玉米莖尖分生組織叢生芽高頻誘導和再生體系建立

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1、 玉米莖尖分生組織叢生芽高頻誘導和再生體系建立 玉米是世界三大糧食作物之一 , 轉(zhuǎn)基因是提高玉米產(chǎn)量和品質(zhì)的有效方法。 成功的轉(zhuǎn)基因體系依賴于良好的受體系統(tǒng)。 目前 , 幼胚仍然是玉米轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)中最重要的外植體。而由成熟胚莖尖分 生組織誘導而來的叢生芽與傳統(tǒng)的幼胚相比 , 具有不受季節(jié)限制 , 誘導率高 , 再生 植株無變異等優(yōu)勢。 如何高頻的誘導叢生芽并再生成為完整植株正是本課題的研究目的所在。 本 研究主要獲得的結(jié)果有以下幾點： 1、以 CML295莖尖分生組織為受體材料 , 根據(jù)

2、 實驗所得濃度范圍分別配制 8 種含有不同濃度 6-BA 和 2,4-D 的誘導培養(yǎng)基進行 誘導 , 每種培養(yǎng)基包含 3 次重復試驗 , 并最終以誘導頻率的高低作為評價標準進 行極差分析 , 誘導頻率最高達到 63%。 2、以 3.5 ：0.5 和 3.0 ：0.5 兩種誘導培養(yǎng)基上誘導出的叢生芽為對象 , 研究 叢生芽的繼代和擴繁能力。 3.5 ：0.5 誘導培養(yǎng)基上的叢生芽能繼代培養(yǎng) 6 個月 左右 , 后期擴繁能力較差： 3.0 ： 0.5 誘導培養(yǎng)基上的叢生芽可以繼代 12 個月左 右 , 后期仍具有一定的擴繁能力： 而在

3、 3.5 ：0.5 誘導培養(yǎng)基上誘導并在 3.0 ：0.5 誘導培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)的叢生芽在繼代 16 個月后仍有較好的生長狀態(tài)和較高的 增殖能力。 3、通過對各誘導培養(yǎng)基上所誘導出叢生芽的質(zhì)量進行對比分析 , 建立叢生芽 質(zhì)量評價標準。將誘導頻率 , 增殖速度和誘導質(zhì)量等因素相結(jié)合 , 得到 6-BA 濃度 為 3.2mg/L,2,4-D 濃度為 0.5mg/L 的誘導培養(yǎng)基最為適宜 4、用不同生長時期的叢生芽制作樣品進行掃描電鏡觀察。 觀察到誘導前、 中、后期三個階段芽組織及周圍幼葉的不同形態(tài)特征。 誘導 前期莖尖生長不明顯；中期形成瘤狀突起 , 幼葉上有少量纖毛狀突起；后期叢生 芽形成 , 幼葉上布滿纖毛狀突起。 5、叢生芽誘導完成后 , 分別取繼代培養(yǎng) 2 個月、 4 個月和 6 個月的叢生芽塊 進行分化再生 , 得到的結(jié)果是繼代培養(yǎng) 2 個月的叢生芽分化培養(yǎng) 20 天的分化率達 到 80%,生根率 60%,繼代培養(yǎng) 4 個月的叢生芽分化率為 50%,而培養(yǎng) 6 個月的叢生芽短時間未能分化成苗。 到 到 到