倒平板、滅菌 C．計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板 D．計算、稱量、滅菌、溶化、倒平板 (3)溶化時，燒杯中加入瓊脂后要不停地__________，防止瓊脂糊底引起燒杯破裂。對培養(yǎng)基滅菌的方法一般為______

25、______________。 (4)①過程是__________，②過程所使用的接種方法是____________________法。 (5)部分嗜熱菌在Ⅰ號培養(yǎng)基上生長時可釋放__________分解培養(yǎng)基中的淀粉，在菌落周圍形成透明圈，挑選相應(yīng)的菌落，接種到Ⅱ號培養(yǎng)基進一步分離純化后，再對菌種進行____________培養(yǎng)。 解析：固體培養(yǎng)基通常加入瓊脂作為凝固劑。本實驗的目的是獲得產(chǎn)生高溫淀粉酶的嗜熱菌，故其選擇培養(yǎng)基中應(yīng)以淀粉作為唯一碳源。配制固體培養(yǎng)基的基本步驟是計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。配制培養(yǎng)基時加熱溶化時，要注意加入瓊脂后要不斷攪拌，防止瓊脂糊底和溢出。對培養(yǎng)基

26、的滅菌一般采用高壓蒸汽滅菌。仔細觀察題圖可知，過程①是菌液稀釋，過程②是采用涂布法接種的。能產(chǎn)生淀粉酶的部分細菌能分解利用淀粉，其菌落周圍會出現(xiàn)透明圈，取這樣的菌落再分離純化可獲得相應(yīng)菌種，以后可以擴大培養(yǎng)用于生產(chǎn)。 答案：(1)瓊脂　淀粉 (2)C (3)攪拌　高壓蒸汽滅菌 (4)稀釋　涂布 (5)淀粉酶　擴大 　無菌技術(shù)的操作 3．[經(jīng)典模擬]微生物培養(yǎng)過程中，要十分重視無菌操作?，F(xiàn)代生物學(xué)實驗中的許多方面也要進行無菌操作，防止雜菌污染。請分析下列操作中錯誤的是(　　) ①煮沸消毒可以殺死微生物的營養(yǎng)細胞和部分芽孢 ②接種操作要在酒精燈火焰附近進行?、蹮o菌繁殖脫毒苗時，植

27、物的外植體要進行消毒　④家庭制作葡萄酒時要將容器和葡萄進行滅菌?、菖囵B(yǎng)基要進行高壓蒸汽滅菌 ⑥加入培養(yǎng)基中的指示劑和染料不需要滅菌 A．①③　　　　　　　　B．②④ C．③⑤ D．④⑥ 解析：無菌操作包括消毒和滅菌。需進行消毒處理的有植物的外植體及操作人員的雙手等，需進行滅菌的有器皿、培養(yǎng)基、添加劑(指示劑或染色劑)等。煮沸可以殺死微生物的營養(yǎng)細胞和一部分芽孢，屬于消毒；為防止空氣中雜菌污染，接種時要在酒精燈火焰附近進行；家庭制作葡萄酒時所利用的微生物是葡萄表面的酵母菌，故不能滅菌；培養(yǎng)基常進行高壓蒸汽滅菌。故④⑥操作錯誤。 答案：D 　大腸桿菌的純化方法及過程分析 4．[20

28、19·甘肅蘭州一中高三試題]平板冷卻凝固后要將平板倒置，其目的是(　　) A．利于大腸桿菌的生長 B．防止空氣進入 C．利于培養(yǎng)基的冷卻 D．防止皿蓋冷卻水滴入培養(yǎng)基造成污染 解析：平板冷卻凝固后將平板倒置是為了防止皿蓋冷卻后水滴入培養(yǎng)基后造成污染，D正確；不是因為利于大腸桿菌的生長，A錯誤；空氣仍然可以進入到平板中，B錯誤；倒置對于培養(yǎng)基冷卻沒有太大影響，C錯誤。 答案：D 　微生物的分離、計數(shù)與篩選(國考5年6考) (全國卷：2018全國卷Ⅰ；2017全國卷Ⅰ；2016全國卷Ⅰ；2015全國卷Ⅰ；2014全國卷Ⅰ、Ⅱ； 地方卷：2017江蘇卷；2016四川卷；2015四川

29、卷；2014四川卷) 【師說考問】 考問1　土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù) (1)實驗原理 ①分解尿素的原理 土壤中細菌之所以能分解尿素，是由于它們體內(nèi)能合成脲酶，這種物質(zhì)在把尿素分解成無機物的過程中起到催化作用。 ②篩選菌株的原理 微生物的選擇培養(yǎng)：在選擇培養(yǎng)基的配方中，把尿素作為培養(yǎng)基中的唯一氮源，原則上只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長。 (2)統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法 ①顯微鏡直接計數(shù)法 a．原理：利用特定細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物數(shù)量。 b．方法：用血球計數(shù)板計數(shù)。 c．缺點：不能區(qū)分死菌與活菌。 ②間接計數(shù)法(活菌計數(shù)法)

30、 a．原理：當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。 b．操作： (ⅰ)設(shè)置重復(fù)組，增強實驗的說服力與準確性。 (ⅱ)為了保證結(jié)果準確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)。 c．計算公式：每克樣品中的菌株數(shù)＝(C÷V)×M，其中C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數(shù)。 (3)實驗流程 土壤取樣→樣品的稀釋→微生物的培養(yǎng)與觀察→細菌的計數(shù)。 [注意事項] (1)在同一稀釋度下，至少對3個平板進行重復(fù)計數(shù)，然后求出平

31、均值，并根據(jù)平板所對應(yīng)的稀釋度計算出樣品中細菌的數(shù)目，如果某個平板的菌落數(shù)與其他組差別甚遠，說明該平板操作過程中出現(xiàn)失誤，應(yīng)舍棄。 (2)統(tǒng)計的菌落往往比活菌的實際數(shù)目低。這是因為當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。因此，統(tǒng)計結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是用活菌數(shù)來表示。 考問2　分解纖維素的微生物的分離 (1)實驗原理 ①纖維素酶 纖維素酶是一種復(fù)合酶，它包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酸，具有催化分解纖維素的作用，其作用過程如下： 纖維素纖維二糖葡萄糖 ②篩選原理 a．培養(yǎng)基：以纖維素為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基。 b．方法：剛果紅染色法。 →紅色復(fù)合物紅色消失，出現(xiàn)

32、透明圈即可根據(jù)是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。 (2)篩選流程 土壤取樣→選擇培養(yǎng)→梯度稀釋→將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上→挑選產(chǎn)生透明圈的菌落。 ①土壤取樣：選擇富含纖維素的環(huán)境。 ②將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上。 a．制備鑒別培養(yǎng)基：主要碳源是CMC－Na。 b．剛果紅染色法。 (ⅰ)先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進行顏色反應(yīng)； (ⅱ)倒平板時加入剛果紅。 ③進一步鑒定 a．為確定得到的菌是否是纖維素分解菌，還需進行發(fā)酵纖維素酶的實驗。 b．測定方法一般是對纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖進行定量測定。 (3)分離纖維素分解菌的幾個關(guān)鍵步驟

33、 ①分離纖維素分解菌的實驗中先用選擇培養(yǎng)基，再用鑒別培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基，以纖維素作為碳源和能源的微生物可以正常生長，而其他絕大多數(shù)微生物不能正常生長；利用液體培養(yǎng)基能使營養(yǎng)成分充分消耗，以增加纖維素分解菌的濃度。 ②鑒別培養(yǎng)基含瓊脂，為固體培養(yǎng)基，因為要在培養(yǎng)基上形成我們?nèi)庋劭梢姷木?，剛果紅染色法應(yīng)用的就是此培養(yǎng)基。 考問3　選擇培養(yǎng)基應(yīng)用實例 (1)選擇培養(yǎng)基是在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物的生長，促進所需要的微生物的生長。目的是培養(yǎng)、分離出特定微生物。 (2)選擇培養(yǎng)基應(yīng)用實例 ①培養(yǎng)基中加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌。 ②培養(yǎng)基中加入高濃度

34、的食鹽可得到金黃色葡萄球菌。 ③培養(yǎng)基中缺乏氮源時，可以分離固氮微生物，因為非固氮微生物不能在此培養(yǎng)基上生存。 ④當培養(yǎng)基的某種營養(yǎng)成分為特定化學(xué)成分時，也具有分離效果。如石油是唯一碳源時，可以抑制不能利用石油的微生物的生長，使能夠利用石油的微生物生存，達到分離能消除石油污染的微生物的目的。 ⑤改變微生物的培養(yǎng)條件，也可以達到分離微生物的目的，如將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)只能得到耐高溫的微生物。 【題組跟進】 高考題組——研考向 　微生物分離與計數(shù)的考查 1．[2018·全國卷Ⅰ，37]將馬鈴薯去皮切塊，加水煮沸一定時間，過濾得到馬鈴薯浸出液。在馬鈴薯浸出液中加入一定量蔗糖和瓊脂

35、，用水定容后滅菌，得到M培養(yǎng)基。 回答下列問題： (1)M培養(yǎng)基若用于真菌的篩選，則培養(yǎng)基中應(yīng)加入鏈霉素以抑制________的生長，加入了鏈霉素的培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基。 (2)M培養(yǎng)基中的馬鈴薯浸出液為微生物生長提供了多種營養(yǎng)物質(zhì)，營養(yǎng)物質(zhì)類型除氮源外還有________(答出兩點即可)。氮源進入細胞后，可參與合成的生物大分子有________(答出兩點即可)。 (3)若在M培養(yǎng)基中用淀粉取代蔗糖，接種土壤濾液并培養(yǎng)，平板上長出菌落后可通過加入顯色劑篩選出能產(chǎn)淀粉酶的微生物。加入的顯色劑是________，該方法能篩選出產(chǎn)淀粉酶微生物的原理是_______________

36、_________________________________________________________。 (4)甲、乙兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測定某一土壤樣品中微生物的數(shù)量，在同一稀釋倍數(shù)下得到以下結(jié)果： 甲同學(xué)涂布了3個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是110、140和149，取平均值133；乙同學(xué)涂布了3個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是27、169和176，取平均值124。有人認為這兩位同學(xué)的結(jié)果中，乙同學(xué)的結(jié)果可信度低，其原因是__________________________。 解析：(1)M培養(yǎng)基若用于真菌的篩選，說明M培養(yǎng)基能滿足真菌的生長，而能抑制其它微生物的生長，鏈霉素是一

37、種抗生素，可以抑制細菌的生長。加入了鏈毒素的培養(yǎng)基能篩選出真菌，該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。(2)微生物生長需要多種營養(yǎng)物質(zhì)，除氮源外，還需要碳源、無機鹽、水以及特殊營養(yǎng)物質(zhì)等。氮元素是蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子的組成元素，因此氮源進入細胞后，可參與合成的生物大分子有蛋白質(zhì)和核酸。 (3)淀粉遇碘液會變成藍色，篩選產(chǎn)淀粉酶的微生物，依據(jù)淀粉遇碘液顯藍色，產(chǎn)淀粉酶的菌落周圍淀粉被水解，形成透明圈，再根據(jù)透明圈，來篩選產(chǎn)淀粉酶的微生物。(4)乙同學(xué)結(jié)果不合理，因為1個平板的計數(shù)結(jié)果與另2個相差懸殊，結(jié)果的重復(fù)性差，不能簡單的用其平均數(shù)作為最終結(jié)果。 答案：(1)細菌　選擇 (2)碳源、無機鹽　蛋白質(zhì)

38、、核酸 (3)碘液　淀粉遇碘液顯藍色，產(chǎn)淀粉酶的菌落周圍淀粉被水解，形成透明圈 (4)乙同學(xué)的結(jié)果中，1個平板的計數(shù)結(jié)果與另2個相差懸殊，結(jié)果的重復(fù)性差 2．[2017·全國卷Ⅰ，37]某些土壤細菌可將尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用?；卮鹣铝袉栴}： (1)有些細菌能分解尿素，有些細菌則不能，原因是前者能產(chǎn)生____________。能分解尿素的細菌不能以尿素的分解產(chǎn)物CO2作為碳源，原因是________________________，但可用葡萄糖作為碳源，進入細菌體內(nèi)的葡萄糖的主要作用是________________________(答出兩點即可)。 (2)為了篩選

39、可分解尿素的細菌，在配制培養(yǎng)基時，應(yīng)選擇________________(填“尿素”“NH4NO3”或“尿素＋NH4NO3”)作為氮源，不選擇其他兩組的原因是________________________。 (3)用來篩選分解尿素細菌的培養(yǎng)基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有________________________(答出兩點即可)。 解析：(1)細菌分解尿素是由于細菌體內(nèi)能合成脲酶的結(jié)果，尿素是有機物，分解尿素的細菌是分解者，而不是生產(chǎn)者，只有生產(chǎn)者才能利用CO2作為碳源合成有機物。葡萄糖通常既作為碳源，也可作為能源。(2)篩選分解尿素的細菌，通常只能用尿素作為唯一氮源，

40、而“NH4NO3”或“尿素＋NH4NO3”均含有無機氮源。(3)KH2PO4和Na2HPO4為微生物提供P元素和無機鹽離子如鉀離子和鈉離子，還可作為緩沖劑保持細胞生長過程中pH穩(wěn)定。 答案：(1)脲酶　分解尿素的細菌是異養(yǎng)型生物，不能利用CO2來合成有機物　為細胞生物生命活動提供能量，為其他有機物的合成提供原料 (2)尿素　其他兩組都含有NH4NO3，能分解尿素的細菌和不能分解尿素的細菌都能利用NH4NO3，不能起到篩選作用 (3)為細菌生長提供無機營養(yǎng)；作為緩沖劑保持細胞生長過程中pH穩(wěn)定 3．[2016·全國卷Ⅰ，39]空氣中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小組欲

41、用平板收集教室空氣中的微生物，以了解教室內(nèi)不同高度空氣中微生物的分布情況。實驗步驟如下： ①配制培養(yǎng)基(成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O)； ②制作無菌平板； ③設(shè)置空白對照組和若干實驗組，進行相關(guān)操作； ④將各組平板置于37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)一段時間，統(tǒng)計各組平板上菌落的平均數(shù)。 回答下列問題： (1)該培養(yǎng)基中微生物所需的氮來源于__________。若要完成步驟②，該培養(yǎng)基中的成分X通常是__________。 (2)步驟③中，實驗組的操作是__________________________________________________。 (3)若在某次調(diào)查中

42、，某一實驗組平板上菌落平均數(shù)為36個/平板，而空白對照組的一個平板上出現(xiàn)了6個菌落，這種結(jié)果說明在此次調(diào)查中出現(xiàn)了__________現(xiàn)象。若將30(即36－6)個/平板作為本組菌落數(shù)的平均值，該做法__________(填“正確”或“不正確”)。 解析：(1)牛肉膏和蛋白胨都含有蛋白質(zhì)的水解產(chǎn)物，都可以作為氮源；平板為固體培養(yǎng)基，故需要加入凝固劑瓊脂。(2)實驗探究的是教室內(nèi)“不同高度空氣”中微生物的分布，其中自變量為不同高度，故需在不同高度下開蓋放置平板。同時，為了保證單一變量，需要保證開蓋放置時間一致。為了保證實驗可靠性，需要設(shè)置多個平行組。(3)在完全正確的操作情況下，空白對照組中不

43、應(yīng)出現(xiàn)菌落。若出現(xiàn)菌落，表明操作過程中存在雜菌污染，屬于實驗失誤，所有實驗數(shù)據(jù)均不應(yīng)采用。 答案：(1)牛肉膏、蛋白胨　瓊脂 (2)將各實驗組平板分別放置在教室不同高度的位置上，開蓋暴露一段時間 (3)污染　不正確 [題后歸納] 稀釋涂布平板法計數(shù)微生物的注意問題 用稀釋涂布平板法計數(shù)微生物時，要求選擇菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)。解題時易出現(xiàn)以下誤解： (1)只得到1個菌落數(shù)在30～300的平板是錯誤的。錯誤的原因是不符合實驗的重復(fù)原則，易受到偶發(fā)因素的影響。 (2)得到3個或3個以上菌落數(shù)在30～300的平板，也不一定正確，這可能有兩種情況： ①不同平板間差異較大，

44、如得到3個平板，菌落數(shù)分別為230、34、240，雖然菌落數(shù)均在“30～300”之間，這也是不正確的，因為“34”與“230”“240”差異太大，應(yīng)重新實驗找出原因。 ②不同平板之間差異不大，是符合要求的，用其平均值作為估算的最終結(jié)果。 可見，并不是只要得到3個“菌落數(shù)在30～300的平板”即可，而應(yīng)該是涂布的同一稀釋度的平板均符合“菌落數(shù)在30～300的平板”且無較大差異，說明實驗操作合格，才能按照公式進行計算。 4．[2015·全國卷Ⅰ，39]已知微生物A可以產(chǎn)生油脂，微生物B可以產(chǎn)生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生產(chǎn)?；卮鹩嘘P(guān)問題： (1)顯微觀察時，微生物A菌體中的油脂通

45、?？捎胈_________染色。微生物A產(chǎn)生的油脂不易揮發(fā)，可選用__________(填“萃取法”或“水蒸氣蒸餾法”)從菌體中提取。 (2)為了從自然界中獲得能產(chǎn)生脂肪酶的微生物B的單菌落，可從含有油料作物種子腐爛物的土壤中取樣，并應(yīng)選用以__________為碳源的固體培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。 (3)若要測定培養(yǎng)液中微生物B的菌體數(shù)，可在顯微鏡下用________________直接計數(shù)；若要測定其活菌數(shù)量，可選用________________法進行計數(shù)。 (4)為了確定微生物B產(chǎn)生的脂肪酶的最適溫度，某同學(xué)測得相同時間內(nèi)，在35 ℃、40 ℃、45 ℃溫度下降解10 g油脂所需酶量依次為

46、4 mg、1 mg、6 mg，則上述三個溫度中，__________℃條件下該酶活力最小。為了進一步確定該酶的最適溫度，應(yīng)圍繞__________℃設(shè)計后續(xù)實驗。 解析：(1)生物組織中的油脂能被蘇丹Ⅲ(或蘇丹Ⅳ)染成橘黃色(或紅色)。(2)為了篩選出能產(chǎn)生脂肪酶的微生物B的單菌落，我們應(yīng)選用只能讓該菌落生長的選擇性培養(yǎng)基，因此培養(yǎng)基中只能選用油脂作為唯一碳源的固體培養(yǎng)基。(3)血細胞計數(shù)板可用于直接計數(shù)培養(yǎng)液中的菌體數(shù)，但是不分死活，因此要計數(shù)活菌數(shù)量要通過稀釋涂布平板法來計數(shù)。(4)溫度影響酶的活性，在三個溫度中，45 ℃需酶量最高，說明酶活性最低；在三個溫度實驗中40 ℃所需酶量最少，

47、低于35 ℃和45 ℃所用酶量，說明酶的最適溫度介于35 ℃和45 ℃之間，因此應(yīng)圍繞40 ℃設(shè)計不同溫度梯度，進行后續(xù)實驗。 答案：(1)蘇丹Ⅲ(或蘇丹Ⅳ)　萃取法 (2)油脂 (3)血細胞計數(shù)板　稀釋涂布平板 (4)45　40 5．[2014·全國卷Ⅱ，39]為了調(diào)查某河流的水質(zhì)狀況，某研究小組測定了該河流水樣中的細菌含量，并進行了細菌分離等工作?；卮鹣铝袉栴}： (1)該小組采用稀釋涂布平板法檢測水樣中細菌含量。在涂布接種前，隨機取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時間，這樣做的目的是____________________；然后，將1 mL水樣稀釋100倍，在3個平板上用涂布

48、法分別接入0.1 mL稀釋液；經(jīng)適當培養(yǎng)后，3個平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為____________________。 (2)該小組采用平板劃線法分離水樣中的細菌，操作時，接種環(huán)通過__________滅菌。在第二次及以后的劃線時，總是從上一次劃線的末端開始劃線。這樣做的目的是________________________________________________________________________。 (3)示意圖A和B中，__________表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。 (4)該小組將得到的菌株接種到液體

49、培養(yǎng)基中并混勻，一部分進行靜置培養(yǎng)，另一部分進行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：振蕩培養(yǎng)的細菌比靜置培養(yǎng)的細菌生長速度快。分析其原因是：振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中__________的含量，同時可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高__________的利用率。 解析：本題通過微生物培養(yǎng)考查滅菌的方法、微生物數(shù)量計算和培養(yǎng)條件。 (1)為了確定培養(yǎng)基的滅菌是否合格，通過隨機取若干滅菌后的空白平板培養(yǎng)一段時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落生長，用來進行對照。三個培養(yǎng)基上平均菌落數(shù)為38，所以每升水樣中活菌數(shù)為38×10×100×1000＝3.8×107。(2)接種環(huán)用灼燒法進行滅菌。在第二次及以后劃線時，總是從上一次的末

50、端開始劃線，這樣做的目的是：隨著劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌體的數(shù)目逐漸減少，以便得到單個菌落。(3)A表示平板劃線法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果，B表示稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。(4)振蕩培養(yǎng)可以增加液體培養(yǎng)基中的氧氣含量，促進好氧型微生物的生長；同時還能使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高營養(yǎng)物質(zhì)的利用率。 答案：(1)檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格　3.8×107 (2)灼燒　將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個菌落 (3)B (4)溶解氧　營養(yǎng)物質(zhì) 　菌種篩選的拓展應(yīng)用 6．[2014·全國卷Ⅰ]植物秸稈中的纖維素可被某些微生物分解?；卮鹣铝袉栴}： (1)分解秸稈中纖維素的微生物能分

51、泌纖維素酶，該酶是由3種組分組成的復(fù)合酶，其中的葡萄糖苷酶可將________分解成________。 (2)在含纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅(CR)時，CR可與纖維素形成________色復(fù)合物。用含有CR的該種培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時，培養(yǎng)基上會出現(xiàn)以該菌的菌落為中心的________。 (3)為從富含纖維素的土壤中分離獲得纖維素分解菌的單菌落，某同學(xué)設(shè)計了甲、乙兩種培養(yǎng)基(成分見下表)： 酵母膏 無機鹽 淀粉 纖維素粉 瓊脂 CR溶液 水 培養(yǎng) 基甲 ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ 培養(yǎng) 基乙 ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋ 注：“＋”表

52、示有，“－”表示無。 　據(jù)表判斷，培養(yǎng)基甲________(填“能”或“不能”)用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是__________________________；培養(yǎng)基乙________(填“能”或“不能”)用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是________________________________。 解析：(1)纖維素是一種由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物，是含量最豐富的多糖類物質(zhì)。纖維素能被土壤中某些微生物分解利用，如下圖： (2)剛果紅與纖維素形成紅色復(fù)合物，當纖維素被纖維素酶分解后，紅色復(fù)合物無法形成，出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，我們可以通過是否產(chǎn)生透明圈

53、來篩選纖維素分解菌。(3)分離和鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，且需以纖維素為唯一碳源。 答案：(1)纖維二糖　葡萄糖 (2)紅　透明圈 (3)不能　液體培養(yǎng)基不能用于分離單菌落　不能　培養(yǎng)基中沒有纖維素 師說拓展 1.篩選微生物的兩個實例比較 比較 項目 土壤中分解尿素的細菌的分離 分解纖維素的微生物的分離 方法 利用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基進行選擇培養(yǎng) 利用富含纖維素的選擇培養(yǎng)基進行選擇培養(yǎng) 原理 只有分解尿素的細菌能夠合成脲酶，才能在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上生長 因為培養(yǎng)基中含有豐富的纖維素，因此能夠分解纖維素的微生物具有更多的生存機會而大量

54、繁殖 鑒別 在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，指示劑變紅說明菌落中的菌體為分解尿素的細菌 剛果紅染色法，周圍出現(xiàn)透明圈的菌落為分解纖維素的微生物的菌落 2.選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)基的比較 種類 制備方法 原理 用途 舉例 選擇培養(yǎng)基 培養(yǎng)基中加入某些化學(xué)物質(zhì) 依據(jù)某些微生物對某些物質(zhì)或環(huán)境條件的嗜好、抗性而設(shè)計 從眾多微生物中分離所需的微生物 加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌 鑒別培養(yǎng)基 培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品 依據(jù)微生物產(chǎn)生的某種代謝產(chǎn)物與培養(yǎng)基中的特定試劑或化學(xué)藥品反應(yīng)，產(chǎn)生明顯的特征變化而設(shè)計 鑒別不同種類的微生物 伊紅美藍培養(yǎng)基可以鑒別大

55、腸桿菌 7.[2018·江蘇卷，31]酵母的蛋白質(zhì)含量可達自身干重的一半，可作為飼料蛋白的來源。有些酵母可以利用工業(yè)廢甲醇作為碳源進行培養(yǎng)，這樣既可減少污染又可降低生產(chǎn)成本。研究人員擬從土壤樣品中分離該類酵母，并進行大量培養(yǎng)。下圖所示為操作流程，請回答下列問題： (1)配制培養(yǎng)基時，按照培養(yǎng)基配方準確稱量各組分，將其溶解、定容后，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的______________，及時對培養(yǎng)基進行分裝，并進行______________滅菌。 (2)取步驟②中不同梯度的稀釋液加入標記好的無菌培養(yǎng)皿中，在步驟③中將溫度約________(在25 ℃、50 ℃或80 ℃中選擇)的培養(yǎng)基倒入

56、培養(yǎng)皿混勻，冷凝后倒置培養(yǎng)。 (3)挑取分離平板中長出的單菌落，按步驟④所示進行劃線。下列敘述合理的有________________________________________________________________________。 a．為保證無菌操作，接種針、接種環(huán)使用前都必須滅菌 b．劃線時應(yīng)避免劃破培養(yǎng)基表面，以免不能形成正常菌落 c．挑取菌落時，應(yīng)挑取多個菌落，分別測定酵母細胞中甲醇的含量 d．可以通過逐步提高培養(yǎng)基中甲醇的濃度，獲得甲醇高耐受株 (4)步驟⑤中，為使酵母數(shù)量迅速增加，培養(yǎng)過程中需保證充足的營養(yǎng)和________供應(yīng)。為監(jiān)測酵母的活細胞密度，

57、將發(fā)酵液稀釋1 000倍后，經(jīng)等體積臺盼藍染液染色，用25×16型血細胞計數(shù)板計數(shù)5個中格中的細胞數(shù)，理論上________色細胞的個數(shù)應(yīng)不少于________，才能達到每毫升3×109個活細胞的預(yù)期密度。 解析：(1)配制培養(yǎng)基的操作步驟為稱量→溶化→定容→調(diào)pH→培養(yǎng)基的分裝→包扎→滅菌，因此微生物的培養(yǎng)基配制好后應(yīng)該先調(diào)節(jié)pH，再分裝。常見的滅菌方法有：干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌、灼燒滅菌。培養(yǎng)基適宜用高壓蒸汽滅菌法進行滅菌。(2)在步驟③中，待培養(yǎng)基冷卻至50 ℃左右時進行倒平板。 (3)在劃線過程中，接種針、接種環(huán)使用前都必須滅菌，以防止雜菌污染，a正確；劃線時應(yīng)避免劃破培養(yǎng)基表面，否

58、則將不能形成正常菌落，b正確；該實驗的目的是獲得利用工業(yè)廢甲醇作為碳源的酵母菌，不需要測定酵母菌中的甲醇含量，c錯誤；培養(yǎng)基中的甲醇濃度越高，此種培養(yǎng)基中得以生存的酵母菌利用甲醇的能力越強，因此可以通過逐步提高培養(yǎng)基中甲醇的濃度，獲得甲醇高耐受株，d正確。(4)酵母菌通過有氧呼吸大量繁殖，因此為使酵母數(shù)量迅速增加，培養(yǎng)過程中需保證充足的營養(yǎng)和氧氣供應(yīng)；臺盼藍是大分子物質(zhì)，不能將活細胞染色，再根據(jù)25×16型的血球計數(shù)板：1毫升懸液中待測標本(菌體)總數(shù)＝80小方格內(nèi)菌體數(shù)/80×400×104×稀釋倍數(shù)。而臺盼藍與菌液等體積加入，因此要達到每毫升3×109個活細胞的預(yù)期密度，理論上無色細胞數(shù)應(yīng)

59、該不少于(3×109)÷(1 000×2×104×400÷80)＝30個。 答案：(1)pH　高壓蒸汽 (2)50 ℃ (3)a、b、d (4)氧氣　無　30 模擬題組——預(yù)趨勢 　微生物的篩選與計數(shù) 1．[2019·河北衡水中學(xué)高三調(diào)考]下列有關(guān)“土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)實驗”的敘述，正確的是(　　) A．分解尿素的細菌能產(chǎn)生脲酶，將尿素分解產(chǎn)生氮氣 B．用選擇培養(yǎng)基選擇出分解尿素的細菌，殺死其他微生物 C．統(tǒng)計尿素分解菌的數(shù)目時，以菌落數(shù)在300以上的平板進行計數(shù) D．用尿素為唯一氮源、加有酚紅指示劑的培養(yǎng)基培養(yǎng)尿素分解菌，指示劑變紅 解析：分解尿素的細菌能

60、產(chǎn)生脲酶，將尿素分解為氨和CO2，A錯誤；用含尿素的選擇培養(yǎng)基選擇出分解尿素的細菌，目的是淘汰不能分解利用尿素的其他微生物，B錯誤；統(tǒng)計尿素分解菌的數(shù)目時，以菌落數(shù)在30～300以上的平板進行計數(shù)，求其平均值，C錯誤；用尿素為唯一氮源、加有酚紅指示劑的培養(yǎng)基培養(yǎng)尿素分解菌，指示劑變紅，D正確。 答案：D 2.[2019·四川樂山四校聯(lián)考]某小組同學(xué)為了調(diào)查湖水中細菌的污染情況而進行了實驗。包括制備培養(yǎng)基、滅菌、接種及培養(yǎng)、菌落觀察與計數(shù)。下列與此試驗相關(guān)問題的敘述中，正確的是(　　) A．實驗用過的帶菌培養(yǎng)基經(jīng)過加熱后才能倒掉 B．利用平板劃線法對細菌進行分離純化并計數(shù) C．觀察細

61、菌培養(yǎng)的實驗時，最好是在另一平板上接種清水作為對照試驗 D．培養(yǎng)基中含有的蛋白胨、淀粉可分別為細菌培養(yǎng)提供氮源和碳源 解析：實驗用過的帶菌培養(yǎng)基要高壓蒸汽滅菌后才能倒掉，以免污染環(huán)境，A項錯誤；應(yīng)利用稀釋涂布平板法對細菌進行分離純化并計數(shù)，B項錯誤；要使該實驗所得結(jié)果可靠，還應(yīng)該同時在另一平板上接種無菌水作為對照進行實驗，C項錯誤；培養(yǎng)基中含有的蛋白胨、淀粉分別為細菌培養(yǎng)提供了氮源和碳源，D項正確。 答案：D 　土壤中分離尿素分解菌和纖維素分解菌 3．[2019·山東、湖北部分重點中學(xué)沖刺卷]從土壤中分離尿素分解菌和纖維素分解菌，具有下列類似的操作過程： (1)在過程④的選擇培

62、養(yǎng)基是________培養(yǎng)基，過程⑧的選擇培養(yǎng)基是________培養(yǎng)基(填“固體”或“液體”)。④的具體措施是____________________；⑧的選擇措施是________________________________________________________________________。 (2)在過程③樣品梯度稀釋后，一般只將稀釋度為104～106倍的菌液分別接種到3個平板培養(yǎng)基上。接種的常用方法為________________________________________________________________________。 (3)過程⑩采用__

63、__________________的鑒別方法較簡單。周圍出現(xiàn)透明圈但不能100%確定為纖維素分解菌的菌落，原因是：________________________________________________________________________。 解析：(1)將微生物接種在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，才能形成菌落，可見，過程④的選擇培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基。進行梯度稀釋并接種前要進行過程⑧所示的選擇培養(yǎng)，因此過程⑧的選擇培養(yǎng)基是液體培養(yǎng)基。④選擇培養(yǎng)的目的是篩選尿素分解菌，所以具體的措施是應(yīng)以尿素為唯一氮源；⑧選擇培養(yǎng)的目的是篩選纖維素分解菌，所以⑧的選擇措施是以纖維素為唯一碳源。(2)常采

64、用稀釋涂布平板(或平板劃線)法，將稀釋度為104～106倍的菌液分別接種到3個平板培養(yǎng)基上。 (3)剛果紅可與纖維素形成紅色復(fù)合物，但并不和纖維素水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生顏色反應(yīng)。當纖維素被纖維素酶水解后，剛果紅—纖維素復(fù)合物就無法形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。可見，過程⑩采用倒平板時加入剛果紅染液的鑒別方法較簡單。由于不分解纖維素(或分解剛果紅或淀粉)的微生物菌落也可能出現(xiàn)透明圈，所以周圍出現(xiàn)透明圈的菌落，不能100%確定為纖維素分解菌。 答案：(1)固體　液體　以尿素為唯一氮源　以纖維素為唯一碳源 (2)稀釋涂布平板(或平板劃線) (3)倒平板時加入剛果紅染液

65、　不分解纖維素(或分解剛果紅或淀粉)的微生物菌落也可能出現(xiàn)透明圈 課堂總結(jié)　網(wǎng)絡(luò)建構(gòu) [網(wǎng)絡(luò)建構(gòu)] [答題必備] 1．無菌操作技術(shù)包括消毒和滅菌，消毒包括煮沸消毒、巴氏消毒、化學(xué)藥劑消毒和紫外線消毒等；滅菌包括灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌。 2．培養(yǎng)基的制備包括計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板等步驟，倒置平板的目的是防止培養(yǎng)皿蓋上的水滴滴入培養(yǎng)基造成污染。 3．大腸桿菌的純化包括平板劃線法和稀釋涂布平板法。平板劃線法要求多次劃線，稀釋涂布平板法要求將菌液充分地稀釋。 4．微生物的計數(shù)要求制作多個平板，且每個平板上能長出30～300個菌落。 5．尿素分解菌和纖維素分解菌的分離都運用了選擇培養(yǎng)基，前者所用的培養(yǎng)基中尿素是唯一的氮源，后者所用的培養(yǎng)基中纖維素是唯一的碳源。 18