黑 龍 江 中 醫(yī) 藥 大 學(xué) - 黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)

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1、 黑 龍 江 中 醫(yī) 藥 大 學(xué) 教 案 課程名稱 中藥化學(xué) 使用教材 中藥化學(xué) 主講教師 匡海學(xué) 職務(wù)職稱 教授 實(shí)驗(yàn)名稱 實(shí)驗(yàn)一 苦參中氧化苦參堿和苦參堿的提取、分離、鑒定 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模? 1．掌握用離子交換法提取生物堿的原理和方法。 2．掌握利用苦參總堿中各生物堿溶解性差異分離氧化苦參堿方法。 3．了解和熟練應(yīng)用滲漉提取法及索式提取器連續(xù)回流提取。 4．掌握生物堿的常規(guī)定性檢識(shí)方法。 實(shí)驗(yàn)原理： 苦參生物堿有一定堿性，可與酸結(jié)合成鹽，因此采用酸水提取法?？偵飰A呈

2、陽離子狀態(tài)而被陽離子交換樹脂所交換，再用氨水堿化后生物堿游離以有機(jī)溶劑回流提取。利用總生物堿中氧化苦參堿在乙醚中難溶而與其它生物堿分離。 實(shí)驗(yàn)難點(diǎn) 離子交換樹脂法和生物堿的定性檢識(shí)方法 教學(xué)方法 少量課堂講授和實(shí)驗(yàn)指導(dǎo) 教 具 滲漉、回流提取裝置、薄層色譜裝置 實(shí) 驗(yàn) 進(jìn) 程 1.導(dǎo) 言（時(shí) 間）5－8min （1）中藥化學(xué)實(shí)驗(yàn)課具體要求。 （2）中藥化學(xué)實(shí)驗(yàn)的成績(jī)?cè)u(píng)定規(guī)定。 （3）試驗(yàn)報(bào)告書寫要求。 板 書 設(shè) 計(jì) 【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹? 1．掌握用離子交換法提取生物堿的原理和方法。 2．掌握利用苦參總堿中各生物堿溶解性差異分離氧化苦參堿的方法。 3．了

3、解和熟練應(yīng)用滲漉提取法及索式提取器連續(xù)回流提取。 4．掌握生物堿的常規(guī)定性檢識(shí)方法。 【實(shí)驗(yàn)原理】 苦參生物堿有一定堿性，可與酸結(jié)合成鹽，因此用酸水提取后，總生物堿呈陽離子狀態(tài)而被陽離子交換樹脂所交換，再用氨水堿化后生物堿游離，以有機(jī)溶劑回流提取。 【提取工藝】 苦參粗粉100g 以0.1%鹽酸100ml濕潤(rùn)半小時(shí)裝入滲漉中， 以0.1%鹽酸1100ml滲漉，速度1~2d/s。 滲漉液 2.講授（時(shí)間）（20－30min） 講課內(nèi)容 （1）離子交換樹脂型號(hào)、適應(yīng)類型及應(yīng)用 （2）離子交換樹脂法提取苦參總堿的原理 （3）苦參總

4、堿的溶解性 （4）生物堿的定性檢識(shí)方法 （5）索式提取器的使用 掌握要點(diǎn) （1）生物堿的定性檢識(shí)方法 （2）離子交換樹脂法的應(yīng)用 舉 例 離子交換樹脂法的應(yīng)用 提 問 苦參堿與氧化苦參堿的堿性和溶解性 生物堿的定性檢識(shí)方法 3.小結(jié)（時(shí)間）5－8min 總結(jié)本實(shí)驗(yàn)的基本情況，提出注意事項(xiàng)和新的要求。 4.布置作業(yè) （1）試驗(yàn)報(bào)告一周內(nèi)交齊 （2）預(yù)習(xí)第二個(gè)試驗(yàn) 通過裝濕重60g（60ml）樹脂的陽離子交換樹脂柱交換，交換速度1~2d/s。注意測(cè)定不同交換時(shí)間PH值的變化。（每隔15分鐘） 吸堿樹脂 將樹脂倒入燒杯中

5、，以蒸餾水洗至洗液無色抽濾后室溫晾干。將樹脂置燒杯中，加入濃氨水，拌勻（加氨水量以手握成團(tuán)但不粘手為度），密閉放置。 堿化樹脂 放置20分鐘，裝入濾紙袋置索氏提取器中以氯仿連續(xù)回流提取6~10小時(shí)，回收氯仿至盡，蒸去水分。 殘留物 以丙酮回流殘留物，抽濾，溶液回收部分丙 酮，加蓋放置，結(jié)晶，抽濾，干燥。 粗品總堿結(jié)晶 【精制工藝】 粗品總堿 以少量丙酮（粗品量的30~40倍）回流溶解，白色總堿全部溶解后過濾。 濾液 回收少量丙酮后加蓋放置，結(jié)晶后抽濾，干燥。 精品總堿（以氧化苦參堿為主） 【色譜鑒定】 色譜板：自制硅膠-CMC硬板

6、 樣 品：精品總堿氯仿液 對(duì)照品；氧化苦參堿的氯仿溶液 顯色劑：改良碘化鉍鉀試劑 展開劑：氯仿：甲醇：氨水（15：4：0.5） 結(jié) 果：樣品斑點(diǎn)與對(duì)照品斑點(diǎn)比較位置 并計(jì)算Rf值 【思考題】 （1）以反應(yīng)式表示出離子交換樹脂提取生物堿的原理。 （2）苦參堿滲漉中若氫離子濃度過高，通過樹脂時(shí)對(duì)交換有何影響？ 課題名稱 實(shí)驗(yàn)二 槐米中蘆丁的提取、分離、鑒定及槲皮素的制備 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模? 掌握黃酮成分的主要性質(zhì)、黃酮苷及苷元結(jié)構(gòu)研究的一般程序和方法。 通過蘆丁的結(jié)構(gòu)檢識(shí)，了解苷類化合物結(jié)構(gòu)研究的一般程序和方法。 根據(jù)溶解性掌握提取、分離蘆丁的方法。 實(shí)驗(yàn)原

7、理： 蘆丁為黃酮苷，利用其可溶于熱水、難溶于冷水的性質(zhì)進(jìn)行提取。又利用其在冷、熱醇中的溶解度差進(jìn)行重結(jié)晶法分離精制。蘆丁可被稀酸水解，生成的苷元及糖可通過定性反應(yīng)及色譜進(jìn)行鑒別。 實(shí)驗(yàn)重點(diǎn) 蘆丁的結(jié)構(gòu)檢識(shí)和提取分離方法 教學(xué)方法 少量課堂講授和實(shí)驗(yàn)指導(dǎo) 教 具 薄層色譜裝置 試 驗(yàn) 進(jìn) 程 1.導(dǎo)言（時(shí)間）3－5min （1）復(fù)習(xí)蘆丁和槲皮素的結(jié)構(gòu)和性質(zhì) （2）復(fù)習(xí)蘆丁的2種主要提取分離方法 板 書 設(shè) 計(jì) 【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹? 掌握黃酮成分的主要性質(zhì)、黃酮苷及苷元結(jié)構(gòu)研究的一般程序和方法。 通過蘆丁的結(jié)構(gòu)檢識(shí)，了解苷類化合物結(jié)構(gòu)研究的一般程序和方法。 根據(jù)溶

8、解性掌握提取、分離蘆丁的方法。 【實(shí)驗(yàn)原理】 蘆丁為黃酮苷，利用其可溶于熱水、難溶于冷水的性質(zhì)進(jìn)行提取。又利用其在冷、熱醇中的溶解度差進(jìn)行重結(jié) 晶法分離精制。蘆丁可被稀酸水解，生成的苷元及糖可通過定性反應(yīng)及色譜進(jìn)行鑒別。 【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】 1、提?。? 槐花米20g（稍研磨） 以500ml的燒杯直火燒400ml蒸餾水，沸后將槐花米投入，繼續(xù)加熱保持微沸30分鐘，四層紗布過濾。藥渣再加水250ml，煮沸20分鐘，同上過濾，合并兩次濾液。 藥 渣 濾 液 放置4~5小時(shí)，抽濾至干

9、 濾 液 沉 淀 2.講授（時(shí)間）20－25min 講課內(nèi)容 （1）蘆丁的提取方法 （2）蘆丁的精制方法 （3）蘆丁的水解方法 （4）蘆丁、槲皮素的鑒定 掌握要點(diǎn) （1）蘆丁的提取、精制方法 （2）蘆丁的檢識(shí)方法 舉 例 提 問 黃酮類化合物的主要性質(zhì) 100℃以下干燥 粗品蘆丁 2、精制：粗品蘆丁 加甲醇15~20ml，水浴加熱（空氣冷凝）溶解， 至無黃色物，趁熱過濾。 沉

10、淀 濾 液 放置，待結(jié)晶析出，抽濾至干 沉 淀 干燥 精品蘆丁 3、水解：精品蘆丁0.5g 放入150ml圓底燒瓶中，加入2%稀硫酸50ml, 空氣冷凝直火加熱（電爐上放石棉網(wǎng)）40分鐘，趁熱過濾。 沉 淀 濾 液 水洗至中性 取10ml，加氫氧化鋇約 抽濾、干燥。 1g調(diào)PH7.5，過濾。 槲皮素 沉淀 濾液 水浴濃縮至1~2ml 濃縮液（備檢查

11、糖用） 4、蘆丁、槲皮素的鑒定 （1）試管定性反應(yīng)： ①HCI-Mg粉反應(yīng)：取樣品的乙醇溶液1ml加少許鎂粉，再加濃HCI 1~2滴，觀察顏色。 ②FeCl3反應(yīng)：取樣品的乙醇溶液1ml加1%的FeCl3乙醇溶液2~3滴，觀察顏色。 ③中性醋酸鉛反應(yīng)：取樣品的乙醇溶液1ml加5%的中性醋酸鉛溶液1~2滴，觀察現(xiàn)象。 ④α-萘酚、濃H2SO4反應(yīng)：取樣品的乙醇溶液1ml加α-萘酚試液1~ 2滴后振搖，然后沿管壁加適量濃H2SO4，觀察兩界面處的顏色。 （2）AlCl3紙斑反應(yīng) ; 取樣品的乙醇溶液，在濾紙上各滴一個(gè)點(diǎn)，干燥后置紫外燈下觀察熒光。然后在原斑點(diǎn)上噴AlCl3，干燥后重

12、新置紫外光燈下觀察熒光。 3.小結(jié)（時(shí)間）5－8min 總結(jié)本實(shí)驗(yàn)的基本情況，提出注意事項(xiàng)和新的要求。 4.布置作業(yè) （1）試驗(yàn)報(bào)告一周內(nèi)交齊。 （2）思考題 ① 據(jù)黃酮類化合物的性質(zhì)，再設(shè)計(jì)一種提取蘆丁的方法。 ② 苷類水解有幾種方法？ ③ 怎樣證明蘆丁分子中只含有一分子葡萄糖和一分子鼠李糖？ ④ 如何確定蘆丁結(jié)構(gòu)中的糖連在槲皮素的3-OH上？ 5、糖的檢識(shí)（徑向紙色譜） 展開劑：正丁醇：冰醋酸：水（4：1：5）上層 顯色劑：鄰苯二甲酸-苯胺試劑（95℃烘干） 樣 品：水解濃縮液 對(duì)照品：葡萄糖、鼠李糖的水溶液 展開方

13、式：徑向 結(jié) 果：對(duì)照樣品斑點(diǎn)及對(duì)照品斑點(diǎn)位置并計(jì)算Rf值。 6、蘆丁及槲皮素紫外光譜測(cè)定 （1）蘆丁溶液的配制 精密稱取蘆丁純品1g，用無水甲醇溶解，并稀釋至10ml，從中吸取5ml，置50ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度。 （2）槲皮素溶液的配制 精密稱取槲皮素純品1g，用無水甲醇溶解，并稀釋至10ml，從中吸取5ml，置50ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度。 （3）蘆丁及槲皮素紫外光譜測(cè)定 ① 甲醇光譜：取樣品置石英杯中，加入甲醇鈉溶液3滴后，立即測(cè)定，放置5分鐘后再測(cè)定一次。 ② 甲醇鈉光譜：取樣品置石英杯中，200－500nm進(jìn)行掃描，重復(fù)一次，觀察紫外光譜。 ③

14、三氯化鋁光譜：在盛有樣品液的石英杯中，加入三氯化鋁6滴，放置1分鐘后進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定后加入3滴鹽酸溶液（鹽酸：水＝1：1）再進(jìn)行測(cè)定。 ④ 乙酸鈉光譜：取樣品液約3ml，加入過量的無水乙酸鈉固體，搖勻（杯底剩約2ml的乙酸鈉），加入乙酸鈉后2分鐘內(nèi)進(jìn)行測(cè)定，5分鐘到10分鐘再測(cè)定一次。 ⑤ 乙酸鈉－硼酸光譜：在測(cè)定用的盛有樣品液和乙酸鈉00溶液的石英杯中加入足夠量的硼酸使成飽和溶液進(jìn)行測(cè)定。 課 題 第六章 黃酮類化合物 第六節(jié) 結(jié)構(gòu)研究 教學(xué)目的 1、掌握1H-NMR在黃酮類化合物結(jié)構(gòu)研究中的應(yīng)用 2、掌握13C-NMR在黃酮類化合物結(jié)

15、構(gòu)研究中的應(yīng)用 教學(xué)重點(diǎn) 1、1H-NMR光譜特征 2、13C-NMR光譜特征 教學(xué)難點(diǎn) 1、1H-NMR光譜特征 2、13C-NMR光譜特征 教學(xué)方法 講授 教 具 多媒體幻燈片 教學(xué)進(jìn)程 1.導(dǎo)言（時(shí)間）：3～5分鐘 1H-NMR譜是黃酮類化合物結(jié)構(gòu)研究的一種重要方法，具有簡(jiǎn)便、快速而且可獲得大量信息等優(yōu)點(diǎn)。13C-NMR也以廣泛應(yīng)用于黃酮類化合物結(jié)構(gòu)研究，下面我們就這兩種方法逐一進(jìn)行。 復(fù)習(xí)提問 1、何謂診斷試劑？常用黃酮類化合物的診斷試劑有哪幾種？ 2、如何利用UV光譜區(qū)別黃酮和黃酮醇類化合物？ 板書設(shè)計(jì) 第六節(jié) 結(jié)構(gòu)研究 二

16、、1H-NMR的應(yīng)用 （一）C環(huán)質(zhì)子 （二）A環(huán)質(zhì)子 1、5、7－二OH黃酮類化合物 2、7－OH黃酮類化合物 （三）B環(huán)質(zhì)子 1、4＇－含氧取代 2、3＇、4＇－二氧取代 2.講授（時(shí)間）：80~85分鐘 課題內(nèi)容 第六章 黃酮類化合物 第六節(jié) 結(jié)構(gòu)研究 掌握要點(diǎn) 1、1H-NMR在黃酮類化合物結(jié)構(gòu)研究中的應(yīng)用 2、13C-NMR在黃酮類化合物結(jié)構(gòu)研究中的應(yīng)用 舉 例 各光譜數(shù)據(jù)。 提 問 綜合解析課堂練習(xí) 3.小結(jié)（時(shí)間）：3～5分鐘 今天的內(nèi)容是重點(diǎn)，又是難點(diǎn)，大家可能覺得有些吃力，不過沒關(guān)系，多做一些練

17、習(xí)題效果就會(huì)好多了。老師也盡量慢點(diǎn)講，讓大家慢慢理解、吸收。 4.布置作業(yè) 1、習(xí)題集本章相應(yīng)練習(xí)題。 3．3＇、4＇、5＇－三氧取代 （四）糖基上質(zhì)子 1、單糖苷類 2、雙糖苷類 三、13C-NMR的應(yīng)用 1、基本母核的碳信號(hào) 2、取代后的模式 *課堂練習(xí) 課 題 第六章 黃酮類化合物 第六節(jié) 結(jié)構(gòu)研究 第七節(jié) 天然藥物實(shí)例 教學(xué)目的 1、掌握黃酮類化合物MS的一般裂解規(guī)律 2、掌握含黃酮類化合物的天然藥物實(shí)例（化學(xué)成分、性質(zhì)及提取分離） 教學(xué)重點(diǎn) 1、黃酮類化合物MS的裂解規(guī)律 2、天然藥物實(shí)例

18、（槐米、黃芩） 教學(xué)難點(diǎn) MS裂解規(guī)律。 教學(xué)方法 講授（討論） 教 具 多媒體幻燈片 教學(xué)進(jìn)程 1.導(dǎo)言（時(shí)間）：3～5分鐘 MS在黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)研究中作用很大，近來隨著FD-MS和FAB-MS及ESI-MS等軟電離質(zhì)譜技術(shù)的應(yīng)用，使得質(zhì)譜在黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)研究中的應(yīng)用更加廣泛。 復(fù)習(xí)提問 1、黃酮、黃酮醇類的C環(huán)質(zhì)子有何區(qū)別（1H-NMR） 2、黃酮、黃酮醇類的C環(huán)碳原子個(gè)有何特征？（13C-NMR ） 板書設(shè)計(jì) 第六節(jié) 結(jié)構(gòu)研究 四、MS在黃酮類化合物中的應(yīng)用 （一）游離黃酮 （二）黃酮苷類 五、黃酮類化合物綜合光譜解析

19、練習(xí) 第七節(jié) 天然藥物實(shí)例 2.講授（時(shí)間）：80－85分鐘 課題內(nèi)容 第六章 黃酮類化合物 第六節(jié) 結(jié)構(gòu)研究 第七節(jié) 天然藥物實(shí)例 掌握要點(diǎn) 1、黃酮類化合物MS的裂解規(guī)律 2、天然藥物實(shí)例的化學(xué)成分，性質(zhì)及提取分離

20、 舉 例 1、提取分離工藝流程 2、MS裂解式 提 問 本次課不設(shè)提問，課堂練習(xí)采用討論的方式進(jìn)行 3.小結(jié)（時(shí)間）：3～5分鐘 黃酮類化合物今天就全部講完了，大家腦海里是否已經(jīng)有了比較清晰、明確的知識(shí)體系？如果還沒有，說明你復(fù)習(xí)的不及時(shí)，或者課堂上沒有跟上老師的思路，總之提醒大家一句，要及時(shí)復(fù)習(xí)，不要欠帳。 4.布置作業(yè) 1、習(xí)題集本章相應(yīng)練習(xí)題。 一、槐米 1、化學(xué)成分及性質(zhì) 2、提取分離 二、黃芩 1、化學(xué)成分及性質(zhì) 2、提取分離 三、葛根 1、化學(xué)成分 2、提取分離 四、銀杏葉 1、化學(xué)成分 2、提取分離 *課堂練習(xí)