2019屆高考生物二輪復(fù)習(xí) 專題八 生物技術(shù)實踐 課時作業(yè)（十七）生物技術(shù)實踐

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1、課時作業(yè)(十七)　生物技術(shù)實踐 [全員必做題] 1．[2018·河北武邑高三質(zhì)檢]為解決塑料袋造成的“白色污染”問題，某同學(xué)試圖從土壤中尋找一種能加速塑料袋自然降解的目的菌，請根據(jù)有關(guān)知識回答下列問題： (1)為培養(yǎng)該目的菌，需要配制出供其________所需的營養(yǎng)基質(zhì)—培養(yǎng)基，對培養(yǎng)基滅菌常用的方法是________。在接種前需要檢驗使用的培養(yǎng)基滅菌是否合格，方法是________________________________________________________________________。 (2)為了確保能夠從樣品中分離得到所需要的微生物，我們可在接種之前進(jìn)行_

2、_________培養(yǎng)，以增加目的菌的濃度。實驗室常用的接種方法有__________和__________。 (3)該同學(xué)在稀釋倍數(shù)為104的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數(shù)分別為24、23、25，則每毫升樣品中的菌落數(shù)是________個(涂布平板時所用稀釋液的體積為0.2 mL)。用該方法統(tǒng)計的數(shù)目往往比活菌的實際數(shù)目________。 【解析】　無菌操作技術(shù)有消毒和滅菌，消毒有煮沸消毒法、巴氏消毒法和化學(xué)藥劑消毒法，滅菌有灼燒滅菌法適用于接種工具、干熱滅菌法適用于玻璃器皿和金屬工具、高壓蒸汽滅菌法適用于培養(yǎng)基及容器的滅菌。接種最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法。 (1)培養(yǎng)基可以為

3、目的菌的生長繁殖提供營養(yǎng)物質(zhì)，常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌法；在接種前需要檢測使用的培養(yǎng)基是否被污染，可以將未接種的培養(yǎng)基在37℃(或適宜溫度)恒溫箱中培養(yǎng)一段時間，觀察是否有菌落生成。(2)為了確保能夠從樣品中分離得到所需要的微生物，在接種之前用以聚乙烯塑料為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行選擇培養(yǎng)，以增加目的菌的濃度；實驗室常用的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法。(3)根據(jù)題意可知，每克樣品中的菌落數(shù)＝平板上菌落數(shù)的平均值÷體積×稀釋倍數(shù)＝(24＋23＋25)÷0.2×104＝1.2×106個；由于細(xì)菌會相互重疊，因此用該方法統(tǒng)計的數(shù)目往往比活菌的實際數(shù)目少。 【答案】　(1)生長繁殖　高壓

4、蒸汽滅菌法　將未接種的培養(yǎng)基在37℃(或適宜溫度)恒溫箱中倒置培養(yǎng)一段時間(或1—2天)，觀察是否有菌落生成 (2)選擇　平板劃線法　稀釋涂布平板法 (3)1.2×106　少 2．[2018·安徽滁州高三期末]科學(xué)家篩選培育良種纖維素分解菌對玉米芯進(jìn)行降解，并進(jìn)一步利用酵母菌發(fā)酵制備乙醇?；卮鹣铝袉栴}： (1)篩選纖維素分解菌時，一般在以______________為唯一碳源的培養(yǎng)基中添加________染料，通過是否產(chǎn)生______________來篩選纖維素分解菌。 (2)請用文字?jǐn)⑹鰣D1中分解玉米芯絲菌用量與還原糖濃度的關(guān)系_______________________

5、_______________________。 (3)圖2表示酵母菌量與酒精產(chǎn)生量的關(guān)系，酵母菌接種量超過40mL后，酒精產(chǎn)量反而減少的原因是_________________________________________________。 為確定發(fā)酵罐內(nèi)酵母菌的數(shù)量，常用稀釋涂布平板法統(tǒng)計細(xì)菌數(shù)量，統(tǒng)計的數(shù)據(jù)往往會偏小的原因是___________________________________________________。 【解析】　據(jù)圖分析，圖1中，隨著纖維素分解菌用量的增加，還原糖濃度先增加后降低，菌用量為30時還原糖濃度最大；圖2中，隨著酵母菌量的增加，酒精產(chǎn)率先增加后

6、降低，酵母菌量為40時，酒精產(chǎn)率最高。 (1)纖維素分解菌具有分解纖維素的能力，因此其培養(yǎng)基中一般添加纖維素作為唯一碳源；剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅—纖維素的復(fù)合物就無法合成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，所以我們就可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。(2)根據(jù)圖1中的曲線變化分析，隨著纖維素分解菌用量的增加，還原糖濃度先增加后降低，即在底物玉米芯用量一定的情況下，菌用量的增加有利于玉米芯酶解為還原糖，當(dāng)菌用量過大時，還原糖含量下降。(3)圖2顯示，酵母菌接種量超過40 mL后，酒精產(chǎn)量反而減少，其主要原因是酵母菌接種量過大

7、導(dǎo)致酵母菌種群密度過大，不利于酵母菌的發(fā)酵活動。稀釋涂布平板法統(tǒng)計細(xì)菌數(shù)量時，由于兩個或多個細(xì)菌形成一個菌落，所以統(tǒng)計的數(shù)據(jù)往往會偏小。 【答案】　(1)纖維素　剛果紅　透明圈 (2)在底物玉米芯用量一定的情況下，菌用量的增加有利于玉米芯酶解為還原糖，當(dāng)菌用量過大時，還原糖含量下降 (3)酵母菌接種量過大導(dǎo)致酵母菌種群密度過大，不利于酵母菌的發(fā)酵活動　兩個或多個細(xì)菌形成一個菌落 3．[2018·山東淄博高三一模]以下是在推進(jìn)生態(tài)文明建設(shè)過程中，合理利用微生物的實例。 ①農(nóng)作物秸稈可用于還田、造紙、養(yǎng)殖蘑菇、生產(chǎn)乙醇等，既能解決集中焚燒污染環(huán)境問題，又能變廢為寶。 ②農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上廣泛使

8、用的除草劑在土壤中不易被降解，長期使用會污染土壤，可選育降解該除草劑的細(xì)菌修復(fù)被污染的土壤。 請回答： (1)用于生物工程的目的菌大多是從自然環(huán)境中篩選純化出來的。在選育能分解除草劑(一類含氮有機(jī)物)的目的菌時，應(yīng)將土壤浸出液接種在以________為唯一氮源的固體培養(yǎng)基上。對固體培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌處理常用的方法是________，為檢測滅菌效果可對培養(yǎng)基進(jìn)行____________________________。 (2)稻稈還田以及利用秸稈生產(chǎn)乙醇的過程都需要以纖維素為__________的微生物。分離該類微生物時應(yīng)用含纖維素的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，并加入________形成紅色復(fù)合物進(jìn)行篩選

9、，目的菌應(yīng)從周圍有________的菌落中選取。 (3)生產(chǎn)乙醇過程中常用的微生物是________，發(fā)酵過程中檢測該微生物數(shù)量可采用的方法有顯微直接計數(shù)(或血球計數(shù)板)法和________，后者統(tǒng)計得到的菌落數(shù)目往往比活菌的實際數(shù)目________。 【解析】　(1)根據(jù)題意分析，實驗的目的是選育分解除草劑(一類含氮有機(jī)物)的目的菌，因此應(yīng)該將土壤浸出液接種在以除草劑為唯一氮源的固體培養(yǎng)基上；固體培養(yǎng)基常用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌，以不接種培養(yǎng)(或空白培養(yǎng))為對照，檢測滅菌效果。 (2)秸稈還田提高土壤肥力以及利用秸稈生產(chǎn)乙醇的過程的原理主要是土壤中微生物以纖維素等有機(jī)物為碳源，合成自己

10、需要的有機(jī)物；剛果紅是一種染料，它可以與纖維素形成紅色復(fù)合物，但并不和纖維二糖、葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后剛果紅－纖維素的復(fù)合物就無法形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解為中心的透明圈，進(jìn)而可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。 (3)乙醇是酵母菌無氧呼吸的產(chǎn)物；酵母菌的計數(shù)方法有顯微直接計數(shù)(或血球計數(shù)板)法和稀釋涂布平板法，后者觀察到的菌落往往有重疊現(xiàn)象，因此得到的值一般偏小。 【答案】　(1)除草劑　高壓蒸汽滅菌法　不接種培養(yǎng)(或空白培養(yǎng)) (2)碳源　剛果紅(CR)　較大透明圈 (3)酵母菌　稀釋涂布平板法　少 4．[2018·山東煙臺高三診斷]為了調(diào)查某河

11、流的水質(zhì)狀況，某研究小組測定了該河流水樣中的細(xì)菌含量，并進(jìn)行了細(xì)菌分離和培養(yǎng)等工作。回答下列問題： (1)該小組采用稀釋涂布平板法檢測水樣中細(xì)菌含量。為了檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格，可在涂布接種前，____________________；然后，將1 mL水樣稀釋1 000倍，在3個平板上用涂布法分別接入0.1 mL稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37，據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為________。 (2)該小組采用平板劃線法分離水樣中的細(xì)菌。操作時，接種環(huán)通過________滅菌，為了將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個菌落，在第二次及以后的劃線時，一定要__

12、______。示意圖A和B中，________表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。通常，對獲得的純菌種可以依據(jù)________對細(xì)菌進(jìn)行初步的鑒定和分類。 (3)該小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻，一部分進(jìn)行靜置培養(yǎng)，另一部分進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長速度快。分析其原因是：振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中________的含量，同時可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高_(dá)_____________的利用率。 【解析】　(1)為了確定培養(yǎng)基的滅菌是否合格，通過隨機(jī)取若干滅菌后的空平板培養(yǎng)一段時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落生成，用來進(jìn)行對照。由題意知1 ml水樣中

13、的菌落數(shù)是(39＋38＋37)÷3÷0.1×1 000＝3.8×105個，每升水樣中的活菌數(shù)為3.8×105×103＝3.8×108個。(2)接種環(huán)用灼燒法進(jìn)行滅菌。在第二次及以后劃線時，總是從上一次劃線的末端開始劃線，這樣做的目的是：通過劃線次數(shù)的增加，將聚集的菌體逐漸稀釋分散，使每次劃線時菌體的數(shù)目逐漸減少，以便獲得由單個細(xì)胞繁殖而來的單個菌落。圖A是平板劃線法，圖B表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。可以依據(jù)菌落的形狀、大小等菌落特征對細(xì)菌進(jìn)行初步的鑒定和分類。(3)振蕩培養(yǎng)可以增加液體培養(yǎng)基的氧氣含量，促進(jìn)好氧型微生物的生長；同時還能使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高營養(yǎng)物質(zhì)的利用

14、率。 【答案】　(1)隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)一段時間　3.8×108 (2)灼燒　從上一次劃線的末端開始劃線　B　菌落的形狀、大小等菌落特征 (3)溶解氧　營養(yǎng)物質(zhì) 5．[2018·山東濟(jì)南章丘區(qū)高三模擬]請回答下列問題： (1)制作果醋和葡萄酒使用微生物在結(jié)構(gòu)上有所不同，主要表現(xiàn)在前者_(dá)_______________。果酒發(fā)酵后是否有酒精產(chǎn)生，可以用重鉻酸鉀溶液進(jìn)行檢驗，酒精與重鉻酸鉀在酸性條件下反應(yīng)呈________________色。 (2)腐乳制作過程中，豆腐發(fā)酵主要利用微生物產(chǎn)生的________等，將豆腐中的營養(yǎng)物質(zhì)分解成易于消化和吸收的小分子物質(zhì)。 (3

15、)測定泡菜中亞硝酸鹽含量的原理是在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生_________________________反應(yīng)后，再與N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成______________染料。 (4)從土壤中分離及篩選高效分解尿素的細(xì)菌時，首先要將選取的一定量的土壤溶解在無菌水中進(jìn)行________后，才能夠接種到培養(yǎng)基表面。 (5)生姜精油是傳統(tǒng)的保健良方，調(diào)和在洗發(fā)露中，可去頭風(fēng)、止頭痛。提取生姜精油的流程如下：植物體→生姜→油水混合物→初級精油→除水、過濾→生姜精油。提取生姜精油時，采用___________________________________________

16、_____________________________ 法獲得油水混合物，然后在其中加入________試劑，分層后可獲得初級精油。 【解析】　(1)制作果醋和葡萄酒使用的菌種分別是醋酸菌和酵母菌，分別是原核生物和真核生物，兩者的主要區(qū)別是前者沒有核膜包被的成形的細(xì)胞核；橙色的重鉻酸鉀溶液，在酸性條件下與乙醇(酒精)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，變成灰綠色。(2)腐乳發(fā)酵主要利用微生物產(chǎn)生的蛋白酶和脂肪酶等，其中蛋白酶能將蛋白質(zhì)水解成小分子肽和氨基酸，脂肪酶能將脂肪水解成甘油和脂肪酸。(3)制作泡菜時常用比色法測定其中的亞硝酸鹽含量，該方法的原理是在鹽酸酸化的條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反

17、應(yīng)后，與N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成玫瑰紅色染料，將顯色反應(yīng)后的樣品與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)液目測比較，可以大致估算出泡菜中亞硝酸鹽的含量。(4)從土壤中分離及篩選高效分解尿素的細(xì)菌時，為防止土壤浸出液濃度過高，不能獲得單菌落，應(yīng)先將土壤用無菌水進(jìn)行一系列的梯度稀釋。(5)提取生姜精油時，采用水蒸氣蒸餾法獲得油水混合物，然后在其中加入氯化鈉試劑，增加鹽的濃度，就會出現(xiàn)明顯的分層，分層后可獲得初級精油，再加入無水硫酸鈉吸水，放置過夜，再過濾除去固體硫酸鈉就可以得到生姜精油。 【答案】　(1)無成形的細(xì)胞核　灰綠 (2)蛋白酶和脂肪酶 (3)重氮化　玫瑰紅色 (4)梯度稀釋 (5)水蒸氣蒸餾

18、　氯化鈉 6．[2018·山東濟(jì)寧高三一模]已知微生物A可以產(chǎn)生脂肪酶，微生物B可以產(chǎn)生油脂。這兩種物質(zhì)可用于生物柴油的生產(chǎn)。回答有關(guān)問題： (1)為了從自然界中獲得能產(chǎn)生脂肪酶的微生物單一菌落，可從含有油料作物種子腐爛物的土壤中取樣，并應(yīng)選用以油脂為唯一________的固體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。 (2)顯微觀察時，微生物B菌體中的油脂通?？捎胈_______染色。微生物B產(chǎn)生的油脂易揮發(fā)，可選用________(填“萃取法”或“水蒸氣蒸餾法”)從菌體中提取。 (3)若要測定培養(yǎng)液中微生物A的菌體數(shù)，可在顯微鏡下用________直接計數(shù)；若要測定其活菌數(shù)量，可選用________法進(jìn)行計

19、數(shù)。 (4)加酶洗衣粉是含有酶制劑的洗衣粉，除脂肪酶之外，常用的酶制劑還有______________________________等。(至少寫出兩種) 【解析】　(1)篩選能產(chǎn)生脂肪酶的微生物A時，應(yīng)該使用只有目的菌能夠生存的，而其他微生物不能生存的選擇培養(yǎng)基，所以培養(yǎng)基中應(yīng)該添加油脂作為唯一碳源。(2)油脂通?？杀惶K丹Ⅲ染液染成橘黃色(或被蘇丹Ⅳ染液染成紅色)；由于微生物B產(chǎn)生的油脂易揮發(fā)，所以可選用水蒸氣蒸餾法從菌體中提取。(3)若要測定培養(yǎng)液中微生物A的菌體數(shù)，可在顯微鏡下用血細(xì)胞計數(shù)板直接計數(shù)(該種方法測定的菌體包括活菌和死菌)；若要測定其活菌數(shù)量，可選用稀釋涂布平板法進(jìn)行計數(shù)

20、。(4)加酶洗衣粉中除脂肪酶之外，常用的酶制劑還有蛋白酶、淀粉酶、纖維素酶等。 【答案】　(1)碳源 (2)蘇丹Ⅲ(或者蘇丹Ⅳ)　水蒸氣蒸餾法 (3)血細(xì)胞計數(shù)板　稀釋涂布平板 (4)蛋白酶、淀粉酶、纖維素酶 7．[2018·河南濮陽高三二模]生物技術(shù)實踐在實際生產(chǎn)生活中有著多種應(yīng)用。請回答下列有關(guān)問題： (1)泡菜發(fā)酵過程會產(chǎn)生少量的亞硝酸鹽，若泡菜中的亞硝酸鹽總量達(dá)到一定值，則會引起中毒，故需要檢測泡菜中亞硝酸鹽的含量，測定亞硝酸鹽含量的常用方法是__________________________________________________________________

21、______。 (2)微生物的接種方法有多種，常用于統(tǒng)計活菌數(shù)目的接種方法是________，使用該方法統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目偏低，原因是________________________。 統(tǒng)計微生物數(shù)目的方法除利用菌落進(jìn)行活菌計數(shù)外，還有________法。 (3)精油在日常生活中有著廣泛的應(yīng)用，不同精油的制備過程不同，這與其原料的性質(zhì)等有關(guān)。柚皮在水中蒸餾時容易焦糊，宜采用______________法提取柚皮精油；玫瑰精油的化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，難溶于水，常選擇______________法進(jìn)行提取。 (4)天然胡蘿卜素具有使癌細(xì)胞恢復(fù)成正常細(xì)胞的功能。根據(jù)胡蘿卜素具有易溶于有

22、機(jī)溶劑的特點，常采用________法提取胡蘿卜素；提取的胡蘿卜素粗產(chǎn)品可通過________法進(jìn)行鑒定。 【解析】　(1)亞硝酸鹽與某些化學(xué)物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)后形成玫瑰色染料。先將泡菜樣品及一系列已知濃度的亞硝酸鹽溶液分別與化學(xué)物質(zhì)發(fā)生顯色反應(yīng)，然后通過對比，可以估測出泡菜液樣品亞硝酸鹽的含量。(2)微生物的接種方法有稀釋涂布平板法和平板劃線法，其中稀釋涂布平板法常用于統(tǒng)計活菌數(shù)目；使用該方法統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目偏低，原因是當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落；除了活菌計數(shù)法外，顯微鏡直接計數(shù)也是測定微生物數(shù)量常用的方法。(3)柚皮在水中蒸餾時容易焦糊，宜采用壓榨法

23、提取柚皮精油；玫瑰精油的化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，難溶于水，常選擇水蒸氣蒸餾法進(jìn)行提取。(4)根據(jù)胡蘿卜素具有易溶于有機(jī)溶劑的特點，常采用萃取法提取胡蘿卜素；提取的胡蘿卜素粗產(chǎn)品可通過紙層析法進(jìn)行鑒定。 【答案】　(1)比色法 (2)稀釋涂布平板法　當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落　顯微鏡直接計數(shù) (3)壓榨　(水蒸氣)蒸餾 (4)(有機(jī)溶劑)萃取　紙層析 8．[2018· 河南八市學(xué)評高三測評]影響醬油衛(wèi)生指標(biāo)的細(xì)菌主要有耐熱的芽孢桿菌和耐鹽菌。某生物興趣小組欲從釀制的醬油中篩選出耐鹽菌。請回答： (1)在篩選過程中，應(yīng)將醬油接種于含有適量_______________

24、_________________________________________________________ 的固體培養(yǎng)基上：從功能上講，該培養(yǎng)基屬于________________培養(yǎng)基；對該培養(yǎng)基滅菌的方法是________________。在涂布接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白培養(yǎng)基培養(yǎng)一段時間，發(fā)現(xiàn)空白培養(yǎng)基上出現(xiàn)了一些菌落?？瞻着囵B(yǎng)基上出現(xiàn)菌落的原因是： ①_______________________________________________； ②________________________________________________。 (2)在篩選耐鹽菌

25、的過程中，必須在無菌條件下完成的操作是________(多選)。 ①配制培養(yǎng)基?、诘蛊桨濉、劢臃N?、芘囵B(yǎng) (3)若要統(tǒng)計活的耐鹽菌的數(shù)目，把醬油接種到培養(yǎng)基上常采用的方法為________；統(tǒng)計結(jié)果一般用菌落來表示，統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目________，原因是________________________________________________________________________。 (4)在純化耐鹽菌的過程中，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上的菌落連成一片，最可能的原因是____________________________，避免出現(xiàn)此種現(xiàn)象應(yīng)該采取的措施是_______

26、_______________。 【解析】　(1)欲從釀制的醬油中篩選出耐鹽菌，應(yīng)將醬油接種于含有適量NaCl(食鹽)的固體培養(yǎng)基上，從功能上講，該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。常采用高壓蒸汽滅菌的方法對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌。培養(yǎng)的空白培養(yǎng)基上出現(xiàn)菌落的原因可能是：對培養(yǎng)基的滅菌不徹底；倒平板時培養(yǎng)基被污染。(2)配制培養(yǎng)基的步驟包括計算、稱量、溶化，培養(yǎng)基配制完成后需依次調(diào)節(jié)pH、滅菌，然后在酒精燈火焰旁進(jìn)行倒平板；為了避免雜菌污染，接種和培養(yǎng)都需要在無菌條件下完成。綜上所述，在篩選耐鹽菌的過程中，必須在無菌條件下完成的操作是②③④。(3)若要統(tǒng)計活的耐鹽菌的數(shù)目，常采用稀釋涂布平板法將醬油接種到培養(yǎng)基

27、上。由于當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上只能觀察到一個菌落，所以統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目低。(4)在純化耐鹽菌的過程中，若醬油中耐鹽菌濃度過高，則會出現(xiàn)菌落在培養(yǎng)基上連成一片的現(xiàn)象。為了避免出現(xiàn)此種現(xiàn)象，應(yīng)對醬油進(jìn)行梯度稀釋(或“加大稀釋倍數(shù)”)。 【答案】　(1)NaCl(食鹽)　選擇　高壓蒸汽滅菌　對培養(yǎng)基的滅菌不徹底　倒平板時培養(yǎng)基被污染 (2)②③④ (3)稀釋涂布平板法　低　兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上只能觀察到一個菌落 (4)醬油中耐鹽菌濃度過高　對醬油進(jìn)行梯度稀釋(或“加大稀釋倍數(shù)”) [重點選做題] 1．[2018·河北唐山高三一模]有人認(rèn)為，鮮榨果汁

28、比盒裝或瓶裝的果汁更新鮮健康。食品監(jiān)督人員發(fā)現(xiàn)鮮榨果汁若不能做到無菌生產(chǎn)，更容易滋生細(xì)菌。研究過程如下： (1)純化培養(yǎng)細(xì)菌的方法：平板劃線法可以觀察菌落特征，對混合菌進(jìn)行分離，但不能________；使用稀釋涂布平板法，在稀釋度足夠高時，一個菌落代表________。 (2)對細(xì)菌計數(shù)時往往會產(chǎn)生實驗誤差，稀釋涂布平板法計數(shù)的值比實際值________，原因是__________________________________________；顯微計數(shù)法計數(shù)的結(jié)果比 實際值________，原因是______________________。 (3)接種結(jié)束后，將一個未接種的培養(yǎng)基和

29、一個接種的培養(yǎng)基放在一起培養(yǎng)的目的是____________。未接種的培養(yǎng)基表面是否有菌落生長很關(guān)鍵，如果有菌落生長，說明________________________________________________________________________。 【解析】　(1)平板劃線法可以觀察菌落特征，對混合菌進(jìn)行分離，但不能計數(shù)；使用稀釋涂布平板法，在稀釋度足夠高時，聚集在一起的微生物將分散成單個細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落，即一個菌落代表單個細(xì)胞。(2)用稀釋涂布平板法對細(xì)菌進(jìn)行計數(shù)時，當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落，所以統(tǒng)計的菌落往往比活菌的

30、實際數(shù)目偏??；若用顯微計數(shù)法計數(shù)時，由于顯微鏡下無法區(qū)分細(xì)胞的死活，計數(shù)時包括了死細(xì)胞，所以計數(shù)的結(jié)果會比實際值偏大。(3)接種結(jié)束后，將一個未接種的培養(yǎng)基和一個接種的培養(yǎng)基放在一起培養(yǎng)的目的是作對照，未接種的培養(yǎng)基表面是否有菌落生長很關(guān)鍵。如果有菌落生長，則說明培養(yǎng)基滅菌不徹底(或培養(yǎng)基被污染了或需要重新制備)。 【答案】　(1)計數(shù)　單個細(xì)胞 (2)偏小　當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落　偏大　顯微鏡下無法區(qū)分細(xì)胞的死活，計數(shù)時包括了死細(xì)胞 (3)對照　培養(yǎng)基滅菌不徹底(或培養(yǎng)基被污染了或需要重新制備) 2．[2018·廣東汕頭高三模擬]塑料的生物降解，是一個

31、世界性的難題。北京航天航空大學(xué)趙軍教授帶領(lǐng)的團(tuán)隊所進(jìn)行的研究，引人矚目。他們從一種吃塑料(聚乙烯)的蠟蟲腸道內(nèi)容物中分離出8個菌株，并對其中的2個菌株進(jìn)行了深入研究。 蠟蟲→腸道內(nèi)容物→接種、培養(yǎng)、分離→菌種鑒定→菌種保藏 (1)塑料的生物降解，主要是利用某些生物分泌特定的________的作用。 (2)上述步驟中“培養(yǎng)”是為了________，其培養(yǎng)基應(yīng)以聚乙烯為________、并加入水和________等制作而成。培養(yǎng)一定時間后，根據(jù)________對菌種進(jìn)行初步分離。 (3)研究人員將其中兩個菌株YT1、YP1分別接種到含有聚乙烯膜的培養(yǎng)基中連續(xù)培養(yǎng)，部分結(jié)果如下圖一、二所示。

32、 ①圖一顯示，兩個菌株在實驗條件下，增殖能力更強(qiáng)的是__________________。圖中缺少對照組的數(shù)據(jù)，根據(jù)實驗設(shè)計的意圖，對照組的細(xì)胞密度應(yīng)該為________。 ②圖二是對兩個菌株進(jìn)行聚乙烯減重分析的實驗結(jié)果，可以得出的主要結(jié)論是___________________________。 【解析】　(1)某些生物分泌特定的酶，能夠降解塑料。(2)接種、培養(yǎng)、分離中的培養(yǎng)，是為了增加目的菌株數(shù)量。本操作是為了篩選能分解聚乙烯的菌種，其培養(yǎng)基應(yīng)以聚乙烯為唯一碳源、并加入水和無機(jī)鹽等制作而成。培養(yǎng)一定時間后，根據(jù)菌落特征(或菌落的形態(tài)、菌落的顏色)對菌種進(jìn)行初步分離。(3)①由于

33、在同一時間范圍內(nèi)，YT1組的細(xì)胞密度較YP1更大，說明增殖能力更強(qiáng)的是YT1。對照組為未加入菌株的含有聚乙烯膜的培養(yǎng)基，其細(xì)胞密度應(yīng)該為0。②與對照組相比，YT1和YP1的聚乙烯減重較大，且YP1的聚乙烯減重較YT1大，說明YT1和YP1都能降解聚乙烯，其中YP1的降解能力更強(qiáng)。 【答案】　(1)酶 (2)增加目的菌株數(shù)量　唯一碳源　無機(jī)鹽(和氮源)　菌落特征(或菌落的形態(tài)、菌落的顏色) (3)YT1　0　YT1和YP1都能降解聚乙烯，其中YP1的降解能力更強(qiáng) 3．[2018·安徽蕪湖高三一模]某研究小組對酸奶中乳酸菌數(shù)量進(jìn)行了測定，取6支滅菌試管，分別加入9 mL滅菌水，標(biāo)號為A1、

34、A2、A3、A4、A5、A6，吸取1 mL酸奶樣液加入試管A1中，混合均勻；然后從A1中吸取1 mL溶液，加入A2中，混合均勻；重復(fù)上述操作，最后從試管A6中取0.1 mL樣液進(jìn)行涂布計數(shù)。涂布三個平板，其菌落數(shù)分別為251、265、276個。請回答下列問題： (1)該小組在取樣涂布前，隨機(jī)取若干滅菌后未接種平板先行培養(yǎng)一段時間，這樣做的目的是___________________________________________________。 (2)在制備乳酸菌培養(yǎng)基過程中，倒平板時培養(yǎng)基溫度不能太低，原因是______________________________________；

35、 待平板冷凝后，要將平板倒置，其目的是_________________________________________________ _________________________________________________。 (3)根據(jù)三個平板中菌落數(shù)，可推測原酸奶中乳酸菌濃度為________個/mL，該方法測定的乳酸菌含量和實際值相比偏小的原因是___________________________________________。 (4)該小組在探究橘皮精油對乳酸菌抑制作用時，提取橘皮精油采用________法而不用蒸餾法，原因是________。抑菌實驗時，在長滿

36、乳酸菌平板上，會出現(xiàn)以抑菌物質(zhì)為中心的透明圈，可通過________來判斷抑菌效果。 【解析】　(1)對滅菌后而未接種平板先培養(yǎng)一段時間的目的是檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格。(2)制備培養(yǎng)基過程中， 倒平板時溫度太低會導(dǎo)致培養(yǎng)基凝固，無法鋪展均勻，因此倒平板時培養(yǎng)基的溫度不能太低；待平板冷凝后，要將平板倒置，其目的是防止平板冷凝后，培養(yǎng)皿蓋上凝結(jié)的水珠落入培養(yǎng)基中造成污染。(3)結(jié)合題意，根據(jù)操作步驟可推知得到了101、102、103、104、105、106倍的稀釋液。從試管A6中取0.1 mL樣液進(jìn)行涂布計數(shù)，三個平板中菌落數(shù)分別為251、265、276個，可推測原酸奶中乳酸菌的濃度為(25

37、1＋265＋276)÷3×10×106＝2.64×109個/mL。稀釋涂布平板法測定活菌數(shù)目時，因為相鄰的細(xì)菌可能形成一個菌落，因此測定值可能比實際值小。(4) 提取橘皮精油采用壓榨法而不用蒸餾法，原因是水中蒸餾會導(dǎo)致原料焦糊和有效成分水解。抑菌實驗時，在長滿乳酸菌平板上，會出現(xiàn)以抑菌物質(zhì)為中心的透明圈，可通過測定透明圈大小來判斷抑菌效果。 【答案】　(1)檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格 (2)溫度太低會導(dǎo)致培養(yǎng)基凝固，無法鋪展均勻　既可使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染 (3)2.64×109　兩個或多個乳酸菌連在一起時，平板上只能觀察到1個菌落 (4

38、)壓榨　水中蒸餾會導(dǎo)致原料焦糊和有效成分水解　測定透明圈大小(直徑) 4．[2018·山東省聊城市高三一模]以下是柿子醋制作的流程：柿果→挑選→清洗→去皮→去核→脫澀處理→切塊→壓榨→柿汁→滅菌→酒精發(fā)酵→醋酸發(fā)酵→滅菌→陳釀→淋醋→過濾→成品。請回答下列問題： (1)脫澀過程可以用成熟的蘋果、梨等水果釋放的________氣體促進(jìn)柿子成熟。 (2)將壓榨后的柿汁加熱到80℃保持10～20分鐘的目的是________。酒精發(fā)酵時可添加活性干酵母進(jìn)行，發(fā)酵的原理是________________________________________________________________

39、________(寫反應(yīng)式)。 (3)若醋酸發(fā)酵時需擴(kuò)大培養(yǎng)醋酸菌種，實驗室常用的接種方法是________和________；接種前應(yīng)對培養(yǎng)皿、接種環(huán)和培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，方法分別是____________________；接種后培養(yǎng)時需要設(shè)置空白培養(yǎng)基，目的是__________________________________________________ __________________________________________________。 【解析】　(1)成熟的蘋果、梨等水果釋放的乙烯可促進(jìn)果實的成熟。(2)將壓榨后的柿汁加熱到80℃保持10～20分鐘的目的是滅菌，防止雜菌污染。果酒發(fā)酵是利用酵母菌進(jìn)行無氧呼吸產(chǎn)生酒精的原理，其反應(yīng)式是C6H12O62C2H5OH(酒精)＋2CO2＋少量能量。(3)純化培養(yǎng)微生物時常用的接種方法是：平板劃線法和稀釋涂布平板法；接種前對培養(yǎng)皿、接種環(huán)和培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌時所采用的方法分別是干熱滅菌、灼燒滅菌、高壓蒸汽滅菌；接種后培養(yǎng)時需要設(shè)置空白培養(yǎng)基，其目的是：檢測培養(yǎng)基是否合格(檢測培養(yǎng)基是否被污染)。 【答案】　(1)乙烯 (2)防止雜菌污染　C6H12O62C2H5OH＋2CO2＋能量 (3)平板劃線法　稀釋涂布平板法　干熱滅菌、灼燒滅菌、高壓蒸汽滅菌　檢測培養(yǎng)基是否合格(檢測培養(yǎng)基是否被污染) 7