高中生物：第1章《微生物的利用》課件（1）（浙科版選修1）

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1、 了解有關(guān)微生物及培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識(shí)，了解有關(guān)微生物及培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識(shí)，進(jìn)行無(wú)菌技術(shù)的操作，進(jìn)行微生物的培養(yǎng)。進(jìn)行無(wú)菌技術(shù)的操作，進(jìn)行微生物的培養(yǎng)。 一、課題目標(biāo)：一、課題目標(biāo)： 掌握掌握培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基的制備、高壓蒸氣滅菌高壓蒸氣滅菌和和平平板劃線法板劃線法等基本操作技術(shù)，熟練、規(guī)范地等基本操作技術(shù)，熟練、規(guī)范地進(jìn)行無(wú)菌操作，成功地培養(yǎng)微生物。進(jìn)行無(wú)菌操作，成功地培養(yǎng)微生物。 無(wú)菌技術(shù)的操作。無(wú)菌技術(shù)的操作。二、課題重點(diǎn)和難點(diǎn)：二、課題重點(diǎn)和難點(diǎn)：三、技能目標(biāo)：三、技能目標(biāo)：微生物包括哪五類：微生物包括哪五類：真菌真菌原生動(dòng)物原生動(dòng)物特點(diǎn)：特點(diǎn)：結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單, ,形體微小形體微小. .通

2、常要用光學(xué)顯微鏡或通常要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒(méi)有細(xì)胞結(jié)構(gòu)電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒(méi)有細(xì)胞結(jié)構(gòu). .且且體內(nèi)一般不含有葉綠素體內(nèi)一般不含有葉綠素. .不能進(jìn)行光合作用不能進(jìn)行光合作用. . 原核生物界原核生物界 原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界一、基礎(chǔ)知識(shí)： (一)微生物細(xì)菌的外形與大小細(xì)菌：細(xì)菌：?jiǎn)渭?xì)胞不分枝的原核微生物單細(xì)胞不分枝的原核微生物。細(xì)菌細(xì)胞細(xì)菌細(xì)胞，通常用適當(dāng)染料，通常用適當(dāng)染料后顯微鏡觀后顯微鏡觀察察圖圖1-1 常見(jiàn)的三種細(xì)菌典型形態(tài)常見(jiàn)的三種細(xì)菌典型形態(tài)A.球菌球菌 B.桿菌桿菌 C.弧菌弧菌細(xì)菌細(xì)胞由外向里依次有、菌菌（、，。細(xì)菌的構(gòu)造

3、*細(xì)胞壁細(xì)胞壁有哪些功能？細(xì)胞壁有哪些功能？ 傷傷寒寒桿桿菌菌細(xì)細(xì)胞胞壁壁中中含含毒毒素素 有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個(gè)橢圓形的休眠有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個(gè)橢圓形的休眠體，叫做體，叫做芽孢芽孢。芽孢的壁很厚，對(duì)干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)。芽孢的壁很厚，對(duì)干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強(qiáng)的抵抗力。例如，有的細(xì)菌的芽孢，煮沸境有很強(qiáng)的抵抗力。例如，有的細(xì)菌的芽孢，煮沸3 3小時(shí)以后才小時(shí)以后才死亡。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜（如溫度、水死亡。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的時(shí)候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個(gè)細(xì)菌分適宜）的時(shí)候，芽孢又

4、可以萌發(fā)，形成一個(gè)細(xì)菌. .菌落： 單個(gè)或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，就會(huì)形成一單個(gè)或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，就會(huì)形成一個(gè)肉眼可見(jiàn)的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌個(gè)肉眼可見(jiàn)的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落落。 菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。菌落細(xì)菌的菌落特征細(xì)菌的菌落特征因種而異因種而異 細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)類型 根據(jù)細(xì)菌所利用的能源和碳源的不同，將細(xì)菌分為根據(jù)細(xì)菌所利用的能源和碳源的不同，將細(xì)菌分為兩大營(yíng)養(yǎng)類型。兩大營(yíng)養(yǎng)類型。 自養(yǎng)菌自養(yǎng)菌: :分類分類, ,舉例舉例? ? 異養(yǎng)菌異養(yǎng)菌: : 腐生菌腐生菌 寄生菌寄生菌 大部分病原菌大部分病原菌

5、光合自養(yǎng)型光合自養(yǎng)型:光合細(xì)菌光合細(xì)菌化能自養(yǎng)型化能自養(yǎng)型:硝化細(xì)菌硝化細(xì)菌,鐵細(xì)菌鐵細(xì)菌,硫細(xì)菌硫細(xì)菌1 1、結(jié)構(gòu)：、結(jié)構(gòu)：?jiǎn)渭?xì)胞原核單細(xì)胞原核分支狀的菌絲（基內(nèi)菌絲、氣生菌絲）分支狀的菌絲（基內(nèi)菌絲、氣生菌絲）鏈霉素、土霉素、四環(huán)素、鏈霉素、土霉素、四環(huán)素、氯霉素、紅霉素、慶大霉素氯霉素、紅霉素、慶大霉素 微生物中發(fā)現(xiàn)了幾千種抗生素，其中微生物中發(fā)現(xiàn)了幾千種抗生素，其中2/32/3是是由放線菌產(chǎn)生的由放線菌產(chǎn)生的 應(yīng)用應(yīng)用: :病毒的結(jié)構(gòu)病毒的結(jié)構(gòu)2、病毒的增殖：、病毒的增殖：真菌真菌一、基礎(chǔ)知識(shí)：一、基礎(chǔ)知識(shí)：（二）培養(yǎng)基（二）培養(yǎng)基 培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而成培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）

6、是由人工方法配制而成的，專供微生物生長(zhǎng)繁殖使用的混合營(yíng)養(yǎng)液。的，專供微生物生長(zhǎng)繁殖使用的混合營(yíng)養(yǎng)液。（1 1）按物理狀態(tài)分：）按物理狀態(tài)分：固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基和和液體培養(yǎng)液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基基、半固體培養(yǎng)基。其中固體培養(yǎng)基用于菌種。其中固體培養(yǎng)基用于菌種保存及分離、鑒定菌落、活菌計(jì)數(shù)等，半固體保存及分離、鑒定菌落、活菌計(jì)數(shù)等，半固體培養(yǎng)基可觀察微生物的運(yùn)動(dòng)，液體培養(yǎng)基常用培養(yǎng)基可觀察微生物的運(yùn)動(dòng)，液體培養(yǎng)基常用于發(fā)酵工業(yè)。于發(fā)酵工業(yè)。（2 2）按功能分：）按功能分：選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基和和鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基。（3 3）按成分分：）按成分分：天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基和和合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基。

7、1.1.培養(yǎng)基的類型和用途培養(yǎng)基的類型和用途選擇培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基: : 分離酵母菌、霉菌等真菌分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基: : 分離金黃色葡萄球菌分離金黃色葡萄球菌不加氮源的無(wú)氮培養(yǎng)基不加氮源的無(wú)氮培養(yǎng)基: : 分離固氮菌分離固氮菌 不加含碳有機(jī)物的無(wú)碳培養(yǎng)基不加含碳有機(jī)物的無(wú)碳培養(yǎng)基: : 分離自養(yǎng)型微生物分離自養(yǎng)型微生物 加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基: : 分離導(dǎo)入了目的基因的受體細(xì)胞分離導(dǎo)入了目的基因的受體細(xì)胞 加入氨基喋呤、次黃嘌呤和胸腺嘧啶加入氨基喋呤、次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷的核苷的培養(yǎng)基培養(yǎng)基

8、: : 分離雜交瘤細(xì)胞分離雜交瘤細(xì)胞天然培養(yǎng)基有血清、天然培養(yǎng)基有血清、血漿、和組織提取液血漿、和組織提取液（如雞胚和牛胚浸（如雞胚和牛胚浸液）。液）。優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：營(yíng)養(yǎng)成分豐富，營(yíng)養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果好培養(yǎng)效果好缺點(diǎn)：缺點(diǎn)：來(lái)源受限來(lái)源受限; ;成分成分復(fù)雜，影響對(duì)某些實(shí)復(fù)雜，影響對(duì)某些實(shí)驗(yàn)產(chǎn)物的提取和實(shí)驗(yàn)驗(yàn)產(chǎn)物的提取和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析結(jié)果的分析; ;易發(fā)生支易發(fā)生支原體污染原體污染; ; 根據(jù)細(xì)胞生存所需物質(zhì)的根據(jù)細(xì)胞生存所需物質(zhì)的種類和數(shù)量，用人工方法模種類和數(shù)量，用人工方法模擬合成的。擬合成的。 合成培養(yǎng)基主要成分是合成培養(yǎng)基主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合氨基酸、維生素、碳水化合物、無(wú)

9、機(jī)鹽和其它一些輔助物、無(wú)機(jī)鹽和其它一些輔助物質(zhì)。物質(zhì)。 優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，組分標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，組分和含量相對(duì)固定和含量相對(duì)固定; ;成本低成本低 缺點(diǎn)：缺點(diǎn)： 缺少某些成分，缺少某些成分，不能完全滿足體外細(xì)胞生長(zhǎng)不能完全滿足體外細(xì)胞生長(zhǎng)需要。需要。 合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基: :天然培養(yǎng)基：天然培養(yǎng)基：血清中含有：血清中含有：多種蛋白質(zhì)（白蛋白、球蛋白、多種蛋白質(zhì)（白蛋白、球蛋白、鐵蛋白等）鐵蛋白等）多種金屬離子；多種金屬離子； 激素；激素；促貼附物質(zhì)，如纖粘蛋白、冷析促貼附物質(zhì)，如纖粘蛋白、冷析球蛋白、膠原等。球蛋白、膠原等。各種生長(zhǎng)因子各種生長(zhǎng)因子轉(zhuǎn)移蛋白轉(zhuǎn)移蛋白不明成分不明成分 人工合成培

10、養(yǎng)基只能維持細(xì)胞生存，要想使細(xì)胞生長(zhǎng)和人工合成培養(yǎng)基只能維持細(xì)胞生存，要想使細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖，還需補(bǔ)充一定量的天然培養(yǎng)基（如血清）。繁殖，還需補(bǔ)充一定量的天然培養(yǎng)基（如血清）。液體培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基：表面生長(zhǎng)表面生長(zhǎng)均勻混濁生長(zhǎng)均勻混濁生長(zhǎng)沉淀生長(zhǎng)沉淀生長(zhǎng)固體培養(yǎng)基：菌落，菌苔固體培養(yǎng)基：菌落，菌苔半固體培養(yǎng)基：半固體培養(yǎng)基：無(wú)動(dòng)力無(wú)動(dòng)力 有動(dòng)力有動(dòng)力( (彌散彌散) )( (是否運(yùn)動(dòng)是否運(yùn)動(dòng)) ) 2.2.不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方基配方 (參考教材附錄內(nèi)容參考教材附錄內(nèi)容) 3. 3.不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水水、碳

11、源碳源、和和氮源氮源、 無(wú)機(jī)鹽無(wú)機(jī)鹽、等等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)， 另外還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)另外還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pHpH、特殊營(yíng)特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)養(yǎng)物質(zhì), ,例如例如: :生長(zhǎng)因子生長(zhǎng)因子(即細(xì)菌生長(zhǎng)必需，而即細(xì)菌生長(zhǎng)必需，而自身不能合成的化合物自身不能合成的化合物,如維生素、某些氨基如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶酸、嘌呤、嘧啶) )以及以及氧氣氧氣、二氧化碳二氧化碳、滲透滲透壓壓等的要求。等的要求。 4.4.培養(yǎng)基的用途培養(yǎng)基的用途液體培養(yǎng)基：增菌液體培養(yǎng)基：增菌固體培養(yǎng)基：純化，增菌固體培養(yǎng)基：純化，增菌半固體培養(yǎng)基：動(dòng)力檢測(cè)，保種半固體培養(yǎng)基：動(dòng)力檢測(cè)，保種1.1.無(wú)菌技術(shù)的概念無(wú)菌技術(shù)

12、的概念 無(wú)菌操作泛指無(wú)菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。所有防止雜菌污染的方法。無(wú)論是隨后將要無(wú)論是隨后將要學(xué)到的學(xué)到的倒平板倒平板、平板劃線平板劃線操作，還是操作，還是平板稀平板稀釋涂布法釋涂布法，其操作中的每一步都需要做到，其操作中的每一步都需要做到“無(wú)菌無(wú)菌”，即防止雜菌污染。只有熟練、規(guī)，即防止雜菌污染。只有熟練、規(guī)范地進(jìn)行無(wú)菌操作，才可能成功地培養(yǎng)微生范地進(jìn)行無(wú)菌操作，才可能成功地培養(yǎng)微生物。物。 （）（）消毒定義：消毒定義：利用化學(xué)或物理方法，殺死大部份致利用化學(xué)或物理方法，殺死大部份致病微生物的過(guò)程。區(qū)分為病微生物的過(guò)程。區(qū)分為高程度消

13、毒高程度消毒（High-level DisinfectionHigh-level Disinfection）、）、中程度消中程度消毒毒（Intermediate-level DisinfectionIntermediate-level Disinfection）、）、低程度消毒低程度消毒（Low-level DisinfectionLow-level Disinfection）三種方式。三種方式。2.2.消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別 （2 2）滅菌的定義：）滅菌的定義：以化學(xué)劑或物理方法消滅以化學(xué)劑或物理方法消滅所有所有微生微生物，包括所有細(xì)菌的繁殖體、芽孢、霉物，

14、包括所有細(xì)菌的繁殖體、芽孢、霉菌及病毒，而達(dá)到菌及病毒，而達(dá)到完全無(wú)菌完全無(wú)菌之過(guò)程。之過(guò)程。 滅菌消毒技術(shù)是微生物有關(guān)工作中最滅菌消毒技術(shù)是微生物有關(guān)工作中最普通也是最重要的技術(shù)。普通也是最重要的技術(shù)。1 1、煮沸消毒法煮沸消毒法:100100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法：、巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min15min3 3、化學(xué)藥劑消毒法、化學(xué)藥劑消毒法: :用用75%75%酒精、新潔爾酒精、新潔爾滅等進(jìn)行皮膚消毒滅等進(jìn)行皮膚消毒; ;氯氣消毒水源氯氣消毒水源4 4、紫外線消毒、紫外線消毒(1)消毒的方

15、法：消毒的方法：3.3.常用的消毒與滅菌的方法常用的消毒與滅菌的方法1 1、灼燒滅菌、灼燒滅菌2 2、干熱滅菌：、干熱滅菌：160-170 160-170 下加下加熱熱1-2h1-2h。3 3、高壓蒸氣滅菌：、高壓蒸氣滅菌：100kPa100kPa、121 121 下維持下維持15-30min.15-30min.(2)滅菌的方法：滅菌的方法： 最常用的滅菌方法是最常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌，它可以殺，它可以殺滅所有的生物，包括最耐熱的某些微生物的休眠體滅所有的生物，包括最耐熱的某些微生物的休眠體，同時(shí)可以基本保持培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分不被破壞。，同時(shí)可以基本保持培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分不被破壞

16、。 有些玻璃器皿也可采用有些玻璃器皿也可采用高溫干熱滅菌高溫干熱滅菌。為了防。為了防止雜菌，特別是空氣中的雜菌污染，試管及玻璃燒止雜菌，特別是空氣中的雜菌污染，試管及玻璃燒瓶都需采用適宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也瓶都需采用適宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各種金屬、塑料及硅膠帽，它們只可讓空氣可采用各種金屬、塑料及硅膠帽，它們只可讓空氣通過(guò)，而空氣中的其他微生物不能通過(guò)。通過(guò)，而空氣中的其他微生物不能通過(guò)。 而平皿是由正反兩平面板互扣而成，這種器具而平皿是由正反兩平面板互扣而成，這種器具是專為防止空氣中微生物的污染而設(shè)計(jì)的。是專為防止空氣中微生物的污染而設(shè)計(jì)的。 分類分類定義定義方法

17、方法滅菌法滅菌法殺滅一切微生物殺滅一切微生物 物理法：熱力、輻射、微物理法：熱力、輻射、微波、等離子體波、等離子體化學(xué)法：醛類、烷化劑化學(xué)法：醛類、烷化劑高效消高效消毒法毒法殺滅一切致病微殺滅一切致病微生物生物紫外線、含氯劑、臭氧、紫外線、含氯劑、臭氧、復(fù)配劑等復(fù)配劑等中效消中效消毒法毒法殺滅除芽孢外的殺滅除芽孢外的致病微生物致病微生物超聲波、碘類、醇類、酚超聲波、碘類、醇類、酚類類低效消低效消毒法毒法殺滅細(xì)菌繁殖體、殺滅細(xì)菌繁殖體、親脂病毒親脂病毒單鏈季胺鹽、雙胍類、中單鏈季胺鹽、雙胍類、中草藥、金屬離子草藥、金屬離子1 1、器具的滅菌、器具的滅菌2 2、培養(yǎng)基的配制、培養(yǎng)基的配制3 3、培

18、養(yǎng)基的滅菌、培養(yǎng)基的滅菌4 4、倒平板、倒平板5 5、微生物接種、微生物接種6 6、恒溫箱中培養(yǎng)、恒溫箱中培養(yǎng)7 7、菌種的保存、菌種的保存1.1.無(wú)菌技術(shù)除了用來(lái)防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他無(wú)菌技術(shù)除了用來(lái)防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來(lái)微生物污染外，還有什么目的？外來(lái)微生物污染外，還有什么目的？2.2.請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請(qǐng)選擇合適的方法。如果需要，請(qǐng)選擇合適的方法。（1 1） 培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2 2） 玻棒、試管、燒瓶和吸管玻棒、試管、燒瓶和吸管（3 3） 實(shí)驗(yàn)操作者的雙手實(shí)驗(yàn)操作者的

19、雙手答：無(wú)菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。答：無(wú)菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（答：（1）、（）、（2）需要滅菌；（）需要滅菌；（3）需要消毒。）需要消毒。三、實(shí)驗(yàn)操作三、實(shí)驗(yàn)操作 1.制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細(xì)菌）制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細(xì)菌）1 1計(jì)算、稱量計(jì)算、稱量2 2溶化溶化3 3調(diào)調(diào)pHpH：pH7pH76 64 4過(guò)濾：這一步可以省去。過(guò)濾：這一步可以省去。5 5分裝：分裝過(guò)程中注意不要使培養(yǎng)分裝：分裝過(guò)程中注意不要使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分裝三角燒瓶的量以不超過(guò)引起污染。分裝三

20、角燒瓶的量以不超過(guò)三角燒瓶容積的一半為宜。三角燒瓶容積的一半為宜。6 6加塞加塞7 7包扎包扎操作步驟操作步驟 8 8滅菌滅菌: : 將將50ml50ml培養(yǎng)基用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中，培養(yǎng)基用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為鍋，在壓力為100100kPakPa、溫度為、溫度為121121，滅菌，滅菌151530min30min。將培養(yǎng)基用舊報(bào)紙包裹，放入干。將培養(yǎng)基用舊報(bào)紙包裹，放入干熱滅菌箱內(nèi)，在熱滅菌箱內(nèi)，在160160170 170 下滅菌下滅菌2 2h h。 9 9倒平板倒平板: : 待培養(yǎng)基冷卻到待

21、培養(yǎng)基冷卻到50 50 左右時(shí)，在酒精燈附左右時(shí)，在酒精燈附近倒平板。（倒平板操作見(jiàn)課本）近倒平板。（倒平板操作見(jiàn)課本）2d2d后觀察平后觀察平板，無(wú)雜菌污染才可用來(lái)接種板，無(wú)雜菌污染才可用來(lái)接種. . 10 10無(wú)菌檢查：無(wú)菌檢查： 將滅菌的培養(yǎng)基放入將滅菌的培養(yǎng)基放入3737的溫室中培的溫室中培養(yǎng)養(yǎng)24482448小時(shí)，以檢查滅菌是否徹底。小時(shí)，以檢查滅菌是否徹底。 1. 1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 50 左右時(shí)，左右時(shí)，才能用來(lái)倒平板。你用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的才能用來(lái)倒平板。你用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？溫度？ 答：答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，可

22、以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺(jué)錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可感覺(jué)錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。以進(jìn)行倒平板了。2.2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？ 答：通過(guò)灼燒滅菌，防止瓶口的微生物答：通過(guò)灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。污染培養(yǎng)基。3.3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.4.在倒平板的過(guò)程中，如果不小心將培養(yǎng)在倒平板的過(guò)程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎？為什么？還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎？為什么？ 答：平

23、板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固答：平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。 答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。培養(yǎng)微生物。2 2、純化大腸桿菌、純化大腸桿菌接種方法有：接種方法有：平板劃線法和稀釋涂布平板法平板劃線法和稀釋涂布平板

24、法 平板劃線法平板劃線法: :通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)畫(huà)線的操作養(yǎng)基表面連續(xù)畫(huà)線的操作, ,將聚集的菌鐘將聚集的菌鐘逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面. . 在數(shù)次畫(huà)線后在數(shù)次畫(huà)線后, ,可以分離到由一個(gè)細(xì)胞可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的子細(xì)胞群體繁殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的子細(xì)胞群體, ,這就這就是菌落是菌落. . 平板劃線的操作方法平板劃線的操作方法交叉劃線法交叉劃線法連續(xù)劃線法連續(xù)劃線法 平板劃線時(shí)不能劃破培養(yǎng)基的原因 一旦劃破，會(huì)造成劃線不均勻，難以達(dá)到分離單菌落的目的；一旦劃破，會(huì)造成劃線不均勻，難以達(dá)到分離單菌落的目的； 二是存留

25、在劃破處的單個(gè)細(xì)胞無(wú)法形成規(guī)矩的菌落，菌落會(huì)沿著劃二是存留在劃破處的單個(gè)細(xì)胞無(wú)法形成規(guī)矩的菌落，菌落會(huì)沿著劃破處生長(zhǎng)，會(huì)形成一個(gè)條狀的菌落。破處生長(zhǎng)，會(huì)形成一個(gè)條狀的菌落。 1.1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？ 答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，線前灼燒接種環(huán)是為了

26、殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端，從而環(huán)上的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端，從而通過(guò)劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)通過(guò)劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。 2. 2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？再進(jìn)行劃線？答：以免接種環(huán)溫

27、度太高，殺死菌種。答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。 3. 3.在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線？什么總是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線？ 答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開(kāi)始，起始處要少，每次從上一次劃線的末端開(kāi)始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。 涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃

28、線與系列稀釋的無(wú)菌操作要進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無(wú)菌操作要求，想一想，第求，想一想，第2 2步應(yīng)如何進(jìn)行無(wú)菌操作？步應(yīng)如何進(jìn)行無(wú)菌操作？ 應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無(wú)菌無(wú)菌”。例如，。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。等。 1 1、臨時(shí)保藏：、臨時(shí)保藏：接種到固體斜面培接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長(zhǎng)成后養(yǎng)基，菌落長(zhǎng)成后置于置于44冰箱保存。冰箱保存。 2 2、長(zhǎng)期保存：、長(zhǎng)期保存：甘油冷凍管藏法甘油冷凍管藏法四、課題成果評(píng)價(jià)四、課題成果

29、評(píng)價(jià) （一）培養(yǎng)基的制作是否合格（一）培養(yǎng)基的制作是否合格 如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1 12 d2 d后無(wú)后無(wú)菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。制備。 （二）接種操作是否符合無(wú)菌要求（二）接種操作是否符合無(wú)菌要求 如果培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落的顏色、形狀、大小基如果培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)，則說(shuō)明接種操作本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)，則說(shuō)明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說(shuō)明是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說(shuō)明接

30、種過(guò)程中，無(wú)菌操作還未達(dá)到要求，需要分析原因，接種過(guò)程中，無(wú)菌操作還未達(dá)到要求，需要分析原因，再次練習(xí)。再次練習(xí)。 （三）是否進(jìn)行了及時(shí)細(xì)致的觀察與記錄（三）是否進(jìn)行了及時(shí)細(xì)致的觀察與記錄 培養(yǎng)培養(yǎng)12 h12 h與與24 h24 h后的大腸桿菌菌落的大小會(huì)有明后的大腸桿菌菌落的大小會(huì)有明顯不同，及時(shí)觀察記錄的同學(xué)會(huì)發(fā)現(xiàn)這一點(diǎn)，并能觀察顯不同，及時(shí)觀察記錄的同學(xué)會(huì)發(fā)現(xiàn)這一點(diǎn)，并能觀察到其他一些細(xì)微的變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學(xué)生到其他一些細(xì)微的變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學(xué)生良好的科學(xué)態(tài)度與習(xí)慣。良好的科學(xué)態(tài)度與習(xí)慣。本課題知識(shí)小結(jié)本課題知識(shí)小結(jié): :【典例解析【典例解析】 例例1 1關(guān)微生

31、物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的關(guān)微生物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的A.A.是碳源的物質(zhì)不可能同時(shí)是氮源是碳源的物質(zhì)不可能同時(shí)是氮源 B.B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量C.C.除水以外的無(wú)機(jī)物只提供無(wú)機(jī)鹽除水以外的無(wú)機(jī)物只提供無(wú)機(jī)鹽 D.D.無(wú)機(jī)氮源也能提供能量無(wú)機(jī)氮源也能提供能量 解析：解析：不同的微生物，所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有較大差別，要針對(duì)微不同的微生物，所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有較大差別，要針對(duì)微生物的具體情況分析。對(duì)于生物的具體情況分析。對(duì)于A A、B B選項(xiàng)，它的表達(dá)是不完整的。有選項(xiàng)，它的表達(dá)是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同時(shí)是氮源，如的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同時(shí)

32、是氮源，如NH4HCO3NH4HCO3；有的碳源同時(shí)是能源，如葡萄糖；有的碳源同時(shí)是；有的碳源同時(shí)是能源，如葡萄糖；有的碳源同時(shí)是氮源，也是能源，如蛋白胨。對(duì)于氮源，也是能源，如蛋白胨。對(duì)于C C選項(xiàng)，除水以外的無(wú)機(jī)物種類選項(xiàng)，除水以外的無(wú)機(jī)物種類繁多，功能也多樣。如二氧化碳，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源；繁多，功能也多樣。如二氧化碳，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源；NaHCO3NaHCO3，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源和無(wú)機(jī)鹽；而，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源和無(wú)機(jī)鹽；而NaClNaCl則只能則只能提供無(wú)機(jī)鹽。對(duì)于提供無(wú)機(jī)鹽。對(duì)于D D選項(xiàng)，無(wú)機(jī)氮源提供能量的情況還是存在的，選項(xiàng)，無(wú)機(jī)氮源提供能量的情況還是存

33、在的，如如NH3NH3可為硝化細(xì)菌提供能量和氮源。可為硝化細(xì)菌提供能量和氮源。答案：答案：D例例2 2下面對(duì)發(fā)酵工程中滅菌的理解下面對(duì)發(fā)酵工程中滅菌的理解的是的是A.A.防止雜菌污染防止雜菌污染 B.B.消滅雜菌消滅雜菌C.C.培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備都必須滅菌培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備都必須滅菌 D.D.滅菌必須在接種前滅菌必須在接種前答案：答案：B 解析：滅菌是微生物發(fā)酵過(guò)程的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。解析：滅菌是微生物發(fā)酵過(guò)程的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。A A說(shuō)的是滅菌的目的，因?yàn)榘l(fā)酵所用的菌種大多是單一說(shuō)的是滅菌的目的，因?yàn)榘l(fā)酵所用的菌種大多是單一的純種，整個(gè)發(fā)酵過(guò)程不能混入其他微生物（雜菌），的純種，整個(gè)發(fā)酵過(guò)程不能混入其他

34、微生物（雜菌），所以是正確的；所以是正確的；B B是錯(cuò)誤的，因?yàn)闇缇哪康氖欠乐闺s是錯(cuò)誤的，因?yàn)闇缇哪康氖欠乐闺s菌污染，但實(shí)際操作中不可能只消滅雜菌，而是消滅菌污染，但實(shí)際操作中不可能只消滅雜菌，而是消滅全部微生物。全部微生物。C C是正確的，因?yàn)榕c發(fā)酵有關(guān)的所有設(shè)備是正確的，因?yàn)榕c發(fā)酵有關(guān)的所有設(shè)備和物質(zhì)都要滅菌；發(fā)酵所用的微生物是滅菌后專門(mén)接和物質(zhì)都要滅菌；發(fā)酵所用的微生物是滅菌后專門(mén)接種的，滅菌必須在接種前，如果接種后再滅菌就會(huì)把種的，滅菌必須在接種前，如果接種后再滅菌就會(huì)把所接菌種也殺死。所接菌種也殺死。編號(hào)編號(hào)成分成分含量含量粉狀硫粉狀硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO

35、4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gHH2 2OO100ml100ml例例3 3右表是某微生物培右表是某微生物培養(yǎng)基成分，請(qǐng)據(jù)此回答：養(yǎng)基成分，請(qǐng)據(jù)此回答：（1 1）右表培養(yǎng)基可培養(yǎng)）右表培養(yǎng)基可培養(yǎng)的微生物類型的微生物類型是是 。（2 2）若不慎將過(guò)量）若不慎將過(guò)量NaClNaCl加入培養(yǎng)基中。加入培養(yǎng)基中。如不想浪費(fèi)此培養(yǎng)基，如不想浪費(fèi)此培養(yǎng)基，可再加入可再加入 . .自養(yǎng)型微生物自養(yǎng)型微生物 含碳有機(jī)物含碳有機(jī)物 （3 3）若除去成分）若除去成分，加入（，加入（CH2OCH2O），），該培養(yǎng)基可用于培養(yǎng)該培養(yǎng)基可用于培養(yǎng) 。（4 4）表中營(yíng)養(yǎng)成分共有）表中營(yíng)養(yǎng)成分共有 類。類。（5 5）不論何種培養(yǎng)基，在各種成分都）不論何種培養(yǎng)基，在各種成分都溶化后分裝前，要進(jìn)行的是溶化后分裝前，要進(jìn)行的是 。（6 6）右表中各成分重量確定的原則）右表中各成分重量確定的原則是是 。（7 7）若右表培養(yǎng)基用于菌種鑒定，應(yīng)）若右表培養(yǎng)基用于菌種鑒定，應(yīng)該增加的成分該增加的成分 。固氮微生物固氮微生物 3 調(diào)整調(diào)整pHpH 依微生物的生長(zhǎng)需要確定依微生物的生長(zhǎng)需要確定 瓊脂（或凝固劑）瓊脂（或凝固劑）