臨床病原體檢測診斷學一護理系.ppt

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1、華 中 科 技 大 學 同 濟 醫(yī) 學 院 附 屬 協(xié) 和 醫(yī) 院 檢 驗 科曾 吉 微 生 物 的 概 念 ； 病 原 微 生 物 標 本 的 采 集 ； 病 原 微 生 物 檢 查 方 法 ； 細 菌 耐 藥 性 ； 常 見 病 原 微 生 物 的 分 類 及 檢 測 ； 性 傳 播 疾 病 病 原 體 檢 測 ； 醫(yī) 院 感 染 。 微 生 物 （ microbiology):是 指 不 能 用 肉 眼 直接 觀 察 到 的 一 大 類 單 細 胞 生 物 ， 可 分 為 真核 細 胞 、 原 核 細 胞 和 病 毒 三 大 類 型 。 臨 床 常 見 的 病 原 微 生 物 有 真 菌

2、 、 細 菌 、 支原 體 、 衣 原 體 、 螺 旋 體 、 病 毒 等 。 1. 給 臨 床 感 染 的 診 斷 提 供 實 驗 室 的 依 據 2. 給 臨 床 抗 感 染 治 療 提 供 參 考 3. 臨 床 流 行 病 學 的 調 查 微 生 物 檢 驗 的 一 個 重 要 功 能 就 是 進 行 細 菌 耐 藥 監(jiān)測 ， 以 指 導 臨 床 合 理 使 用 抗 生 素臨 床 微 生 物 檢 驗 的 主 要 功 能 實 驗 前 因 素 實 驗 室 因 素 實 驗 后 因 素 血 液 和 骨 髓 的 采 集 ; 痰 標 本 的 采 集 ; 咽 拭 子 標 本 的 采 集 ; 尿 液 標

3、 本 的 采 集 ; 膿 、 創(chuàng) 傷 感 染 標 本 的 采 集 ; 穿 刺 液 標 本 的 采 集 ; 糞 便 標 本 的 采 集 ; 采 血 的 時 機 ？ 正 確 的 采 血 量 應 該 是 多 少 ? 采 血 的 方 法 ？ 血 培 養(yǎng) 陽 性 率 為 什 么 不 高 ？ 如 何 認 識 血 培 養(yǎng) 結 果 ？ 有 不 明 原 因 的 發(fā) 熱 、 體 溫 過 低 等 癥 狀 ； 懷 疑 有 菌 血 癥 或 膿 毒 癥 。 1.有 發(fā) 熱 等 癥 狀 時 ； 2.在 使 用 抗 生 素 的 情 況 下 ； 3.懷 疑 有 亞 急 性 心 內 膜 炎 時 。 濃 度 1： 細 菌 （ 溫

4、度 ） 2： 內 毒 素 3： 體 溫 1 2 3 時 間 采 血 時 的 皮 膚 消 毒 推 薦 采 用 三 步 消 毒 法 ： 1 首 先 用 70%酒 精 擦 拭 靜 脈 穿 刺 部 位 待 30秒 鐘 以上 。 2 然 后 用 一 根 碘 酊 或 碘 伏 棉 簽 消 毒 皮 膚 （ 1% 2%碘 酊 30秒 或 10%碘 伏 消 毒 60秒 ） ， 從 穿 刺 點 向 外 以1.5cm 2cm直 徑 畫 圈 進 行 消 毒 。 3 最 后 用 70%酒 精 脫 碘 。 注 意 對 碘 過 敏 的 患 者 ， 只 能 用 70%酒 精 消 毒 ， 消 毒60秒 鐘 ， 待 穿 刺 部 位

5、 酒 精 揮 發(fā) 干 燥 后 穿 刺 采 血 。 血 養(yǎng) 瓶 消 毒 程 序 ： 1 用 70%酒 精 或 碘 溶 液 (不 要 使 用 碘 )消 毒血 培 養(yǎng) 瓶 橡 皮 塞 子 。 2 酒 精 作 用 約 60秒 。 3 在 血 液 注 入 血 培 養(yǎng) 瓶 之 前 ,用 無 菌 紗 布清 除 橡 皮 塞 子 表 面 剩 余 的 酒 精 ,然 后 注 入 血液 。 1.菌 血 癥 、 膿 毒 癥 只 是 發(fā) 熱 原 因 中 的 一 小 部 份 ； 2.采 血 量 、 采 血 時 間 等 人 為 因 素 的 干 擾 ； 3.部 份 苛 養(yǎng) 菌 用 常 規(guī) 方 法 難 以 培 養(yǎng) 。 1.培 養(yǎng)

6、 出 革 蘭 陰 性 菌 、 金 黃 色 葡 萄 球 菌 、腸 球 菌 等 時 ， 多 數 可 以 確 認 為 病 原 菌 ； 2.培 養(yǎng) 出 凝 固 酶 陰 性 葡 萄 球 菌 、 草 綠 色鏈 球 菌 、 芽 胞 桿 菌 等 時 ， 感 染 ？ 污 染 ？ 需 多 次 多 部 位 /天 采 血 。 1.疑 為 細 菌 性 或 真 菌 性 骨 髓 炎 的 患 者 ； 2.疑 為 傷 寒 感 染 的 患 者 ； 要 求 采 集 肺 深 部 的 痰 液 ， 不 要 唾 液 。 一 般采 用 自 然 咳 痰 法 ， 但 以 氣 管 鏡 采 集 法 標 本質 量 最 好 。 自 然 咳 痰 法 ；

7、氣 管 鏡 采 集 法 ； 小 兒 取 痰 法 ； (4) 導 管 尖 送 檢 ； 所 有 病 人 的 下 呼 吸 道 標 本 應 在 采 集 后 立 即 送 至 微 生物 室 ， 并 于 1小 時 內 接 種 室 溫 下 放 置 1h會 降 低 肺 炎 鏈 球 菌 、 流 感 嗜 血 桿 菌的 分 離 率 而 定 植 于 上 呼 吸 道 的 非 致 病 菌 則 會 過 度生 長 下 呼 吸 道 標 本 勿 放 冰 箱 或 運 輸 時 勿 置 于 冰 塊 中 痰 肉 眼 觀 察 : 記 錄 標 本 外 觀 唾 液 、 帶 血 、 粘 液 樣 、 水 樣 、 膿 性 的 、 粘 液膿 性 、 膿

8、 性 粘 液 樣 顯 微 鏡 檢 查 ： 取 膿 性 部 分 涂 在 玻 片 上 作 革 蘭 染 色 . 低 倍 視 野 下 看 涂 片 ， 記 錄 5個 視 野 下平 均 細 胞 數 。 分 類 WBC 鱗 狀 上 皮 細 胞 6 25 25 25 10-25 3 25 25 2 10-25 25 1 25 分 類 中 1 3類 不 做 培 養(yǎng) ， 要 求 重 新 留 取 標 本 ；4、 5類 為 合 格 標 本 ； 6類 為 氣 管 穿 刺 液 時 ， 如 未 見白 細 胞 ， 而 鱗 狀 上 皮 細 胞 10/低 倍 ， 亦 應 重 新 留取 標 本 。 標 本 采 集 應 在 用 藥

9、前 ， 最 好 在 清 晨 ， 囑 患者 用 清 水 漱 口 ， 由 檢 查 者 將 舌 向 外 拉 ， 使懸 雍 垂 向 外 牽 引 ， 將 咽 拭 子 超 過 舌 根 到 達咽 后 壁 或 懸 雍 垂 的 后 側 ， 在 咽 部 肉 眼 見 明顯 發(fā) 紅 或 有 假 膜 處 局 部 反 復 涂 抹 棉 拭 (注 意不 要 碰 著 口 腔 粘 膜 )， 放 入 無 菌 試 管 內 立 即送 檢 。 中 段 尿 采 集 法 導 尿 法 膀 胱 穿 刺 取 尿 法 留 尿 法 首 先 用 無 菌 生 理 鹽 水 拭 凈 病 灶 表 面 的 污 染 雜 菌 。對 已 破 潰 的 膿 腫 用 無 菌

10、 的 棉 拭 子 取 深 部 的 膿 液 和分 泌 物 ； 未 破 潰 的 膿 腫 消 毒 皮 膚 后 ， 用 無 菌 注 射器 抽 取 膿 液 及 分 泌 物 立 即 送 檢 。 如 深 部 膿 腫 在 送需 氧 培 養(yǎng) 的 同 時 應 考 慮 送 厭 氧 培 養(yǎng) ， 厭 氧 培 養(yǎng) 標本 應 隔 絕 空 氣 立 即 送 檢 。 當 創(chuàng) 傷 出 血 時 ， 敷 用 藥物 2h以 內 及 燒 傷 在 12h內 不 應 采 集 標 本 ， 此 時 獲得 陽 性 結 果 的 機 會 很 少 。 應 在 患 者 用 藥 之 前 或 停 藥 12d后 進 行 穿刺 ， 標 本 應 立 即 送 檢 或

11、保 存 于 4 冰 箱 。腦 脊 液 標 本 應 保 溫 （ 2537 ） ， 抽 2ml直 接 注 入 小 兒 瓶 中 ,同 時 再 另 抽 12ml于 無菌 容 器 同 時 送 檢 并 立 即 送 檢 。 自 然 排 便 采 集 法 直 腸 拭 子 采 集 法 有 腹 瀉 的 病 人 ， 在 送 培 養(yǎng) 標 本 的 同 時 可 以送 細 菌 涂 片 檢 查 。 抗 生 素 相 關 性 腹 瀉 性 腹瀉 ， 培 養(yǎng) 是 陰 性 ， 但 涂 片 檢 查 卻 可 以 看 到細 菌 比 例 失 調 ， 涂 片 臨 床 意 義 大 于 培 養(yǎng) 。 1.直 接 顯 微 鏡 檢 測 ； 2.病 原 體

12、特 異 性 抗 原 檢 測 ； 3.病 原 體 核 酸 檢 測 ； 4.病 原 體 的 分 離 培 養(yǎng) 和 鑒 定 ； 5.血 清 學 實 驗 一 、 耐 藥 機 制 ： 1.滅 活 酶 的 產 生 ； 2.細 菌 靶 位 置 的 改 變 ； 3.旁 路 途 徑 的 產 生 ； 4.細 菌 膜 通 透 性 的 改 變 和 主 動 泵 出 機 制 。 體 外 抗 菌 藥 物 敏 感 試 驗 （ antimicrobial susceptibility testing in vitro):對 敏 感 性 不能 預 測 的 臨 床 分 離 株 進 行 藥 敏 試 驗 ， 以指 導 臨 床 選 擇 治

13、 療 藥 物 ； 并 了 解 常 見 病原 菌 耐 藥 性 的 變 遷 ， 有 助 于 臨 床 經 驗 性治 療 選 擇 用 藥 和 醫(yī) 院 感 染 流 行 病 學 調 查 。 二 、 檢 測 方 法 ： 1.K-B法 ； 肉 湯 稀 釋 法 2.稀 釋 法 ； 瓊 脂 稀 釋 法 3.E試 驗 中 介 （ intermediate， I） :指 測 試 菌 可 被 測 定 藥 物大 劑 量 給 藥 后 在 體 內 能 達 到 的 濃 度 所 抑 制 ， 或 在 測定 藥 物 濃 集 部 位 的 體 液 中 ， 如 尿 中 被 抑 制 。 耐 藥 （ resistant， ） :表 示 測 試

14、 菌 不 能 被 在 體 內感 染 部 位 可 能 達 到 的 抗 菌 藥 物 濃 度 所 抑 制 。 敏 感 （ susceptible,S） :表 示 測 試 菌 能 被 測 定 藥 物常 規(guī) 劑 量 給 藥 后 在 體 內 達 到 的 血 藥 濃 度 所 抑 制 或 殺滅 。 最 低 抑 菌 濃 度 ( m i n i m a l i n h i b i t o r y concentration,MIC):能 抑 制 侍 檢 菌 肉 眼 可 見 生 長的 最 低 藥 物 濃 度 ， 多 以 MIC(g/ml )數 值 表 示 . 細 菌 ： 根 據 細 菌 的 形 態(tài) 和 染 色 性

15、可 分 為 ： 革 蘭 陽 性 球 菌 、革 蘭 陽 性 桿 菌 、 革 蘭 陰 性 球 菌 、 革 蘭 陰 性 桿 菌 。 根 據 對 氧 氣 的 需 求 與 否 可 分 為 需 氧 菌 、 厭 氧 菌 、 兼性 厭 氧 菌 。 真 菌 ： 根 據 在 人 體 分 布 部 位 不 同 可 分 為 淺 表 真 菌 和深 部 真 菌 淺 表 真 菌 ： 主 要 引 起 各 類 皮 膚 病 ， 如 癬 等 深 部 真 菌 ： 有 很 重 要 的 臨 床 意 義 ， 常 引 起 各 類 真 菌感 染 ， 可 分 為 霉 菌 、 酵 母 菌 、 似 酵 母 樣 真 菌 、 雙 相真 菌 等 。 寄 生

16、 蟲 :從 病 人 的 血 液 、 組 織 液 、 排 泄 物 、 分 泌 物或 活 體 組 織 中 檢 查 寄 生 蟲 的 某 一 發(fā) 育 蟲 期 為 最 可靠 的 診 斷 方 法 。 螺 旋 菌 ： 血 清 學 方 法 為 常 用 方 法 支 原 體 ： 培 養(yǎng) 結 合 血 清 學 試 驗 衣 原 體 ： 檢 查 細 胞 質 內 的 包 涵 體 有 參 考 價 值 病 毒 ： 血 清 學 、 病 毒 培 養(yǎng) 和 分 子 生 物 學 方 法 常 見 的 臨 床 類 型 ： AIDS 梅 毒 淋 病 非 淋 病 尿 道 炎 生 殖 道 皰 疹 尖 銳 濕 疣 梅 毒 病 原 體 檢 測 ： 暗

17、 視 野 顯 微 鏡 檢 查 ： 是 診 斷 早 期 梅 毒 唯一 準 確 、 可 靠 的 方 法 。 梅 毒 血 清 學 試 驗 淋 病 病 原 體 檢 測 ： 涂 片 檢 查 ： 主 要 適 用 于 男 性 急 性 淋 病 培 養(yǎng) PCR 非 淋 病 尿 道 炎 病 原 體 檢 測 ： 支 原 體 的 分 離 培 養(yǎng) 血 清 學 試 驗 分 子 生 物 學 方 法 醫(yī) 院 感 染 (nosocomial infections)： 也 稱 為醫(yī) 院 內 感 染 ， 是 指 在 患 者 在 住 院 期 間 獲 得的 感 染 。 醫(yī) 院 感 染 的 基 本 條 件 ： 感 染 源 、 傳 播 途 徑和 易 感 人 群 。 1.下 呼 吸 道 感 染2.尿 路 感 染3.手 術 切 口 感 染4.胃 腸 道 感 染5.血 液 感 染6.皮 膚 和 軟 組 織 感 染 等 醫(yī) 院 感 染 衛(wèi) 生 學 的 監(jiān) 測 ： 包 括 物 表 細 菌污 染 監(jiān) 測 ; 空 氣 中 細 菌 檢 測 ; 醫(yī) 務 人 員手 部 細 菌 污 染 的 監(jiān) 測 ; 滅 菌 試 驗 監(jiān) 測 ; 滅 菌 效 果 的 微 生 物 學 監(jiān) 測 ; 臨 床 標 本 的 病原 學 的 監(jiān) 測 等 。 謝 謝 ！