《生物化學(xué)實驗》(精)(1)

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1、Four short words sum up what has lifted most successful individuals above the crowd: a little bit more. ------------------------------------------author ------------------------------------------date 《生物化學(xué)實驗》(精)(1) 《生物化學(xué)實驗》 《生物化學(xué)實驗》 教學(xué)方案 湖南文理學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院學(xué)院 生化與分子生物學(xué)教

2、研組 實驗一 蛋白質(zhì)的性質(zhì)實驗（1）—蛋白質(zhì)和氨基酸的呈色反應(yīng) 授課題目：蛋白質(zhì)的性質(zhì)實驗（1）——蛋白質(zhì)和氨基酸的呈色反應(yīng)（3學(xué)時） 授課對象：生科、農(nóng)學(xué)、動科專業(yè) 授課教師： 教學(xué)目標(biāo)及基本要求： 1、了解蛋白質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)單位及主要連接方式。 2、了解某些蛋白質(zhì)和氨基酸的呈色反應(yīng)原理。 3、學(xué)習(xí)幾種常見的鑒定蛋白質(zhì)和氨基酸的方法。 教學(xué)內(nèi)容提要及時間分配： 1、實驗原理講解： 12分鐘 ?雙縮脲反應(yīng)的原理

3、 ?茚三酮反應(yīng)的原理 ?黃色反應(yīng)的原理 ?坂口反應(yīng)的原理 ?考馬斯亮藍反應(yīng)的原理 2、實驗試劑與器材

4、 2分鐘 3、實驗步驟講解： 10分鐘 4、總結(jié)。 2分鐘 教學(xué)重點及難點： 1、?雙縮脲反應(yīng)的原理。 2、蛋白質(zhì)、氨基酸與水合茚三酮的顯色反應(yīng)。 教學(xué)方法： 采用啟發(fā)式教學(xué)，結(jié)合理論，對實驗步驟進行分析并給于適當(dāng)示范。 教學(xué)手段（掛圖、幻燈、多媒體…等）： 采用板書等手段進行教學(xué)。 使用的教材及參考資料

5、： 1、生物化學(xué)實驗指導(dǎo)，自編講義。 2、基礎(chǔ)生物化學(xué)實驗，高等教育出版社，王秀奇 主編，第二版，2003年。 思考題： 1、如果蛋白質(zhì)水解后雙縮脲反應(yīng)呈陰性時，可以對水解反應(yīng)程度作出什么樣的推論？ 2、茚三酮反應(yīng)的陽性結(jié)果為何顏色？能否用茚三酮反應(yīng)可靠鑒定蛋白質(zhì)的存在？ 3、考馬斯亮藍G-250法測定蛋白質(zhì)含量的原理是什么？ 4、如何正確使用分光光度計？ 5、測定蛋白質(zhì)含量還有哪些方法，測定原理有哪些不同？ 本單元教學(xué)總結(jié)（教學(xué)的主要經(jīng)驗、效果、存在的問題、改進措施等） 1、 結(jié)合理論內(nèi)容講述實驗內(nèi)容，效果較好。 2、 強調(diào)實驗基本操作規(guī)范，讓學(xué)生養(yǎng)成良好的實驗習(xí)慣，

6、具有扎實的實驗技能。 實驗二 蛋白質(zhì)的性質(zhì)實驗（2）—蛋白質(zhì)等電點的測定和沉淀反應(yīng) 授課題目：蛋白質(zhì)的性質(zhì)實驗（2）——蛋白質(zhì)等電點的測定和沉淀反應(yīng)（3學(xué)時） 授課對象：生科、農(nóng)學(xué)、動科專業(yè) 授課教師： 教學(xué)目標(biāo)及基本要求： 1、了解蛋白質(zhì)的兩性解離性質(zhì)。 2、學(xué)習(xí)測定蛋白質(zhì)等電點的一種方法。 3、加深對蛋白質(zhì)膠體溶液穩(wěn)定因素的認識。 4、了解沉淀蛋白質(zhì)的幾種方法及其實用意義。 5、了解蛋白質(zhì)變性與沉淀的關(guān)系。 教學(xué)內(nèi)容提要及時間分配： 1、實驗原理講解：

7、 10分鐘 ???蛋白質(zhì)的兩性解離性質(zhì) ??蛋白質(zhì)等電點的概念 ???? ??測蛋白質(zhì)溶解度最低時的溶液pH值為其等電點 ?穩(wěn)定蛋白質(zhì)親水膠體顆粒的因素 ?蛋白質(zhì)沉淀反應(yīng)的類型 2、實驗操作講解： 10分鐘 ??蛋白質(zhì)的鹽析 ??重金屬離子沉淀蛋白質(zhì) ??某些有機酸沉淀蛋白質(zhì) ??有機溶劑沉淀蛋白質(zhì) ??乙醇引起的變性與沉淀 3、總結(jié)。

8、 2分鐘 教學(xué)重點及難點： 1、?穩(wěn)定蛋白質(zhì)親水膠體顆粒的因素。 2、蛋白質(zhì)變性與沉淀的關(guān)系。 教學(xué)方法： 采用啟發(fā)式教學(xué)，結(jié)合理論，對實驗步驟進行分析并給于適當(dāng)示范。 教學(xué)手段（掛圖、幻燈、多媒體…等）： 板書，PPT。 使用的教材及參考資料： 1、生物化學(xué)實驗指導(dǎo)，自編講義 2、基礎(chǔ)生物化學(xué)實驗，高等教育出版社，王秀奇 主編，第二版，2003年 思考題： 1、穩(wěn)定蛋白質(zhì)親水膠體顆粒的因素有哪些？ 2、蛋白質(zhì)變性與沉淀的關(guān)系。 3、解釋蛋白質(zhì)兩性反應(yīng)中顏色及沉淀變化的原

9、因。 4、該方法測定蛋白質(zhì)等電點的原理是什么？ 本單元教學(xué)總結(jié)（教學(xué)的主要經(jīng)驗、效果、存在的問題、改進措施等） 1、 結(jié)合理論內(nèi)容講述實驗內(nèi)容，效果較好。 2、 強調(diào)實驗基本操作規(guī)范，培養(yǎng)學(xué)生對實驗現(xiàn)象的觀察和實驗結(jié)果的思考。 實驗三 牛乳中蛋白質(zhì)的提取與鑒定 授課題目：牛乳中蛋白質(zhì)的提取與鑒定（3學(xué)時） 授課對象：生科、農(nóng)學(xué)、動科專業(yè) 授課教師： 教學(xué)目標(biāo)及基本要求 1、學(xué)習(xí)從牛乳中制備酪蛋白的原理和方法。 教學(xué)內(nèi)容提要及時間分配 1、實驗原理講解：

10、 8分鐘 ??????蛋白質(zhì)在其等電點pH溶液中溶解度降底。根據(jù)這個原理，將牛乳的pH調(diào)整至4.8，即酪蛋白的等電點時，酪蛋白即沉淀出來。用乙醇除去酪蛋白沉淀中不溶于水的脂肪，得到純的酪蛋白 ??????所得酪蛋白的定性鑒定? 2、實驗條件及步驟講解： 7分鐘 ???酪蛋白的制備 ? ??酪蛋白的性質(zhì)鑒定 ? ??乳清中可凝固性蛋白質(zhì)的鑒定 教學(xué)重點及難點：酪蛋白的制備。 教學(xué)方法： 1、結(jié)合理論實際，深入淺出。 2、實驗操作過程給于示教。 教學(xué)手段（掛圖、幻燈

11、、多媒體??等） 板書，PPT。 使用的教材及參考資料 1、生物化學(xué)實驗指導(dǎo)，自編講義 2、基礎(chǔ)生物化學(xué)實驗，高等教育出版社，王秀奇 主編，第二版，2003年 思考題： 1、牛乳中制備酪蛋白的原理和方法。 本單元教學(xué)總結(jié)（教學(xué)的主要經(jīng)驗、效果、存在問題、改進措施等） 1、實驗內(nèi)容結(jié)合理論內(nèi)容進行講述，效果較好。 2、強調(diào)實驗基本操作規(guī)范，讓學(xué)生養(yǎng)成良好的實驗習(xí)慣，具有扎實的實驗技能。 實驗四 氨基酸的分離鑒定——紙層析法 授課題目：氨基酸的分離鑒定——紙層析法（3學(xué)時） 授課對象：生科、農(nóng)學(xué)、動科專業(yè) 授課教師：

12、 教學(xué)目標(biāo)及基本要求 通過氨基酸的分離，學(xué)習(xí)紙層析法的基本原理及操作方法。 教學(xué)內(nèi)容提要及時間分配 1、實驗原理的說明 10分鐘 ?紙層析法是用濾紙作為惰性支持物的分配層析法 ?層析溶劑由有機溶劑和水組成 ?物質(zhì)被分離后在紙層析圖譜上的位置是用Rf值（比移）來表示 ?在一定的條件下某種物質(zhì)的Rf值是常數(shù)。Rf值的大小與物質(zhì)的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、溶劑系統(tǒng)、層析濾紙的質(zhì)量和層析溫度等因素有關(guān)。 2、實驗操作講解： 5分鐘

13、 教學(xué)重點及難點 1 、擴展劑的制備。 2、 氨基酸樣品的點樣。 教學(xué)方法 理論與實際相結(jié)合，深入淺出，培養(yǎng)學(xué)生綜合運用所學(xué)課程知識。實驗過程中向?qū)W生提出問題，讓學(xué)生在實驗中觀察思考，提高學(xué)生的分析問題，解決問題的能力。 教學(xué)手段（ 掛圖、幻燈、多媒體. .等） 板書，PPT，示教。 使用的教材及參考資料 1、生物化學(xué)實驗指導(dǎo)，自編講義 2、基礎(chǔ)生物化學(xué)實驗，高等教育出版社，王秀奇 主編，第二版，2003年 思考題： 1、何謂Rf值？影響Rf值的主要因素是什么？ 2、層析缸中平衡溶劑的作用是什么？ 3、濾紙為什么要在層析缸中預(yù)先懸空密封飽和30min？

14、 4、展開時為什么要調(diào)節(jié)濾紙使溶劑前沿線平行于點樣線？ 5、實驗結(jié)果為什么有時會產(chǎn)生拖尾、相鄰氨基酸分不開等異?，F(xiàn)象？ 本單元教學(xué)總結(jié)（教學(xué)的主要經(jīng)驗、效果、存在的問題、改進措施等） 在實驗中向?qū)W生提問題，可增強學(xué)生的好奇心，對于理解實驗原理很有幫助。 實驗五 酶的特性（設(shè)計型實驗） 授課題目：酶的特性（設(shè)計型實驗）（6學(xué)時） 授課對象：生科、農(nóng)學(xué)、動科專業(yè) 授課教師： 教學(xué)目標(biāo)及基本要求 1、加深對酶的性質(zhì)的認識：本實驗由溫度對酶活力的影響；PH對酶活力的影響；酶的激活劑及抑制；酶的專一性4組實驗組成。 2、學(xué)會設(shè)計并實施影響酶催化活性因素的實驗方案

15、。 教學(xué)內(nèi)容提要及時間分配 1、實驗原理講解： 10分鐘 ?酶的催化作用受溫度的影響。在最適溫度下，酶的反應(yīng)速度最高。大多數(shù)動物酶的最適溫度為37-40℃，植物酶的最適溫度為50-60℃ ?酶的活力受環(huán)境pH的影響極為顯著。不同酶的最適pH值不同 ?酶的活性受活化劑或抑制劑的影響 ?酶具有高度的專一性，淀粉和蔗糖無還原性 2、實驗設(shè)計方案講解： 5分鐘 ? 教學(xué)重點及難點 1、影響酶催化活性的因素。 2

16、、實驗方案設(shè)計及原理方法選擇。 教學(xué)方法：結(jié)合理論實際，深入淺出。實驗操作過程給于示教。 教學(xué)手段（掛圖、幻燈、多媒體??等） 多媒體，板書，畫圖，示教。 使用的教材及參考資料 1、生物化學(xué)實驗指導(dǎo)，自編講義 2、基礎(chǔ)生物化學(xué)實驗，高等教育出版社，王秀奇 主編，第二版，2003年 思考題： 1、?實驗方法設(shè)計及選擇的原理和依據(jù) 2、? 進行設(shè)計性實驗的經(jīng)驗與體會 3、什么是酶的最適溫度及其應(yīng)用意義？ 4、什么是酶反應(yīng)的最適pH？對酶活性有什么影響？ 5、什么是酶的活化劑？ 6、什么是酶的抑制劑？與變性劑有何區(qū)別？ 本單元教學(xué)總結(jié)（教學(xué)的主要經(jīng)驗、效果、存在的問題、改

17、進措施等） 1、 學(xué)生實驗結(jié)合理論內(nèi)容進行自行設(shè)計，講述實驗設(shè)計方法，效果較好。 2、 學(xué)生自己設(shè)計實驗方案，探討影響酶催化活性的因素，培養(yǎng)學(xué)生分析和解決實際問題的能力，提高學(xué)生的主動性和創(chuàng)造性，得到能力的培養(yǎng)。 實驗六 酵母核糖核酸的分離及組分鑒定 授課題目：酵母核糖核酸的分離及組分鑒定 （3學(xué)時） 授課對象：生科、農(nóng)學(xué)專業(yè) 授課教師： 教學(xué)目標(biāo)及基本要求： 了解核酸的組分，并掌握鑒定核酸組分的方法。 教學(xué)內(nèi)容提要及時間分配： 1、實驗原理講解： 10分鐘 ?酵母

18、核酸中RNA含量較多。RNA可溶于堿性溶液，在堿提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此即得到RNA的粗制品。核糖核酸含有核糖、嘌呤堿、嘧啶堿和磷酸各組分。加硫酸煮沸可使其水解，從水解液中可以測出上述組分的存在。 2、實驗操作講解： 5分鐘 3、總結(jié) 2分鐘 教學(xué)重點及難點： 核酸組分鑒定的實驗依據(jù)。 教學(xué)方法： 理論結(jié)合實踐，深入淺出。實驗操作過程給予示教。

19、 教學(xué)手段： 板書，PPT，示教。 使用的教材及參考資料 1、生物化學(xué)實驗指導(dǎo)，自編講義 2、基礎(chǔ)生物化學(xué)實驗，高等教育出版社，王秀奇 主編，第二版，2003年 思考題： 1、如何得到高產(chǎn)量RNA的粗制品？ 2、現(xiàn)有三瓶未知溶液，已知它們分別為蛋白質(zhì)、糖和RNA，采用什么試劑和方法鑒定？（自行設(shè)計簡便的實驗） 本單元教學(xué)總結(jié)： 對學(xué)生的實驗預(yù)習(xí)、實驗紀律、實驗操作、實驗報告、實驗整理等環(huán)節(jié)進行督導(dǎo)，使學(xué)生養(yǎng)成良好的實驗習(xí)慣，提高實驗技能。 實驗七 紫外分光光度法測定核酸的含量 授課題目：紫外分光光度法測定核酸的含量 （3學(xué)時） 授課對象：生科

20、、農(nóng)學(xué)、動科專業(yè) 授課教師： 教學(xué)目標(biāo)及基本要求 1、了解紫外分光光度計的基本原理和使用方法。 2、學(xué)習(xí)用紫外分光光度法測定核酸含量的原理和操作方法。 教學(xué)內(nèi)容提要及時間分配 1、實驗原理講解： 10分鐘 ?核酸、核苷酸及其衍生物都具有共軛雙鍵系統(tǒng)，能吸收紫外光。RNA和DNA的紫外吸收高峰在A260nm波長處。一般在A260波長下，每mL含1ugRNA溶液的光吸收值為0.020。故測定未知濃度RNA或DNA溶液A260nm波長的光吸收值即可計算出其中核酸的含量。此法操作簡便

21、。若樣品內(nèi)混雜有大量的核苷酸或蛋白質(zhì)等能吸收紫外光的物質(zhì)，則測定誤差較大，故應(yīng)設(shè)法預(yù)除去。 2、實驗操作講解： 5分鐘 ? 紫外分光光度計的使用 教學(xué)重點及難點 1、核酸的制備 2、紫外分光光度計的使用 教學(xué)方法： 理論結(jié)合實踐，深入淺出。實驗操作過程給予示教。 教學(xué)手段（掛圖、幻燈、多媒體??等） 板書，PPT，示教。 使用的教材及參考資料 1、生物化學(xué)實驗指導(dǎo)，自編講義 2、基礎(chǔ)生物化學(xué)實驗，高等教育出版社，王秀奇 主編，第二版，2003年

22、思考題或作業(yè)： 1、紫外分光光度計的使用方法和操作要點？ 2、若樣品中含有蛋白質(zhì)和核苷酸等雜質(zhì)，如何排除干擾？ 本單元教學(xué)總結(jié)（教學(xué)的主要經(jīng)驗、效果、存在的問題、改進措施等） 1、強調(diào)實驗基本操作規(guī)范，讓學(xué)生養(yǎng)成良好的實驗習(xí)慣，具有扎實的實驗技能。 實驗八　維生素C的定量測定 授課題目：維生素C的定量測定 （3學(xué)時） 授課對象：生科、農(nóng)學(xué)、動科專業(yè) 授課教師： 教學(xué)目標(biāo)及基本要求 1、學(xué)習(xí)維生素C定量測定法的原理和方法。 2、進一步熟悉、掌握微量商定法的基本操作技術(shù)。 教學(xué)內(nèi)容提要及時間分配 1、實驗原理講解：

23、 8分鐘 ?測定維生素C（抗壞血酸）的化學(xué)方法，一般是根據(jù)它的還原性。本實驗即利用維生素C的這一性質(zhì)，使其與2,6-二氯酚靛酚作用。2,6-二氯酚靛酚鈉鹽的水溶液呈藍色，在酸性環(huán)境中為玫瑰色，當(dāng)其被還原時，則脫色。 2、實驗操作講解： 5分鐘 教學(xué)重點及難點 1、 含維生素C的樣品提取液的制備 2、 熟練掌握滴定操作 教學(xué)方法 理論結(jié)合實踐，深入淺出

24、。實驗操作過程給予示教。 教學(xué)手段（幻燈、多媒體等） 板書，PPT，示教。 使用的教材及參考資料 1、生物化學(xué)實驗指導(dǎo)，自編講義 2、基礎(chǔ)生物化學(xué)實驗，高等教育出版社，王秀奇 主編，第二版，2003年 思考題： 試述本實驗介紹的2,6-二氯酚靛酚滴定法的優(yōu)缺點。 本單元教學(xué)總結(jié)（教學(xué)的主要經(jīng)驗、效果、存在問題、改進措施等） 1、實驗內(nèi)容結(jié)合理論內(nèi)容進行講述，效果較好。 2、強調(diào)實驗基本操作規(guī)范，讓學(xué)生養(yǎng)成良好的實驗習(xí)慣，具有扎實的實驗技能。 實驗九　血糖的定量測定—GOD-PAP法 授課題目：血糖的定量測定—GOD-PAP法 （3學(xué)時） 授課對

25、象：生科、動科專業(yè) 授課教師： 教學(xué)目標(biāo)及基本要求 學(xué)習(xí)用GOD-PAP法測定血糖含量。 教學(xué)內(nèi)容提要及時間分配 1、實驗原理講解： 8分鐘 ?動物血液中的糖主要是葡萄糖，正常情況下，其含量較恒定。健康家兔的血糖水平為80-120mg/dL。GOD-PAP法，即過氧化物酶-抗過氧化物酶法是近幾年臨床血糖定量測定普遍采用的方法。該法測定血糖依據(jù)的酶反應(yīng)為： 葡萄糖 氨基安替比林＋酚醌亞胺＋ 醌亞胺在A480nm~A550nm波長有最大吸收，所產(chǎn)生顏色的深淺與血清中葡

26、萄糖的量成正比。 2、實驗操作講解： 5分鐘 教學(xué)重點及難點： 樣品中葡萄糖濃度的計算方法。 教學(xué)方法： 1、結(jié)合理論實際，深入淺出。 2、實驗操作過程給于示教。 教學(xué)手段（掛圖、幻燈、多媒體??等） 板書，PPT，示教。 使用的教材及參考資料 1、生物化學(xué)實驗指導(dǎo)，自編講義 2、基礎(chǔ)生物化學(xué)實驗，高等教育出版社，王秀奇 主編，第二版，2003年 思考題： 1、 制取樣品時應(yīng)主要什么？ 2、 體液血糖測定有哪些方法 本單元教學(xué)總結(jié)（教學(xué)的主要

27、經(jīng)驗、效果、存在問題、改進措施等） 1、實驗內(nèi)容結(jié)合理論內(nèi)容進行講述，效果較好。 2、強調(diào)實驗基本操作規(guī)范，讓學(xué)生養(yǎng)成良好的實驗習(xí)慣，具有扎實的實驗技能。 實驗十 DNA的瓊脂糖凝膠電泳 授課題目：DNA的瓊脂糖凝膠電泳（3學(xué)時） 授課對象：生科、農(nóng)學(xué)、動科專業(yè) 授課教師： 教學(xué)目標(biāo)及基本要求 1、了解瓊脂糖凝膠電泳的原理和使用范圍。 2、了解瓊脂糖凝膠電泳的操作技術(shù)。 教學(xué)內(nèi)容提要及時間分配 1、實驗原理講解： 10分鐘 ? DNA片斷瓊

28、脂糖凝膠電泳的原理與蛋白質(zhì)的電泳原理基本相同，DNA分子在高于其等電點的pH溶液中帶負電荷，在電場中向正極移動。DNA分子在電場中通過介質(zhì)而泳動，除電荷效應(yīng)外，凝膠介質(zhì)還有分子篩效應(yīng)，與分子大小及構(gòu)想有關(guān)。對于線形DNA分子，其電場中的遷移率與其分子量的對數(shù)值成反比。 ?在凝膠中加入少量溴化乙錠，其分子可插入DNA的堿基之間，形成一種光絡(luò)合物，在254~365nm波長紫外光照射下，呈現(xiàn)桔紅色的熒光，因此可對分離的DNA進行檢測。 ?電泳時以溴酚藍及二甲苯氰（藍）作為雙色電泳指示劑。其目的有：①增大樣品密度，確保DNA均勻進入樣品孔內(nèi)；②使樣品呈現(xiàn)顏色，了解樣品泳動情況，使操作更為便利；③以

29、0.5×TBE做電泳液時溴酚藍的泳動率約與長300bp的雙鏈DNA相同，二甲苯氰（藍）則與4 kb的DNA相同。 2、實驗操作講解： 5分鐘 ?瓊脂糖凝膠的制備 ?樣品配制與加樣 ?電泳 ?觀察和拍照 3、凝膠成像系統(tǒng)的使用 2分鐘 教學(xué)重點及難點 1、? 利用電泳方法分離核酸的原理。 2、? 如何使用電泳儀和水平式電泳槽。 3、? 凝膠的制備和加樣操作。 教學(xué)方法 結(jié)合理論實際，深入

30、淺出。實驗操作過程給于示教和個別指導(dǎo)。 教學(xué)手段（多媒體、錄像等） PPT，錄像，示教。 使用的教材及參考資料 1、生物化學(xué)實驗指導(dǎo)，自編講義 2、基礎(chǔ)生物化學(xué)實驗，高等教育出版社，王秀奇 主編，第二版，2003年 思考題： 1、 DNA在電場中的遷移率取決于哪些因素？ 2、 瓊脂糖凝膠有哪些注意事項？ 本單元教學(xué)總結(jié)（教學(xué)的主要經(jīng)驗、效果、存在的問題、改進措施等） 首先讓學(xué)生觀看錄像，要求學(xué)生注意電泳技術(shù)的基本原理和基本操作。在此基礎(chǔ)上，學(xué)生進入實驗操作階段。 實驗十一　蛋白質(zhì)的透析 授課題目：蛋白質(zhì)的透析（3學(xué)時） 授課對象：生科專業(yè) 授課教師：

31、 教學(xué)目標(biāo)及基本要求 學(xué)習(xí)透析的基本原理和操作 教學(xué)內(nèi)容提要及時間分配 1、實驗原理講解： 3分鐘 ?蛋白質(zhì)是大分子物質(zhì)，它不能透過透析膜而小分子物質(zhì)可以自由透過。在分離提純蛋白質(zhì)的過程中，常利用透析的方法使蛋白質(zhì)與其中夾雜的小分子物質(zhì)分開。 2、實驗操作講解： 5分鐘 ?用蛋白質(zhì)溶液作雙縮脲反應(yīng) ?向火棉膠制成的透析管中裝人10~15mL蛋白質(zhì)溶液并放在盛有蒸餾水的燒杯中 ?檢

32、查氯離子的存在。做雙縮脲反應(yīng)，檢查是否有蛋白質(zhì)存在。 ?不斷更換燒杯中的蒸餾水以加速透析過程。 教學(xué)重點及難點 火棉膠制成透析管 教學(xué)方法 理論結(jié)合實踐，深入淺出。實驗操作過程給予示教。 教學(xué)手段（幻燈、多媒體等） 板書，示教。 使用的教材及參考資料 1、生物化學(xué)實驗指導(dǎo)，自編講義 2、基礎(chǔ)生物化學(xué)實驗，高等教育出版社，王秀奇 主編，第二版，2003年 思考題： 蛋白質(zhì)透析的操作要點及主要事項。 本單元教學(xué)總結(jié)（教學(xué)的主要經(jīng)驗、效果、存在問題、改進措施等） 1、實驗內(nèi)容結(jié)合理論內(nèi)容進行講述，效果較好

33、。 2、強調(diào)實驗基本操作規(guī)范，讓學(xué)生養(yǎng)成良好的實驗習(xí)慣，具有扎實的實驗技能。 實驗十二 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離細菌蛋白質(zhì) 授課題目：SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離細菌蛋白質(zhì) （12學(xué)時） 授課對象：生科 授課教師： 教學(xué)目標(biāo)及基本要求 1、? 掌握不連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳的原理和實驗方法。 2、? 能夠熟練使用電泳儀和垂直板式電泳槽進行凝膠電泳操作。 教學(xué)內(nèi)容提要及時間分配 1、凝膠電泳分離蛋白質(zhì)的原理。 5 分鐘 2、聚丙烯酰胺凝膠電泳的組成成份。

34、 3 分鐘 3、影響電泳分離效果的因素。 2 分鐘 4、實驗條件及步驟。 10 分鐘 5、儀器的使用方法。 4 分鐘 6、具體實驗過程包括：凝膠貯液和工作液的配制、電泳裝置的安裝、制分離膠和濃縮膠、樣品的制備、加樣、電泳、取膠、染色、固

35、定、背景脫色。 3 分鐘 7、評價并總結(jié)實驗結(jié)果 1 分鐘 教學(xué)重點及難點 1、? 利用電泳方法分離蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子物質(zhì)的原理。 2、? 如何使用電泳儀和垂直板式電泳槽。 3、? 分離膠和濃縮膠的制備及灌膠和加樣的操作。 教學(xué)方法 首先讓學(xué)生觀看錄像，要求學(xué)生注意電泳技術(shù)的基本原理和基本操作。在此基礎(chǔ)上，學(xué)生進入實驗操作階段。 教學(xué)手段（多媒體、錄像等） 多媒體、錄像，示教 使用的教材及參考資料 1、生物化學(xué)實驗指導(dǎo)，自編講義 2、基礎(chǔ)

36、生物化學(xué)實驗，高等教育出版社，王秀奇 主編，第二版，2003年 思考題： 1、? 電泳后上下槽緩沖液可否混合后再使用？為什么？ 2、上樣緩沖液中加入甘油的作用是什么？ 3、貯液配制及貯存應(yīng)注意什么？ 4、過硫酸銨、TEMED和考馬斯亮藍在實驗中有什么作用？ 本單元教學(xué)總結(jié)（教學(xué)的主要經(jīng)驗、效果、存在的問題、改進措施等） 1、分離膠和濃縮膠的制備過程不要與皮膚接觸，管膠過程緩慢不能產(chǎn)生氣泡。 2、電泳儀應(yīng)從低壓電流逐步到高壓電，以免直接影響實驗結(jié)果。 3、?此實驗過程中需要凝膠過程，所以最好選擇于室溫達到25°C的季節(jié)進行。強調(diào)實驗基本操作規(guī)范，讓學(xué)生養(yǎng)成良好的實驗習(xí)慣，具有扎實的實驗技能。 --------------------------------------------------