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1、
羥基磷灰石在心臟外科應(yīng)用的初步實(shí)驗(yàn)研究
背景 : 風(fēng)濕性心臟瓣膜病是一種患病率和死亡率都很高的疾病。目前我們所
使用的人工合成材料或生物材料替代瓣膜還存在著許多缺陷如血栓的形成 , 材料
的壽命短甚至需要再次手術(shù)。
目的 : 探討 HA的生物相容性 , 為人工心臟瓣膜的構(gòu)建提供理想的支架薄膜材
料。方法 : 將傳代的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 , 制成細(xì)胞懸液接種在羥基磷灰石
(Hydroxyapatite,HA) 材料上。
置含 5%(V/V)CO2、37℃的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)靜態(tài)培養(yǎng) 3 周。分別在培養(yǎng) 3 天
2、、 7
天、14 天和 21 天后取出部分材料 , 用 2.5 %戊二醛固定 , 乙醇梯度脫水 , 臨界點(diǎn)干
燥 , 噴金 , 于掃描電子顯微鏡 (Scanning Electron Microscope, SEM) 下觀察細(xì)胞
在材料上的附著情況。
用四氮唑鹽比色 (MTT)法測定 HUVEC與材料復(fù)合培養(yǎng)的增殖能力。 結(jié)果 : 掃描
電鏡觀察復(fù)合培養(yǎng)后見 HA材料的表面有細(xì)胞附著且數(shù)目逐漸增多 , 到第 21 天時(shí)
可見細(xì)胞融合成片 , 并將材料表面覆蓋 , 部分區(qū)域有細(xì)胞外基質(zhì)形成。
四唑鹽 (MTT)比色方法評價(jià)
3、材料對 HUVEC的細(xì)胞毒性見細(xì)胞增殖未受到明顯
影響 , 生長良好。結(jié)論 :HA 對 HUVEC的增殖和分化功能無明顯影響 , 對細(xì)胞無明顯
毒性 , 具有良好的生物相容性 , 可以作為心臟瓣膜材料安全應(yīng)用。
目的 : 用四甲基偶氮唑藍(lán) (MTT)法檢測羥基磷灰石 (Hydroxyapatite,HA) 對人
臍帶內(nèi)皮細(xì)胞可能存在的細(xì)胞毒性。 方法 : 用 MTT比色方法評價(jià)材料的細(xì)胞毒性。
設(shè)常溫浸提液組 ; 高溫浸提液組。兩組均設(shè)置各自對應(yīng)的陽性和陰性對照組。
將加入浸提液和材料并培養(yǎng) 72h 后各組樣品分別在倒置相差顯微鏡下
4、觀察
細(xì)胞在浸提液中及在材料邊緣的形態(tài)變化及生長狀況 , 以細(xì)胞毒性試驗(yàn)來評價(jià)生
物材料生物相容性。參照國際標(biāo)準(zhǔn)化組織 (ISO) 制定的細(xì)胞毒性試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn) , 即
ISO10993-5:1992 《醫(yī)療器械生物學(xué)評價(jià)細(xì)胞毒性試驗(yàn)體外法》之評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)和要
求。
結(jié)果 : 材料浸提液與細(xì)胞共培養(yǎng)組 24h 時(shí)觀察常溫浸提液、高溫浸提液及陰
性對照組的 HUVEC細(xì)胞形態(tài)、數(shù)量 , 各實(shí)驗(yàn)組與陰性對照組無明顯差異。結(jié)論 :
通過細(xì)胞毒性試驗(yàn)與評價(jià) , 結(jié)果表明 HA材料對人臍帶內(nèi)皮細(xì)胞生長抑制反應(yīng)級
別為 1 級或 0 級 , 屬于無明顯毒性作用 , 有良好的細(xì)胞相容性。
羥基磷灰石在心臟外科應(yīng)用的初步實(shí)驗(yàn)研究
