免疫學(xué) 免疫課件

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1、一、概念 1．抗原（antigen, Ag）： 是一類能刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答，產(chǎn)生致敏L-C和（或）抗體，并能與相應(yīng)的致敏L-C和（或）抗體在體內(nèi)或體外發(fā)生特異性結(jié)合的物質(zhì)。例如：乙型肝炎疫苗、禽流感病毒、禽流感滅活苗。 第一節(jié) 抗原的概念 又稱為，免疫反應(yīng)性。抗原能與相應(yīng)的免疫應(yīng)答產(chǎn)物（抗體和致敏淋巴細(xì)胞）在體內(nèi)或體外發(fā)生特異性結(jié)合的性能。 抗原刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗體和致敏淋巴細(xì)胞的性能。 2.免疫原性(immunogenicity) 3.反應(yīng)原性(reactigenicity) 抗原性=免疫原性+反應(yīng)原性 4.完全抗原(complet

2、e antigen)： 免疫原（immunogen），既具有免疫原性又具有反應(yīng)原性的抗原。蛋白質(zhì)、細(xì)菌、病毒 5.不完全抗原(incomplete antigen)： 又稱半抗原（Hapten)，單獨存在時只具有反應(yīng)原性而無免疫原性的物質(zhì)。大多數(shù)的多糖、類脂、藥物等如二硝基酚、青霉素。 （1）半抗原 （2）完全抗原 不產(chǎn)生抗體 產(chǎn)生抗體 既然半抗原不能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體，那么其反應(yīng)原性中，與半抗原結(jié)合的抗體從何而來呢？有什么方法可得到針對半抗原的抗體？ 免疫原（immunogen）：在具有免疫應(yīng)答能力的機(jī)體中，能使機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的物質(zhì)。半抗原不屬于免疫原。 載體：是

3、能賦予半抗原以免疫原性的大分子物質(zhì)。 即半抗原+載體 完全抗原 6.載體(carrier) 用化學(xué)合成的方法：將半抗原+大分子物質(zhì)（BSA等）?形成半抗原-BSA復(fù)合物，即具有了免疫原性。 常用載體：BSA（牛血清白蛋白） OVA（卵清白蛋白） HSA（人血白清蛋白） 二、抗原的兩種性能 1.免疫原性 2.反應(yīng)原性 問題1：一種物質(zhì)要成為抗原必須具備的特質(zhì)是什么呢？影響免疫原性質(zhì)量的因素又有哪些呢？我們一日三餐中的三大營養(yǎng)物質(zhì)是否屬于抗原

4、而受到機(jī)體的排斥？為什么？ 第二節(jié) 構(gòu)成抗原的條件 一、異源性（foreignness） 異源性又稱異物性，是構(gòu)成抗原的首要條件?！? 異物：化學(xué)組成和結(jié)構(gòu)與宿主的自身成分相異，或者機(jī)體的免疫活性細(xì)胞從未與其接觸過的物質(zhì)就是異物。 抗原與機(jī)體之間種族關(guān)系越遠(yuǎn)，組織結(jié)構(gòu)差異越大，免疫原性越強(qiáng)。 如：微生物抗原→人 強(qiáng)免疫原 鴨血清蛋白→雞：弱免疫原 兔：強(qiáng)免疫原 異種抗原：不同種屬間的抗原 同種異體抗原：同種異體間的物質(zhì)，如血型抗原、組織相容性抗原。 自身抗原：自身物質(zhì)，如I型糖尿病

5、（胰島素依 賴型糖尿病) 胰島細(xì)胞 胰島細(xì)胞被破壞 胰島素分泌不足 按親緣關(guān)系的遠(yuǎn)近可分為三個不同層次：異種抗原→同種異體抗原→自身抗原 胰島素依賴型糖尿病 抗原的免疫原性與其分子大小密切相關(guān) 二、大分子有機(jī)物 1.小分子物不具有載體特性。 2.大分子物質(zhì)一般結(jié)構(gòu)較復(fù)雜，抗原位 點較多。 3.大分子具有相對的穩(wěn)定性，不易降 解，可較長時間刺激T-C和B-C。 MW＞10KD（1萬以上），才有較強(qiáng)的免疫原性; MW 在5-10KD之間，免疫原性弱; MW＜5KD ，免疫原性很差或無免疫原性; M

6、W＜1000的小分子為半抗原； 胰島素MW為5,734KD,具有很好的免疫原性 明膠的MW高達(dá)100KD，免疫原性卻很差 問題2：半抗原沒有免疫原性，但可經(jīng)改造使之具有免疫原性。舉例說明如何改造？ 分子結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)象復(fù)雜者抗原性強(qiáng)。 對蛋白質(zhì)抗原來說，凡是含有芳香族氨基酸的蛋白質(zhì)抗原性較強(qiáng)，如酪氨酸。 多肽鏈中的二硫鍵也起重要作用。（形成環(huán)形結(jié)構(gòu)） 三、化學(xué)組成、分子結(jié)構(gòu)和立體構(gòu)像的復(fù)雜性 例如：胰島素——結(jié)構(gòu)復(fù)雜； 明膠的MW高達(dá)100KD，因其為直鏈氨基酸， 結(jié)構(gòu)單一，免疫原性卻很差。　 1．抗原的物理狀態(tài)： 一般顆粒性抗原的免疫原性通常比可溶性抗原強(qiáng)。一

7、些免疫原性弱的可溶性抗原，可由于分子的聚集增加質(zhì)點的大小或吸附在顆粒表面，從可增加或使其獲得免疫原性。 四、物理狀態(tài)及可降解性 如：顆粒：AL(OH)3膠粒、聚丙烯酰胺顆粒蛋白：甲狀腺球蛋白 　 2. 抗原分子的可降解性對免疫原性有明顯影響　　 免疫應(yīng)答是一個抗原驅(qū)逐的過程，因此抗原分子降解太快不利于激發(fā)免疫應(yīng)答。 適當(dāng)?shù)倪M(jìn)入途徑，對抗原的免疫原性影響較大。 問題1：我們一日三餐中的三大營養(yǎng)物質(zhì)是否屬于抗原而受到機(jī)體的排斥？為什么？ 一日三餐的三大營養(yǎng)物質(zhì)—蛋白質(zhì)、脂類、多糖都具有不同程度的免疫原性→但經(jīng)消化→分別變成小分子氨基酸、多肽、脂肪酸、單糖→失去免疫原性

8、。所以一般免疫途徑也不宜采用消化道 半抗原+大分子載體（蛋白質(zhì)）→異源的、大分子有機(jī)物、結(jié)構(gòu)復(fù)雜、適度的可降解性的優(yōu)質(zhì)抗原。 如果想獲得某種小分子半抗原的特異抗體其技術(shù)路線：用化學(xué)方法將之與大分子蛋白質(zhì)等相連（如CAP-BSA）→免疫適當(dāng)?shù)膶嶒瀯游铩蛛x血清中的抗體 問題2：半抗原沒有免疫原性，但可經(jīng)改造使之具有免疫原性。舉例說明如何改造，為什么？ 識別自己和非已、特異性、記憶性 其中最大特點是特異性. 第三節(jié) 抗原特異性與抗原決定簇 1．免疫三大特點： 一、概述 2．特異性的含義 所謂特異性（Specificity）是指物質(zhì)之間的相互吻

9、合性、針對性、專一性。 免疫原性的特異性： 某一特定抗原→激發(fā)某一特定的免疫應(yīng)答：即產(chǎn)生針對該Ag的特異抗體和致敏L-C； 3. 抗原的特異性 反應(yīng)原性的特異性： 特定Ag只能與其相應(yīng)抗體和致敏L-C特異結(jié)合。 二、抗原特異性與抗原決定簇的關(guān)系 1.抗原決定簇(antigenic determinant，AD) 抗原分子表面具有特殊立體構(gòu)型和免疫活性的化學(xué)基團(tuán)，又稱為抗原表位（epitope） 既是免疫活性細(xì)胞識別的部位，又是與相應(yīng)抗體和/或致敏淋巴細(xì)胞相結(jié)合的部位。 2.免疫優(yōu)勢決定簇 能誘導(dǎo)產(chǎn)生高效價抗體的AD。 3.免疫靜止決定簇

10、 不能誘導(dǎo)產(chǎn)生抗體的決定簇。 改變 改變決定簇內(nèi)某一單個的氨基酸殘基，就可能引起免疫優(yōu)勢決定簇的改變。 抗原的特異性決定于AD A B 三、抗原決定簇的性質(zhì)、大小及數(shù)量 1.大?。? 6個左右的氨基酸殘基/葡萄糖殘基 2. 抗原價：決定簇的個數(shù)。 4. 單價抗原：只有一個AD的抗原。 5. 多價抗原：有兩個以上AD的抗原。 7.多價多特異性抗原：有兩個以上AD，而且有兩種以上的AD。 6.多價單特異性抗原：有兩個以上AD，但只有一種AD。 8. 功能決定簇：曝露在抗原分子的表面，可供免疫活性細(xì)胞識別的AD。功能決定簇→功能價； 9. 非功能決定簇：隱蔽

11、在抗原分子的內(nèi)部。非功能決定簇→非功能價/隱蔽價 兩者在一定的條件下可相互轉(zhuǎn)化 一般來說5000D中有一個抗原決定簇，如BSA的MW=69000D，其上有18個決定簇。 10. B細(xì)胞表位：抗原中被BCR和抗體分子所識別的部位； B細(xì)胞表位存在于天然抗原分子表面，不經(jīng)抗原遞呈細(xì)胞（APC)的加工處理即可直接被B細(xì)胞識別。 11. T細(xì)胞表位：蛋白質(zhì)分子中被MHC分子遞呈并被TCR識別的肽段。 它不存在天然蛋白質(zhì)表面，必須經(jīng)抗原呈遞細(xì)胞加工處理為小肽分子，然后再與自己MHC分子結(jié)合才能被T細(xì)胞所識別。 一個T細(xì)胞只具有一種TCR 第四節(jié) 半抗原載體現(xiàn)象 初次應(yīng)答和再次應(yīng)答

12、初次應(yīng)答：是機(jī)體第一次接觸某一抗原物質(zhì)所發(fā) 生的免疫應(yīng)答。 再次免疫應(yīng)答：機(jī)體第二次接觸同樣的抗原而發(fā) 生的免疫應(yīng)答。 免疫應(yīng)答：機(jī)體接受抗原物質(zhì)刺激后，體內(nèi)免疫細(xì)胞 活化、增殖、分化和產(chǎn)生效應(yīng)的過程。包括抗原遞呈、淋巴細(xì)胞活化、免疫分子形成及免疫效應(yīng)發(fā)生等一系列的生理反應(yīng)。通過有效的免疫應(yīng)答，機(jī)體得以維護(hù)內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。 30 初次免疫應(yīng)答和再次免疫應(yīng)答是后面的內(nèi)容，可作簡單的交待。 Ag B細(xì)胞 漿細(xì)胞 Ab APC Th細(xì)胞 Ag肽-MHC分子 T細(xì)胞 T

13、c細(xì)胞 體液免疫應(yīng)答 細(xì)胞免疫應(yīng)答 初次應(yīng)答其特點：初次應(yīng)答刺激幼稚B細(xì)胞，比較緩慢柔和，產(chǎn)生抗體的潛伏期長，產(chǎn)生的抗體滴度低，維持的時間短且多為親和力較低的IgM。 再次免疫應(yīng)答特點：再次應(yīng)答刺激記憶B細(xì)胞，較快速激烈。產(chǎn)生抗體的潛伏期短，產(chǎn)生的抗體滴度高，維持的時間長且多為高親和性IgG等其他類抗體。 半抗原不具免疫原性，將半抗原與大分子載體相連后，即可賦予半抗原以免疫原性。那么半抗原與載體復(fù)合物免疫動物后，免疫系統(tǒng)對半抗原和載體的反應(yīng)如何？ 可以這樣理解:抗原物質(zhì)由兩個不同的功能部分組成：一個是半抗原 —— 只具有特異性反應(yīng)原性的小分子物質(zhì)；另一個是載體 —— 賦予

14、半抗原以免疫原性的大分子物質(zhì)。 33 初次免疫應(yīng)答和再次免疫應(yīng)答是后面的內(nèi)容，可作簡單的交待。 從實驗結(jié)果我們看到有趣的半抗原-載 體現(xiàn)象和載體效應(yīng)現(xiàn)象: 1、半抗原-載體現(xiàn)象：小分子物質(zhì)不具有免疫原性，不能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答，但當(dāng)與大分子物質(zhì)連接后，就能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答。 2、載體效應(yīng)：半抗原只有結(jié)合在與初次免疫所用的載體相同時，才能引起再次免疫應(yīng)答。 （1）如果用DNP和OVA復(fù)合物免疫動物之后，再用同一復(fù)合物或單獨用OVA作抗原，均可引起細(xì)胞介導(dǎo)免疫應(yīng)答的再次反應(yīng)。 （2）如果用DNP或DNP和另一載體（BGG）復(fù)合物作抗原，則不引起細(xì)胞介導(dǎo)免疫應(yīng)答的再次反應(yīng)，說明

15、致敏的T-C只能識別載體，不能對半抗原或結(jié)合在另一載體上的半抗原發(fā)生免疫效應(yīng)。 進(jìn)一步的實驗證明： 1.小分子半抗原可通過與載體大分子結(jié)合而獲得免疫原性，獲得特異性抗體 結(jié) 論： 2.載體不僅增加了半抗原分子的大小，使之獲得免疫原性，而且在再次應(yīng)答的免疫記憶中起重要作用，再次應(yīng)答由載體決定。 3.大多數(shù)天然抗原都可看作是半抗原－載體復(fù)合物，半抗原實質(zhì)上就是抗原決定簇，而其余部分則為載體。 4.細(xì)胞介導(dǎo)免疫應(yīng)答的特異性決定于載體，而體液免疫應(yīng)答的特異性決定于半抗原。 第五節(jié) 抗原的分類 一、根據(jù)抗原的特異性分類 不同的Ag物質(zhì)具有不同的A

16、D，決定了各自的特異性，此種Ag稱為特異性Ag 不同的Ag分子有部分相同或相似的AD，這種AD稱為共同Ag或交叉Ag。共同Ag刺激機(jī)體產(chǎn)生相同特異性的抗體，在血清學(xué)上就會發(fā)生交叉反應(yīng)。如天花與牛痘、牛冠狀病毒和鼠肝炎病毒都具有g(shù)p190、pp52、gp26抗原。 O14與人類直腸粘膜具有共同Ag，引起可引發(fā)潰瘍性結(jié)腸炎 交叉反應(yīng)： 抗原除了能與自身抗血清發(fā)生特異性反應(yīng)外，還能與其它的抗血清發(fā)生反應(yīng)。這種抗原抗體的反應(yīng)就是交叉反應(yīng)。如：CAP-BSA和CAP-HSA……… 在自然界中具有共同Ag的物質(zhì)很多，根據(jù)物種親緣關(guān)系的遠(yuǎn)近不同，常見的有類屬Ag和異嗜性抗原。 由共

17、同抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生的抗體可以和兩種抗原(共同抗原)結(jié)合發(fā)生反應(yīng)。 抗原甲 抗原乙 抗體1 ↘ ↙ 刺激機(jī)體 產(chǎn)生抗體 醫(yī)學(xué)意義：１）利用交叉反應(yīng)推測物種進(jìn)化的親緣關(guān)系和進(jìn)行疾病的診斷和病因的探析。２）影響免疫診斷的結(jié)果。 類屬Ag：指存在于同屬生物中的共同Ag。如A群沙門氏菌有OAg1、2、12三種不同的AD。D群OAg有9、12二種不同的AD。O1、O2為A群特異的Ag，O9為D群特異的Ag。 O12為A、D群類屬Ag 。 異嗜性抗原（Forssman抗原）：指不同種系或無親緣關(guān)系的生物之間共同具有的Ag。屬于共同Ag的特殊情況。異嗜性抗原被認(rèn)為是自身免疫病之因。如O14

18、與人類直腸粘膜具有共同Ag，反復(fù)感染O14后……。 二、根據(jù)抗原的性質(zhì)分 1、完全抗原 2、不完全抗原 三、根據(jù)抗原的來源 1、異種Ag：各種疫苗、異種紅細(xì)胞、異種蛋白 2、同種Ag：血型抗原、組織相容性抗原 3、自身Ag 4、異嗜性抗原 五、根據(jù)誘導(dǎo)抗體產(chǎn)生是否需要T細(xì)胞分為 B細(xì)胞分化成漿細(xì)胞的過程中，需Th協(xié)助的Ag，稱TDAg或T細(xì)胞依賴性Ag。如：異種組織、微生物等。 不需TH協(xié)助，直接刺激B-C分化成漿細(xì)胞的抗原。如細(xì)菌脂多糖（LPS）、肺炎球菌莢膜多糖（SSS）、PVP等。 TD抗原與TI抗原的區(qū)別 項目 TD抗原

19、 TI抗原 結(jié)構(gòu)特點 載體表位 無載體表位 T細(xì)胞輔助 需要 不需要 免疫應(yīng)答 體液和細(xì)胞免疫 體液免疫 抗體類型 多種 IgM 免疫記憶 有 無 六、根據(jù)化學(xué)組成分 1. 蛋白質(zhì)：血清蛋白、細(xì)菌外毒素等 2. 脂蛋白：血清脂蛋白 3. 糖蛋白：血型物質(zhì)、組織相容性抗

20、原 4. 脂 質(zhì)：結(jié)核桿菌的磷脂質(zhì)和糖脂質(zhì) 5. 多 糖：肺炎鏈球菌等的莢膜 6. 脂多糖：內(nèi)毒素、Forssman抗原 7. 核 酸：核蛋白等 凝集原： 參與凝集反應(yīng)的抗原，為顆粒性抗原。 2. 沉淀原： 參與沉淀反應(yīng)的抗原，為可溶性抗原。 3. 病毒中和抗原：存在于病毒中，能刺激機(jī)體產(chǎn)生中和抗體的病毒成分。 七、根據(jù)臨床應(yīng)用分 5. 血凝素抗原：某些病毒的囊膜上有血凝素，血凝素具有抗原性，能刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)抗體，這種物質(zhì)稱為血凝素抗原。 4. 免疫保護(hù)性抗原：微生物具有多種抗原成分，但其中只有1～2種抗原成分能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體具有免疫保護(hù)作用，

21、因此將這些抗原稱為保護(hù)性抗原或功能抗原。如口蹄疫病毒的VP1保護(hù)性抗原、傳染性法氏囊病毒的VP2保護(hù)性抗原，腸致病性大腸桿菌的菌毛抗原（K88、K99等）和腸毒素抗原（如ST、LT等）。 第六節(jié) 重要的微生物抗原 一、?細(xì)菌抗原(bacterium antigen) 1.鞭毛抗原（flagellar antigen） 又稱H抗原(hauch)。 鞭毛主要成分是蛋白質(zhì)。 不同細(xì)菌的的H抗原具有型特異性，常作為血清學(xué)鑒定的依據(jù)之一。 免疫原性強(qiáng) 100度加熱1h失去免疫原性 大腸桿菌的菌毛抗原與致病性有密切的關(guān)系，在細(xì)菌學(xué)診斷上非常重要。 2. 菌毛抗原

22、（pilus antigen） 3. 菌體抗原（somatic antigen） 指G-細(xì)菌的胞壁抗原，又稱O抗原(ohne)。 其化學(xué)本質(zhì)為脂多糖(LPS）。 G- 菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu) 脂多糖（LPS） 脂蛋白 肽聚糖 磷脂(內(nèi)膜，細(xì)胞膜) 磷脂(外膜) 類脂A、核心多糖、側(cè)鏈多糖 菌體抗原的特異性就決定于這些位于G-菌胞壁最外層的多糖側(cè)鏈的單糖種類、序列及空間立體構(gòu)型。 4.莢膜抗原（capsular antigen）： 又稱K抗原，由菌體外的粘液物質(zhì)組成。 多數(shù)細(xì)菌的莢膜主要含多糖類，如：豬鏈球菌； 少數(shù)主要含多肽類，如：炭疽桿菌 極少數(shù)細(xì)菌兩

23、者都有，如：巨大芽孢桿菌 K抗原可以干擾O抗體對O抗原的凝集作用。如大腸桿菌的O不凝集性。 病毒的基本結(jié)構(gòu) 核心 核酸 病毒 衣殼 蛋白質(zhì) 包膜(部分病毒) 脂類、糖蛋白 刺突 蛋白質(zhì) 核衣殼 二、 病毒抗原(virus antigen) 有1.囊膜抗原(Envelope antigen) 膜病毒的抗原特異性由囊膜上的纖突所決定，如流感病毒囊膜上

24、的血凝素（H）和神經(jīng)氨酸酶（N），囊膜抗原具有型和亞型的特異性。 2.衣殼抗原(capsid antigen) 無囊膜病毒，其抗原特異性決定于病毒顆粒表面的衣殼結(jié)構(gòu)蛋白。如口蹄疫病毒的結(jié)構(gòu)蛋白VP1、VP2、VP3、VP4。 另外還有S抗原（可溶性抗原）、NP抗原（核蛋白抗原）。 1.外毒素(exotoxin) 破傷風(fēng)梭菌、白喉桿菌、肉毒梭菌等都能產(chǎn)生外毒素（exotoxin）并釋放到環(huán)境中。外毒素的化學(xué)組成為蛋白質(zhì)，性質(zhì)不穩(wěn)定，不耐熱，可被蛋白酶所破壞。 三、毒素抗原（toxin antigen） 外毒素的分子結(jié)構(gòu)：大部分外毒素由A亞單位和B亞單位組成，A亞單

25、位為活性成分，決定致病特點，作用方式，是毒性部分；B亞單位為結(jié)合部分，決定其結(jié)合性。外毒素的中和AD位于B亞單位上。 抗毒素(antitoxin)：外素毒具有很強(qiáng)的免疫原性，能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體，這種抗體稱之為抗毒素。 3.類毒素(toxoid)： 外毒素經(jīng)0.4%甲醛處理，可脫毒而保留原有抗原性成為類毒素。 外毒素→ 類毒素(toxoid) →免疫適宜的動物 → 制備抗毒素（如破傷風(fēng)抗毒素） 2.內(nèi)毒素(toxoid)： 革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁中的一種成分，叫做脂多糖。脂多糖對宿主是有毒性的。內(nèi)毒素只有當(dāng)細(xì)菌死亡溶解或用人工方法破壞菌細(xì)胞后才釋放出來，所以叫做內(nèi)毒素。

26、 各種G-菌的類脂A結(jié)構(gòu)極其相似，無種屬特異性。 四．超抗原(superantigen, SAg) 某些抗原物質(zhì)，只需要極低濃度（1-10ng/ml）即可激活2%-20%某些亞型的T細(xì)胞克隆，產(chǎn)生極強(qiáng)的免疫應(yīng)答，這類抗原稱為超抗原SAg（superantigen,)。 普通抗原：一種抗原決定簇只能活化 　　　　　一個克隆的淋巴細(xì)胞 超級抗原：少數(shù)幾個抗原決定簇就能 　　　　　活化多個克隆的淋巴細(xì)胞 SAg的作用特點： （2）不需APC處理，直接與MHC-II類分子和TCR-Vb結(jié)合； （3）與MHCII類分子的外側(cè)結(jié)合，不受MHC限制 （1）具有強(qiáng)激活T細(xì)胞作用，

27、可刺激T細(xì)胞總數(shù)的2～20%； SAg的種類： （1）外源性超抗原：主要為細(xì)菌的代謝產(chǎn)物。如： 金黃色葡萄球菌腸毒素（staphylococcus enterotoxin,SE）、A群鏈球菌M蛋白等 （2）內(nèi)源性超抗原：主要為逆轉(zhuǎn)錄病毒產(chǎn)物。如： 病毒DNA與宿主DNA整合，表達(dá)的病毒蛋白質(zhì)產(chǎn)物。 SAg的實際意義： 其生物學(xué)意義尚不完全清楚。 （2）SAg à T細(xì)胞亞群 à 免疫抑制 à 促進(jìn)病毒感染、增殖。 （1）SAg à T細(xì)胞亞群 à 細(xì)胞因子 à 毒性效應(yīng)。 1901年Behring由于在運用抗毒素血清預(yù)防和治療白喉和破傷

28、風(fēng)等病癥方面； 1919年Bordet發(fā)現(xiàn)抗原和抗體相互作用的結(jié)果是激活補(bǔ)體，導(dǎo)致攜帶抗原的靶細(xì)胞的裂解； 1972年美國Gerald Maurice Edelman和英國Rodney Robert Porter由于在抗體結(jié)構(gòu)上的突出貢獻(xiàn)被授予諾貝爾醫(yī)學(xué)及生理學(xué)獎； 1984年丹麥免疫學(xué)家Niels K.Jerne、德國免疫學(xué)家Kohler和美國著名生物化學(xué)價Cesar Milstein在發(fā)現(xiàn)生產(chǎn)單克隆抗體的原理而共同獲得諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎； 1987年利根川進(jìn)在基因水平上對抗體多樣性形成的機(jī)制進(jìn)行了探索，證實了免疫球蛋白的基因結(jié)構(gòu)，在免疫球蛋白研究領(lǐng)域取得了突破性進(jìn)展。 抗體（a

29、ntibody，Ab）： 在抗原和免疫系統(tǒng)的相互作用下，由B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化漿細(xì)胞產(chǎn)生的能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異結(jié)合的免疫球蛋白（immunoglobulin）。 包括IgG、IgM、IgA、IgD、 IgE 第一節(jié) 抗體與免疫球蛋白的概念 曾有抗毒素、殺菌素、溶菌素、凝集素、沉淀素、溶血素、紅斑狼瘡因子、類風(fēng)濕因子等名稱。 是具有抗體活性或化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗體相似的球蛋白 免疫球蛋白(Immunoglobulin, Ig)： 非抗體 存在形式： 膜型（membrane immunoglobulin, mIg） — B細(xì)胞膜上的抗原受體； 分泌型(

30、secreted immunoglobulin, sIg) — 分泌進(jìn)入體液,介導(dǎo)體液免疫應(yīng)答。 69 異常免疫球蛋白，如多發(fā)性骨髓瘤蛋白，又稱為L鏈蛋白或本周氏蛋白。早在1847年，Bence Jones在多發(fā)性骨髓瘤疾病患者的尿液中成功地?fù)斐鲆环N蛋白，稱為Bence Jones氏蛋白，它本身是抗體的片斷（L鏈），還有其他患者血清中的免疫球蛋白，這種蛋白不易查到抗體活性。 (1)抗體是與抗原相對應(yīng)的一個概念，著重點在 其生物學(xué)活性； (2)免疫球蛋白是結(jié)構(gòu)和化學(xué)本質(zhì)上的概念； (3)抗體都是免疫球蛋白，免疫球蛋白質(zhì)并非都 是抗體，它包括抗體球蛋

31、白、異常免疫球蛋 白等。 如骨髓瘤患者血清中的骨髓瘤蛋白，其化學(xué)結(jié)構(gòu)與Ab相似，但無Ab活性，沒有免疫功能，不能稱為Ab。 通常情況下二者可通用。 γ球蛋白 = 丙種球蛋白 = 抗體分子 抗體與免疫球蛋白的關(guān)系： 第二節(jié) 抗體的結(jié)構(gòu) 抗體分子巨大，含有1000個以上的aa殘基。但各類抗體都具有相似的基本結(jié)構(gòu)。 即所有抗體都由1個或多個單體組成。 單體：由四條多肽鏈和幾對二硫鏈接成的一個基本單位稱為Ig單體。 四肽鏈結(jié)構(gòu) 所有Ig的基本單位都是四條多肽鏈的對稱結(jié)構(gòu)。 重 鏈（heavy chain，H鏈） 其中兩條相同的長鏈

32、稱為重鏈，由446個aa組成，結(jié)合有不同含量的糖，故Ig屬糖蛋白。 輕 鏈（light chain，L鏈） 兩條相同的短鏈稱為輕鏈，由214個aa組成。 重鏈和輕鏈 二硫鍵連接 穩(wěn)定區(qū)與可變區(qū) 穩(wěn)定區(qū)（constant region，C區(qū)） 肽鏈aa組成和排列相對恒定區(qū)域，稱為穩(wěn)定區(qū)，決定著抗體分子的多種生物活性，由L的1/2、H的3/4組成。 根據(jù)H鏈恒定區(qū)氨基酸組成和排列順序不同分為： 重鏈分5類： α γ δ ε μ Ig： IgA IgG IgD IgE IgM 根據(jù)L鏈恒定

33、區(qū)氨基酸組成和排列順序不同分為： 兩型： κ、λ 可變區(qū)（variable region，V區(qū)） 抗體分子肽鏈N-端，L鏈的1/2和H鏈的1/4的aa組成和排列順序多變，故稱可變區(qū)。是識別AD和決定抗體特異性的部位。 對來自不同B細(xì)胞克隆的Ig輕鏈氨基酸序列進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)V區(qū)的變化主要集中在3個分別由6－10個氨基酸殘基組成的狹小區(qū)域內(nèi)。 超變區(qū)/互補(bǔ)決定區(qū) 框架區(qū) 高變區(qū)與框架區(qū) 高變區(qū)（hypervariable region）： 在V區(qū)內(nèi)，重鏈與輕鏈各有3個特殊區(qū)域，在這些區(qū)域aa排列順序變化大大超過V區(qū)的其他部分，這些區(qū)域稱為超

34、變區(qū)或高變區(qū)，又叫互補(bǔ)決定區(qū)(complementarity-determing region ， CDR)。 框架區(qū)（Framework region，F(xiàn)R):維持超變區(qū)的空間構(gòu)型,FR1,FR2,FR3,FR4 每條L鏈和H鏈的高變區(qū)相互作用形成一個單一的抗原結(jié)合位點。 每個IgG分子有2個抗原結(jié)合位點，在功能上稱為雙價抗體。 抗原 B細(xì)胞表位 抗體 CDR 表位 免疫球蛋白的功能區(qū) H鏈和L鏈上每隔110個氨基酸殘基就通過鏈內(nèi)二硫鍵連接形成跨度約110個氨基酸的環(huán)形結(jié)構(gòu)區(qū)域（domain），具有不同的生物學(xué)功能，稱為功能區(qū)。 輕鏈包括VL和CL兩個結(jié)構(gòu)域,

35、重鏈含有1個VH和3-4個CH結(jié)構(gòu)域。 （1）IgG、 IgA、 IgD的重鏈有4個功能區(qū)， 分別為VH、CH1、CH2、CH3； （2）IgM和IgE有5個功能區(qū)，即比IgG等多一個CH4。 （3）輕鏈只有VL和CL兩個功能區(qū)。 以IgG為例，各功能區(qū)的功能如下： 1.VH和VL：結(jié)合抗原的部位。 2.CH1和CL：遺傳標(biāo)志所在。 3.CH2 ：有補(bǔ)體結(jié)合點，參與活化補(bǔ)體。 4.CH3：可與細(xì)胞表面的Fc受體結(jié)合。 絞鏈區(qū)（hinge region） CH1和CH2之間，兩個重鏈間二硫鍵連結(jié)處，能自由折疊，可以轉(zhuǎn)動，彈性好，易被各種專一性不同的蛋白酶水解。

36、當(dāng)抗體與抗原結(jié)合時，此區(qū)可轉(zhuǎn)動，便于與抗原結(jié)合，另外亦可暴露CH2上的補(bǔ)體結(jié)合位點。 原因：含大量脯氨酸和二硫鍵 Ig分子結(jié)合抗原前后的構(gòu)象變化 BACK 二、抗體的其它結(jié)構(gòu)—J鏈與分泌片 J鏈（joining chain，J鏈） 分子量20KD，內(nèi)含10%糖，富含半胱氨酸，由漿細(xì)胞合成。J鏈只有一種，它以二硫鍵的形式共價結(jié)合到Ig的重鏈上。 功 能：連接Ig單體形成多聚體。 如IgM---五聚體、sIgA---二聚體 分泌片（Secretory piece，SP） 分子量60-70KD，含6%糖。分泌片由上皮細(xì)胞合成和分泌。

37、 分泌型IgA所特有的一種特殊結(jié)構(gòu) 功能： a.幫助IgA穿越黏膜 b.保護(hù)sIgA抵抗蛋白酶的水解作用 分泌片 2個相同的抗原結(jié)合片斷（fragment antigen binding，F(xiàn)ab) 1個Fc片段，即可結(jié)晶片斷（fragment crystallizable， Fc） (一)木瓜蛋白酶水解： 1、酶解位點 H鏈間二硫鍵近N端。 2、酶解片斷及其生物學(xué)活性 每個Fab片段有一條完整的輕鏈和部分重鏈。 具有抗體活性，其結(jié)合抗原的部位在VL及VH功能區(qū)。 Fab 單價抗體，能與抗原結(jié)合形成可溶性復(fù)合物（不能形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)？），無可見現(xiàn)象生成（沉淀、

38、凝集）。如不加指示劑，則無可見現(xiàn)象。 由CH2和CH3組成，容易結(jié)晶。 Fc 與抗體的生物學(xué)活性有密切關(guān)系，如：與補(bǔ)體結(jié)合活化補(bǔ)體，與帶Fc受體的細(xì)胞（Mφ、B-C、K-C，嗜堿性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞）結(jié)合，引起各種生物學(xué)效應(yīng)。 與具有FcR的吞噬細(xì)胞結(jié)合，可提高其吞噬能力。免疫學(xué)上稱為調(diào)理作用，這類抗體稱為調(diào)理素。 這類親細(xì)胞抗體在與抗原結(jié)合前或后都能與細(xì)胞結(jié)合，只是在與抗原結(jié)合后，增加了與細(xì)胞的結(jié)合能力。 1.調(diào)理吞噬作用 調(diào)理素：Wright于1903年觀察到免疫血清能顯著增強(qiáng)白細(xì)胞的吞噬作用，并將此種抗體稱為調(diào)理素（opsonin）。 抗體依賴性

39、介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用（ antibody dependent cell-mediated cytotoxicity） 細(xì)胞毒素 2.ADCC作用 當(dāng)當(dāng)抗原為細(xì)胞且效應(yīng)細(xì)胞為K-C或NK-C等時，靶細(xì)胞與相應(yīng)的抗體結(jié)合，K-C或NK-C可與結(jié)合在靶細(xì)胞上的IgG的Fc片段結(jié)合，從而被活化，釋放溶細(xì)胞因子，裂解靶細(xì)胞。 BACK IL-4 BCR IgE 3.引起過敏反應(yīng) 效應(yīng)細(xì)胞為肥大細(xì)胞、嗜堿性細(xì)胞時，引發(fā)Ⅰ型過敏反應(yīng)。 BACK 記憶性B-C B-C的Fc受體與SIg都能與同一種抗原結(jié)合，兩者之間存在競爭同一種抗原的關(guān)系，由Fc受體結(jié)合的抗原通過胞飲作用進(jìn)入B-C ，

40、導(dǎo)致抑制因子的釋放，而抗原與SIg的結(jié)合則導(dǎo)致B-C的活化。 4.免疫調(diào)節(jié)作用 BCR IgG是唯一能通過胎盤的免疫球蛋白，與Fc片段及Fc受體有關(guān)。 5.與IgG選擇性通過胎盤有關(guān) 1.酶解位點 H鏈間二硫鍵近C端 2.酶解片斷 1個大分子 —— F(ab')2 幾個小分子 —— pFc (二)胃蛋白酶水解 3. 酶解片斷的生物學(xué)活性 F(ab′)2 （1）具有雙價抗體活性，因而與抗原結(jié)合能夠形成沉淀，可見現(xiàn)象。 （2）其特性和功能與Fab相同。 pFc′ 無任何生物活性，為小分子肽，不能結(jié)晶。 克服了Fc抗原性而帶來的副作用。 （

41、三）綜合應(yīng)用 Fab片段或F(ab′)2片段代替完整抗體試劑。 例如：白喉或破傷風(fēng)抗毒素經(jīng)胃蛋白酶消化后精制的制劑，可減少超敏反應(yīng)的發(fā)生,其原因就是去掉了重鏈的Fc段。 克服了完整抗體分子與帶有 Fc受體的細(xì)胞結(jié)合引起的非特異反應(yīng)。 闡明Ig的結(jié)構(gòu)及生物活性。 異種抗體：微生物抗體 一、根據(jù)抗原的來源分 同種抗體：血型抗體 自身抗體： 異嗜抗體：針對異嗜性抗原產(chǎn)生的抗體 不同種屬生物間存在的共同抗原。如大腸桿菌O86含有人的B血型物質(zhì)，肺炎球菌14型含有人A血型物質(zhì)。如O14與人類直腸粘膜具有共同Ag。 第三節(jié)????抗體分類 完全抗體： 二價或

42、多價抗體，與抗原結(jié)合，產(chǎn)生可見反應(yīng)。？ 二、根據(jù)與抗原是否產(chǎn)生可見反應(yīng) 不完全抗體： 只有一個抗原結(jié)合部位。 能與顆?？乖Y(jié)合但不能產(chǎn)生可見凝集性反應(yīng)，功能上為單價。 類 亞類： 型 亞型 三、根據(jù)理化特性和抗原結(jié)構(gòu)分 類(class)： 依據(jù)其重鏈C區(qū)的理化性質(zhì)及抗原性差異。 Fc段氨基酸組成，約60%不同 重鏈決定Ig的種類。 IgG(γ)、IgA(α)、IgM (μ)、 IgD(δ)、IgE(ε) （一）類和亞類 用于抗體的純化 可用二抗進(jìn)行鑒定。 亞類：

43、 類內(nèi)相比又有18%不同。 根據(jù)重鏈C區(qū)的微細(xì)結(jié)構(gòu)、二硫鍵的位置與數(shù)目、抗原性的不同 小鼠： IgG1、IgG2a 、IgG2b、IgG3 人： IgG1、IgG2 、IgG3、IgG4 1.羊抗鼠IgG1 2.羊抗鼠IgG2a 3.羊抗鼠IgG2b 4.羊抗鼠IgG3 5.羊抗鼠IgM 6.羊抗鼠IgG 7.1F9腹水 雜交瘤細(xì)胞染色體 SP2/0細(xì)胞染色體 例：氯霉素單克隆抗體制備與鑒定 單抗亞類的鑒定 型： （1）根據(jù)輕鏈C區(qū)的抗原性不同，分為κ、λ兩個型。 （2）每個Ig分子中的兩條輕鏈都是相同的，

44、在一個Ig單 體分子上不可能同時出現(xiàn)κ和λ兩種輕鏈。 亞型： （1）λ型輕鏈C區(qū)內(nèi)氨基酸存在的微小差異，分為 λ1、λ2、 λ3、λ4四個亞型。 （2） κ型輕鏈無亞型 （二）型和亞型 Ig是蛋白質(zhì)，因此一種動物的Ig對另一種動物具有抗原性?？笽g抗體識別的Ig抗原決定簇（epitope）主要有三種：同種型、同種異型和獨特型抗原決定簇。 第四節(jié) Ig的抗原決定簇 同一種屬所有個體的Ig分子共有的抗原特異性標(biāo)志，不同種動物之間則不同，這種表位稱為同種型。 1.同種型表位（isotypic epitope） 同種型表位在重鏈恒定

45、區(qū)，決定Ig的類和亞類，是同一種屬內(nèi)所有個體共有的抗原決定簇。 輕鏈的同種型表位在其恒定區(qū)，有2種，決定輕鏈的κ、λ兩型。 同一種屬不同個體間，同一類型的Ig分子所具有的不同的抗原特異性標(biāo)志。 2.同種異型表位（allotypic epitope） 位于輕鏈和重鏈的恒定區(qū)。 獨特型是指每個Ig分子的V區(qū)肽鏈所具有的抗原特異性標(biāo)志。 3.獨特型表位（idiotypic epitope，Id） 獨特位：免疫球蛋白分子上能結(jié)合抗原決定簇的可變區(qū)本身構(gòu)成了一個獨特型表位 這種AD可刺激自身、同種異體、異種動物產(chǎn)生抗體。 獨特型 第五節(jié) 各類免疫球蛋白的理

46、 化特性和免疫學(xué)功能 不同抗體分子理化特性有所不同，但都具有結(jié)合相應(yīng)抗原的功能及各種生理效應(yīng)功能。 1 IgG是介導(dǎo)體液免疫的主要抗體，是再次免疫的主要抗體； 2 單體形式存在于血清和其它體液中；血清中含量最高，占血清Ig總量的3/4，半衰期最長(21天左右)； 3 結(jié)合補(bǔ)體，激活補(bǔ)體的傳統(tǒng)途徑； 4 唯一通過胎盤的Ig，穿過胎盤，介導(dǎo)新生兒抗感染免疫； 5 結(jié)合巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、NK細(xì)胞，參與調(diào)理吞噬和ADCC效應(yīng)； 6 其Fc段與葡萄球菌A蛋白（SPA）結(jié)合，可以純化抗體，也可以用于免疫診斷； 7 抗感染的主要抗體（抗菌、抗病毒、中和毒素)；同時也是血清學(xué)診斷和疫苗免

47、疫后監(jiān)測的主要抗體。 一、IgG 五聚體IgM： 1 五聚體形式存在于血液中 2 分子量最大，不能穿過血管壁和胎盤 3 個體發(fā)育中合成最早的Ig，臍帶血中IgM增多，提示可能存在宮內(nèi)感染。 4 IgM是抗原刺激后出現(xiàn)最早的抗體，半衰期短，故檢測IgM水平可用于傳染病的早期診斷。 5 結(jié)合和激活補(bǔ)體的能力最強(qiáng) ？ 6 調(diào)理吞噬和凝集作用比IgG強(qiáng) ？ 單體IgM： 為mIgM，是B細(xì)胞的重要表面標(biāo)志，是最早出現(xiàn)的BCR。 二、 IgM 三、IgA 血清型IgA：單體，存在于血清中。 分泌型IgA（SIgA): 含J鏈和分泌片

48、的二聚體，存在于胃腸道和支氣管分泌液、初乳、唾液和淚液中。 1.分為兩種類型： 3.SIgA是參與粘膜局部免疫的主要抗體 滴鼻、點眼、飲水 4.中和毒素、調(diào)理吞噬 2.SIgA不能通過胎盤，但初生動物可以從母乳中 獲得SIgA。 四、IgE 1.種系進(jìn)化中最晚出現(xiàn)的Ig，血清中含量最低 2.單體形式存在 3.結(jié)合肥大細(xì)胞和嗜堿性性粒細(xì)胞，參與I型超敏反應(yīng)的發(fā)生 4.在抗寄生蟲感染中具有重要的作用。 五、IgD 1.單體形式存在血清中，含量低，僅占血清總Ig的1%； 2.分子結(jié)構(gòu)類似于IgG，但不能通過胎盤，也不能激

49、活補(bǔ)體； 3.表達(dá)在B細(xì)胞膜上的smIgD是成熟B細(xì)胞的重要標(biāo)六、Ig的基因結(jié)構(gòu)與Ab多樣性的機(jī)制 （二）Ig的基因結(jié)構(gòu) 1.Ig重鏈VDJ基因重排及C基因類別轉(zhuǎn)換 V區(qū)： V、D、J基因編碼 V基因：CDR1、CDR2 D基因及V-D：大部分CDR3 D-J基因：CDR3其余部分及骨架區(qū) C區(qū)：C基因編碼 存在類別轉(zhuǎn)換 （一）免疫球蛋白的基因庫 H基因庫（重鏈基因連 鎖群）第14號染色體 2.κ基因庫（κ鏈基因連 鎖群）第2號染色體 3.λ基因庫（λ鏈基因連 鎖群）第22號染色體 2.Ig輕鏈基因結(jié)構(gòu)與VJ重排 （

50、1）Ig κ型輕鏈基因：V、J、C κ V基因： CDR1、CDR2 V-J基因：CDR3 C基因： C區(qū) （2）Igλ型輕鏈基因：V、J、C λ V基因：CDR1、CDR2 V-J： CDR3 C基因：C區(qū) (三)Ig的基因結(jié)構(gòu)及其重排和表達(dá) 1.κ鏈: Vκ(約100個)、 Jκ(5個)、 Cκ(1個) 2.λ鏈: Vλ(約30個)、 Jλ-Cλ(4個)

51、 3.H鏈: V基因(約95個) D基因(27個) J基因(6個) C基因(9個) （四）Ig的類別轉(zhuǎn)換 1.定義 一個B細(xì)胞克隆在分化過程中V-D-J功能性基因片段保持不變，而發(fā)生C基因重排，使其表達(dá)的抗體分子發(fā)生H鏈類的改變，稱為類別轉(zhuǎn)換（class switching） 。 2.舉例 B細(xì)胞克隆 à IgM à

52、 IgG IFN-γ IL-4 IgE IL-5 IgA (五)抗體多樣性機(jī)制: 1.Ig受多基因控制 2.V-D-J及V-J連接的多樣性 3.體細(xì)胞的基因突變 4.H 、L鏈的隨機(jī)組合 第七節(jié) 免疫球蛋白的生物學(xué)功能 在蛋白質(zhì)中，象Ig這樣在一種分子中能表現(xiàn)如此多方面的生物活性的例子是少見的，IgG是其中的典型代表。Ig的主要功能概述如下： Ig與Ag的結(jié)合具有高度特異性，必需是超變區(qū)與抗原的

53、空間構(gòu)象完全吻合。 與抗原結(jié)合后，可介導(dǎo)體內(nèi)的多種生理和病理效應(yīng)（中和病毒、毒素，介導(dǎo)炎癥反應(yīng)），體外可產(chǎn)生凝集、沉淀現(xiàn)象用于檢測等 。 一、與抗原特異性結(jié)合 抗體（IgG1、 IgG2、 IgG3、IgM）與相應(yīng)抗原結(jié)合后，發(fā)生變構(gòu)，其重鏈恒定區(qū)上的補(bǔ)體結(jié)合點（CH2）暴露。C1q與之結(jié)合，從而使補(bǔ)體各成分激活。 二、激活補(bǔ)體 主要通過IgG/IgE的CH3/CH4功能域與位于不同細(xì)胞上的FcgR/FceR結(jié)合，介導(dǎo)不同的生物學(xué)效應(yīng)： 三、結(jié)合Fc受體 (1)與單核巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞上的FcgR結(jié)合 介導(dǎo)調(diào)理吞噬作用； (2)與肥大和嗜堿性粒細(xì)胞上的FceR結(jié)合介導(dǎo)I型

54、超敏反應(yīng)； (3)靶細(xì)胞上的抗原決定簇結(jié)合IgG的Fab段，而抗體的Fc段與NK細(xì)胞上的FcgR結(jié)合，發(fā)揮抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用（Ab dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC）。 IgG是人類唯一能從母體通過胎盤轉(zhuǎn)到胎兒體內(nèi)的Ig。 新生兒消化道壁通透性較高，人和兔的IgG可通過胎盤，其他哺乳類IgG可通過初乳吸收，對新生兒抗感染起作用。 四、通過胎盤 多克隆抗體(polyclonal antibody) 第一代抗體 一、單克隆抗體和多克隆抗體 指由不同B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的針對抗原物質(zhì)中多種抗原決 定簇的多種抗

55、體混合物,如:免疫血清（含多種特異性抗體）。 應(yīng)用 免疫學(xué)檢測 被動免疫治療和緊急預(yù)防 存在問題 質(zhì)量難以控制，不易標(biāo)準(zhǔn)化， 特異性差, 用于免疫學(xué)檢測容易出現(xiàn)交叉反應(yīng)。 單克隆抗體(monoclonalantibody, McAb) 第二代抗體 由單個B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的、針對同一抗原表位的抗體。 特點： 高特異性、高均一性 應(yīng)用： 廣泛 項目 多克隆 單克隆 抗體產(chǎn)生細(xì)胞

56、多克隆型 單克隆性 抗體特異性 識別多種抗原表位 僅識別單一抗原表位 抗體種類 不同特異性、不同類別的混合物 同一類別、質(zhì)地均一、結(jié)構(gòu)一致 特異性與親和力 批與批之間不同，個體間有差異 特異性高，親和力一致 與其它抗原交叉反應(yīng) 常有 無 其他血清蛋白 較多 少或僅有小牛血清 與抗原發(fā)生沉淀反應(yīng) 有 無 McAb和多克隆抗體的比較 二、淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù) 1975年，由Kohler和Milstein建立 1984年，獲諾貝爾獎 免疫的淋巴細(xì)胞： 具有合成分泌抗體的功能 但不能在體外生長

57、。 骨髓瘤細(xì)胞：不能合成或分泌Ig。 具有在體外長期連續(xù)繼代的特性。 1. 原 理 雜交瘤細(xì)胞：合成抗體、能在體外長期連續(xù)傳代 2.單抗技術(shù)流程 聚乙二醇（PEG） 次黃嘌呤（H） 氨基蝶呤（A） 胸腺嘧啶核苷（T） 3 雜交瘤細(xì)胞的選擇性培養(yǎng) DNA合成的途徑： 糖+氨基酸 氨基喋呤

58、 (Aminopterin,A) TK 核苷酸 DNA 胸腺嘧啶核苷 TMP (Thymidine,T) 核苷酸前體 次黃嘌呤 HGPRT IMP (Hypoxanthine, H) （２）主要試劑　 融合劑：聚乙二醇（p

59、olyethylene glycol，PEG） HAT選擇培養(yǎng)基： 次黃嘌呤（H） 　　　　　　　　　氨基蝶呤（A） 　　　　　　　　　胸腺嘧啶核苷（T） 雜交瘤細(xì)胞染色體 SP2/0細(xì)胞染色體 三. 單克隆抗體的特性 高度均一性： 純度很高的均一性抗體 高度專一性： 只對抗原分子上某一抗原決定 簇起反應(yīng) 大量產(chǎn)生及穩(wěn)定性： 雜交瘤細(xì)胞能在體內(nèi)外無限繁殖 之傳代 四 .單克隆抗體在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用

60、 （一）用作診斷試劑 1. 檢測淋巴細(xì)胞表面分子，區(qū)分不同分化 階段的淋巴細(xì)胞，鑒別淋巴細(xì)胞。 2. 鑒定病原體，準(zhǔn)確診斷傳染病。 3. 用于腫瘤的診斷和分型 4. 激素類單抗用于測定體內(nèi)激素含量，判 斷內(nèi)分泌的功能狀態(tài) （二）用作研究工具 純化抗原 分析和探查抗原結(jié)構(gòu) 分析抗原決定簇分子的功能 （三）用于疾病的治療 抗細(xì)胞表面分子單抗，用于移植排斥反應(yīng)的防治 抗細(xì)胞因子單抗用于自身免疫性疾病的治療 抗腫瘤單抗用于腫瘤的導(dǎo)向治療 基因工程抗體(GeAb): 第三代抗體 由基因重組技術(shù)制備的抗體

61、,稱為基因工程抗體。 嵌合抗體 (chimeric Ab) 人源抗體（humanized Ab) 雙特異性抗體（bispecific Ab) Fab/ScFV（single chain FV fragment) 單域抗體（single chain Ab) 本章小結(jié) 幾幅圖：△ 幾個概念：抗體，單克隆抗體，多克隆抗體，免疫球蛋白，抗原結(jié)合部位，ADCC，F(xiàn)c，F(xiàn)ab ，CDR，中和作用(毒素和病毒)，中和抗體 幾個難點：抗體的抗原性，五大類抗體的理化特性及其生物學(xué)作用。 單體結(jié)構(gòu) 復(fù)習(xí)思考題 一、名

62、詞解釋: 1. Ab/Ig/SIg 2. 功能區(qū)/V區(qū)/超變區(qū)(CDR) 3. Fab/F(ab')2/Fab'/Fc/pFc 4. J鏈/分泌片/絞鏈區(qū) 5. 同種型/獨特位 6. 多克隆抗體/McAb 二、判斷改錯題 1. 抗體都是免疫球蛋白。(?) 2. 免疫球蛋白都是抗體。(′) 3. 由多個漿細(xì)胞產(chǎn)生的抗體就是多克隆抗體。(′) 4. 只有由單個漿細(xì)胞產(chǎn)生的抗體才是單克隆抗體。(′) 5. 位于同一B細(xì)胞克隆上的IgM和IgD，其V區(qū)特異性相 同。(?) 6. J鏈與分泌片由相同的細(xì)胞分泌，其生物學(xué)作用也 相同

63、。(′) 7. 所有類型的抗體都有J鏈與分泌片。(′) 8. 所有類型的抗體都由數(shù)目不等的單體組成。 (?) 9. 抗體是由B細(xì)胞分泌的。(′) 10. 所有類型的抗體都對機(jī)體有利。(′) 11. 所有的抗體都能激活補(bǔ)體。(′) 12. 所有的抗體都是保護(hù)性抗體。(′) 13. 所有的抗體都只存在于血清中。(′) 14. 抗體是由B細(xì)胞和漿細(xì)胞共同分泌的。 (′) 15. 除漿細(xì)胞外，其它細(xì)胞也能分泌抗體。 (′) 16. 抗體的單體由4條多肽鏈組成。 (′) 17. 抗體的CDR與高變區(qū)所指不是同一部位。 (′) 18. IgM的分子量最大，也是抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生的最早

64、 的抗體。 (?) 19. IgG分子量最小，但在機(jī)體的抗感染免疫中作用卻 最大。 (?) 20.抗體H鏈與L鏈可變區(qū)分別具有3個CDR，兩者相應(yīng)部位的CDR相互咬合，形成與特異AD相結(jié)合的咬合點。 (?) 21.抗體上的同種型AD位于H鏈的穩(wěn)定區(qū)。 (′) 22.抗體上的獨特型AD位于L鏈的穩(wěn)定區(qū)。 (′) 23.制備抗家兔IgG抗體，可用家兔免疫制備。 (′) 24.對家免而言，IgG是唯一能從母體通過胎盤轉(zhuǎn)移到胎兒體內(nèi)的免疫球蛋白。(?) 三、綜合題 1.簡述抗體的基本結(jié)構(gòu)及各功能區(qū)的功能。 2.簡述各類Ig的理化特性及生物學(xué)作用。 3.

65、McAb與常規(guī)血清抗體有何不同？可謂雜交瘤技術(shù)？其基本原理是什么？ Jules Bodet (1870-1961), Discoverer of Complement 1894 Bordet 發(fā)現(xiàn)綿羊抗霍亂血清能夠溶解霍亂弧菌，加熱56°C 30 min 阻止其活性；加入新鮮非免疫血清可恢復(fù)其活性。 第三章 補(bǔ) 體 以1895年Bordet的霍亂弧菌溶菌實驗為例? 抗 原 抗菌血清 正常人(豚鼠) 試驗結(jié)果 (細(xì)菌) 新鮮 56℃30min 新鮮血清 凝集 溶解 霍亂弧菌 +

66、 + + 霍亂弧菌 + + - 霍亂弧菌 + - - 霍亂弧菌 + + + + 推測結(jié)論： 1.新鮮血清中存在一種幫助抗體溶解細(xì)菌的成分 2. 這種成份化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定 3. 這種成份無抗原特異性 細(xì)菌的裂解需要兩種血清成分參與，一種是存在于免疫血清中經(jīng)56 ℃ 30min處理仍保持活性的特異免疫球蛋白分子，另一種是血清中對熱不穩(wěn)定的非特異性成分。 Ehrlich 在同時獨立發(fā)現(xiàn)了類似現(xiàn)象，認(rèn)為這種因子是抗體發(fā)揮溶細(xì)胞作用的必要補(bǔ)充條件，故將其命名為補(bǔ)體（complement，C） 一、補(bǔ)體系統(tǒng)概述 (一) 概念 1.補(bǔ)體（complement）：存在于人和動物正常新鮮血清中具有酶樣活性的一組不耐熱的球蛋白，是重要的非特異性免疫分子。 2.補(bǔ)體系統(tǒng)：參與